PLOS ONE: Caveolina-1 Nível de expressão no câncer associado fibroblastos prediz a evolução no câncer gástrico

Abstract

Objectivos

expressão alterada de epitelial ou estromal caveolin-1 (Cav-1) é observado em vários tipos de cancros humanos. No entanto, o significado clínico da Cav-1 expressão no câncer gástrico (GC) permanece em grande parte desconhecido. O presente estudo tem como objetivo explorar o significado clínico-patológico e valor prognóstico de ambas as células tumorais e de cancro associado fibroblastos (FAC) Cav-1 no GC.

Métodos e Resultados

Quantum dots imunofluorescência histoquímica foi realizada para examinar a expressão de Cav-1 em 20 casos de gastrite, sem metaplasia intestinal (MI), 20 casos de gastrite com IM e 286 casos de GC. taxas positivas de epitelial Cav-1 na gastrite sem IM, gastrite com IM e GC mostrou uma tendência decrescente ( P
= 0,012). Baixa expressão de Cav-1 em FAC, mas não em células tumorais foi um preditor independente de mau prognóstico em pacientes GC ( P
= 0,034 e 0,005, respectivamente, na sobrevida livre de doença e sobrevida global). Cav-1 no sangue células tumorais e FAC não apresentou correlação significativa com características clinicopatológicas clássicos.

Conclusões

Perda de epitelial Cav-1 podem promover a progressão maligna e baixas FAC Cav-1 nível arauto pior resultado do paciente GC, FAC sugerindo Cav-1 pode ser um alvo terapêutico candidato e um marcador de prognóstico útil de GC

Citation:. Zhao X, Y Ele, Gao J, Fan L, Li Z, Yang G, et ai. (2013) Caveolina-1 Nível de expressão em Câncer Associated fibroblastos prediz a evolução no câncer gástrico. PLoS ONE 8 (3): e59102. doi: 10.1371 /journal.pone.0059102

editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 06 de dezembro de 2012; Aceito: 11 de fevereiro de 2013; Publicação: 19 de março de 2013

Direitos de autor: © 2013 Zhao et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado pelo Projeto de Graduação em Inovação Nacional da China (nO. 111048670) eo de Ciências naturais da Fundação Nacional da China (nO. 30900652). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito "

Conflito de interesses:. Guilin Fanpu Biotechnology Co., Ltd deu suporte tecnológico para a construção TMA. Não há patentes, produtos em desenvolvimento ou produtos comercializados a declarar. Isto não altera a adesão dos autores para todas as políticas de PLoS One sobre os dados e materiais de compartilhamento.

Introdução

Tal como tecidos normais, os tumores são compostos de dois compartimentos distintos, mas interativos, do parênquima e o estroma. Em tumores, as próprias células tumorais são parênquima, enquanto que o estroma inclui uma mistura de elementos de matriz extracelular (ECM) e células não-malignas, tais como cancro associado fibroblastos (FAC), células endoteliais vasculares e células do sistema imunológico e inflamatórias [1], [2], [3]. Nos últimos anos, as influências profundas do estroma do tumor no crescimento e na metástase de vários tipos de tumores têm sido amplamente elucidado [2], [3]. As células tumorais podem provocar a deposição de estroma reactivo contendo FAC activados, células imunitárias e inflamatórias, elementos de ECM que podem favorecer a invasão e metástase de cancros [2], [3]. Além disso, embora as funções definidas de proteínas em conversa cruzada molecular entre o tumor e células do estroma permanecem obscuros, expressão alterada de proteínas do estroma ter sido manifestada como novos biomarcadores em vários tipos de cancros humanos, incluindo cancro da mama [4], [5], [6] [7], próstata [8], nasofaringe [9] e carcinoma basocelular [10]

