PLoS ONE: Puž-reguliran Mir-375 inhibira migraciju i invaziju želučane stanica raka ciljajući JAK2

Sažetak pregled

mikroRNA (miRNAs) su izvijestili da igra ključnu ulogu u invazije i metastaziranja raka. Naša prethodna studija pokazala je da Mir-375 često regulirani kod raka želuca smanjuje proliferaciju stanica ciljajući Janus kinaze 2 (JAK2). Ovdje ćemo dalje utvrdio da je razina ekspresije Mir-375 značajno je smanjena u metastatskih želučanog tkiva raka u usporedbi s kontrolama bez metastaza. Ektopično izraz Mir-375 inhibira migraciju i invaziju želučanih stanica raka djelomično ciljajući JAK2. Nadalje, Mir-375 ekspresija negativno regulirana je metastaza povezanih faktora transkripcije puž, koji se izravno veže za navodni promotor Mir-375. Štoviše, pojačanom ekspresijom puž djelomično preokrenuti inhibicije migracije stanica karcinoma želuca uzrokovanog Mir-375. Uzeti zajedno, ovi podaci ukazuju na to da Mir-375 može biti negativno regulirana puževa i koji su uključeni u želučanom migraciju stanica raka i invazijom potencijalno ciljajući JAK2 pregled

Izvor:. Xu Y, Jin J, Liu Y, Huang Z, Deng Y, Ti T, et al. (2014) puž-reguliran Mir-375 inhibira migraciju i invaziju želučane stanica raka ciljajući JAK2. PLoS ONE 9 (7): e99516. doi: 10,1371 /journal.pone.0099516 pregled

Urednik: Ming Tan, University of South Alabama, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 7. veljače 2014. godine Prihvaćeno: 15. svibnja 2014; Objavljeno: 23. srpnja 2014 pregled

Copyright: © 2014 Xu i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od Natural znanstvenoj zakladi Kine (31301149, 31071221, 31190063, 31125017 i 31100975), Ministarstvo znanosti i tehnologije u Kini (2013CB945603, 2012CB945004 i (2011CBA01001), Ministarstva prosvjete u Kini (20110101110103 i (20130101120001), prirodoznanstvene zaklada Zhejiang Province, Kina (LQ13H160013, LQ14H160003, Z2100247 i Y2100106) je 111 projekta (B13026), temeljna istraživanja Sredstva za središnju sveučilišta (2014QNA7015) i Zhejiang Provincial programu za uzgoj visoke razine inovativnih zdravstvenih talenata. the donatori imali nikakvu ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

u konkurenciji interese.. autori su izjavili da nema suprotstavljenih interesa postoji

Uvod

Metastaza je najstrašniji aspekti raka, te je studirao za više od 100 godina [1], [2]. Kod karcinoma želuca, visoka smrtnost se uglavnom pripisuje odgođeno dijagnoze zbog nedostatka specifičnih simptoma u ranoj fazi. I metastaza je odgovoran za smrtnosti od raka povezanih s želučanom [3], [4]. Migraciju i invaziju stanica raka su bitne procese u metastatskog karcinoma povorci koja se sastoji od niza međusobno povezanih koraka, uključujući proliferaciju, nevezanosti, promet, transport, zaustavljaju se u organima, pridržavanje stijenke krvnih žila, izljeva, osnivanje mikro okolinu i proliferacije udaljenim organima. Kod karcinoma želuca, stanice invazije u okolno tkivo je ključni rano korak [3], [5]. Međutim, mehanizmi želučane stanice raka migracije, invazije i metastaziranja nisu u potpunosti razumjeli. Pregled

