PLoS One: Csiga-Szabályozott miR-375 Gátolja migrációs és behatolás gyomorrák sejtek által célzás JAK2

absztrakt katalógusa

A mikroRNS (miRNS) számoltak be kritikus szerepet játszanak a rák terjedését és áttét. A korábbi tanulmány azt mutatta, hogy a miR-375 gyakran downregulált gyomorrákban elnyomja sejtburjánzást megcélozva Janus kináz 2 (JAK2). Itt azt találtuk továbbá, hogy az expressziós szintet a miR-375 jelentősen csökkent a metasztatikus gyomor rákos szövet összehasonlítva a nem-metasztázis ellenőrzéseket. Méhen kívüli kifejezése miR-375 gátolja a migrációs és behatolás gyomorrák sejtek részben célzott JAK2. Továbbá, miR-375 expresszió negatívan szabályozza a metasztázis kapcsolódó transzkripciós faktor csiga, amely közvetlenül kötődik a feltételezett promoter miR-375. Ráadásul túltermelése Csiga részlegesen visszafordítani a gátlást gyomorrák sejtek migrációját okozta miR-375. Együttesen ezek az adatok arra utalnak, hogy a miR-375 negatívan szabályozza Csiga és részt vesz a gyomorrák sejtek migrációját és invázióját potenciálisan célzott JAK2. Katalógusa

Citation: Xu Y, Jin J, Liu Y, Z Huang, Deng Y, Te T, et al. (2014) Csiga-Szabályozott miR-375 Gátolja migrációs és behatolás gyomorrák sejtek által célzás JAK2. PLoS ONE 9 (7): e99516. doi: 10,1371 /journal.pone.0099516 katalógusa

Szerkesztő: Ming Tan, University of South Alabama, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: február 7, 2014; Elfogadva: 15. május 2014; Megjelent: július 23, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Xu et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatott természettudományos Foundation of China (31301149, 31071221, 31190063, 31125017 és 31100975), a Tudományos és Technológiai Kína (2013CB945603, 2012CB945004 és (2011CBA01001), az Oktatási Minisztérium, Kína (20110101110103 és (20130101120001), természettudományos Alapítvány Zhejiang tartomány, Kína (LQ13H160013, LQ14H160003, Z2100247 és Y2100106), a 111 Project (B13026), The Fundamental Research alapok a közép-egyetemek (2014QNA7015) és a Zhejiang tartományi Program a termesztése magas szintű innovatív egészségügyi tehetségét. a finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető

Metastasis a legszörnyűbb szempontjait rák és vizsgálták több mint 100 éve [1], [2]. A gyomorrák, a magas halálozási elsősorban attribútumokat késleltetett diagnózis hiánya miatt a specifikus tünetek korai szakaszában. És metasztázis felelős a gyomorrák kapcsolatos mortalitás [3], [4]. Migrációs és behatolás rákos sejtek alapvető folyamatok során a rák áttétes körmenet, amely egy sor, egymással összefüggő intézkedést, ideértve a proliferációt, leválás, keringés, a közlekedés, a letartóztatás a szervekben, ragaszkodás érfal, Extravasatio létrehozása mikrokörnyezet, és proliferáció távoli szervekben. A gyomorrák, a sejtek invázióját a környező szövetekbe döntő korai lépése [3], [5]. Azonban azok a mechanizmusok a gyomor rákos sejtek migráció, invázió és metasztázis nem teljesen tisztázott.

Az elmúlt években különböző molekulákkal, például növekedési faktorok, citokinek, extracelluláris mátrix-remodeling molekulák, és néhány transzkripciós faktorok mint a csiga, Twist és ZEB1 [6], [7], [8], [9], [10], [11], már kiderült, hogy hajt a haladás a rákos sejtek migráció, invázió és metasztázis. Az utóbbi időben nyilvánvalóvá vált, hogy amellett, hogy rendellenességek fehérje-kódoló gének, módosított nem kódoló gének is hozzájárulhat a rákos sejtek migráció, invázió és metasztázis, mint például a miRNS, amelyek egy osztály a kis egyszálú nem kódoló RNS-molekulák, amelyek szabályozzák a génexpressziót nagy potenciállal és hozták összefüggésbe a szabályozásában a rákos sejtek migráció, invázió és metasztázis, mint aktivátorok vagy szupresszorok [12], [13], [14], [15], [16] . A mai napig, számos miRNS tanulmányozták már szerepet játszik az gyomorrák metasztázis progressziója, például, a miR-218, miR-9, miR-7, és miR-146a [6], [17], [18], [19]. Megvizsgáltuk a szövetség között sajátos szabályozatlan miRNS és konkrét metasztázis lépése gyomorrák, amelyek bepillantást engednek a lehetséges megoldásokat a gyomorrák sejtek migráció, invázió és metasztázis. Katalógusa