A família de genes caveolin tem três membros:. CAV1
, CAV2
, e CAV3
, que codifica para as proteínas caveolin-1 (CAV-1), caveolin-2 e caveolin-3, respectivamente [11]. CAV1
está localizado no cromossoma 7 (7q31.1 lócus) e contém três exons (35, 165 e 324 pb) e dois íntrons (1,5 e 32 kb) [11]. CAV-1 constitui o principal componente estrutural de caveolae, que são invaginações vesiculares em forma de frasco de membrana de plasma [12], [13]. Vários receptores e moléculas de sinalização são localizadas na caveolae e são reguladas negativamente pela Cav-1 através do seu domínio de andaimes. Além disso, o CAV-1 interage directamente com a bicamada de colesterol e esfingolípidos dentro caveolin, portanto, influenciar a homeostase de lípidos e de transporte [12], [13]. Nos cancros, é cada vez mais claro que Cav-1 está implicada na regulação de vários processos associados ao cancro, variando de transformação celular, crescimento tumoral, invasão e metástase, a resistência a múltiplas drogas e a angiogénese [14]. CAV-1 mostra um papel dependente do compartimento em tumores. No compartimento epitelial, Cav-1 impactos tanto positiva como negativamente sobre o desenvolvimento do tumor. No estroma tumoral, especialmente as FAC, baixa expressão de Cav-1 proteína prevê resultado adverso no cancro da mama e da próstata [4], [5], [6], [8], [12], [15]. No entanto, os valores clínicos de Cav-1 em GC não ficar totalmente claro. Com base em pesquisas anteriores, nós hipótese de que papéis de Cav-1 no epitélio e estroma podem ser diferentes, papéis de epitelial Cav-1 é a expressão incerta, mas baixa de Cav-1 em FAC podem promove a progressão GC e se correlaciona com resultado adverso de pacientes GC .

Para esclarecer a relação entre a progressão ou supressão Cav-1 e GC, analisamos especificamente tanto do estroma e expressão de células epiteliais de Cav-1 em secções de tecidos, através dos pontos quânticos avançados (QDs) imunofluorescência baseados histoquímica (QDs-IHC) que tinham sido desenvolvidas nos nossos estudos anteriores e que têm sido amplamente reconhecido e utilizado em laboratórios [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Fluorescentes QDs semicondutores nanocristais são uma nova classe de fluoróforos inorgânicos multifuncionais que têm muitas propriedades que beneficiam, como picos de banda de emissão estreitas, comprimento de onda da sua fluorescência depende fortemente seus tamanhos e cores diferentes QD podem ser simultaneamente excitado por uma única fonte de luz com espectral mínima sobreposição [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Estas propriedades tornam extremamente QDs útil para imagiologia molecular multiplexado imunofluorescente [21], [23]. A avançada múltiplos alvos tecnologia de etiquetas de QDs-IHC permitiu uma análise precisa de Cav-1 expressão em FAC, por detecção simultânea de alfa-actina de músculo liso (α-SMA), que é um marcador de FAC e proteína de VAG-1.

Materiais e Métodos

pacientes e seguimento

Como o tempo era limitado e alguns pacientes estavam fora do hospital, por isso é difícil de obter consentimento por escrito. Nós chamado para cada paciente, explicou nosso estudo foi utilizada apenas para intercâmbios acadêmicos, e não foi prejudicial para a sua saúde, e não continha suas informações privadas. Quando chamado, um notário público estava presente, e recebemos o telefone móvel de mensagens curtas que exigia dos pacientes que consentem o estudo para enviar para nós. Se o paciente tem mortos, nós temos o consentimento de seu representante legal. Finalmente, obteve o consentimento verbal de todos os 300 pacientes. Um total de 340, tecidos embebidos em parafina fixadas em formalina foram obtidas de pacientes diagnosticados no período de julho de 2005 a fevereiro de 2012, incluindo 300 GCs, 20 gastrite sem metaplasia intestinal tecidos (IM) e 20 gastrite com tecidos de IM. A gastrite sem IM e com amostras IM foram obtidos a partir de adenocarcinoma de tecidos paracancerous. seção Serial confirmado nenhum tecido do tumor foi encontrado nestas amostras. Os espécimes foram coletados a partir dos arquivos do Departamento de Patologia, Zhongnan Hospital da Universidade de Wuhan (Hubei, P. R. China). diagnóstico e graus de diferenciação histológica foram determinados de acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS) para GC. Todas as amostras de GC foram classificados com base na classificação UICC TNM (2009). Dois patologistas placa-certificados (Yang GF e Fan LF) reconfirmou as características histopatológicas destas amostras. 326 amostras foram preservadas com sucesso para uma análise mais aprofundada; Enquanto isso, 14 amostras de GC foram perdidos a partir do slide durante a imunocoloração. fatores clínico-patológicos de pacientes do GC foram listadas na Tabela 1. Para 247 pacientes GC houve tecido suficiente para a análise das células tumorais e câncer de fibroblastos associados Cav-1 imunocoloração. Todos estes 300 pacientes foram tratados com ressecção radical ou cirurgia citorredutora de GC, antes da administração de quimioterapia ou radioterapia. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Instituto de Pesquisa Médica da Faculdade de Básico de Ciências Médicas, Universidade de Wuhan.

