PLoS ONE: kompenzacijski Uloga NF-kB na p53 odgovor na 5-FU kemoterapijom na bazi za rak želuca Cell Lines

Sažetak Netlogu

Unatoč značajnom poboljšanju postoperativnih 5-FU-based dodatna kemoterapija, stopa relapsa u bolesnika s rakom želuca koji su podvrgnuti ljekovito resekcija a nakon njega i adjuvantne kemoterapije i dalje bitan. Stoga je važno utvrditi predviđanja markere za kemoterapeutska učinkovitost 5-FU. Nedavno smo identificirali NF-kB kao kandidat recidiva predviđanja biomarkera kod raka želuca. Da bi se procijenila biološki značaj NF-kB u kontekstu 5-FU-based kemoterapije, analizirali smo NF-kB ovisan biološku reakciju nakon 5-FU liječenje u želučanom staničnim linijama karcinoma. Sedam geni induced by 5-FU djelovanjem u NF-kB način ovisan je identificirano, od kojih je pet poznati p53 ciljeve. Obaranje relativnog Netlogu koji kodira P65 podjedinicu NF-kB, smanjena p53 i p53 razine ciljnog proteina. Nasuprot tome, NF-kB nije utjecao na TP53
obaranje. Također smo pokazali da stanične linije koje nose Pro /Pro homozygosity u codon72 od p53 exon4, što je važno za NF-kB vezivanje na p53, su otporniji na 5-FU u odnosu na one s Arg /Arg homozygosity. Možemo zaključiti da NF-kB ima važnu ulogu u kao odgovor na 5-FU u liječenju raka želuca staničnim linijama, s mogućim kompenzacijskog funkciju p53. Ovi rezultati ukazuju da NF-kB je potencijalni 5-FU-kemosenzitivnost predviđanje marker koji odražavaju 5-FU-inducirane puteve stres-odgovor, uključujući p53 pregled

Izvor. Endo F, Nishizuka SS, Kume K, Ishida K, Katagiri H, Ishida K, et al. (2014) kompenzacijski Uloga NF-kB na p53 kao odgovor na 5-FU kemoterapijom na bazi za rak želuca staničnim linijama. PLoS ONE 9 (2): e90155. doi: 10,1371 /journal.pone.0090155 pregled

urednik: Thomas G. Hofmann, Rak njemački istraživački centar, Njemačka pregled

Primljeno: 17. listopada 2013; Prihvaćeno: 28 siječnja 2014; Objavljeno: 27 veljača 2014 pregled

Copyright: © 2014 Endo i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od MIAST (medicinska inovacija naprednu znanost i tehnologiju) projekta Grant-in-aid za strateška Medical Science Research Center iz Ministarstva obrazovanja, kulture, znanosti i tehnologije Japana, 2010-2014 (SSN, K.Ku. GW); i dodjeljivanje pomoći za znanstvena istraživanja (c) (11863286) (S.S.N.) i (12877914) (K.Ko.). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

većina karcinoma želuca u svijetu dijagnosticira u istočnoj Aziji [1], gdje je standardna terapija za napredne želučanog karcinoma ostaje operacija i kemoterapija. Nedavno razvijeni pomoćni kemoterapijski režim nakon kurativne gastrektomije za uznapredovali rak želuca su napravili značajan napredak u smislu kontrole recidiva i bez bolesti opstanak, posebno u japanskoj populaciji [2], [3]. Međutim, 30-40% pacijenata i dalje postoji recidiv, unatoč primanja kemoterapije nakon kurativne gastrektomije [3], sugerirajući da je selekcija bolesnika temelji na molekularnoj informacija može potencijalno biti vrlo učinkovit za povećanje ne-Relapse i opstanak stope kemoterapije posredovane. Pregled

