PLoS ONE: Sraigė reguliuojama MIR-375 slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląstelių Nukreipimas JAK2

Anotacija

mikro RNR (miRNAs) buvo pranešta vaidinti svarbų vaidmenį vėžio invazijos ir metastazių. Mūsų Ankstesnis tyrimas parodė, kad Pasaulis-375 dažnai downregulated skrandžio vėžio slopina ląstelių proliferaciją nukreipiant Janus kinazės 2 (JAK2). Čia mes dar rasti, kad žodžiai lygis miR-375 yra gerokai sumažėjo skrandžio vėžiui audinių palyginti su ne metastazės kontrolės. Negimdinis išraiška miR-375 slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląstelių dalies nukreipiant JAK2. Be to, miR-375 išraiška yra neigiamai reguliuoja ir jo metastazių susijęs transkripcijos veiksnio sraigė, kuri tiesiogiai prisijungusi prie spėjamame promotoriaus miR-375. Be to, padidėjusią sraigė gali iš dalies pakeisti skrandžio vėžio ląstelių migraciją sukelia miR-375 slopinimą. Kartu paėmus, šie duomenys rodo, kad Pasaulis-375 gali neigiamai reglamentuoja sraigė ir dalyvauja skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazijos potencialiai nukreipiant JAK2

nurodomoji dalis:. Xu Y Jin J Liu Y Huang Z Dan Y Jūs T et al., (2014) sraigė reguliuojama MIR-375 slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląstelių Nukreipimas JAK2. PLoS ONE 9 (7): e99516. Doi: 10,1371 /journal.pone.0099516

redaktorius: Mingas Tan universiteto Pietų Alabama, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: vasario 7, 2014; Priėmė: Gegužės 15, 2014 m Paskelbta: Lie 23, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Xu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė gamtos mokslo fondo Kinijos (31301149, 31071221, 31190063, 31125017 ir 31100975), ministerijos mokslo ir technologijų Kinijoje (2013CB945603, 2012CB945004 ir (2011CBA01001), švietimo ir mokslo ministerija Kinijos (20110101110103 ir (20130101120001), natūralus mokslo fondas, Zhejiang Province, Kinija (LQ13H160013, LQ14H160003, Z2100247 ir Y2100106), 111 projektas (B13026), Pagrindinių mokslinių tyrimų fondų Centrinės universitetuose (2014QNA7015) ir Zhejiang provincijos programa, skirta aukšto lygio naujoviškų sveikatos talentų auginimo. finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Metastazė yra pats baisiausias aspektai vėžio ir buvo tiriamas daugiau nei 100 metų [1], [2]. Skrandžio vėžio, didelis mirtingumas daugiausia atributus vėluojančio diagnozę dėl konkrečių simptomų ankstyvoje stadijoje trūksta. Ir metastazių yra atsakingas už skrandžio vėžio susijusio mirtingumo į [3], [4]. Migracija ir invazija į vėžinių ląstelių yra esminiai procesai metu vėžio metastazavusiu procesija, kuri susideda iš tarpusavyje susijusių priemonių, įskaitant platinimo, būrys, apyvartą, transporto, arešto organų laikymasis kraujagyslių sienelių, ekstravazacija, steigimas mikroaplinkos ir platinimu serijos tolimi organus. Skrandžio vėžio, ląstelės invazija į aplinkinių audinių yra esminis anksti žingsnis [3], [5]. Tačiau skrandžio vėžio ląstelių migracijos, invazija ir metastazių mechanizmai nebuvo visiškai suprantama.