A korábbi vizsgálatban, miR-375 volt szignifikánsan csökkent expressziót a gyomorrák és gátolt gyomorrák-sejtek proliferációját célzásával JAK2 [20]. Érdekes, hogy a jelen tanulmányban azt találtuk továbbá, hogy az expressziós szintet a miR-375 még alacsonyabb volt a gyomorrák mintákban áttét-pozitív betegek compaired azzal származó metasztázis-mentes betegeken. Így azt javasolta, hogy a miR-375 lehet, hogy egy oki szerepet gyomorrák áttét. Vizsgálataink fedetlen, hogy a méhen kívüli kifejezése miR-375 gátolja a migrációs és behatolás gyomorrák sejtek is részben célzott JAK2. Mi tovább kéri, hogy megtudja, hogyan miR-375 expressziója szabályozott gyomorrák. Az eredmények azt mutatták, hogy a miR-375 volt a cél, a metasztázis kapcsolódó transzkripciós faktor Csiga és annak kifejezése fordítottan korrelál csiga gyomorrákban. Túlexpressziója Csiga részlegesen visszafordítani a gátlást gyomorrák sejtek migrációját okozta miR-375. Így eredményeink azt mutatják, hogy a miR-375 gátolja a gyomorrák sejtek migrációs és behatolás révén Csiga /miR-375 /JAK2 szabályozás útvonal. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Klinikai minták (Etikai Nyilatkozat) és a sejt vonalak

Klinikai gyomorrák példányok és pár egyező nem rosszindulatú gyomor mintákat 39 átesett betegek gyomorrák eltávolítását biztosította Sir Run Run Shaw Kórház (Hangzhou, Kína). Valamennyi mintát gyűjtöttünk írásos beleegyezést a betegek korábban leírtak szerint [20]. Mindkét gyomor tumorszövetmintákból szomszédos nontumorous gyomor szövetek gyűjtött a műtét után volt, és két részre oszlik. Egy lefagyasztottuk folyékony nitrogénben azonnal további használatra, egy másik része tárolták formalin patológiai elemzéseket. A bevont betegek vizsgálatunk osztottuk metasztázis-mentes, és áttét pozitív csoportban (9/30). A gyomor rákos sejtvonalat (AGS és MGC-803) és egy nem-malignus gyomornyálkahártya sejtvonalat (GES-1) a korábban leírt [20].

RNS extrakció

teljes RNS-t gyomor minták és sejtvonalak kivontuk a Mirvana miRNS Isolation Kit (Ambion, TX, USA) követően a gyártó protokoll.

kvantitatív valós idejű PCR analízis

expresszióját miR-375-ben vizsgáljuk a Taqman microRNS Assay (Applied Biosystems, CA, USA), specifikus primerekkel (P /N: 4.373.151, Applied Biosystems). Reverz transzkripciós reakció végeztük kiindulva 10 ng teljes RNS felhasználásával a hurkolt primerek. Kvantitatív valós idejű PCR (qRT-PCR) segítségével végeztük a standard Taqman mikroRNS esszék protokoll ABI7500 Real-Time PCR Detection System. A ΔΔCt módszer relatív kvantálási használták, hogy meghatározzák miRNS expresszió. A Ct frakcionált ciklus számot, amelynél a fluoreszcencia minden minta áthalad a rögzített küszöböt. A ΔCt úgy számoltuk, hogy a Ct-snRNS U6 (RNU6B, P /N: 4373381, Applied Biosystems) a Ct a miRNS az érdeklődés. A ΔΔCt úgy számítottuk ki, levonva a ΔCt a referencia minta (párosított nem malignus szövetben sebészeti mintákban, normális szövetekben és GES-1 sejt gyomorrák sejtvonalak) a ΔCt minden egyes minta. Szeres változást határoztuk 2 ^{-ΔΔCt. Katalógusa}