U posljednjih nekoliko godina, različite molekule, primjerice, faktori rasta, citokini, molekule izvanstaničnog matriksa-pregradnja, a neki transkripcijskih faktora kao puž, Twist i ZEB1 [6], [7], [8], [9], [10], [11], su objavljene voziti napredak stanica raka migracije, invazije i metastaziranja. U posljednje vrijeme, postalo je jasno da, osim abnormalnosti u genima za kodiranje proteina, promjene u ne-kodiranje gena se također mogu pridonijeti stanice raka migracije, invazije i metastaziranja, kao što su miRNAs, koji su klasa malih jednolančana NEKODIRAJUĆA RNK molekule koje reguliraju ekspresiju gena s velikim potencijalom i uključen je u regulaciju stanica raka migracije, invazije i metastaziranja kao aktivatori ili potiskivača [12], [13], [14], [15], [16] , Do danas, brojni miRNAs ispitani su u biti uključene u želučanom metastaze raka napredovanje, na primjer, miR-218, miR-9, miR-7 i miR-146a [6], [17], [18] [19]. Proučavali smo povezanost između specifične nereguliranom Mirne i specifične metastaza korak raka želuca, koji će pružiti uvid u mogući mehanizam želučane stanice raka migracije, invazije i metastaziranja. Pregled

U našem prethodnom istraživanju, Mir-375 bio je značajno regulirani kod raka želuca i inhibiran proliferaciju stanica želuca raka ciljajući JAK2 [20]. Zanimljivo je da je u ovom istraživanju, možemo dalje utvrdio da je razina ekspresije Mir-375 bio je još manji u uzorcima karcinoma želuca od metastaza-pozitivnih pacijenata compaired s onima sa pacijentima metastaza-free. Tako, predložili smo da miR-375 može imati uzročnu ulogu u želučanom metastaziranja raka. Naša istraživanja otkrila da izvanmaternične izraz Mir-375 inhibira migraciju i invaziju želučanih stanica raka je također djelomično ciljajući JAK2. Mi i dalje traži da saznate kako Mir-375 ekspresija je regulirano raka želuca. Rezultati su pokazali da je Mir-375 bio je meta metastaza povezanih faktora transkripcije puž i njegov izraz obrnuto povezana sa puž u raka želuca. Prekomjerna ekspresija puž može djelomično preokrenuti inhibicije migracije stanica karcinoma želuca uzrokovanog Mir-375. Dakle, naši rezultati pokazuju da Mir-375 inhibira želučane stanice raka migraciju i invaziju kroz puž /Mir-375 /propis JAK2 puta. Pregled

Materijali i metode

Klinički uzorci (etika i gubitka) i stanica linije

Klinički želučani uzoraka raka i njihove par podudaranja nemalignih uzoraka želuca 39 bolesnika podvrgnutih želučane resekcija karcinoma dali su Sir Run Run Shaw Hospital (Hangzhou, Kina). Svi uzorci su prikupljeni uz pisanu suglasnost od pacijenata kao što je ranije [20] što je opisano. Oba želučani tumorskih tkiva i susjedne nontumorous želučani tkiva prikupljene nakon operacije su i podijeljeni u dva dijela. Jedan je zamrznuta u tekućem dušiku odmah za daljnju uporabu, drugi dio je pohranjen u formalinu za patologije analizu. Pacijenti koji su uključeni u našoj studiji su podijeljeni u metastazama-free i metastaza pozitivne skupine (9/30). Stanične linije karcinoma želuca (AGS i MGC-803) i jedan ne-maligne želuca linija stanica epitela (GES-1) su prethodno opisano [20]. Pregled

RNA ekstrakciju pregled

Ukupna RNA iz želuca uzorci i stanične linije je ekstrahiran pomoću mirVana Mirna izolacije Kit (Ambion, TX, USA) slijedeći protokol proizvođača. pregled

Kvantitativna real-time PCR analiza pregled

izraz Mir-375 je ispitana je pomoću Taqman mikrornk testovima (Applied Biosystems, CA, USA) sa specifičnim primerima (P /N: 4373151, Biosystcms). Reakcija reverzne transkripcije vrši polazeći od 10 ng ukupne RNA pomoću petlji primera. Kvantitativna realnom vremenu PCR (QRT-PCR) koristeći standardni TaqMan mikrornk Ispitivanja protokol o ABI7500 real-time sustav detekcije PCR. ΔΔCt metoda relativne kvantizacije je korištena za određivanje Mirna izraz. CT je frakcijska broj ciklusa u kojoj fluorescentni svakog uzorka prolazi fiksnu prag. ΔCt je izračunata oduzimanjem CT snRNA U6 (RNU6B, P /N: 4373381, Applied Biosystems) iz CT Mirne interesa. ΔΔCt je izračunata oduzimanjem ΔCt referentnog uzorka (uparene ne maligna tkiva za kirurške uzoraka, normalnih tkiva i GES-1 stanica za želučane staničnim linijama karcinoma) iz ΔCt svakog uzorka. Fold promjena je određena kao 2 ^{-ΔΔCt. Pregled}