Pastaraisiais metais įvairios molekulės, pavyzdžiui, augimo faktorių, citokinų, tarpląsteliniame-remodeling molekulių, ir kai transkripcijos veiksnių pavyzdžiui, sraigė, pasukti ir ZEB1 [6], [7], [8], [9], [10], [11], buvo nustatyta, vairuoti vėžinių ląstelių migracija, invazija ir metastazių pažangą. Pastaruoju metu, tapo akivaizdu, kad, be to, anomalijos baltymų kodavimo genų, keičiant nekoduojanti genų taip pat gali prisidėti prie vėžinių ląstelių migraciją, invazija ir metastazių, pavyzdžiui, miRNAs, kurios yra iš klasės mažas viengrandis nekoduojanti RNR molekulės, reguliuoti genų ekspresiją su dideliu potencialu ir buvo susijęs su vėžio ląstelių migracijos, invazija ir metastazių kaip aktyvatoriai ar slopintuvai [12] reglamento [13], [14], [15], [16] , Iki šiol buvo tiriamas iš miRNAs numeris į būti susijęs su skrandžio vėžys ir jo metastazių progresavimo, pavyzdžiui, miR-218, miR-9, miR-7, ir miR-146A [6], [17], [18], [19]. Mes ištyrėme tarp konkretaus dysregulated Mirna ir specifinį metastazių žingsnio skrandžio vėžio asociaciją, kuri suteiks įžvalgų galimų mechanizmų skrandžio vėžio ląstelių migracijos, invazija ir metastazių.

Mūsų ankstesniame tyrime, PPN-375 buvo žymiai downregulated skrandžio vėžio ir inhibuoja skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją nukreipiant JAK2 [20]. Įdomu tai, kad šiame tyrime, mes dar rasti, kad žodžiai lygis miR-375 buvo dar mažesnis skrandžio vėžio mėginių metastazės-teigiamiems pacientams compaired su tuo iš pacientų metastazės-nemokamai. Taigi, mes pasiūlėme, kad Pasaulis-375 gali turėti priežastinį vaidmenį skrandžio vėžio metastazių. Mūsų tyrimai atskleidė, kad negimdinis išraiška miR-375 slopino migracija ir invazija skrandžio vėžio ląsteles, taip pat iš dalies nukreipiant JAK2. Mes taip pat raginami išsiaiškinti, kaip Pasaulis-375 išraiška buvo reglamentuojamas skrandžio vėžio. Rezultatai parodė, kad Pasaulis-375 buvo metastazes susijęs transkripcijos veiksnio sraigė tikslas ir jo išraiška buvo atvirkščiai koreliuoja su sraigė skrandžio vėžio. Padidėjusi sraigė gali iš dalies pakeisti skrandžio vėžio ląstelių migraciją sukelia miR-375 slopinimą. Taigi, mūsų tyrimo rezultatai rodo, kad Pasaulis-375 slopina skrandžio vėžio ląstelių migraciją ir invazija per sraigė /Pasaulis-375 /JAK2 reguliavimo keliu.

Medžiagos ir metodai

klinikinius mėginius (Etikos ataskaita) ir ląstelių linijos

Klinikiniai skrandžio vėžio mėginiai ir jų pora atitikimo nepiktybinių skrandžio mėginius iš 39 pacientų, kuriems atliekama skrandžio vėžio rezekcijos teikė seras Run Run Shaw ligoninės (Hangzhou, Kinija). Visi mėginiai buvo surinkti gavus raštišką sutikimą iš pacientų, kaip aprašyta anksčiau [20]. Abu skrandžio navikų audiniuose ir gretimų nontumorous skrandžio audiniai surinkti po operacijos buvo ir padalintas į dvi dalis. Vienas buvo užšaldomos skystame azoto iš karto tolesniam naudojimui, kita dalis buvo saugomi formalinu patologijos analizę. Dalyvaujantys mūsų tyrime pacientai buvo suskirstyti į metastazių-nemokamai ir metastazės teigiamas grupių (9/30). Skrandžio vėžio ląstelių linijas (AGS ir MGC-803) ir vienas nepiktybinis skrandžio epitelio ląstelių linija (GES-1) buvo aprašyta anksčiau [20].

RNR gavybos

Viso RNR iš skrandžio mėginius ir ląstelių linijos buvo išgauti naudojant mirVana Mirna išskyrimas komplektas (Ambion, TX, Jungtinės Amerikos Valstijos) po gamybos protokole.

