PLoS One: A Novel proteomikai alapuló klinikai diagnosztika technológiája azonosítja heterogenitás aktivált jelátviteli Gyomor Cancers

absztrakt katalógusa

Cél katalógusa

A vizsgálat célja az volt, hogy kihasználja a proteomikai alapú kollaboratív enzim Enhanced Reaktív (CEER) immunoassay vizsgálja protein tirozin foszforiláció diagnosztikai markerek gyomorrák (GC). katalógusa

Kísérleti elrendezés katalógusa

fehérje lizátumok friss fagyasztott 434 előrehaladott stádiumban GC elemezték foszforiláció a HER1, HER2 p95HER2, HER3 cMET, IGF1R és PI3K. Az útvonal aktiválása mintákat elkülönítve alapján a daganat HER2 státusz. Hierarchikus klaszterezés használtak annak megállapítására útvonal coactivations a GC. Prognosztikai útvonal aktiválása minták határoztuk összefüggésbe betegségmentes túlélés idejét a különböző GC alcsoportok Kaplan-Meier túlélési analízis. CEER is használták, hogy meghatározzák a jelenlétét tirozin foszforilezett jelzőkaszkádok a keringő tumorsejtek (CTC) és az ascites tumor sejtek (ATC).

Eredmények

Használó újszerű diagnosztika immunoassay, CEER, mi jelenlétét igazolják p95HER2 és egyidejűleg aktivált jelátviteli mechanizmusok GC tumor szövetekben, CTC és ATC izolált GC betegek az első alkalommal. p95HER2 fejezzük ~77% HER2 (+) GC. Körülbelül 54% -a GC-k aktivált HER1, HER2, HER3 cMET vagy IGF1R és bizonyítani rosszabb prognózist, mint azok, ahol ezek a receptor tirozin kinázok (RTK) nem aktiválódnak. Hierarchikus klaszterezés RTK-k kiderül együttes csoportosulását foszforilált HER1: cMET, HER2: HER3 és IGF1R-PI3K. Koaktivációja HER1 a cMET teszi GC rövidebb betegségmentes túlélés képest csak cMET aktivált GC. Katalógusa

Következtetések katalógusa

A tanulmány kiemeli a típus egy új társ diagnosztikai technológia, amely CEER erős drog-fejlesztési és terápiás ellenőrzés. CEER használják fel, hogy fokozott megértése aktivált jelátviteli utak fejlett GC, amely jelentősen javítja a klinikai kezelés révén pontos betegek kiválasztását a célzott terápiás. Katalógusa

Citation: Lee J. Kim S, Kim P, Liu X, Lee T, Kim KM, et al. (2013) A Novel Proteomika-Based Clinical Diagnostics technológiája azonosítja heterogenitás aktivált jelátviteli gyomorrák. PLoS ONE 8 (1): e54644. doi: 10,1371 /journal.pone.0054644 katalógusa

Vágó: Anthony W. I. Lo, a kínai University of Hong Kong, Hong Kong katalógusa

Beérkezett: szeptember 20, 2012; Elfogadva: december 13, 2012; Megjelent: január 25, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Lee et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: A szerzők nincs támogatás vagy támogatási jelenteni. katalógusa

Érdekütközés: Bár PK, XL, TL, NH, GH, AK, AJ, a GM, a GL és az SS által alkalmazott Prometheus Laboratories, ez nem változtat a szerzők betartása minden PLoS One politikák adatok megosztása és anyagok. katalógusa