Siga-up começou na data da cirurgia e terminou em agosto de 2012. Entre as restantes 286 tecidos GC de pacientes , 257 inscritos em nossa coorte de acompanhamento e 116 pacientes que alcançaram com sucesso uma criança de cinco anos de acompanhamento ou morreram por causa do GC foram incluídos na análise de sobrevivência. Os pacientes, que não chegar a cinco anos de follow-up e morreram de outras doenças ou devido a eventos inesperados, foram excluídos do estudo de sobrevivência. A mediana de seguimento dos 116 pacientes foi de 62 (intervalo: 1-85) meses. A sobrevivência global foi definida como o intervalo entre a data da cirurgia para a morte. sobrevida livre de doença foi definido como o intervalo entre a data da cirurgia para recorrência. Diagnóstico de recidiva foi baseada nos seguintes critérios: a recorrência local encontrado por biópsia endoscópica ou com relaparotomia; metástase no exame radiológico, ultra-som ou citológica.

Tissue Microarray Construção

Dois conjuntos de microarrays de tecido (TMAs) foram construídos. Cada conjunto continha 5 TMAs que foram montados com 340 espécimes. As áreas de tumor mais representativos foram definidos em hematoxilina e-eosina e marcados no slide. A forma como construímos o TMA eo instrumento sistema de microarray foram o mesmo com o nosso estudo anterior [24], [25]. Como previamente estudos não relataram heterogeneidade intratumoral de Cav-1 expressão em GC e nossa experiência de viabilidade indicaram que um núcleo por tumor no TMA e grandes seções mostrou uma boa consistência [26], [27], [28], portanto, em testes experimento, um núcleo foi amostrado em cada caso. Resumidamente, um núcleo com um diâmetro de 1,5 mm foi feita a partir de cada amostra e inserida no "receptora" blocos de parafina; estes blocos foram cortados em secções (4 mm de espessura) e utilizado para análise QDs-IHC. baseado em QDs

Imunofluorescência histoquímica

Cav-1 imunorreatividade foi detectado em um conjunto de TMAs. Os anticorpos, QDs conjugados sondas estreptavidina (QDs-SA) com comprimento de onda de emissão de 605 nm e reagentes relacionados para Cav-1 de detecção foram os mesmos de antes [16] com as seguintes principais procedimentos: deparaffinizing → recuperação antigênica → bloqueio → anticorpo primário para Cav -1 (Sinalização Cell Technology, Beverly, MA) → lavagem e bloqueio → biotinilado IgG → lavagem e bloqueio → 605 nm-QDs-SA → lavar → montagem e observação. O sinal obtido a partir das células de marcação foi detectado através de microscopia de fluorescência utilizando Olympus BX51 (CCD DP72). O sinal de QDs foi alvo específico, vermelho e fotoestável. Autofluorescência do tecido-fundo era verde. Desde Cav-1 localiza normalmente nas células endoteliais dos vasos sanguíneos [27], [29] que examinaram em cada TMA, que pode ser servido como controle interno positivo e qualidade em QDs-IHC. TBS, em vez do anticorpo primário Cav-1 serviu como controle negativo.
Baseado em QDs