za odabir za pacijente s rakom želuca koji bi mogli imati koristi od kemoterapije, to je važno razumjeti individualne osjetljivosti prije kemoterapije. [4] Postoperativna dodatna kemoterapija karcinoma želuca pruža priliku testirati pacijenta izveden iz tumora prije nego što primaju kemoterapiju. U pokušaju identificiranja potencijalnih biomarkera u ovom okruženju na razini proteina, što je ranije izvijestili sustav panela za selekciju stanične linije pomoću kvantitativne ekspresije proteina profiliranje s reverzne fazne Protein polja (RPPAs) [5], [6] u kombinaciji s staničnoj based test rasta sustav koji se temelji na konceptu NCI-60 stanične linije za selekciju panela [7], [8]. biomarkeri kandidati su izolirane na temelju korelacijskih koeficijenata iz ekspresije proteina i matrice osjetljivosti na lijekove i zatim dalje potvrđuju se kirurški uklonjeni primjeraka [9]. Temelju ovog pristupa identificirali smo dva biomarkera na razini proteina, uključujući i NF-kB i JNK, čija razina imao dobru korelaciju s kemoterapeutskim odgovora. Viša ekspresija NF-kB kao korelira sa lošijom prognozom, a JNK pokazala obrnutu korelaciju. Ovi su markeri i provjerena na molekularnoj razini pomoću gastrointestinalnog raka stanične linije. Pokazano je da siRNA posredovano obaranje P65 gotovo isključivo utječe 5-FU osjetljivost među trenutno korištenih kemoterapijskih sredstava; ali to nije slučaj za JNK obaranje [9]. Dakle, došli smo do zaključka da je NF-kB igra dominantnu ulogu u 5-FU liječenja i JNK može biti pokazatelj kronične upale želučane sluznice pozadini [10]. Kao produžetak ove studije validacije, tražili smo istražiti ove proteine ​​funkcionalno i pojasniti ulogu NF-kB kao transkripcijski faktor stresa može inducirati tijekom 5-FU liječenja. Isto smo ulogu p53 nakon 5-FU posredovanog transaktivacije NF-kB [10], [11], jer je poznato da je p53 aktivira u odgovoru na ovaj genotoksični sredstva [12]. U ovoj studiji smo izvješće potencijalnu kompenzacijski ulogu NF-kB za p53 kroz analizu p53-NF-kB vezanja polimorfni stranice, kodon 72 p53. Zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da je NF-kB /p53-codon72 mogao biti robustan biomarker za 5-FU osjetljivosti. Pregled

Materijali i metode

staničnim linijama

Devet ljudskog želuca stanične linije raka, uključujući Kato-III, KE39, MKN74, MKN7, NUGC4, GSS, GCIY i MKN45 dobiveni su iz Cell banke Riken BioResource Center. Prijevoz unutarnjim vodama-1 bio je de novo pregled stanična linija koji je postavljen u našem laboratoriju iz japanske muškog želuca pacijenta sa rakom koji je recidiv peritonitis carcinomatosa. Korištenje prijevoz unutarnjim vodama-1 stanične linije je odobren od strane Iwate Medical University Institutional Review Board (H25-116 i HG H25-15) i obitelji donatora pacijenta koji je umro u vrijeme osnivanja stanične linije s pismeni informirani pristanak s obzirom na uzimanje uzoraka i stvaranje stanične linije. Stanice su rasle do 70-80% pokrivenosti u RPMI-1640, uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) pri 37 ° C u prisutnosti 5% CO _{2. Pregled}

Priprava staničnog lizata

Stanice su sakupljene centrifugiranjem i pelete stanica su lizirani pomoću pufera za Pink sadrži 9 M urea (Sigma-Aldrich, St. Louis, MI, USA), 4% 3 - [(3-holamidopropil) dimetilaminijoj] -1 -propanesul-fonate (CHAPS, Calbiochem, Merck Millipore, Darmstadt, Njemačka), 2% pH 8,0 - 10,5 Pharma-LYTE (GE Healthcare Japan, Tokyo, Japan), i 65 mM DTT (GE Healthcare Japan, Tokyo, Japan) kao prethodno opisano [5], [13]. pregled