Kiekybiniai realaus laiko PGR analizė

miR-375 išraiška buvo tiriami naudojant TaqMan MicroRNA tyrimai (Applied Biosystems, CA, JAV) su specifinius pradmenis (P /N: 4373151, Applied Biosystems). Atvirkštinės transkripcijos reakcija buvo padaryta nuo 10 ng visų RNR naudojant kilpinio pradmenis. Kiekybinis realaus laiko PGR (KRL-PGR) buvo atliktas naudojant standartinę TaqMan MicroRNA tyrimų protokolą ABI7500 "Realaus laiko PGR aptikimo sistema. ΔΔCt metodas santykinio kvantavimo buvo siekiama nustatyti Mirna išraiška. CT yra trupmeninė ciklas numeris, kuriame kiekvieno mėginio fluorescencija eina nei nustatyta riba. ΔCt buvo apskaičiuojamas atimant snRNA U6 Ct (RNU6B, P /N: 4373381, Taikomosios BIOSYSTEMS) nuo palūkanų Mirna Ct. ΔΔCt buvo apskaičiuojamas atimant ataskaitinio mėginio ΔCt (poriniai nepiktybinis audinių chirurgijos pavyzdžius, normalių audinių ir GES-1 ląstelės skrandžio vėžio ląstelių linijų) iš kiekvieno mėginio ΔCt. Sulenkite pokytį lėmė kaip 2 ^-ΔΔCt.

Migracija ir invazija tyrimas

Ląstelės buvo pernešta su 20 Nm iki Pasaulis-375 arba neigiamos kontrolės, naudojant transfekcijq tarpininką (Ambion, TX, JAV) po Gamyba protokole 24-duobučių lėkštelėse. 24 val po transfekciją, Transwell migracijos tyrimas ir Matrigel invazija tyrimas buvo atliekamas atskirai, naudojant 24-gerai Transwell įterpia 8 mkm akučių dydis (Corning "Costar Corp). Dėl Transwell migracijos tyrimas, 2 × 10 ^{4 AGS arba 3 × 10 4 MGC-803 ląstelių suspenduotos 100 iL atitinkanti kultūros terpėje be vaisiaus galvijų serumo (FBS) buvo pakrautas į viršų kameroje transwell įdėklas su ne -coated membrana. Dėl Matrigel invazijos metodu, 5 × 10 4 AGS arba MSV-803 ląstelės buvo padengtas 100 iL serumo neturinčia terpe viršutiniame Matrigel dengtos kameroje vietoj. Abiem tyrimus, apačioje kamera buvo, kuriame yra 600 iL terpę su 20% FBS. tada ląstelės buvo leista perkelti arba įsiveržė 12 valandų, esant 37 ° C temperatūroje. Ląstelės migravo arba įsiveržė į apatinį kameroje buvo nustatytos, tamsintas su 4 ", 6-diamidino 2-fenilindolo (DAPI, 1:1000), ryškinamos pagal fazinio kontrasto mikroskopu ir fotografavo. Viso migravo arba įsiveržė ląstelių buvo skaičiuojamas IPP (image-Pro Plus 6.0) programine įranga. Visi eksperimentai buvo savarankiškai pakartoti bent tris kartus.}

įbrėžimams žaizdų gijimą tyrimas

Ląstelės buvo pernešta kaip aprašyta anksčiau ir leido augti santakoje. Ląstelės buvo tada kultivuojamos per atitinkamą terpėje be FBS 12 valandų ir tada, subraižyti pipetės galu. Žaizdų teritorijos buvo pažymėtos ir fotografavo 0 h, 12 h, 24 h ir 36 h atitinkamai. Ląstelių migracijos lygis buvo įvertintas tiek fotografavimas ir kiekybiškai išsiskyrusio atstumas ląstelių persikėlė iš žaizdos krašto link centro, naudojant IPP 6.0 sistema. Visi eksperimentai buvo kartojamas tris kartus.