Duplo imunofluorescência Labeling

Foi utilizado um conjunto de TMAs de Cav-1 /α-SMA co-localização, detectada por QDs com base na tecnologia de rotulagem de imunofluorescência dupla de acordo com as instruções do fabricante (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.). Todos os passos de diluição (anticorpos e QDs) foram realizadas em TBS contendo albumina de soro bovino a 2% (BSA, Sigma, St. Louis, MO, EUA). A recuperação de antígenos foi realizada em ácido cítrico (10 mM, pH 6,0) a 95 ° C durante 10 min, seguido de arrefecimento durante 30 min. TMA foram primeiro incubadas em tampão de BSA a 2% a 37 ° C durante 30 min, e em seguida a 4 ° C durante a noite em coelho anti-VAG-1 anticorpo policlonal e anticorpo monoclonal anti-α-SMA rato (1:300 diluição, Abcam, Cambridge, MA), a fim de ligações do anticorpo. Em seguida, TMA foram lavadas três vezes com TBS-T (Tween a 0,5% em TBS) durante 5 min de cada vez, e foram incubadas em cabra biotinilado anti-IgG de ratinho (diluição 1:400, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) a 37 ° C durante 30 min. Para QDs conjugação, a TMA foram incubadas em tampão de BSA a 2% a 37 ° C durante 10 min, incubou-se em QDs (525 nm) conjugada com estreptavidina de ligação ao anticorpo (1:200, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) e QDs (605 nm) conjugada com IgG de cabra anti-coelho (1:100, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) durante 50 minutos, enxaguadas três vezes com TBS-T, durante 5 minutos cada. Finalmente, TMA foram seladas com 90% de glicerina (Sigma). O sinal de imunofluorescência foi observado por sistemas de imagens de microscopia multi-espectrais da Caliper (Caliper Life Sciences). Como o sinal de imunofluorescência de rotulagem única e rotulagem dupla foram agarrados por CCD DP72 e sistemas de imagens de microscopia multiespectrais, respectivamente, nós calibrado resultados dos dois instrumentos para garantir a comparabilidade desses experimentos. sinal positivo de α-SMA era verde, e Cav-1 era vermelho. CAV-1 em células endoteliais de vasos sanguíneos [27], [29], expressão α-SMA em vasos sanguíneos e tecidos positivos conhecidos são considerados como os controlos positivos. TBS, em vez de dois anticorpos primários serviram como controlos negativos, mostrando apenas sinal de autofluorescência.

Scoring dos resultados de imunofluorescência

Os resultados foram avaliados por dois patologistas (Yang GF e Fan LF) simultaneamente em mesma displayer , que são independentes e cegos para as características clínicas do estudo. A pontuação dos dois patologistas foram comparados e quaisquer pontuações discrepantes foram reavaliados por reavaliação da amostra de tecido manchadas por dois patologistas para alcançar uma pontuação de consenso. A metodologia utilizada para conseguir um Cav-coloração de células tumorais e FAC foram os mesmos. Os resultados foram também determinados pela combinação de a proporção de células coradas positivamente e a intensidade da coloração. As seções foram inicialmente digitalizados em baixa potência. Em seguida, as células dos cinco campos representativos de cada espécime em alta ampliação (200 ×) foram contadas para as células tumorais Cav-1-manchadas ou FAC. A área da positiva (AP) são classificadas as células como se segue: 0 (nenhuma área positiva ou área positiva < 5%), 1 (área positiva 5-25%), 2 (área positiva 26-50%), 3 ( área positiva 51-75%) e 4 (área positiva > 75%). Cav-1 intensidade de coloração (IS) pelo valor numérico é resultou em pontuações: 0 (negativo: não há sinal positivo), 1 (fraco: clara ou escura sinal vermelho) e 2 (forte: sinal vermelho brilhante). Os níveis de expressão de Cav-1 foram calculados com base na pontuação total como a seguinte equação:. distribuição de intensidade (ID) = AP × É O

O valor de corte para alta e baixa expressão foi determinado com característica operacional do receptor ( ROC) análise da curva com o respeito à sobrevida global. De acordo com a sensibilidade e especificidade óptimas da curva ROC pelo estado geral de sobrevivência, 1,5 foi definido como o corte ótimo para Cav-1 pontuação de imunofluorescência no FAC (uma pontuação ID ≥1.5 definido alta expressão e pontuação ID < 1,5 indicaram baixa expressão) , 3,5 foi definido como o corte ótimo para Cav-1 pontuação de imunofluorescência em células tumorais (uma pontuação ID ≥3.5 definido alta expressão e pontuação ID < 3,5 indicaram baixa expressão).