Bevezető katalógusa

molekulárisan célzott szerek felgyorsította az onkológia területén. Tekintettel arra, hogy mintegy a fele a tirozin-kináz komponense az emberi kinome szerepet játszik az emberi rákos megbetegedések, nem meglepő, hogy a nagy része a jelenlegi terápiás célba különböző kinázok [1], [2]. Koaktivációja a receptor tirozin kinázok (RTK-k) volt megfigyelhető részhalmazát többszörös rák, például a glioblastoma multiforme, [3] az emlőrák [2], [4], [5], [6], [7], tüdőrák [8 ], [9], a fej-nyaki rák [7] és a gyomorrák [4], [5], [6] ezért implicating őket, ha szükséges a tumor progresszióját és a túlélést. Ezek a megfigyelések elegendő klinikai logikai szűrésére aktivált RTK a rákos megbetegedések, amelyek azután vezesse terápiás célzás és potenciálisan a tudás racionális kombinatorikus terápiás stratégiák. Azonban egyszerűen elemzésével expresszióját vagy aktiválási állapotát egyetlen RTK, amely lehet a specifikus célpont fehérje egy adott terápiás elégtelen kiválasztására betegek sokszor a betegek nem reagálnak a terápiák ellenére a kifejezés a cél. Több lehetséges problémák lehetnek felelősek az ilyen hiánya a terápiás előny célzott szerek, például 1) egyidejű aktiválása párhuzamos vagy alternatív útvonalakat, amelyek kikerülik az eredetileg megcélzott fehérje (k), és 2) a folyamatos változást, a molekuláris és patológiai jellemzői daganatos zsebkendő alatt daganatos progresszió. Ezért ideális lenne, hogy egy társ diagnosztikai eszköz, amely alkalmazható a korlátozott mennyiségű klinikai minták, hogy rögzítse az átfogó összetettsége foszforilezett jelátviteli hálózatok a neoplasztikus szövet amellett, hogy a közvetlen cél RTK fehérje hogy figyelemmel kíséri a "változó" betegség .

Célzott foszforiláció analízise klinikai mintákban akadályozta hiánya miatt a könnyen felhasználható klinikai vizsgálatok vannak elég érzékeny ahhoz, hogy működni, korlátozott mennyiségű klinikai szövetekben. Korábban már beszámoltunk a fejlesztés egy új proximity-alapú immunoassay, Collaborative enzim Enhanced Reaktív-immunoassay (CEER ábra az S1) [6], amely elemzésére alkalmas mind a teljes kifejezés és aktiválási állapotát fehérje jelátviteli kaszkád. CEER lehet végezni egy multiplexeit módon közvetlenül a klinikai mintákat, amelyek rendelkezésre állhatnak korlátozott mennyiségben. A CEER assay kialakulhatna egy egyedi immun-komplex igénylő kolokalizációját két detektor enzimkonjugált-antitestek egyszer célfehérjéje elfogták a microarray. Ez a formátum lehetővé teszi a hatékony és érzékeny kimutatására RTK-k, valamint a downstream útvonal fehérjék le az egyes sejtek szintjén (érzékenysége körülbelül 100 zeptomoles). Ebben a tanulmányban felhasznált CEER assay, hogy tanulmányozza a jelátviteli komplexitás gyomorrák (GC). Katalógusa

GC a vezető daganatos halálok világszerte előfordulási gyakorisággal 18,9 /100.000 eset évente, és a mortalitás aránya 14,7 /100,000 évente [10], és a leggyakoribb rosszindulatú daganat Koreában [11]. A metasztatikus GC marad terápiás kihívás onkológusok miatt rossz prognózissal. Jelenleg, a trasztuzumab az egyetlen aktív célzott szer, amely bebizonyította, hogy hatékony a GC egy randomizált fázis III vizsgálatban [12]. Míg az aktiválást több RTK számoltak be GC, hatásuk a GC prognózis ismeretlen. Ez azért fontos, mert a fejlesztése és alkalmazása a gyógyászatban klinikai kezelésében GC. Katalógusa

