PLOS ONE: Snail-reglerad MIR-375 inhiberar migration och invasion av Gastric cancerceller genom att rikta JAK2

Abstrakt

MicroRNAs (miRNA) har rapporterats spela en avgörande roll i cancerinvasion och metastas. Vår tidigare studie visade att MIR-375 ofta nedregleras i magcancer dämpar celltillväxt genom att rikta Janus-kinas 2 (JAK2). Här fann vi vidare att expressionsnivån av MIR-375 minskar avsevärt i magsäckscancer vävnader jämfört med icke-metastasering kontroller. Ektopiskt uttryck av MIR-375 hämmar migration och invasion av gastric cancerceller delvis genom att rikta JAK2. Vidare är MIR-375 uttryck negativt regleras av metastaser i samband transkriptionsfaktorn Snail, som direkt binder till den förmodade promotorn Mir-375. Dessutom överuttryck av snigel kan delvis vända inhibition av magcancer cell migration som orsakas av MIR-375. Sammantaget antyder dessa data att MIR-375 kan regleras negativt av Snail och involverade i magcancer cell migration och invasion eventuellt genom att rikta JAK2

Citation. Xu Y, Jin J, Liu Y, Huang Z, Deng Y, dig T, et al. (2014) Snail-reglerad MIR-375 inhiberar migration och invasion av Gastric cancerceller genom att rikta JAK2. PLoS ONE 9 (7): e99516. doi: 10.1371 /journal.pone.0099516

Redaktör: Ming Tan, University of South Alabama, USA

Mottagna: 7 februari 2014. Accepteras: 15 maj 2014; Publicerad: 23 juli 2014

Copyright: © 2014 Xu et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. Detta arbete stöddes av naturvetenskapliga Foundation of China (31301149, 31071221, 31190063, 31125017 och 31100975), ministeriet för vetenskap och teknik i Kina (2013CB945603, 2012CB945004 och (2011CBA01001), undervisningsministeriet i Kina (20110101110103 och (20130101120001), naturvetenskapliga Stiftelsen för Zhejiang-provinsen, Kina (LQ13H160013, LQ14H160003, Z2100247 och Y2100106), 111 Project (B13026), de grundläggande forskningsmedel för Central Universitet (2014QNA7015) och Zhejiang Provincial program för odling av hög nivå innovativa hälso talanger. det finansiärer hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

konkurrerande intressen:.. författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

Metastas är de mest fruktansvärda aspekter av cancer och har studerats under mer än 100 år [1], [2]. I magcancer, attribut den höga dödligheten i huvudsak fördröjd diagnos på grund av bristen på specifika symtom i tidigt skede. Och metastas är ansvarig för den gastriska cancerrelaterad dödlighet [3], [4]. Migration och invasion av cancerceller är viktiga processer under cancer metastaser procession som består av en serie sammanhängande steg, inklusive spridning, lösgörande, cirkulation, transport, gripande i organ, anslutning till kärlväggen, extravasering, etablering av en mikro och spridning i avlägsna organ. I magcancer, är celler invasion i den omgivande vävnaden en avgörande tidig steg [3], [5]. Emellertid mekanismerna för gastrisk cancerceller migration, invasion och metastas har inte helt klarlagda.

Under senare år har olika molekyler, till exempel, tillväxtfaktorer, cytokiner, extracellulära matris-remodeling molekyler och vissa transkriptionsfaktorer såsom snigel, Twist och ZEB1 [6], [7], [8], [9], [10], [11], har visat att driva utvecklingen av cancerceller migration, invasion och metastas. På senare tid har det blivit uppenbart att, förutom att avvikelser i proteinkodande gener kan avvikelser från icke-kodande gener kan också bidra till cancerceller migration, invasion och metastas, såsom miRNA, som är en klass av små enkelsträngade icke-kodande RNA-molekyler som reglerar genuttryck med stor potential och har varit inblandade i regleringen av cancerceller migration, invasion och metastas som aktivatorer eller dämpning [12], [13], [14], [15], [16] . Hittills har ett antal miRNA studerats för att vara inblandade i magcancer metastaser progression, till exempel, MIR-218, MIR-9, MIR-7, och MIR-146a [6], [17], [18], [19]. Vi har studerat sambandet mellan specifika oreglerad miRNA och specifik metastas steg i magcancer, som kommer att ge insikter i de potentiella mekanismerna för gastric cancerceller migration, invasion och metastas.