konstruoja

Jei gaminti pGL3-375pro plazmidės, DNR seką, kurioje pri-Pasaulis-375 (pirminė Pasaulis-375) rengėjas sustiprino RT-PGR, naudojant pradmenys 5'-ATCG CTCGAG PPK GAA BMT GCT ARG CGA BTK-3 "ir 5'-ATCG AAGCTT ACG BMT TGG AGC TTG TCC-3" ir tada klonuoti į pGL3 bazinis vektorius (Promega). Statyti plazmidės, kad išreiškia sraigė ląstelėse, atviras skaitymo rėmelis (ORF) seka sraigė buvo klonuotas į žinduolių išraiška vektoriaus pEGFP-C1 (Klontex, CA, JAV), naudojant pradmenis 5'-ATCG A. GCT TCG ATG CCG CGC TCT TTC BTK G-3 "ir 5'-ATCG GGA TCC TBS GCG ggg PPK TCC TGA GCA-3". Dėl negimdinio išraiškos vėliava-tagged JAK2, žmogaus JAK2 su kodavimo regioną buvo klonuotas į pCMV-Tag 2C vektorių. Statyti plazmidės, kad išreiškia MIR-375 žinduolių ląstelėse, suporuotų oligonukleotidai remiantis pirminės sekos yra-Pasaulis-375 ir jos gretutines regionai buvo klonuotas į žinduolių išraiška vektoriaus pEGFP-C1 (Klontex, CA, JAV). Visi konstruktai buvo patvirtinta sekos.

liuciferazės tyrimas

keturiasdešimt tūkstančių ląstelės buvo pasėjamos į 24-duobučių lėkštelėse 24 val prieš transfekciją. Ląstelės buvo pernešta su bet pGL3-375pro ar pGL3-BASIC vektorių. PRL-TK vektorius (Promega, WI, JAV), kuriuose yra Renilla
liuciferazė taip pat buvo cotransfected kaip atskaitos kontrolę. "Firefly ir Renilla
liuciferazės veikla buvo matuojamas naudojant" Dual-liuciferazės reporterio testą (PROMEGA) 24 h po transfekciją. "Firefly liuciferazė veikla buvo standartizuoti Renilla liuciferazės veikla.

statistines analizes

Duomenys atstovavo vidurkis ± standartinė paklaida (SE) trijų nepriklausomų eksperimentų. Santykiai tarp PPN-375 išraiškos ir sraigė mRNR ekspresijos buvo ištirta Pearson
koreliacijos koeficientas, kuris buvo aprašytas anksčiau [20]. Studento , T
-test ir , X
^{2 testas buvo atliekamas siekiant nustatyti, statistinį reikšmingumą. P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas}

Rezultatai

MIR-375 yra labai downregulated skrandžio vėžio ląstelių ir audinių iš metastazės-teigiamiems pacientams
.

Jei išsiaiškinti, ar Pasaulis-375 yra susijęs su skrandžio vėžio metastazių, mes pirmą kartą aptikta raiškos lygis PPN-375 pradinėse skrandžio vėžio audiniuose iš metastazės-teigiamas ir metastazės be pacientams. Lyginant su mėginių iš pacientų metastazės be pasakymas lygis miR-375 buvo beveik du kartus sumažinti audiniuose iš metastazės-teigiamiems pacientams ( P
< 0,05) (1A pav.) Pritardamas šio rezultatas, raiškos lygis miR-375 į skrandžio ląstelių linijų buvo neigiamai susijęs su ląstelių migracijos ir invazijos gebėjimų. buvo būdingas metastazėms savybės skrandžio epitelinių ląstelių linijas (GES-1, MSV-803, AGS). Kaip parodyta 1C ir 1D paveiksle, migracija ir invazija gebėjimai AGS ląstelių linijos buvo didesnis nei MGC-803 ir GES-1 ląstelių linijas ( P
< 0,01). Atvirkščiai, PPN-375 išraiška AGS ląstelių buvo mažesnis nei MGC-803 ir GES-1 ląstelių ( P
< 0,01) (1B pav.) Žodžiu, PPN-375 yra downregulated skrandžio vėžio audiniuose iš metastazės-teigiamiems pacientams ir skrandžio vėžio ląstelių su didesniais migracijos ir invazija sugebėjimus. Ši koreliacija rodo, kad Pasaulis-375 gali turėti priežastinį vaidmenį skrandžio vėžio metastazių.