Migracija i invazija Test pregled

Stanice su transficirane s 20 nM pre-Mir-375 ili negativna kontrola pomoću transfekcije Agent (Ambion, TX, SAD) nakon proizvodnje protokola u 24 jažica. 24 h nakon transfekcije, Transwell® testa migracije i Matrigel® Test invazije provedene su odvojeno u 24-te Transwell® umeće sa 8 veličini um pora (Corning Costar Corp). Za transjažična testa migracije, 2 × 10 ^{4 AGS ili 3 × 10 4 MGC-803 stanice su suspendirane u 100 ul medija koji odgovara kulture bez fetalnog goveđeg seruma (FBS) prebaci se u najgornju komoru transjažice umetka s ne obloženu membrana. Za invaziju u Matrigel pokus, 5 × 10 4 AGS ili MGC-803 stanice su stavljene u 100 ul medija bez seruma u gornjem Matrigel obloženih komore umjesto. U oba pokusa, dno komore koja je sadržavala 600 ul medija sa 20% FBS. Stanice su zatim ostavljeni da se premješten ili napali tijekom 12 sati na 37 ° C. Stanice koje su migrirale ili invaziju u dnu komore su fiksirane, obojene s 4 ', 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI, 1:1000), vizualiziran pod faza kontrastnog mikroskopa i fotografiran. Ukupan broj migrirali ili napali stanica izbrojana IPP (Image-Pro Plus 6,0) softvera. Svi eksperimenti su neovisno ponovi najmanje tri puta. Pregled}

ogrebotine rana zarastanja pregled

Stanice su transficirane kao što je prethodno opisano, a dozvoljeno da rastu do konfluencije. Stanice su zatim uzgojene u odgovarajućem mediju bez FBS tijekom 12 sati, a zatim grebe vrhom pipete. Rane su područja obilježena i snimljena 0 h, 12 sati, 24 sati i 36 h respektivno. Stopa stanica migracije je ocijenjena od strane fotografiranje i kvantificiranja migrirali udaljenost stanica kretali od ruba rane prema središtu pomoću IPP 6.0 sustav. Svi pokusi su ponovljeni tri puta. Pregled

Izvedene

Da bi se proizvelo pGL3-375pro plazmid, DNA slijed koji sadrži Pri-Mir-375 (primarni Mir-375) promotor je bio pojačan pomoću RT-PCR koristeći prajmeri 5'-ATCG CTCGAG ACA GAC CCT GCT AAG CGA CTC-3 'i 5'-ATCG aagctt ACG CCT TGG AGC tTG TCC-3', a zatim su klonirana u pGL3-Basic vektor (Promega). Da bi se stvorio plazmid koji izražava puž u stanicama, otvoreni okvir čitanja (ORF) slijed puž je klonirana u vektor ekspresije sisavaca pEGFP-C1 (Clontech, CA, SAD) pomoću primera 5 'ATCG AA GCT TCG ATG CCG CGC TCT TTC CTC G-3 'i 5' ATCG GGA TCC TCA GCG GGG ACA TCC TGA OKS-3 '. Za ektopične ekspresije FLAG-tagged JAK2, ljudski JAK2 s kodiranjem regiju kloniran je u pCMV-oznake 2C vektora. Konstruirati plazmid koji izražava Mir-375 u stanicama sisavaca, upareni oligonukleotidi na temelju primarne sekvence nije-miR-375 i njegove bočne regije klonirani su u ekspresijski vektor sisavaca pEGFP-C1 (Clontech, CA, USA). Svi konstrukata su potvrđene sekvencioniranjem. Pregled