Western blot pregled

SDS-PAGE je izvedena pomoću NuPAGE 4-12% bis-TrisGel elektroforeze (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), XCell Naravno Lock Mini-stanica (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), a snaga PAC HC (BIO-RAD, Hercules, CA, USA). Razdvojeni proteini na gelu su prebačeni u nitroceluloze membranu pomoću iBlot Suhi blot-sustav (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Rezultirajući Membrane su blokirane s 5% iBlot (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) i 0,1% Tween-20 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) u TBS (TBST) tijekom 1 sata. Membrane su zatim inkubirane s naznačenim primarnih protutijela, uključujući pan-aktin, p53 (Thermo Scientific, Kalamazoo, MI, USA); p21, TIGAR, a PUMAα /β (Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA); i NF-kB, α-tubulin i PCNA (Cell Signaling Technology Japan, Tokyo, Japan). Zatim se membrane isperu dva puta 5 minuta s TBST, inkubirane s HRP konjugiranih sekundarnih antitijela tijekom 1 sata, a zatim dva puta isprane tijekom 5 minuta u TBST. Chemiluminescence reagensi za otkrivanje inkubirani s membranama za 1-5 minuta, a zatim su slike stekla pomoću slike Quant LAS500 (GE Healthcare Japan, Tokyo, Japan). Za procjenu indukcije proteina za 5-FU, Western blot su utvrđene pomoću ImageJ (http://rsbweb.nih.gov/ij/). Pregled

fosforilacija pregled

Stanice su rasle do 70-80 % konfluencija u RPMI-1640, uz dodatak 10% FBS u 4-komornim polistiren posuda za uzgoj kulture tkiva tretirane stakalca i zatim se pomiješa s 5-FU kao što je navedeno u svakom eksperimentu. Nakon stanice su izložene 50 uM 5-FU kroz 4 h da se vidi rani transkripcijski odgovor su fiksirane u 4% paraformaldehidu, permeabilizirane koristeći 0,2% Triton X-100 u PBS i oboje sa DAPI (0,6 uM DAPI, 50 ul RNaza i 5 ml PBS) na sobnoj temperaturi 12 min. Stanice su zatim inkubirane sa sljedećim primarnim antitijelima: anti-NF-kB P65, fosfo-NF-kB P65 (Ser536) i fosfo-p53 (Ser15) (Cell Signaling Technology Japan, Tokyo, Japan) i p53 (Thermo Scientific , Kalamazoo, MI, USA). Konačno, stanice se inkubira s ili Alexa Fluor488- ili 568-konjugiranih sekundarnih antitijela (Life Technologies Japan, Tokyo, Japan). BX43 fluorescentni mikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) se koristi za prikupljanje slike. Pregled

Gene Expression Profiliranje pregled

MKN45 stanice su sakupljene poslije tretmana sa ili bez 50 uM 5-FU 4 h , RNA se zatim ekstrahira iz prikupljane stanice i profila genske ekspresije provedena je u skladu s uputama proizvođača (Naravno Ispis G3 Human GE8 × 60 K, Agilent Technologies Japan, Tokyo, Japan). Sirovi podaci su prvi put normalizirani dijeljenjem svakog signala sa sondom od 75 ^{-og percentila cjelokupnog signala. Svaki mikropločicama Pokus je proveden u duplikatu rezultira dvije kontrole i dva 5-FU liječenja skupova mikropločicama podataka. Da biste identificirali gene koji su različito izraženi u odgovoru na 5-FU, a svaki skup kontrolu podataka koji su u odnosu zasebno za svaki tretman 5-FU set (4 usporedbe). Diferencijalno eksprimirani geni su oni koji su imali promjene u ekspresiji > 2 puta u svakoj usporedbi. Identificirali smo završni set od 10 različito izražene gene na temelju njihove učestalosti u 4 usporedbe [14]. Potvrditi ponovljivosti ovih ekspresijskih promjena kvantitativno u realnom vremenu RT-PCR 5-FU pomiješa uzorke 0, 4, 8, 12, i 24 sata je provedena za svaki gen. Nizovi primera su dani u Tabeli S1. Za gena induciranih 5-FU, analiza vezanja promotora mjestima provedena je pomoću JASPAR algoritam (JASPAR, http://jaspar.genereg.net/). Od 1000 bp promotor slijed specifične za odgovarajućim genima koji je dobiven od transkripcije regulatorni element baze podataka (http://rulai.cshl.edu/cgi-bin/TRED/tred.cgi?process=home). Vezna mjesta su predviđeni skeniranjem promotorske sekvence s konsenzusom sekvenci NF-kB i p53 sa 70% profila rezultat praga. Pregled}