A migráció és inváziós vizsgálati katalógusa

sejteket 20 nM pre-miR-375 vagy negatív kontrollként Transzfekció Agent (Ambion, TX, amerikai Egyesült Államok) a gyártást követő protokollját 24 mérőhelyes lemezeken. 24 órával a transzfekció után, Transwell migrációs assay és Matrigel inváziós vizsgálat végeztünk külön-külön használatával 24 lyukú Transwell lapkák 8 um pórusméretű (Corning Costar Corp.). A Transwell migrációs assay, 2 × 10 ^{4 AGS vagy 3 × 10 4 MGC-803 sejteket szuszpendálunk 100 ul megfelelő táptalaj nélkül magzati borjúszérummal (FBS) vittünk be a felső kamrába a transwell insert kívüli -bevonatú membrán. A Matrigel inváziós vizsgálat, 5 × 10 4 AGS vagy MGC-803 sejteket 100 ul szérummentes tápközegben a felső Matrigel bevont kamra helyett. Mindkét esszében, az alsó kamrát tartalmazó 600 ul tápközegben 20% FBS-t. A sejteket ezután hagytuk migrált vagy megszállták 12 órán át 37 ° C-on. A sejteket, hogy a migrált vagy betört az alsó kamrába fixáltuk, festettük 4 ', 6-diamino-2-fenil-(DAPI, 1:1000), láthatóvá fáziskontraszt mikroszkóp és lefényképeztük. Száma vándorolt ​​vagy megszállták sejtet számoltunk meg IPP (Image-Pro Plus 6.0) szoftver. Minden kísérletet függetlenül megismételjük legalább három alkalommal.}

Korcolásgátló sebgyógyulási assay

sejteket transzfektáltunk a korábban leírt, és hagytuk növekedni összefolyásig. A sejteket azután tenyésztjük megfelelő tápközegben FBS nélküli 12 órán, majd karcos egy pipetta hegyével. Wound területeket jelölik és fényképezett 0 óra, 12 óra, 24 óra és 36 óra volt. Ez az arány a sejtek migrációs értékelték mind fényképezés és számszerűsítése vándorolt ​​távolság sejtek költözött a seb széle közepe felé IPP segítségével 6.0 rendszert. Minden kísérletet háromszor megismételjük.

szerkezeteken

előállításához pGL3-375pro plazmidban a DNS-szekvenciát tartalmazó pri-miR-375 (elsődleges miR-375) promoter amplifikáltuk RT-PCR-rel a primerek 5'-ATCG CTCGAG ACA GAC CCT GCT AAG CGA CTC-3 'és 5'-ATCG AAGCTT ACG CCT TGG AGC TTG TCC-3', majd klónoztuk pGL3-basic vektor (Promega). A konstrukció a plazmid, amely kifejezi csiga sejtekben, a nyitott leolvasási keret (ORF) szekvenciát csiga klónoztuk emlős expressziós vektorba pEGFP-C1 (Clontech, CA, USA) segítségével a primerek 5'ATCG AA GCT TCG ATG CCG CGC TCT TTC CTC G-3 'és 5'-ATCG GGA TCC TCA GCG GGG ACA TCC TGA GCA-3'. Ektópiás expressziója FLAG-címkézett JAK2, emberi JAK2 a kódoló régiót klónoztuk pCMV-Tag 2C vektor. A konstrukció a plazmid, amely kifejezi a miR-375 emlőssejtekben a párosított oligonukleotidok alapján az elsődleges szekvenciáját HAS-miR-375 és szegélyező régiókat kiónoztuk emlős expressziós vektorba pEGFP-C1 (Clontech, Kalifornia, USA). Az összes konstrukciót szekvenálással igazoljuk.