luciferaza analitički pregled

Četrdeset tisuća stanice su posađene na ploči s 24 jažica 24 sata prije transfekcije. Stanice su transfektirane s pGL3-375pro ili pGL3-Basic vektor. PRL-TK vektor (Promega, WI, USA) koji sadrži Renilla luciferaze pregled također je transfektirano kao referentna kontrola. Krijesnice i Renilla luciferaze pregled aktivnosti su mjereni pomoću Dual-Luciferase Reporter Assay (Promega) 24 sata nakon transfekcije. Krijesnice Aktivnost luciferaze je normalizirana na Renilla aktivnost luciferaze. Pregled

Statističke analize pregled

Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± standardna greška (SE) iz tri neovisna eksperimenta. Odnosi između ekspresije Mir-375 i izražavanje puž mRNA su istražili Pearsonov koeficijent korelacije pregled, koji je ranije opisano [20]. Student je t pregled -test i X pregled, ^{2 test je za određivanje statističkog značaja. P izvoznici < 0,05 smatra se statistički značajna pregled}

Rezultati

Mir-375 dramatično regulirani u želučanim stanicama raka i tkiva iz metastaza-pozitivnih pacijenata
.

Kako shvatiti da li Mir-375 je povezana sa želučanom metastaza raka, prvo detektira razinu ekspresije Mir-375 u osnovnim želučanog tkiva raka iz metastaza-pozitivne i metastaza bez pacijenata. U usporedbi s uzorcima pacijenata metastaza-free, razina ekspresije Mir-375 bio je gotovo dvostruko smanjenje u tkivima od metastaza pozitivnih bolesnika ( P izvoznici < 0,05) (Slika 1A). U suglasja s ovim rezultatom, razina ekspresije Mir-375 u staničnim linijama želučanih negativno povezana sa sposobnostima stanica migracije i invazije. Metastatskih svojstva želučanog epitela staničnih linija (GES-1, MGC-803, AGS) su karakterizirani. Kao što je prikazano na Slici 1C i 1D migraciju i invaziju sposobnosti AGS stanične linije bila je veća od one MGC-803 i GES-1 staničnim linijama ( P pregled < 0,01). Obrnuto, Mir-375 ekspresija u AGS stanicama bila je niža od one MGC-803 i GES-1 stanica ( P izvoznici < 0,01) (Slika 1B). Jednom riječju, Mir-375 je regulirani u želučanim tkiva raka iz metastaza-pozitivnih bolesnika i želučanih stanica raka s većim migraciju i invaziju sposobnosti. Ova korelacija ukazuje na to da Mir-375 može imati uzročnu ulogu u želučanom metastaza raka. Pregled

Prekomjerna ekspresija Mir-375 inhibira želučane stanice raka migracija i invazija pregled

Kako bi istražili ulogu Mir-375 u rak želuca metastaze, ispitan je učinak Mir-375 prekomjerne ekspresije na migracije i invazije AGS i MGC-803 želučanih stanica raka s niskim endougenous izražavanja Mir-375. Stanice su transfektirane s Mir-375 prekursor (Mir-375) ili prekursora-negativnih kontrolnih nukleotida (negativno) ili ništa od gore navedenog (tobožnji). Test migracije Transwell® pokazala je da prekomjerna ekspresija Mir-375 značajno inhibira migraciju AGS (slika 2a, 2b) i MGC-803 stanica (Slika S1A, S1B). U skladu s tim rezultatima, ogrebotine zavoji za liječenje Test je također otkrila da su brzine AGS (slika 2c, 2d) i MGC-803 stanica (Slika S1C, S1D) migracije prema području rane su značajno smanjena nakon pojačane ekspresije Mir-375 , Mi i dalje zaposlen invaziju u Matrigel esej i otkrili da pretjerana ekspresija Mir-375 je dovelo do više od dva puta smanjenje invazivnih svojstava AGS (slika 3a, 3b) i MGC-803 stanica (Slika 3C, 3D). Zajedno, ovi rezultati pokazuju da prekomjerna ekspresija Mir-375 je dovoljna da inhibira oba migraciju i invaziju sposobnosti želučanih stanica raka. Pregled