relativnog i TP53 Genea obaranje pregled

Stanice su uzgajane na 70-80 % konfluencija u RPMI-1640, uz dodatak 10% FBS na pločice sa zasijanim kulturama 6 jažica, a zatim se pomiješa s NF-kB p65 ili p53 siRNA (Cell Signaling Technology Japan, Tokyo, Japan) tijekom 48 sati. Ukratko, obaranje provedena je pomoću Trans IT-TKO (mirus Bio Corporation, Madison, WI, USA) u koncentraciji od 3% za 10 minuta na sobnoj temperaturi. Odgovarajuće koncentracije iRNK za svaku staničnu liniju pomiješa se s trans-IT Tko otopine, nakon čega slijedi 20 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi. Koncentracija siRNA korištene su kao što slijedi: 100 nM P65 siRNA za MKN45 i MKN74 stanice, i 150 nM za GSS i Kato III-stanica; i 100 nM p53 siRNA za MKN45 i GSS stanice i 50 nM za MKN74 stanice. Nakon 48 sati, stanice su sakupljene i razina proteina je ispitan pomoću Western blot. Dva siRNA konstrukti koji imaju različite sekvencije s istim ciljnog gena se koristi za svaki gen za potvrdu obaranje specifičnost. distribucija staničnog ciklusa je izveden korištenjem Tali Slika-based citometra u (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Vidjeti maksimalnog učinka siRNA na 5-FU odgovor, lijek je dodan 48 sata nakon siRNA je transficiran, te ako je odgovarajući stanični ciklus je mjerena nakon 24 sati inkubacije s 5-FU. Svi pokusi su ponovljeni barem tri puta. Pregled

TP53 Stanje i Codon72 Varijanta pregled

DNA je izvađen iz želuca staničnim linijama karcinoma koriste QIAmp DNA Mini Kit (Qiagen Japanu, Tokyo, Japan). PCR amplifikacija za P53 pregled exon4 codon72 varijanta (Tablica S1) i P53 pregled exon5-9 mutacija je izvedena kao što je ranije opisano [15], [16]. Svaki PCR proizvod je sekvenciran koristeći ABI PRISM 3030xl genetičke analizatora (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) prema protokolu proizvođača. Rezultati sekvenciranja su analizirani pomoću FinchTV (Perkin Elmer Japan, Tokyo, Japan) i MEGA 5.1 Beta 3 [17]. pregled

Rast Test Suzbijanje pregled

Deset tisuća stanica po komorici zasađene su u 96-te mikroploče. Dvadeset četiri sata kasnije, stanice su tretirane s 5-FU 24 h. Nakon 5-FU liječenja, udio živih stanica je mjerena pomoću brojanja Kit-8 (Dojindo Molecular Technologies, Kumamoto, Japan) i TriStar LB 941 čitača mikroploče (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Njemačka). koncentracija inhibicije rasta Pedeset posto (GI _{50) izračunata je korištenjem Prism softvera (Graph Pad Software, La Jolla, CA, USA). GI 50 vrijednost se koristi za određivanje korelacije između 5-FU učinkovitosti i proteina razinama na temelju koeficijenta umnoška momenta korelacije je Pearsonov ( r pregled). Pregled}

Rezultati pregled

fluorouracil inducira NF-kB pregled

za potvrdu tipičan NF-kB ponašanje kao odgovor na 5-FU liječenja, pratiti smo subeelularnim lokalizaciju NF-kB u MKN45 (p53 divljeg tipa), MKN74 (p53 mutant ) GSS (p53 mutanata) i Kato-III (p53 homozigotno izbrisati) stanične linije. Western blot analiza uz jezgri i u citoplazmi frakcija je pokazala da 5-FU inducirana NF-kB u oba odjeljka u MKN45 ali nije primjećeno kod p53 mutanata staničnih linija (sl. 1-D). Također ispitati učinak 5-FU o NF-kB lokalizaciji u stanicama pomoću imunocitokemijskih (Sl. 1 E-H). NF-kB lokalizirani u citoplazmu u netretiranoj MKN45, dok 5-FU liječenje uzrokuje povećanje NF-kB nuklearnu lokalizaciju (Slika 1E).; Međutim, bez povećanja uočena je u staničnim linijama p53 mutanata (Sl. 1F-H). Također smo uočili drastično povećanje fosforilirani NF-kB (p65 Ser536) u jezgri MKN45 liječenje sa 5-FU, što ukazuje na NF-kB je transactivated je 5-FU (sl. 1E). Konstitutivna nuklearnu lokalizaciju i povremeni fosforilacija p53 zabilježeno je u MKN74 ali nije Čini se da je indicirana za 5-FU (Sl. 1 g). Nuklearna lokalizacija p53 izazvana je 5-FU u GSS, ali aktivira signal bio slab (sl. 1 H). Pregled