Ebben a tanulmányban használt a multiplex CEER platform szint meghatározásához aktivált RTK (HER1, HER2, csonkolt változatai HER2, azaz p95HER2, HER3 cMET, PI3K és IGF1R) 434 friss fagyasztott GC szövetek és megpróbálta kategorizálni GC betegeket potenciális alcsoportokra alapján protein útvonal aktiválása mintákat. Megfigyeltük több jel fehérje aktiválás alcsoportokban GC tumorok, amelyek összefüggésben állnak a betegségmentes túlélés (DFS) ezeknél a betegeknél. Ezért feltételezzük, hogy a redundáns útvonal aktiválás bemenetek vezethet maradék jelátviteli a GC, így korlátozva a tumor-ellenes hatásosságát monoterápiák célzott ellen egyetlen RTK-k. Végül, az általunk kifejlesztett egy potenciálisan hatékony módszer, amely lehetővé teszi a klinikusok nyomon követésére a kiindulási és a fejlődő változásokat a tumor RTK aktiválás profilok során egy kezelés segítségével keringő tumorsejtek (CTC) és a malignus sejtek izolált peritoneális folyadékban (aszcitesz tumor sejteket vagy ATC-k ). Mindezzel együtt, a tanulmány bizonyítékot egyidejűleg RTK aktiválás GC emberi szövetek mellett létrehozó CEER mint hatékony klinikai eszköz diagnosztizálására és nyomon RTK aktiválás során GC kezelés vagy a betegség progresszióját. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

pácienscsoporton és szövetmintát beszerzési katalógusa

a vizsgálat során a jóváhagyás után a Samsung Medical Center Intézményi Review Board (SMC IRB) a beleegyező nyilatkozatot lemond a levéltári szövetek retrospektív klinikai adatok. A primer tumor mintákat minden begyűjtött Samsung Medical Center. Minden betegnél gastrectomián radikális nyirokcsomók kuratív. 2001 márciusa és 2005 februárja 447 friss fagyasztott szövetekben nyert 434 beteget gyűjtöttünk műtétileg eltávolított primer gyomor tumorok és álltak rendelkezésre végső elemzést. Minden friss fagyasztott szöveteket gyűjtöttünk (belül < 30 perc), a sebészeti területen, és azonnal hirtelen lefagyasztottuk és folyékony nitrogénben tároltuk, amíg későbbi használatra. A tumor mintákat megerősítette jelenlétét > 70% tumor területére a patológus. Az elemzéshez, kis darab fagyasztott szövetek (10 um szakasz X 3) állítunk elő előre lehűtött borotvapengével és lizáltuk 100 ul lízis-pufferben. A kapott lizátumokat -80 ° C-ig utólagos elemzése. Katalógusa

Hisztopatológia felülvizsgálata és a HER2-státus meghatározása katalógusa

Az összes elérhető H &E-festett lemezeket központilag felül két patológusok (ID, KKM ) a kísérleti patológiai lényege a Samsung Rákkutató Intézet. Minden daganatminták voltak műtétileg eltávolított primer gyomor tumorok. A HER2-státus határoztuk IHC és FISH. IHC analízist a HercepTest ™ (Dako, Glostrup, Dánia). HER2 fehérje expressziós szinteket pontozni 0 3+ szerint a konszenzus panel ajánlásokat HER2 pontozás GC [13], [14]. Halak, PathVysion HER2 DNS próba készlettel (Abbott, Des Plaines, IL) alkalmaztunk. Ariol képelemző rendszert használtunk számít a hibridizációs jelek (Genetix, San Jose, Amerikai Egyesült Államok). Minden mintát arányoknál az a HER2 /CEP17 1,8 és 2,2 között pontoztuk manuálisan számlálásával több mint 60 nem átfedő sejtekben. Arányai > 2,2, 1,8 és 2,2, illetve < 1,8 sorolták pozitív, nem egyértelmű, vagy negatív erősítés, ill. Kromoszóma 17-es poliszómiát definiálták CEP17 jel, amelyeknek több mint hat példányban átlagosan cellánként. A 447 mintából 434 egyedeket tartalmazza a végső elemzésben. Katalógusa

Collaborative enzim Továbbfejlesztett Reaktív-immunoassay (CEER) hotelben

CEER diák nyomtattak, inkubáltuk GC lizátumokat és feldolgozott korábban leírt módon [ ,,,0],6]. A metszeteket szkennelt négy PMT (PMT) fényerő-hatékonyságának növelése dinamikatartomány. Az adatok alkalmasak voltak egy öt paraméter egyenlet származó függvényében capture antitest koncentráció és a PMT és bemutatni számított egység (CU). Katalógusa