I vår tidigare studie, var MIR-375 betydligt nedregleras i magcancer och hämmade gastric cancerceller spridning genom att rikta JAK2 [20]. Intressant i den aktuella studien fann vi vidare att expressionsnivån av MIR-375 var ännu lägre i magcancer prover från metastaser-positiva patienter compaired med det från metastaser fria patienter. Därför föreslog vi att MIR-375 kan ha en avgörande roll i magcancer metastaser. Våra studier avslöjade att ektopisk expression av MIR-375 hämmade migration och invasion av gastric cancerceller också delvis genom att rikta JAK2. Vi uppmanas vidare att ta reda på hur MIR-375 uttryck reglerades i magcancer. Resultaten visade att MIR-375 var ett mål av metastaser i samband transkriptionsfaktorn Snail och dess uttryck omvänt korrelerad med Snail i magcancer. Överuttryck av snigel kan delvis vända inhibition av magcancer cell migration som orsakas av MIR-375. Således, våra resultat visar att MIR-375 hämmar gastric cancerceller migration och invasion genom Snail /MIR-375 /JAK2 reglering vägen.

Material och metoder

Kliniska prover (Etik Statement) och cell linjer

Kliniska magcancer prover och deras par matchade icke-maligna gastric prover från 39 patienter som genomgick magcancer resektion tillhandahölls av Sir Run Run Shaw Hospital (Hangzhou, Kina). Samtliga prover samlades in med skriftligt medgivande från patienter som tidigare beskrivits [20]. Både gastric tumörvävnad och angränsande nontumorous gastric vävnad som samlats in efter operationen var och uppdelad i två delar. En frystes i flytande kväve omedelbart för ytterligare användning, en annan del lagrades i formalin för patologisk analys. De som deltar i vår studie patienter separerades i metastas fritt och metastas-positiva grupperna (9/30). Cellinjerna gastric cancer (AGS och MGC-803) och en icke-malign gastric epitelcellinje (GES-1) beskrevs tidigare [20].

RNA-extraktion

Totalt RNA från gastric prover och cellinjer extraherades med hjälp av Mirvana miRNA Isolation Kit (Ambion, TX, USA) efter tillverkarens protokoll.

Kvantitativ realtids-PCR-analys

uttrycket av mIR-375 var analyserades med användning av Taqman MicroRNA Assays (Applied Biosystems, CA, USA) med specifika primers (P /N: 4373151, Applied Biosystems). Omvänd transkriptionsreaktion utfördes med start från 10 ng total-RNA med användning av de slingförsedda primrarna. Kvantitativ realtids-PCR (QRT-PCR) utfördes med hjälp av standard Taqman mikroRNA Analyser protokoll på ABI7500 realtids-PCR Detection System. Den ΔΔCt metod för relativ kvantisering användes för att bestämma miRNA uttryck. Ct är fraktionscykelantalet vid vilket fluorescensen för varje prov passerar den fasta tröskeln. Den ΔCt beräknades genom att subtrahera Ct snRNA U6 (RNU6B, P /N: 4.373.381, Applied Biosystems) från Ct av miRNA av intresse. Den ΔΔCt beräknades genom att subtrahera den ΔCt av referensprovet (parade icke-malign vävnad för kirurgiska prover, normala vävnader och GES-1 cell för gastriska cancercellinjer) från ΔCt av varje prov. Faldig förändring bestämdes som 2 ^-ΔΔCt.

migration och invasion analys

Celler transfekterades med 20 nM pre-MIR-375 eller negativ kontroll med hjälp av transfektion Agent (Ambion, TX, USA) genom att följa tillverkarens protokoll i 24-brunnsplattor. 24 timmar efter transfektion, var Transwell migration analys och Matrigel invasion analys utförd separat med 24 brunnar Transwell skär med 8 pm porstorlek (Corning Costar Corp). För Transwell migration assay, 2 × 10 ^{4 AGS eller 3 × 10 4 MGC-803-celler suspenderade i 100}

• PLOS ONE: Effektivitet utvärdering av delresultat och Total Gastrectomies i Robotic Surgery för Gastric cancer jämfört med i öppen och laparoskopisk fria stationer: en metaanalys
• PLOS ONE: antitumöreffekterna av en Sirtuin inhibitor, Tenovin-6, mot Gastric cancerceller via Death Receptor 5 Up-Regulation