Luciferáz assay

Negyven ezer sejteket szélesztettünk 24 mérőhelyes lemezeken 24 H a transzfekció előtt. A sejteket transzfektáltuk vagy pGL3-375pro vagy pGL3-Basic vektorba. PRL-TK vektor (Promega, WI, USA), amely Renilla luciferáz katalógusa is kotranszfektáljuk referencia kontrollként. Firefly és a Renilla
luciferáz aktivitásokat mérjük Dual-Luciferase Reporter Assay (Promega) 24 órával a transzfekció után. Szentjánosbogár luciferáz aktivitást normalizáltuk Renilla luciferáz aktivitást.

Statisztikai elemzések

Az adatokat képviselik átlag ± standard hiba (SE) három független kísérlet során. Közötti kapcsolatok kifejezése a miR-375 és kifejezése csiga mRNS kutattuk A Pearson-féle korrelációs együttható katalógusa, amelyet korábban leírt [20]. Student t katalógusa tesztben és X katalógusa ^{2 tesztet végeztünk a statisztikai szignifikancia meghatározására. P katalógusa < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

miR-375 drasztikusan downregulált gyomorrákban sejteket és a szöveteket metasztázis-pozitív betegek

Annak kiderítésére, hogy a miR-375 társul gyomorrák áttét, először észlelt expressziós szintjének miR-375 primer gyomorrák szöveteket a metasztázis-pozitív és metasztázis-mentes betegeknél. Ha összehasonlítjuk a mintát metasztázis-mentes betegeken expressziós szintjének miR-375 volt közel két-szeres csökkenést szöveteket a metasztázis-pozitív betegek ( p
< 0,05) (1a ábra). Ezzel összhangban ez az eredmény, az expressziós szint a miR-375 a gyomor sejtvonalakban negatívan kapcsolódó képességeit sejtek migrációs és behatolás. A metasztatikus tulajdonságai gyomornyálkahártya sejtvonalak (GES-1, MGC-803, AGS) jellemeztük. Ábrán látható módon az 1C és 1D, a migráció és invázió képességeit AGS sejtvonal nagyobb volt, mint az MGC-803 és GES-1 sejtvonalak ( p
< 0,01). Fordítva, miR-375 expresszió AGS sejtekben alacsonyabb volt, mint az MGC-803 és GES-1 sejteket ( P
< 0,01) (1B ábra). Egy szó, miR-375 downregulált gyomorrákban szövetekben metasztázis-pozitív betegek és gyomorrák sejtek nagyobb migrációs és behatolás képességeit. Ez az összefüggés azt mutatja, hogy a miR-375 lehet, hogy egy oki szerepet gyomorrák áttét. Katalógusa

túltermelése miR-375 gátolja a gyomorrák sejtek migrációs és behatolás katalógusa

tárni, hogy a miR-375 gyomorrák áttét, felmértük a miR-375 túltermelése a migrációs és behatolás AGS és MGC-803 gyomorrák sejtek alacsony endougenous kifejezése miR-375. A sejteket transzfektáltuk vagy miR-375 prekurzor (MIR-375) vagy a prekurzor-negatív kontroll oligonukleotidok (negatív) vagy a fentiek egyike sem (vak). A Transwell migrációs assay azt mutatta, hogy overexpressziója miR-375 nagymértékben gátolta a migráció az AGS (ábra 2A, 2B) és MGC-803 sejtek (ábra S1A, S1B). A konzisztens Ezek az eredmények, a karcolásnak sebgyógyulási assay is kiderült, hogy a sebességek AGS (ábra 2c, 2d) és az MGC-803 sejtek (ábra S1C, S1D) migrációs felé a seb területén jelentősen csökkent után túlexpressziója miR-375 . Mi is alkalmazzuk Matrigel inváziós esszében, és megállapította, hogy a túlzott mértékű expressziója a miR-375 vezetett, hogy több mint két-szeres csökkenést a invazív tulajdonságait AGS (3A, 3B), és MGC-803 sejtek (ábra 3C, 3D). Együttesen ezek az eredmények azt jelzik, hogy overexpressziója miR-375 gátlásához elégséges mind a migrációs és behatolás képességeit gyomor rákos sejteket.