Mir-375-regulirana JAK2 je uključen u regulaciju želučane stanice raka migracije i invazije pregled

Naša prethodna studija je identificirala JAK2 kao nizvodni cilj Mir-375 [20]. Evo, mi smo istražiti je li JAK2 je uključen u regulaciju želučane stanice raka migracije i invazije. zaposleni smo vektor-based RNAi tehniku ​​iscrpiti endogene JAK2 i otkrili da su migraciju i invaziju aktivnosti AGS (slika 4) i MGC-803 stanica (Slika S2) su oboje jako inhibiran. Istovremeno, proučavali smo da li JAK2 može umanjiti učinak inhibicije želučane stanice raka migracije i invazije uzrokovane Mir-375. Stanice su ko-transficirane s miR-375 i prekursora ili JAK2 nadekspresijom vektor (Mir-375 + JAK2) ili kontrolu praznim vektorom (Mir-375 + vektorski). Pojačanom ekspresijom JAK2 jasno promovirala stanicama migraciju i invaziju, kako je prikazano na slici 4 i S2. Tako je, u skladu s našim pretpostavkama, Mir-375 može spriječiti migraciju i invaziju želučanih stanica raka djelomično ciljajući JAK2. Se nadalje utvrđuje da se pojačana ekspresija JAK2 nema učinka na razinu ekspresije Mir-375 kao što je prikazano na slici S3. Međutim, ne možemo isključiti mogućnost da je deregulacija Mir-375 ometa druge ciljeve potrebne za želučane stanice raka migracije i invazije. Pregled

puž downregulates Mir-375 izraza pregled

Navedeni rezultati ukazuju na to da mir-375 može biti na meti nekih transkripcijskih faktora koji su povezani s rakom invazije i proces metastaze. Naravno, mi se fokusirati na to kako Mir-375 izražavanje je regulirano. Mi smo prvi put saznali za razgovarao DNA područje uzvodno od pri-Mir-375 gena, koja je izvijestila da sadrži genski promotor pri-Mir-375 [21]. Mi smo tada izvedena Consite program (http://asp.ii.uib.no:8090/cgi-bin/CONSITE/consite) i utvrdili da je bilo šest veznih mjesta faktora transkripcije puž u regiji DNA (slika 5A). DNA područje je kloniran u pGL3-Basic vektor (Promega) (pGL3-375pro) za mjerenje aktivnosti promotora. U skladu s podacima iz skupine koja se Walker [21], naši rezultati pokazuju da je ova DNA područje sadrži promotor gena pri-miR-375, te je sposoban za usmjeravanje ekspresije luciferaze (slika 5B). Aktivnost luciferaze učinkovito potisnut kada pGL3-375pro vektor bio ko-transfektiran sa puž vektora ekspresije (puž), ali ne kada je ko-transfektirane s praznim kontrolnim vektorom (Mock) (Slika 5C). Štoviše, puž prekomjerna ekspresija može smanjiti razinu ekspresije Mir-375 za 46% (Slika 5D). Kako bi se utvrdilo klinički značaj ovih rezultata uspore razinu ekspresije Mir-375 sa stupnjem puž mRNA u istih bolesnika s karcinomom želuca. Kao što je prikazano na slici 5E, različita inverzna korelacija između razine ekspresije od Mir-375 i puž mRNA ( P izvoznici < 0.05, r = -0,6). Dakle, ova promatranja pokazuju da puž je potencijalni uzvodno regulator Mir-375 izražavanja. Pregled

puž je uključen u regulaciju želučane stanice raka migracije ciljajući Mir-375

za daljnje tumačenje korelacija Mir-375 i puževa, proučavali smo da li puž je uključen u regulaciju želučane stanice raka migracije ciljajući Mir-375. zaposleni smo tehniku ​​vektorskoj grafici u povećanju puž razinu ekspresije i utvrdio da je migracija aktivnost AGS stanica (Slika 6) su uvelike unaprijeđen. Istovremeno, proučavali smo da li puž može umanjiti učinak inhibicije želučane stanice raka migracije uzrokovane Mir-375. Stanice su ko-transficirane Mir-375 nadekspresijom vektora i puž nadekspresijom vektor (puž + Mir-375). Prekomjerna ekspresija puž jasno promovira stanicama migraciju i može djelomično umanjiti učinak inhibicije želučane stanice raka migracije uzrokovane Mir-375 kao što je prikazano na slici 6. Prema tome, u skladu s našim pretpostavkama, puž može spriječiti migraciju želučanih stanica raka djelomično ciljajući mir-375. pregled