p53 Ciljevi su inducirane na 5-FU tretman Netlogu

Od NF-kB je transkripcijski faktor (TF), njegov nuklearni lokalizaciju na 5-FU liječenja snažno sugerira transaktiviranje. Identificirali smo prvih 7 transkripata među više od 60.000 koji su izazvani nakon 4 sata od 5-FU liječenje u MKN45 pomoću profila genske ekspresije (Tablica 1). Zanimljivo je da je pet od 7 transkripata, odnosno BBC3 pregled (koji kodira p53 regulira prema gore modulatora apoptoze, puma), BTG2, C12orf5 pregled (koji kodira vjerojatno fruktoza-2,6-bisfosfataze TIGAR), CDKN1A i GPR87 pregled, poznati p53 ciljevi [18] - [22]. Prisutnost promotora veznih mjesta su predviđeni skeniranjem promotorske sekvence s konsenzusom sekvenci NF-kB i p53 pomoću JASPAR algoritam (Tablica 1) [23]. Pregled

Otkrili smo da su razine p53 su izazvani u jezgri sličan onima NF-kB, kao odgovor na 5-FU tretmana (sl. 1E). Tretman 5-FU povećala razina fosforilacija p53 na Ser15, što upućuje na njezin transaktivacije (Sl. 1e, ref. [24]). U stvari, većina ukupni p53 uzrokovane 5-FU, čini se, fosforiliran. Također smo uočili na vremenski ovisan indukcije gena, uključujući i C12orf5 (TIGAR) pregled, BBC3 (PUMA) Netlogu, CDKN1A (p21)
i BTG2 pregled za 5-FU pomoću RT-PCR (Sl. 1 i). Uzeti zajedno, ovi rezultati ukazuju na to da je stanični odgovor na 5-FU liječenje može uključivati ​​i NF-kB i p53 za transkripcije aktivacije u ovom kontekstu, u MKN45. Pregled

relativnog obaranje ima veći učinak na p53 ciljnih proteina od TP53 Gene obaranje pregled

procijeniti regulatorni učinak NF-kB i p53, kao odgovor na 5-FU liječenja, analizirali smo razine proteina u p65, p53, kao i poznati ciljeve p53, p21, tiger i PUMA, po zapadnoj upijajući sljedećim relativnog Netlogu i TP53 pregled obaranje u MKN45, MKN74, GSS i Kato-III. relativnog pregled obaranje izazvao je značajno smanjenje razine p53 u svim staničnim linijama. Kao što se očekivalo, razina p21, TIGAR, a PUMA također su smanjeni (sl. 2a). S druge strane, dok je TP53 pregled obaranje smanjena p53 razinu, to nije utjecalo na P65 razinama. Kao što se očekivalo, razine p53 ciljnih proteina smanjeni su TP53
obaranje; Međutim, to smanjenje je manje od smanjenja uzrokovanog relativnog pregled obaranje (sl. 2b). U analizu staničnog ciklusa, MKN74 GSS i Kato-III stanične linije bilježi lagani porast u S ili G2 faze frakcije, dok MKN45 pokazali su povećanje od G1 frakciji nakon 24-satnog izlaganja na 5-FU u P65 i p53 obaranje slične odgovarajućim kodira (Sl. 2c). Ovi rezultati mogu ukazivati ​​robusnost strojeva odgovora stanični stres koji održava raspodjelu staničnog ciklusa, unatoč obaranje P65 i p53. Pregled

TP53 Codon72 Pro Varijante pokazuje nisku 5-FU osjetljivosti i visoke razine NF-kB

Gene obaranje eksperimentalni rezultati su pokazali da interakcija između NF-kB i p53 proteina može biti važno u kontekstu 5-FU liječenja. Da bi istražili mogućnost da je TP53 pregled codon72 varijanta može utjecati na stanične odgovore na 5-FU tretmana, mi sekvencionirao TP53 pregled codon72 kao i mutacije u DNA vezne regije domena kodiranje (tj eksona 5-8) 9 želučanih tumorskih staničnih linija (tablica 2). Status codon72 varijacija i TP53 pregled mutacija nije pokazao jasne asocijacije. Pregled