Análise estatística

Foi utilizado SPSS 17.0 software (Chicago, IL, EUA) para realizar todas as análises estatísticas. teste de Friedman foi utilizado para analisar a diferença de Cav-1 pontos originais entre lesões gástricas diferentes. análise da curva ROC foi realizada para determinar o ponto de corte de alto ou baixo nível de Cav-1 e avaliar o valor preditivo de um Cav-expressão para a sobrevivência global. O teste χ2 ou teste exato de Fisher foi utilizado para analisar a correlação entre os parâmetros clínico e Cav-1 expressão. teste de correlação de Spearman foi realizado para analisar a associação entre Cav-1 em células tumorais e FAC. A taxa de sobrevida e sobrevida livre de doença em geral foram estimadas pelo método de Kaplan-Meier e comparadas pelo teste de long-rank. A análise multivariada pelo modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox foi utilizado para testar valores de prognóstico independentes. Bicaudal P
-Valores. ≪ 0,05 foram considerados estatisticamente significativos

Resultados

expressão de Cav-1 em diferentes lesões gástricas

A localização e expressão de Cav-1 na gastrite sem IM, gastrite com IM e GC foram avaliados por QDs-IHC utilizando o anticorpo policlonal Cav-1. A forte intensidade de sinal positivo de Cav-1 no estroma tumor em forma de rosca era o controle interno de expressão endotelial (Fig. 1A). Na gastrite tecidos sem MI, negativo sinal Cav-1 predominantemente nas células mucosas de superfície (Fig. 1A) e sinal positivo predominantemente na base do pescoço e das células das glândulas fúndicas (Fig. 1C). Na gastrite com tecidos IM, alguns casos não mostraram distribuição Cav-1 (Fig. 1E) e alguns mostraram Cav-1 coloração positiva na célula de absorção e de células caliciformes de glândulas metaplásicas (Fig. 1G). Expressão de Cav-1 imunorreactividade foi observada principalmente na membrana celular (Fig. 1D) e no citoplasma. O padrão de pontuação sinal foi exibido na figura. 1I-K e exemplos representativos de Cav-1 expressão em GC foram apresentados na Figura. 2. colocalização de Cav-1 e α-SMA proteínas foi detectada por imunofluorescência dupla marcação com base em QDs no GC e analisado por sistemas de imagens multi-espectrais, para identificar precisamente Cav-1 na expressão FAC (Fig. 3). A distribuição do sinal de Cav-1 em fibroblastos é aleatório e não tem qualquer relação com o estado de Cav-1 em células tumorais.

Tabela 2 resumidas as contagens iniciais de Cav-1 em expressão sem IM gastrite, gastrite com IM e GC. No compartimento epitelial, 30% (6/20) de gastrite sem IM, 55% (11/20) de gastrite com o IM, 75% (15/20) de GC foram marcados 0, mostrando Cav-1 nível de expressão da proteína, diminuindo gradualmente . teste de Friedman mostrou que a diferença de Cav-1 pontuação coloração entre a gastrite sem IM, gastrite com IM e GC foi estatisticamente significativa ( P
= 0,012).

Correlação Expressão de Cav-1 entre células tumorais e FAC

a correlação entre as células tumorais e FAC em Cav-1 expressão também foi analisada. Como foi mostrado na Tabela 3, entre os 226 casos com baixo Cav-1expression em células tumorais, 121 (53,5%) dos casos mostraram baixa expressão de Cav-1 em FAC (Fig. 2A), e entre os 21 casos com alta Cav-1 expressão em células tumorais, 9 (42,9%) casos apresentaram alta Cav-1 expressão em FAC (Fig. 2C). Os outros 117cases mostrou estatuto distinto na expressão de células de tumor e FAC (Fig. 2E e G). Nenhuma correlação significativa foi fundada entre as células tumorais e FAC Cav-1 expressão (r = -0,20, P
= 0,751).

significado clínico de Cav-1 em células tumorais e FAC de GC

Todos os 286 amostras GC estavam disponíveis para análise de Cav-1 imunomarcação nas células tumorais e 247 (86,4%) casos tiveram tecidos suficientes para análise de Cav-1 imuno na FAC. A Tabela 3 resume a correlação entre as células tumorais ou FAC no Cav-1 expressão e os parâmetros clínico-patológicos clássicos de GC, como o status idade, sexo, estágio T e linfonodo na análise univariada. No entanto, nenhuma relação significativa foi encontrada.