Multiplex-microarray nyomtatás. Katalógusa

Capture antitesteket nyomtatott nitrocellulóz bevonatú üveg csúszdák (ONCYTE®, Grace Bio-Labs) alkalmazásával érintésmentes nyomtatók (Nanoplotter, GeSiM). A pont átmérője körülbelül 175 um. A tárgylemezeket tartottuk kiszáradt kamrában 4 ° C-on. Körülbelül 500 pL befogási Abs nyomtattak három példányban a hígítási koncentrációjú, 1 mg /ml, 0,5 mg /ml, és 0,25 mg /ml. Tisztított egér-IgG-k, mint negatív kontrollok. Immuno-tömb dia konfigurációk ábra mutatja az S1.

Ellenanyag konjugáció és tisztítása.

cél-specifikus antitesteket (egér monoklonális ellen specifikus epitópok humán jelátviteli fehérjék) és a megfelelő detektor enzimek, glükóz-oxidáz (GO), vagy torma-peroxidáz (HRP), aktivált bi-funkcionális keresztkötő, szukcinimidil-4- (N-maleimido-metil) -ciklohexán-1-karboxilát (SMCC), és párosul így antitest-enzim konjugátumok. Konjugátumokat HPLC-vel tisztítottuk. Az antitest tevékenységét a tisztított konjugátumok határoztuk meg kompetitív ELISA és a poszt-konjugáció enzim aktivitása kimutatható funkcionális vizsgálatokhoz külön minden egyes érzékelő enzim. Katalógusa

CEER vizsgálatokban. Katalógusa

Immuno-microarray lemezeket leöblítjük 2X TBST-vel (50 mM Tris /150 mM NaCI /0,1% Tween-20, pH = 7,2-7,4), blokkoltuk 80 ul Whatman Blocking pufferben 1 órán át szobahőmérsékleten, majd mossuk 2X TBST-vel. Sorozatban hígított lizátum kontrollokat vagy minták 80 ul hígító pufferrel (2% BSA /0,1% Triton X-100 /TBS, pH = 7,2-7,4) adunk kijelölt al-tömbök a tárgylemezen és 1 órán keresztül inkubáltuk szobahőmérsékleten. Lemezeket mostuk 4X (3 min. Mindegyikből), és a detektor Abs adtunk 80 ul reakció-pufferben, és 2 órán át inkubáltuk szobahőmérsékleten. Mosás után diákat TBST-vel, hogy eltávolítsuk a nem kötött detektor Abs, 80 ul biotin-tiramid oldatot (5 ug /ml 50 mM glükóz /PBS) készített 400 ng /ml etanol-oldatot (Perkin-Elmer Life Science) adunk hozzá, és inkubáltuk 15 percig, sötétben. GO /HRP-mediált tiramid jel amplifikációs folyamat megszűnt mosással TBST 4X, 3 perc legyen. Helyi lerakódása biotin-tiramid detektáltuk inkubáció streptavidin (SA) -Alexa647 (Invitrogen), 0,5 ng /ml 2% BSA /0,1% Triton /TBS 40 percig. Befejezését követően inkubálás lemezeket mostuk 4X TBST, szárított és tartott sötétben, amíg azok rajzolódik keresztül microarray scanner. Katalógusa