Rasprava pregled

MiRNAs su izvijestili da regulira migracija tumora, invaziju i metastaziranje, uključujući rak želuca, [6], [22]. Mir-375 ranije je pokazano kako igraju važnu ulogu u želučanom stanice raka proliferacije [20], [23]. Međutim, regulatorni mehanizmi ostaju nejasni. U ovom istraživanju, možemo dodatno istražiti funkciju i potencijalne mehanizme Mir-375 u migraciji i invaziji želučanih stanica raka. Otkrili smo da izražajnost Mir-375 inhibiran proliferaciju, migraciju i invaziju želučanih stanica raka djelomično ciljajući JAK2. Prošlo je više od desetljeća otkako JAK2 prva klonirana [24]. JAK2 se izražava u gotovo svakom tkivu, a povezana je s mnogim patološka napreduje. Iako je očito da JAK2 djeluje kao onkogena u oba mijeloproliferativnih poremećaja i nekih solidnih tumora [25], [26], [27], bez izravnog uključivanja JAK2 u migraciji raka, invaziju ili metastazu je bio prijavljen. Uzbudljivo, naša studija prva pokazala da kucaju dolje JAK2 strane RNAi inhibiran migraciju i invaziju aktivnosti želučanih stanica raka slične onoj prekomjernom ekspresijom Mir-375. Osim toga, prekomjerna ekspresija JAK2 mogao promicati migraciju i invaziju želučanih stanica raka. Dakle, pretpostavili smo da JAK2 mogli suprotstaviti inhibitorni učinak na migraciju stanica i invazije uzrokovane Mir-375. S obzirom na ključnu ulogu Mir-375 i JAK2 kao master regulatora u želučanoj stanice raka proliferaciju, migraciju i invaziju, i od njih ima terapijski potencijal u liječenju raka želuca. Dakle, ostaje da se istraži postoji li drugi ciljevi sudjelovati u Mir-375 posredovanog želučane metastaza. Pregled

Od posebnog interesa, mi i dalje proučavao kako Mir-375 koji su uključeni u želučanoj karcinogeneze. Iako je evidentna da metilacije DNA i histona deacetiliranja su mogući mehanizmi uključeni u silazni Mir-375 u rakom želuca [23]. Mehanizmi kojima se temelji Mir-375 deregulacija u želučanom metastaza raka su još uvijek slabo razumio. Postoji mogućnost za transkripcijski blokada izražavanja Mir-375 gena u ovom procesu. Ovdje ćemo pokazati da je metastaza povezanih faktora transkripcije puž je potencijalni uzvodno regulator Mir-375 izražavanja. Puž je DNA-vezujući cink prst proteina, te je prijavljen kao transkripcijski represorom [28]. Acumulating dokazi pokazuju da puž veže na E-kutije u promotora E-kadherina i potiskuje njegovu transkripciju regulira invazija tumora razvoj [29]. Osim toga, pronađeno je hiperekspresija puž u karcinomima biti povezan s limfnih čvorova metastaza, tumora relapsa i prognozi [30], [31], [32], [33], [34] [35]. U skladu s drugim izvješćima, naša studija otkrila da puž mRNA je izraženo u želučanom tkivu raka u usporedbi s njihovim susjednim ne-malignih tkiva. Kao promotor aktivnost Mir-375 se može potisnuti puževa i prekomjernom ekspresijom puž mogao smanjiti Mir-375 razina ekspresije bitno mi je nadalje utvrdio jasnu inverznu korelaciju između razine ekspresije od Mir-375 i razini puž mRNA u raka želuca uzorci. Puž je također utvrđeno da je uključen u regulaciju želučane stanice raka migracije ciljajući Mir-375. Pregled