Sljedeći istražili povezanost između 5-FU osjetljivosti i TP53 pregled statusa (Sl. 3A ), kao što su endogeni razine NF-kB i p53 (Sl. 3B). GSS, GCIY i MKN45 linije, koje posjeduju Pro homozigotni varijantu, izlagao nisku osjetljivost na 5-FU, dok KE39, MKN74, MKN7, NUGC4 i IWT1 linijama posjeduju Arg alela pokazali relativno visoka osjetljivost. Kato-III, koji ima veliki TP53 pregled, brisanje [25], bio je najosjetljiviji na 5-FU. NF-kB razina proteina je posebno povezano s 5-FU osjetljivosti ( r pregled = 0,68; p pregled = 0.04; Sl. 3C); Međutim, nije bilo jasne korelacije između razina p53 i 5-FU osjetljivosti ( r pregled = -0,04; p pregled = 0.95; Sl. 3D). Ovi rezultati ukazuju na to da Pro homozygosity je povezana s otporom 5-FU, a ni p53 mutacija, niti endogene razine p53 izravno utječe na 5-FU osjetljivost na. Pregled

Rasprava pregled

Mi smo ranije identificirali NF-kB kao potencijalni predviđanja marker za postoperativnu 5-FU-based kemijske osjetljivosti za uznapredovali rak želuca [9]. NF-kB je inducibilan transkripcijski faktor sastoji od P65 (relativnog), c-rel rel-B, P50 /NF-κB1 i str52 /NF-κB2 [26], te ima središnju ulogu u imunim odgovorima i inflamatornih citokina propis [27] - [29]. Chang i suradnici ranije pokazano da NF-kB inducirana gore ili naniže diferencijalno eksprimirani geni u 5-FU-induciranih crijevne mukozitisa induciranim proupalnih citokina kao što je IL-6, TNF-a i IL-1 [10]. Te 5-FU-inducirani upalni odgovori su uzeti u obzir da se dio stresom izbjegavanje procesa koji mogu dovesti do desenzibilizacije 5-FU efikasnost želučane sluznice [30]. Iako je predloženo da aktivacija NF-kB nije izravno povezan s razvojem tumora i progresiji [31], NF-kB se smatra da je glavni biomarkera i terapeutski cilj [32]. Izravni dokaz smanjenog kemijska otpornost na 5-FU po siRNA za relativnog
zajedno s visokim diskriminacijskom snagom NF-kB nuklearne bojenja u terapijskim rezultatima kirurški odstraniti tkivo potaknuo nas je obavljati daljnje vrednovanje NF-kB iz biološki gledišta. pregled

Naši transkripcijski profiliranje Rezultati su pokazali da je nekoliko p53 nizvodno geni su se regulira-u odgovoru na 5-FU, u kojoj transaktivacije NF-kB i dogodilo. Ta dva glavna transkripcijski faktori prethodno pokazano da se istovremeno regulirani u odgovoru na genotoksičnih sredstava [33] - [35] i TNF-α [36], [37]. Osim toga, bilo je predlagano da se ko aktivacije p53 i NF-kB u tumorima liječenih genotoksičnih sredstava može dovesti do neuspjeha terapije zbog NF-kB posredovane preživljavanja signalizacije [38].

Individualni obaranje ovi faktori transkripcije otkrila gene nizvodno od p53 su pogođeni p65 obaranje, dok je učinak bio ograničen p53 obaranje. Raniji izvještaji sugerirali su kooperativni odnos između p53 i NF-kB u kontekstu autophagy, apoptozu i S-faza kontrolne točke aktivacije [34], [39] - [41]. Naši rezultati također pokazuju da NF-kB može kompenzirati transkripcijskom aktivnošću p53 kada je netaknut funkcija izgubljena kao odgovor na 5-FU liječenja. U stvari, većina želučanih raka nose mutacije u p53 DNA vezne domene, tako čineći to transkripcijski aktivna [42]. Nedavna studija Franka i sur pregled. izvijestio da je codon72 polimorfizam TP53
bitno utječe na sposobnost p53 surađivati ​​s NF-kB za gensku transaktivacije, posebno u indukciji apoptoze preko kaspaze 4/11 [40]. Zajedno s ovom otkriću da su neki transkripcijska aktivnost p53 zahtijeva NF-kB odgovor na 5-FU, p53 kodon 72 polimorfizma za NF-kB vezivanja može biti utjecajniji od mutacije statusu TP53
ili proteinske ekspresije status p53 pregled