Além disso, nós investigamos o valor prognóstico do Cav-1 em células tumorais e FAC. A análise de Kaplan-Meier eo teste de log-rank mostrou que a baixa expressão de Cav-1 em FAC em vez de células tumorais previu sobrevida. sobrevida global mediana de baixa FAC Cav-1 expressão subgrupo foi 73,0 meses (IC 95%, 55,589-90,411), enquanto que no intervalo de acompanhamento, a alta FAC Cav-1 expressão subgrupo tiveram uma taxa de sobrevivência calculado de aproximadamente 0,8 (Fig . 4A). Como mostrado na figura. 4B, baixa expressão de Cav-1 em FAC também previu recidiva precoce de pacientes do GC. Figura 4C e D indicou que as células tumorais Cav-1 estatuto não teve correlação significativa com a sobrevida global ea sobrevida livre de doença ( P
= 0,178 e 0,104, respectivamente). Além disso, a taxa de sobrevivência de cinco anos cumulativo de doentes cujos tumores exibiram altos FAC Cav-1 expressão foi de 75,5% (IC 95%, ,642-0,868), enquanto era apenas 57,4% (IC 95%, 0,456-,692) em baixas FAC Cav-1 grupo ( P
= 0,053).

na análise univariada, estágio TNM, estágio T, status do nó de linfa e FAC Cav-1 nível foram encontrados para ser significativamente associada com a doença sobrevida livre de pacientes do GC ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 e 0,029, respectivamente; Tabela 4). estágio TNM, estágio T e FAC Cav-1 nível foram significativamente correlacionados com a sobrevida global ( P
= 0,012, 0,006 e 0,013, respectivamente; Tabela 4). Para determinar se FAC Cav-1 expressão foi um preditor independente de recorrência e sobrevida dos pacientes do GC, a análise multivariada foi realizada utilizando modelo de risco de regressão proporcional de Cox, em conjunto com a idade, classificação T, estágio TNM e outras características tumorais. Mais uma vez, Cav-1 no sangue FAC foi de forma independente e significativamente associados com a recorrência dos pacientes do GC e do resultado ( P
= 0,034 e 0,005, respectivamente; Tabela 4). Pelo contrário, as células tumorais Cav-1 nível falhou para prognosticar recorrência e sobrevivência do paciente GC no modelo simultânea (Tabela 4).

O valor preditivo morte de CAV-1 limiares em células tumorais e em FAC foi analisada também. Como mostrado na Figura 5, Cav-1 no sangue FAC previu a morte com bom desempenho; a área sob a curva foi (IC 95%: 0,515-0,738; P
= 0,032) 0,627. Considerando que, Cav-1 nível nas células tumorais não conseguiram prever a morte, com área sob a curva de 0,551. (IC 95%: 0,438-0,664; P
= 0,393)

Discussão

Aqui, nós relatamos que o Cav-1 imuno é observado principalmente na membrana celular e no citoplasma. Na gastrite sem tecidos IM, sinal de Cav-1 é predominantemente detectado na base e pescoço de células da glândula fúndica. Na gastrite com tecidos de MI, Cav-1 coloração localiza principalmente na célula de absorção e de células caliciformes de glândulas metaplásicas. Este resultado se correlaciona com outro estudo que analisou Cav-1 no tecido gástrico através de imuno-histoquímica [27]. CAV-1 expressão diminui gradualmente com a progressão da GC e o nível de expressão em vez de FAC em células tumorais, em certa medida prevê recorrência e sobrevivência em pacientes GC.