Padidėjusi miR-375 slopina skrandžio vėžio ląstelių migraciją ir invazija

Jei tyrinėti PPN-375 vaidmenį skrandžio vėžio metastazės, mes išnagrinėjo Pasaulis-375 raiškos poveikį migracijos ir invazijos į AGS ir MSV-803 skrandžio vėžio ląstelių su mažu endougenous išraiškos PPN-375. Ląstelės buvo pernešta su kuriuo Pasaulis-375 pirmtako (MIR-375) arba prekursorių neigiamas kontrolės oligonukleotidų (neigiamas) arba nė vienas iš pirmiau (maketas). Transwell migracijos tyrimas parodė, kad padidėjusi miR-375 labai slopino AGS (pav 2a, 2b) ir MSV-803 ląstelių (pav S1A, S1B) migracija. Be atitikti šiuos rezultatus, įbrėžimams žaizdų gijimą tyrimas taip pat atskleidė, kad AGS greičiai (pav 2c, 2d) ir MGC-803 ląstelių (pav S1C, S1D) migracijos į žaizdos srityje buvo gerokai sumažėjo po raiškos miR-375 , Mes taip pat dirba Matrigel invazija tyrimą ir nustatė, kad padidėjusi miR-375 lėmė daugiau nei du kartus sumažinti invazinių savybių AGS (pav 3a, 3b) ir MSV-803 ląstelių (pav 3C, 3D). Bendrai, šie rezultatai rodo, kad padidėjusi miR-375 yra pakankamai slopinti tiek migracijos ir invazija gebėjimus skrandžio vėžio ląsteles.

MIR-375-reguliuojamas JAK2 dalyvauja skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazijos reglamento

Mūsų Ankstesnis tyrimas nustatė JAK2 tolesniu tikslu PPN-375 [20]. Čia mes esame suinteresuoti studijuoti ar JAK2 dalyvauja skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazijos reglamentą. Mes dirbo vektoriaus pagrįstas RNAi technika ardančių endogeninio JAK2 ir nustatė, kad migracija ir invazija veikla AGS (4 paveikslas) ir MSV-803 ląstelių (S2 paveikslas) buvo tiek slopino labai. Tuo pačiu metu, mes studijavo ar JAK2 gali neutralizuoti slopinamojo poveikio skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazijos sukeltos miR-375. Ląstelės buvo bendrai perkeltų su Pasaulis-375 pirmtakas ir arba JAK2 raiškos vektorių (MIR-375 + JAK2) arba kontroliuoti tuščias vektorių (MIR-375 + Vec). Padidėjusi JAK2 aiškiai skatinamas ląstelių migraciją ir invazija, kaip parodyta 4 paveiksle ir S2. Taigi, suderinamas su mūsų hipotezę, PPN-375 gali slopinti migracija ir invazija skrandžio vėžio ląstelių dalies nukreipiant JAK2. Mes taip pat nustatė, kad JAK2 raiška neturi dėl išraiškos lygio PPN-375 poveikį kaip parodyta S3 pav. Tačiau mes negalime atmesti galimybės, kad miR-375 reguliacijos sutrikimas trukdo kitų tikslų, kurių reikalaujama skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazijos.