miR-375-szabályozott JAK2 részt vesz a szabályozás a gyomorrák-sejtek migrációs és behatolás

a korábbi tanulmány azonosította JAK2 downstream célpontjaként a miR-375 [20]. Itt, mi érdekli a tanulás, hogy JAK2 részt vesz a szabályozás a gyomorrák sejtek migrációs és behatolás. Mi alkalmazott vektor-alapú RNSi technika lebontó endogén JAK2 és megállapította, hogy a migrációs és behatolás tevékenysége AGS (4. ábra) és MGC-803 sejtekben (S2 kép) mindketten gátolta jelentősen. Egyidejűleg megvizsgáltuk, hogy a JAK2 tudnák ellensúlyozni a gátló hatása gyomorrák sejtek migrációs és behatolás okozta miR-375. Sejteket együtt transzfektáltunk miR-375 prekurzor és vagy JAK2 overexpressziója vektor (MIR-375 + JAK2) vagy kontroll üres vektort (MIR-375 + Vec). Overexpressziója JAK2 világosan mozdítani sejtek migrációs és behatolás, mint a 4. ábrán látható és az S2. Így összhangban van a feltételezést, miR-375 gátolhatja a migrációs és behatolás gyomorrák sejtek részben célzott JAK2. Azt továbbá, hogy a JAK2 overexpressziója nincs hatással az expressziós szintjének miR-375 ábra S3. Azt azonban nem zárja ki annak lehetőségét, hogy a zavara miR-375 zavarja más célokat szükséges gyomorrák sejtek migrációs és behatolás. Katalógusa

Csiga gátló módon szabályozza a miR-375 expressziós katalógusa

A fenti eredmények azt mutatják, hogy miR-375 lehet célzott bizonyos transzkripciós faktorokat, amelyek kapcsolatban vannak a rák terjedését és áttétét folyamatot. Természetesen arra összpontosítunk, hogyan miR-375 expresszió szabályozása. Először kiderült egy társalgott DNS-régiót upstream pri-miR-375 gén, amely jelentették, hogy tartalmazza a pri-miR-375 gén promoter [21]. Ezután végre Consite programot (http://asp.ii.uib.no:8090/cgi-bin/CONSITE/consite), és úgy találta, hogy volt hat kötőhelyek transzkripciós faktor csiga a DNS-régiót (5A ábra). A DNS-régiót klónoztuk pGL3-basic vektor (Promega) (pGL3-375pro) mérésére a promoter aktivitását. A összhangban az adatokat a Walker-csoport [21], az eredmények azt mutatták, hogy ez a DNS-régió tartalmazza a pri-miR-375 gén promotor és képes irányítani luciferáz expresszió (5B, ábra). A luciferáz aktivitást hatékonyan elfojtott amikor pGL3-375pro vektort kotranszfektáltunk Csiga expressziós vektorba (csiga), de akkor nem, ha ko-transzfektált az üres kontroll vektorral (Mock) (5C). Sőt, Csiga overexpresszió csökkentheti expressziós szintjének miR-375 46% -kal (5D ábra). Annak érdekében, hogy meghatározzuk a klinikai jelentősége Ezek az eredmények azt további korrelált expressziós szintjének miR-375 a csiga mRNS szinten az azonos gyomor rákos betegeknél. Amint az 5E ábra, egy elkülönült inverz összefüggést találtunk expressziós szintjének miR-375 és Csiga mRNS ( p
< 0,05, r = -0,6). Ezért ezek a megfigyelések azt mutatják, hogy csiga potenciális upstream szabályozó miR-375 expresszió. Katalógusa

Csiga részt vesz a szabályozás a gyomorrák sejtek migrációs megcélozva miR-375 katalógusa

A további megvilágítása korreláció a miR-375 és csiga megvizsgáltuk, hogy a csiga is részt vesz a szabályozás a gyomorrák sejtek migrációs megcélozva miR-375. Mi alkalmazott vektor-alapú módszer, hogy fokozza a Csiga expressziós szintjét, és megállapította, hogy a migrációs tevékenységek AGS sejtek (6. ábra) Előresoroltak jelentősen. Egyidejűleg megvizsgáltuk, hogy a csiga tudnák ellensúlyozni a gátló hatása gyomorrák sejtek migrációs okozta miR-375. Sejteket együtt transzfektáltunk miR-375 overexpresszió vektor és Csiga overexpressziója vektor (Csiga + miR-375). Overexpressziója Csiga világosan mozdítani sejtek migráció, és részben ellensúlyozza a gátló hatása a gyomor rákos sejtek migráció okozta miR-375 amint a 6. ábrán látható Így, összhangban van a hipotézist, Csiga gátolhatja a migráció gyomorrák-sejtek által részben célzás miR-375. katalógusa