utjecaj polimorfizma codon72 spontanog rizik od raka je prethodno istražena, ali nije uvjerljivo utvrđeno zbog ograničenih ljudske populacije i životinjskih modela [40], [43] -. [45]. Međutim, polimorfizam codon72 mogu igrati ulogu u održavanju uspostavljenih stanica raka nego što je izazvalo stanični malignu transformaciju. U stvari, prethodna studija pokazalo da su Pro /Pro alel povezane s rezistencijom na kemoterapiju i lošom prognozom u usnoj šupljini [46] kao i kolorektalni [47], dojke [48] i želuca [49] karcinomi i neuroblastomi [ ,,,0],43]. Niz In vitro
istraživanja također potvrđuju tu hipotezu koja pokazuje da je Arg alel je moćniji apoptoze od Pro alela [40], [50], [51]. Apoptoza je jedan od glavnih mehanizama inducirao 5-FU, a time i razumno je pretpostaviti da je učinkovitost 5-FU-based kemoterapije povezana s određenim p53 polimorfizama [49]. Naš In vitro
nalaza ove epidemiološke i eksperimentalne podatke i ukazuju na mogući mehanizam za 5-FU-posredovane p53-NF-kB interakcije na mjesto vezanja p53-codon72. Pregled

Kao što se očekivalo naša studija pokazala je da su stanične linije s Pro alela bile su otporne na 5-FU od onih s Arg alel. Suzbijanje rasta profil 9 želučanih staničnim linijama karcinoma pokazala dobru korelaciju s NF-kB proteina. Ovi rezultati ukazuju da Arg /Arg genotip ima jači indukciju apoptoze nego Pro Pro /genotip u prisustvu 5-FU. Među staničnih linija (dobiveni iz japanskih pacijenata s rakom želuca), omjer Arg /Arg: Arg /Pro: Pro /Pro bila 04:01:03, dok je kod zdravih japanskih pacijenata bila je 4.5:4.4:1 [52] , To možda ukazuje na proces selekcije koji se događaju tijekom razvoja tumora i uspostave kao stanične linije. Prethodna meta-analize rizika od raka i p53-codon72 polimorfizama sugeriraju da je Pro /Pro genotip ima veći rizik od raka (niža za Arg /Arg genotip) u azijskim populacijama [45], [53]. Međutim, značaj "rizik od raka" za rak maligne bolesti ili odgovora na liječenje Ostaje da se razjasni, jer je općenito teško provesti kliničke studije dominiraju genetskih polimorfizama i procijeniti prave genetske učinke liječenja. Do danas, većina izvještaji opisuju povezanost između polimorfizma p53 codon72 i kemoterapijskih odgovora su pokazala da je Arg /Arg genotip ima povoljan odgovor u širokom rasponu od raka liječenih uobičajenim genotoksičnih lijekovima [49], [54], [55] , Predlažemo urođeni mehanizam za odgovor na 5-FU preko NF-kB i p53 proteina vezanja povezane sa polimorfizam p53, a time i Kombinacijski dijagnoza NF-kB ekspresiju proteina i codon72 može biti koristan pokazatelj za post-operativnu pomoćne kemoterapije. Osim nekoliko velikih skupova podataka [52], [56], u mjeri u kojoj demografska i etnička razdioba polimorfizma ostaje nejasno. Gomilaju podatke o etničkim razlikama za polimorfizam može objasniti razlike u riziku od raka i kemoterapijskih stope odgovora u populaciji pacijenata. Pregled

Ukratko, naši rezultati pokazuju da je NF-kB regulira p53 transkripcijske aktivnosti u odgovoru na 5-FU, koja može biti povezana s polimorfnih mjesta p53 na codon72. Daljnje kliničke i epidemiološke studije treba procijeniti korisnost istovremene patoloških /uzgojne procjene NF-kB /p53-codon72 u kirurški uklonjene uzoraka raka želuca kako bi se predvidjeti efikasnost postoperativne 5-FU-based adjuvantne kemoterapije.

popratne podatke pregled Tablica S1.
sekvencijama pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0090155.s001 pregled (docx) pregled