sraigė downregulates Pasaulis-375 išraišką

Pirmiau pateikti rezultatai rodo, kad ir miR-375 gali būti skirti tam tikrų transkripcijos faktorius, kurie yra susiję su vėžio invazija ir jo metastazių proceso. Natūralu, kad mes orientuojamės į tai, kaip Pasaulis-375 išraiška yra reguliuojama. Mes pirmą kartą sužinojau pereidinėti DNR regioną prieš srovę nuo pri-Pasaulis-375 genų, kurie buvo pranešta, kad yra pri-Pasaulis-375 geno promotoriaus [21]. Tada atliekamas Consite programą (http://asp.ii.uib.no:8090/cgi-bin/CONSITE/consite) ir nustatė, kad ten buvo šeši jungimosi vietų transkripcijos faktorius sraigė į DNR regione (5a pav.) DNR regionas buvo klonuotas į pGL3 bazinis vektorius (Promega) (pGL3-375pro) išmatuoti promotoriaus aktyvumą. Be suderinamas su duomenimis Walker grupės [21], mūsų rezultatai parodė, kad ši DNR regionas yra pri-Pasaulis-375 geno promotoriaus ir gali nukreipti liuciferazės išraišką (5b pav.) Liuciferazė veikla buvo efektyviai represuoti kai pGL3-375pro vektorius buvo bendrai perkeltų su sraigė ekspresijos vektoriumi (sraigė), bet ne tada, kai bendrai perkeltų su tuščiu valdymo vektorių (maketas) (5C pav.) Be to, sraigė raiška gali sumažinti raiškos lygis PPN-375 46% (5d pav). Tam, kad nustatyti klinikinė reikšmė iš šių rezultatų, mes toliau koreliuoja ekspresijos lygį miR-375 su sraigė iRNR lygiu tose pačiose skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Kaip parodyta 5E pav, atskira atvirkštinė koreliacija buvo ekspresijos lygio miR-375 ir sraigė mRNR ( P
< 0,05, r = -0,6). Taigi, šie stebėjimai rodo, kad sraigė yra potencialus prieš reguliatorius Pasaulis-375 išraiška.

sraigė dalyvauja skrandžio vėžio ląstelių migracijos reguliavimo nukreipiant Pasaulis-375

Jei dar aiškinsis koreliacija miR-375 ir sraigė, mes studijavo ar sraigė dalyvauja skrandžio vėžio ląstelių migracijos reguliavimo nukreipiant MIR-375. Mes dirbo vektoriaus pagrįstas technika upregulate sraigė išraiška lygį ir nustatė, kad migracija veikla AGS ląstelių (6 paveikslas) buvo paaukštintas labai. Tuo pačiu metu, mes studijavo ar sraigė gali neutralizuoti slopinamojo poveikio skrandžio vėžio ląstelių migraciją sukelia miR-375. Ląstelės buvo bendrai perkeltų su Pasaulis-375 raiškos vektoriaus ir sraigė raiškos vektorių (sraigė + miR-375). Padidėjusi sraigė aiškiai skatinamas ląstelių migraciją ir gali iš dalies neutralizuoti slopinamojo poveikio skrandžio vėžio ląstelių migraciją sukelia miR-375, kaip parodyta 6 pav Taigi, suderinamas su mūsų hipotezę, sraigė gali slopinti skrandžio vėžio ląstelių migraciją iš dalies nukreipiant Pasaulis-375.