Vita katalógusa

miRNS számoltak szabályozni tumor migráció, invázió és metasztázis beleértve gyomorrák [6], [22]. MiR-375 korábban kimutatták, hogy fontos szerepet játszanak a gyomorrák-sejtek proliferációját [20], [23]. Ugyanakkor a szabályozási mechanizmusok továbbra is tisztázatlanok. A jelen tanulmányban azt vizsgálta tovább funkció és lehetséges mechanizmus a miR-375, a migrációs és behatolás a gyomor rákos sejteket. Azt találtuk, hogy túltermelése miR-375 gátolja proliferáció, migráció, és invázió gyomorrák sejtek részben célzott JAK2. Már több mint egy évtizede JAK2 első klónozott [24]. JAK2 fejezik szinte minden szövetben és kapcsolódó számos kóros előrehaladtával. Bár nyilvánvaló, hogy a JAK2 működik, mint egy onkogén mindkét mieloproliferatív rendellenességek és néhány szolid tumorok [25], [26], [27], nincs közvetlen bevonása JAK2 a rákos migráció, invázió vagy metasztázis számoltak be. Izgalmasan, a mi tanulmány először bizonyította, hogy bontani JAK2 RNSi gátolta a migrációs és behatolás tevékenysége gyomorrák sejtek hasonló a overexpressziója miR-375. Emellett túltermelése JAK2 elősegítheti a migrációs és behatolás a gyomor rákos sejteket. Így feltételezhető, hogy a JAK2 ellensúlyozhatja a gátló hatását a sejtek migrációs és behatolás által okozott miR-375. Mivel a kritikus szerepet a miR-375 és JAK2 master szabályozók gyomorrák sejtek szaporodása, migrációja és invázió, mindketten terápiás hatást fejthet ki a gyomorrák kezelésére. Ezért azt kell vizsgálni, hogy van-e más célokat részt vesznek a miR-375 közvetített gyomor áttét. Katalógusa

Különösen érdekes, mi tovább tanulmányozta, hogyan miR-375 részt vesz a gyomor kialakulásában. Bár van egy nyilvánvaló, hogy a DNS metiláció és hiszton deacetiláció a lehetséges mechanizmusok a downregulációját miR-375 gyomorrákban [23]. A mechanizmusa a miR-375 diszreguláció gyomorrákban áttétek még kevéssé ismert. Lehetőség van egy transzkripciós elzáródása miR-375 génexpresszió ebben a folyamatban. Itt megmutatjuk, hogy az áttét kapcsolódó transzkripciós faktor Csiga potenciális upstream szabályozó miR-375 expresszió. Csiga egy DNS-kötő cink ujj fehérjét és nem számoltak be, mint transzkripciós represszor [28]. Acumulating bizonyítékok azt mutatják, hogy Csiga kötődik E-dobozok a promoter az E-cadherin és elfojtja a transzkripció szabályozása tumor invázió fejlesztés [29]. Sőt, túltermelése csiga a rák találták társítható nyirokcsomó-metasztázis, a tumor kiújulásának és a prognózis [30], [31], [32], [33], [34], [35]. Ebben összhangban vannak más jelentések, a tanulmány megállapította, hogy a csiga mRNS túltermelõdik gyomorrák szövetekben képest a szomszédos, nem malignus szövetben. Ahogy a promóter aktivitását miR-375 gátolhatja Csiga és overexpressziója Csiga csökkentheti miR-375 expressziós szintje szignifikánsan, azt találtuk továbbá egy elkülönült fordított korrelációt expressziós szintjének miR-375 és a szint a csiga mRNS gyomorrák mintákban. Csiga is megtalálható, hogy részt vesz a szabályozás a gyomorrák sejtek migrációs megcélozva miR-375. Katalógusa