Funções de CAV-1 de proteína no desenvolvimento de tumores são dependente do tumor e [12] dependente de compartimento, [30]. CAV-1 gene está localizado a D7S522 lócus de cromossoma humano 7q31.1, que é frequentemente suprimida em alguns tipos de tumores [11]. Além disso, o CAV-1 está implicada no domínio caveolin andaime e podem induzir a inibição da sinalização do receptor de citocina [14], sugerindo o papel de supressor de tumor Cav-1. O tumor promoção da actividade de Cav-1 tem sido amplamente confirmada pela detecção cuidadosamente os seus níveis de expressão e os valores clínicos em variedades de cânceres, como o carcinoma de células escamosas de língua, carcinoma de células escamosas do esôfago, bexiga transição carcinomas de células, carcinoma nasofaríngeo e carcinoma de células escamosas do pescoço [16], [31], [32], [33], [34]. CAV-1 possui diferentes funções em células tumorais e células estromais. Por exemplo, no cancro da mama e cancro da próstata, perda de células do estroma de Cav-1, mas não tumorais Cav-1 anuncia mau prognóstico [6], [8], [12], [14], que indica as funções dependentes do compartimento de cavernoso 1.

Nossos resultados indicaram que Cav-1 nível de expressão em células epiteliais diminuiu gradualmente com a progressão maligna de GC. Resultados semelhantes foram relatados em outro estudo [26] investigar Cav-expressão de um primário e de GC, o que implica Cav-1 pode ser considerada como um supressor tumoral no desenvolvimento de GC. Além disso, ambas as células tumorais e FAC Cav-1 status de expressão da proteína não foram correlacionados com os típicos parâmetros clínico, tais como estágio T, estágio TNM e classificação Lauren. Isso foi em contraste com o outro estudo [26] que demonstraram que a baixa expressão de células tumorais Cav-1 foi correlacionada com a proteína de alta fase T, fase de TNM e metástases linfáticas. A diferença pode ser devido ao método de avaliação: avaliou-se a coloração multiplicando a intensidade e a proporção de células coradas e determinado o ponto de corte que tinha sensibilidade e especificidade da curva ROC com base no estado de sobrevivência global óptimo; ao passo que na outra pesquisa apenas a percentagem de células imunopositivas foi avaliada e o limiar de positivo ou negativo não foi apresentada. Além disso, o tamanho da amostra maior de nosso estudo influenciaram os resultados também.

FAC estão entre os componentes mais essenciais do estroma tumoral, com funções importantes induzir a deposição de ECM, que regula a diferenciação do epitélio e da resposta inflamatória e interagir com microvasculatura através da secreção de metaloproteinases de matriz e o factor de crescimento endotelial vascular [35]. Desde Cav-1 proteína é o componente requisito estrutural das cavéolas, expressão alterada de Cav-1 proteína em FAC afetaria vários processos patológicos e, consequentemente, promover o desenvolvimento do tumor. Perda de Cav-1 na proteína FAC promove a activação da via de activação através de FAC TGF-β, por conseguinte, facilitar a remodelação microambiente do tumor e o desenvolvimento de tumores [12]. No entanto, outro estudo publicado no celular
relatou funções contrárias de FAC Cav-1 proteína que estromais Cav-1 favorece a invasão tumoral e metástases através da regulação arquitectónica dependente da força do microambiente [36]. Portanto, o papel de FAC Cav-1 permanece incerto. Os resultados aqui apresentados demonstraram um preditor prognóstico independente de GC envolvendo o nível de expressão Cav-1 em FAC. Baixa expressão de Cav-1 em FAC, mas não em células tumorais prognosticated independentemente recidiva precoce e pobres sobrevida dos pacientes do GC. análise ROC indicou o valor prever morte de baixo Cav-1 em FAC. Os resultados implicaram a função inibidora de tumor de FAC Cav-1 de proteína e foram consistentes com a conclusão de cancro da mama e da próstata, o que elucidado de que a perda de estroma Cav-1 anuncia mau prognóstico [8], [12], [15]. Além disso, no câncer de mama, é claro que, com o desenvolvimento de câncer, o microambiente do tumor torna-se uma autofagia hipóxica e mal-nutrição nicho, estimulando no FAC. Em seguida, a autofagia activado anormal degrada Cav-1 em FAC. Claro que, se existem mecanismos semelhantes no GC exige mais in vitro
estudos.