Diskusijos

miRNAs buvo pranešta, kad reguliuoti auglio migracija, invazija ir metastazes, įskaitant skrandžio vėžio [6], [22]. MIR-375 Anksčiau buvo įrodyta, kad svarbų vaidmenį skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją [20], [23]. Tačiau reguliavimo mechanizmai lieka neaiški. Šioje studijoje, mes toliau nagrinėti funkciją ir galimas mechanizmus PPN-375 į migraciją ir invazijos į skrandžio vėžio ląsteles. Mes nustatėme, kad Pasaulis-375 inhibuoja dauginimosi, migracijos ir invazijos į skrandžio vėžio ląstelių raiška iš dalies nukreipiant JAK2. Tai buvo daugiau nei dešimtmetį nuo JAK2 pirmą kartą klonuotas [24]. JAK2 išreiškiamas beveik kiekvieną audinio ir susijęs su daugeliu patologinis progresuoja. Nors akivaizdu, kad JAK2 veikia kaip abiejų kaulų čiulpų proliferacijos sutrikimų onkogeno ir kai solidinių navikų [25], [26], [27], be tiesioginio dalyvavimo JAK2 vėžio migracijos, buvo pranešta invazija arba metastazės. Intriguojančiai, mūsų tyrimas pirmą kartą įrodė, kad numušti JAK2 iki RNAi slopinamas migracijos ir invazija veiklą skrandžio vėžio ląstelių, panašių į ta PPN-375 raiškos. Be to, padidėjusią JAK2 galėtų skatinti migracijos ir invazija skrandžio vėžio ląsteles. Tokiu būdu, mes prielaidą, kad JAK2 gali neutralizuoti slopinantį poveikį, ląstelės migracijos ir invazijos, kurį sukelia miR-375. Atsižvelgiant į svarbų vaidmenį PPN-375 ir JAK2 kapitono reguliavimo skrandžio vėžio ląstelių dauginimosi, migracijos ir invazija, jie abu turi gydomąjį potencialą skrandžio vėžio gydymo. Todėl dar turi būti ištirta, ar yra kitų tikslų dalyvauti Pasaulis-375 tarpininkaujant skrandžio metastazių.

Ypač įdomūs, mes toliau tyrė, kaip Pasaulis-375 dalyvauja skrandžio kancerogenezėje. Nors yra akivaizdu, kad DNR metilinimas ir histono deacetilinimo yra galimi mechanizmus, miR-375 downregulation skrandžio vėžio [23]. Mechanizmai pagrindinės Pasaulis-375 reguliacijos sutrikimas skrandžio vėžio metastazių yra dar menkai suprantama. Yra galimybė dėl transkripcijos blokavimo miR-375 genų ekspresijos šiame procese. Čia mes rodo, kad metastazė susijęs transkripcijos faktorius sraigė yra potencialus prieš srovę reguliatorius miR-375 išraiška. Sraigė yra DNR surišantis cinko pirštų baltymų ir buvo pranešta kaip transkripcijos slopinančioje [28]. Acumulating įrodymai rodo, kad sraigė jungiasi prie E-dėžes į E-cad rengėjo ir malšina jo transkripciją reguliuoti naviko invazija plėtrą [29]. Be to, buvo nustatyta padidėjusią sraigė į vėžio būti susijęs su limfmazgių metastazių, naviko recidyvo ir prognozės [30], [31], [32], [33], [34], [35]. Be suderintos su kitomis ataskaitomis, mūsų tyrimas parodė, kad sraigė iRNR ekspresija skrandžio vėžio audiniuose, palyginti su jų gretimų nepiktybinių audiniuose. Kaip rengėjas veikla miR-375 gali būti slopinama sraigė ir padidėjusią sraigė gali sumažinti Pasaulis-375 raiškos lygis žymiai, mes dar rasti atskirą atvirkštinė koreliacija tarp ekspresijos lygio PPN-375 ir sraigė mRNR lygio skrandžio vėžio pavyzdžiai. Sraigė taip pat nustatyta, kad dalyvauja skrandžio vėžio ląstelių migracijos reguliavimo nukreipiant MIR-375.