Összefoglalva, azt állapította meg, hogy a miR-375-ben abnormálisan expresszált A gyomorrák szöveteket a metasztázis-pozitív betegek vagy gyomor rákos sejtek nagyobb migrációs és behatolás tevékenységek képest származó szövetekkel metasztázis-mentes betegekben vagy nem-invazív gyomornyálkahártya sejtvonal GES-1 volt. Túlexpressziója miR-375 csökkentett gyomorrák sejtek migrációs és behatolás tevékenység legalább részben célzott JAK2. Sőt, Csiga lehet upstream szabályozó miR-375, amely negatívan szabályozza a kifejezés a miR-375, és részt vett a rendelet a gyomorrák sejtek migrációs megcélozva miR-375. Együtt, eredményeink egy le nem írt útvonal, amelyben a transzkripciós faktor Csiga expresszióját szabályozza miR-375, amely elnyomja a közvetlen cél JAK2, ami gátolja a migrációs és behatolás a gyomor rákos sejteket. Adataink azt mutatják, hogy helyreállítása a miR-375 vagy gátlása csiga vagy JAK2 hasznos lehet terápiás stratégiák gyomorrák kezelésére. Az biztos, hogy érdekes lesz, hogy tovább vizsgálja a lehetséges hatékonyságát azon molekulák célzó miR-375, JAK2 vagy csiga kezelésére gyomorrák. Egy másik érdekes téma jövőbeni kutatások lesz az azonosító más lehetséges célpontjai miR-375, és pontosabban, az esetleges érintettségét JAK2 gyomorrákban áttét. Katalógusa

alátámasztó információk katalógusa ábra S1. Méhen kívüli katalógusa kifejezése miR-375 elnyomja a migráció a MGC-803 sejtekben. MGC-803 sejteket transzfektáltunk miR-375 prekurzor (MIR-375), a negatív kontroll (negatív) vagy a fentiek egyike sem (Mock) vetettük alá Transwell migrációs assay (A) és karcolásálló sebgyógyulási analízis (C). (A) Reprezentatív mezők az invazív sejtek az alsó membrán, amely fixáltuk és festettük DAPI. (B) teljes száma vándorolt ​​sejtek az alsó membrán számlált IPP 6.0 szoftver. (C) A sejteket migráció A sérült területet fényképezte mikroszkópia át 0 h, 12 óra, 24 óra és 36 óra post-sebzés. A pontozott vonalak jelzik a területeken hiányzik sejteket. (D) Az elvándorlás sebességét vizsgáltuk távolság mérésével sejtek költözött a seb széle közepe felé 36 óra után karcolás. Az adatokat átlag ± SE legalább három független kísérlet során. Bars, 50 nm. * P katalógusa < 0,05, ** P katalógusa < 0,01. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0099516.s001 katalógusa (TIF) hotelben ábra S2 .
túltermelése JAK2 megfordítja a miR-375 indukált gátlásának MGC-803 sejtek migrációs és behatolás. A sejteket transzfektáltunk a jelzett vektorokat vagy oligonukleotidokat alá vetették Transwell migrációs (A) vagy Matrigel inváziós vizsgálati eljárás (C). A mentési kísérletek a miR-375 túltermelése végeztük ectopiás expresszióját JAK2 nélkül 3'-UTR a miR-375-kezelt sejtekben. (A, C) Képviselő mezőket a sejtek az alsó kamrába 12 órával a migráció vagy a invázió mutattak. Scale bárok, 50 nm. (B, D) A teljes száma vándorolt, vagy invazív sejtek kilenc véletlenszerűen kiválasztott területeken számoltuk az IPP 6.0. * P katalógusa < 0,05, ** P katalógusa < 0,01. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0099516.s002 katalógusa (TIF) hotelben ábra S3 .
JAK2 nincs hatással a miR-375 expressziót. Az AGS és MGC-803 sejteket transzfektáltunk JAK2 overexpressziója vektorral vagy kontroll vektorral, és alávetni RT-PCR elemzés expressziós szintjének miR-375. A szint RNS U6 alkalmaztunk kontrollként.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0099516.s003 katalógusa (TIF) katalógusa

• PLoS One: A hatásosság értékelése Részösszeg és a Total gastrectomiák a Robotic Surgery gyomorrák képest, hogy a nyitott és laparoszkópos reszekció: A Meta-Analysis
• PLoS One: tumorellenes hatásai a Sirtuin inhibitor, Tenovin-6 ellen gyomorkarcinóma sejtek keresztül halálreceptor 5 Up-Regulation