Na kraju, mi smo utvrdili da Mir-375 neprirodno je izražen u želučanog tkiva raka od metastaza pozitivnih pacijenata ili želučane stanice raka s većom migracije i invazije aktivnosti u usporedbi s tkivima bolesnika metastaza bez ili neinvazivna želuca epitela stanične linije GES-1 respektivno. Prekomjerna ekspresija Mir-375 smanjuje želučane stanice raka migraciju i invaziju aktivnosti barem djelomično ciljajući JAK2. Štoviše, puž može biti uzvodno regulator Mir-375 koji negativno regulira ekspresiju Mir-375 i bio uključen u regulaciju želučane stanice raka migracije ciljajući Mir-375. Zajedno, naši rezultati daju undescribed put, u kojem transkripcijski faktor puž regulira ekspresiju Mir-375, koji potiskuje svoju izravnu ciljnu JAK2, što dovodi do inhibiraju migraciju i invaziju želučanih stanica raka. Naši podaci pokazuju da obnova Mir-375 ili inhibiciju puž ili JAK2 mogu biti korisne terapijske strategije za želučane liječenja raka. To će sigurno biti vrlo zanimljivo dalje istražiti potencijalnu učinkovitost tih molekula koje ciljaju Mir-375, JAK2 ili puž u liječenju raka želuca. Još jedna zanimljiva tema za buduća istraživanja će biti identifikacija drugih mogućih meta Mir-375, a točnije, moguća uloga JAK2 u želučanom metastaza raka. Pregled

popratne podatke pregled Slika S1. pregled Ectopic izraz Mir-375 smanjuje migraciju MGC-803 stanica. MGC-803 stanice transficirane s Mir-375 prekursor (Mir-375), negativna kontrola (negativan) ili ništa od gore navedenog (Mock) su bili podvrgnuti bunara testa migracije (A) i ogrebotine zacjeljivanje rana analize (C). (A) Reprezentativne područja invazivnih stanica na donjoj strani membrane koje su fiksirane i obojene sa DAPI. (B) Ukupno migriranih stanica na donjoj strani membrane izbrojana IPP 6,0 softvera. (C) Stanice migracija na ranjene području fotografirao je mikroskopom na 0 h, 12 h, 24 sati i 36 h nakon ranjavanja. Isprekidane linije ukazuju na područja gdje nedostaje stanice. (D) Stopa migracija ispitana je mjerenjem razmaka između stanica kretali od ruba rane prema središtu u 36 sati, nakon grebanje. Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SE iz najmanje tri neovisna pokusa. Barovi, 50 um. * P izvoznici < 0,05, ** P izvoznici < 0,01 pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s001 pregled (TIF) pregled slika S2 , pregled Prekomjerna ekspresija JAK2 obrće induciranu inhibiciju Mir-375 od MGC-803 stanica migracije i invazije. Stanice transficirane s naznačenim vektorima ili oligonukleotidima podvrgnuti su s transjažična migracije (A) ili invaziju u Matrigel pokus (C). Pokusi spašavanja za Mir-375 pojačane ekspresije izvedene su izvanmaternične izražavanja JAK2 bez 3'-UTR u tretiranim Mir-375-stanicama. (A, C) su pokazala reprezentativni polja stanicama na dnu komore, na 12 sati nakon migracije i invazije. Mjerila, 50 um. (B, D) Ukupan broj migrirali ili invazivnih stanica iz devet slučajno odabranih područja izbrojana IPP 6.0. * P izvoznici < 0,05, ** P izvoznici < 0,01 pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s002 pregled (TIF) pregled slika S3 , pregled JAK2 nema nikakvog utjecaja na Mir-375 izražavanja. U AGS i MGC-803 stanice su transficirane s JAK2 nadekspresijom vektor ili kontrolnom vektoru i podvrgnut RT-PCR analize za ekspresijsku razinu Mir-375. Razina RNA U6 je služila kao kontrola pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s003 pregled (TIF) pregled