Taigi, mes nustatėme, kad Pasaulis-375 buvo nenormaliai išreikštas skrandžio vėžio audiniuose iš metastazės-teigiamiems pacientams ar skrandžio vėžio ląstelės su didesniu migracijos ir invazija veiklą, palyginti su audinių iš metastazės be pacientų ar neinvazinis skrandžio epitelio ląstelių linijos GES-1 atitinkamai. Padidėjusi miR-375 sumažinamas skrandžio vėžio ląstelių migracijos ir invazija veiklą bent iš dalies nukreipiant JAK2. Be to, sraigė gali būti prieš srovę reguliatorius miR-375, kuris neigiamai reguliuoja miR-375 išraišką ir buvo įtrauktas į skrandžio vėžio ląstelių migracijos reguliavimo nukreipiant miR-375. Kartu mūsų rezultatai pateikti undescribed kelią, kuriame transkripcijos faktorius, sraigė reguliuoja PPN-375, kuris slopina savo tiesioginę tikslinę JAK2 išraišką, todėl slopina migracija ir invazija skrandžio vėžio ląsteles. Mūsų duomenys rodo, kad restauracija miR-375 ar slopinimu sraigė ar JAK2 gali būti naudinga terapinės strategijos skrandžio vėžio gydymo. Jis tikrai bus labai įdomu toliau tirti galimą veiksmingumą, šių molekulių, skirtų MIR-375, JAK2 ar sraigė į skrandžio vėžiui gydyti. Kitas įdomus tema būsimiems tyrimams bus kitų galimų taikinių PPN-375, identifikavimo duomenys ir, konkrečiau, galimas dalyvavimas JAK2 skrandžio vėžio metastazių.

Parama Informacija
S1 paveiksle.
negimdinis išraiška miR-375 slopina MSV-803 ląstelių migraciją. MSV-803 ląstelių transfektuotose Pasaulis-375 pirmtako (MIR-375), neigiamos kontrolės (neigiamas) arba nė vienas iš pirmiau (maketas) buvo atliktas Transwell migracijos tyrimo (A) ir įbrėžimams žaizdų gijimą analizė (C). (A) atstovaujamoji sritys invazinių ląstelių į membraninio kuriems buvo nustatytos ir nudažomi su DAPI apačios. (B) Bendras skaičius migravo ląstelių dėl membranos apačioje buvo skaičiuojamas IPP 6.0 programinės įrangos. (C) ląstelių migracija į sužeistą srityje buvo fotografuotas esant 0 h, 12 h, 24 h ir 36 h po sužeidimo mikroskopu. Punktyrinės linijos nurodo sritis trūksta ląsteles. (D) migracijos spartą buvo tiriama, matuojant ląstelių juda iš žaizdų krašto link centro 36 h po braižymo atstumą. Duomenys pateikiami kaip vidurkis ± SE ne mažiau kaip trijų nepriklausomų eksperimentų. Barai, 50 mkm. * P
< 0,05, ** P
< 0,01
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s001
(TIF)
S2 pav ,
Padidėjusi JAK2 apsisuks Pasaulis-375 sukelto slopina MSV-803 ląstelių migracijos ir invazijos. Transfekuotos su nurodytomis vektoriai arba oligonukleotidų ląstelės buvo atliktas su Transwell migracijos (A) arba Matrigel invazijos tyrimo (C). Gelbėjimo eksperimentai Mir-375 raiškos vykdė negimdinio išraiška JAK2 be 3'-UTR į Pasaulis-375 gydytų ląsteles. (A, C) buvo parodyta atstovas laukai ląstelių ant dugno kameroje 12 valandas po migracijos arba invazijos. Mastelis barai, 50 mkm. (B, D) Iš viso migravo ar invazinių ląstelių iš devynių atsitiktinai pasirinktose srityse buvo skaičiuojamas IPP 6.0. * P
< 0,05, ** P
< 0,01
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s002
(TIF)
S3 pav ,
JAK2 neturi įtakos Pasaulis-375 raiškos poveikį. AGS ir MGC-803 ląstelės buvo transfekuota su JAK2 raiškos vektoriumi ar kontrolės vektoriaus ir veikiamas RT-PGR analizės ekspresijos lygio miR-375. RNR U6 lygis buvo naudojamas kaip kontrolės
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s003
(TIF)

• PLoS ONE: Veiksmingumas vertinimas Tarpinė suma ir bendra Gastrectomies į Robotų chirurgija skrandžio vėžiu, palyginti su atvirose ir laparoskopinės rezekcijos: metaanalizė
• PLoS ONE: priešnavikinis poveikis yra Sirtuin inhibitoriumi Tenovin-6, nuo skrandžio vėžio ląsteles per mirties receptoriaus 5 UP-straipsnį