Além disso, a perda de estroma Cav-1 tem um grande valor preditivo na ER (+), PR (+), HER2 (+), e os chamados pacientes triplo-negativo câncer de mama (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). terapia endócrina Paralelamente instituído não influencia o seu valor preditivo, tornando-se um novo universal ou cancro da mama marcador prognóstico amplamente aplicável [37]. GC é o quarto câncer comum e terceira morte causando no mundo [38], que ainda carece de biomarcadores apropriados suficientes para avaliação de prognóstico e tratamento personalizado anti-câncer. Os pacientes positivo GC HER2 são beneficiaram de tratamento com trastuzumab, no entanto, apenas alguns pacientes são HER2 positivo, por exemplo, apenas 19% dos pacientes do GC mostrou HER2 positivo em nosso estudo. Hoje em dia, os pacientes GC avançadas com HER2 negativo ainda está sofrendo de sobrevida. Assim identificar mais alvos que suprimem o desenvolvimento GC é altamente necessário. Aqui, nós demonstramos os valores do uso de proteínas do estroma como biomarcadores em GC, o que pode contribuir para a tipagem molecular de GC e, consequentemente, o tratamento de GC, verificando as funções essenciais do estroma tumoral no desenvolvimento do tumor. Além disso, um estudo prospectivo é altamente recomendado para validar o valor prognóstico e investigar o significado clínico de detectar Cav-1 em FAC.

Uma coisa interessante é que, embora FAC Cav-1 status pode ser usado como um preditor , quando a correlação entre CAFS níveis Cav-1 e os parâmetros clínico clássico de GC foram analisadas, nenhuma associação significativa foi encontrada. Assim, promover a invasão pelo tumor e metástases podem não ser os principais mecanismos pelos quais a perda de FAC Cav-1 promove o desenvolvimento de GC. A quimioterapia é o tratamento adjuvante mais comum que são recomendados para os pacientes estágio GC média e avançados na China. Combinado com os resultados mostrados aqui, destacamos que se baixa expressão de Cav-1 em FAC correlacionada com a resistência à quimioterapia pode ser um problema notável que merece um estudo mais aprofundado.

Finalmente, em nosso estudo, através dos avançados QDs baseada em tecnologia de dupla marcação de imunofluorescência, Cav-1 proteína em FAC foi precisamente localizado. As imagens co-localização pseudo-color nos permitiu avaliar o nível Cav-1 em FAC exclusivamente, no entanto, com base em QDs QDs-IHC e tecnologia dupla rotulagem de imunofluorescência não é comumente usados ​​em laboratórios clínicos. A imuno-histoquímica é a técnica mais habitualmente praticado em laboratórios clínicos. O nosso estudo anterior que se manifesta método QDs-IHC é tão sensível e específico como IHC [22]. rotulagem dupla Se você deseja detectar simultaneamente duas proteínas diferentes, tais como Cav-1 e α-SMA em um slide, com sede em QDs é um romance, método confiável e alternativa, pelo qual podemos obter os resultados tão precisos quanto possível.

Conclusões

em conclusão, nosso estudo avaliou a expressão Cav-1 em ambas as células tumorais e FAC e investigou seu significado clínico para os pacientes do GC. É digno de nota que a expressão de Cav-1 em FAC em vez de células tumorais particularmente aplicável em predizer recidiva precoce e as perspectivas de sobrevivência pobres de pacientes GC, sugerindo Cav-1 em FAC pode ser um alvo terapêutico candidato e um marcador de prognóstico útil dos pacientes GC . São necessários estudos adicionais para investigar os mecanismos pelos quais os elevados níveis de Cav-1 em FAC suprimem a progressão de GC e, possivelmente, para desenvolver terapêuticas segmentação Cav-1. Além disso, novos ensaios clínicos será essencial para verificar o valor prognóstico da FAC Cav-1 no GC e se poderia contribuir para um tratamento personalizado anti-câncer.

Agradecimentos

Os autores agradecem ao Dr. Kathryn a Solka, Departamento de Bioquímica da rush University Medical Center para escrever assistência.

• PLOS ONE: valor prognóstico do cancro do Stem Cell marcador CD133 expressão no câncer gástrico: A Systematic Review
• PLOS ONE: Segmentação CDH17 Suprime progressão tumoral no câncer gástrico por downregulating Wnt /β-catenina Signaling