CEER adatelemzés, metszeteket szkennelt négy PMT erősítés beállítás, hogy hatékonyabbá tegyék a dinamikus hatótávolság. Háttér-korrigált jelintenzitásai átlagoltuk foltok nyomtatott három példányban. Több kritériumokat az adatok szűrésére további elemzések, beleértve a határokat a helyszínen lábnyomok, variációs együtthatója spot ismétlésben, és az általános pad háttér. Minden egyes vizsgálatban egy standard görbét állítottunk elő sorozatban hígított kontroll sejtlizátumokat készítettünk sejtvonalak jól jellemzett szignál transzdukciós fehérjéket. Az adatok alkalmasak voltak egy öt paraméter egyenlet származó függvényében befogási-antitest-koncentráció és a PMT. A standard görbét az egyes markerek illeszkednek a függvényében log jelintenzitás mért relatív fluoreszcencia egység (RFU) vs. log koncentrációja sejtlizátumok és a hivatkozott a szabványos sejtvonalak. Például standard görbe sorozatban hígított sejtlizátumok készített BT474 használtuk, hogy normalizálják a HER2 expresszió és a mértéke foszforiláció minden mintában (ábra S2). Ezért a mintát 1 CU HER2 van RFU értékével megegyező RFU értéke 1 standard referencia BT474 cellában. Mivel a referencia cellák 1~2 × 10 ^{6 HER1 vagy HER2 receptorokat sejtenként körülbelül 10% foszforilezett receptorokkal, 1 CU jelenti az expresszióját 1~2 × 10 6 RTK-k vagy 1~2 × 10 5 foszforilezett RTK-k [6]. A kimutatási határ (LOD) értéket CU elhatározta, hogy kevesebb, mint 1 CU mindkét kifejezés és aktiválása HER2. Egyedi előrejelzések minden hígítás és erősítés átlagoltuk egyetlen, végső becslés. Katalógusa}

csonkolt HER2 alkoholtartalom-katalógusa

A teljes hosszúságú P185-HER2 receptor kimerültek a daganatos szövet lizátumából mágneses-gyöngy függő antitestek specifikus extracelluláris domén (ECD) a HER2 ábra S3. A kapott P185-HER2 szegényített lizátumok, amely tartalmazta dúsított csonkolt HER2 (t-HER2) receptor fehérjék hiányoznak az ECD, használtuk a későbbi mennyiségi meghatározására a T-HER2 expresszió és foszforiláció segítségével a megfelelő CEER vizsgálatokban. A levágta értéke 500 CU-t alkalmazzuk, hogy a p95HER2 pozitivitás per 20 pg szöveti elemezték. A teljes p95HER2 assay kiolvasás volt képest a generált jelek a standard görbéket generáltunk egy kontroll sejt-lizátum a BT474 emlőrák sejtvonal.

Sejtkultúrák és reagensek

CEER assay kontroll sejtvonalak , MDA-MB-468, T47D, HCC827 és BT474-sejtek különböző fokú ErbB-RTK expresszió ATCC-től kaptuk, és a tenyésztést 37 ° C-on, 5% CO _{2 - az MDA-MB-468 (Dulbecco-féle minimális esszenciális közegben (DMEM) + 10% FBS), BT474 (DMEM + 10% FBS), és HCC827 és T47D (RPMI 1640 + 10% FBS-sel, 0,2 E /ml szarvasmarha inzulin). A sejteket megszámláltuk, és kimostuk 1 × PBS-sel, mielőtt növekedési faktorral történő stimulálása. MDA-MB-468-sejteket stimulálunk 100 nM epidermális növekedési faktor (EGF) vagy transzformáló növekedési faktor a (TGFa), T47D sejteket stimulálunk 20 nM heregulin β (HRGβ), vagy 100 ng /ml inzulin-szerű növekedési faktor-1 (IGF1) szérummentes tenyésztő tápközeget, 5 vagy 15 min. A stimulált sejteket megmostuk 1 × PBS-sel, majd lizáitatjuk (lízis puffer: 50 mM Tris, pH = 7,4, 150 mM NaCI, 1% Trition X-100 és 2 mM Na 3VO 4), és jégen tartottuk 30 perc, mielőtt a felülúszót egy következő vizsgálati eljárással vagy tartottuk -80 ° C-on.}

CEER marker meghatározását és a hő térkép clustering

pozitivitás egy adott biomarker definiáltuk nagyobb, mint a harmadik kvartilis egyedi biomarker a betegpopuláció e tanulmány. A betegek rangsorolja a CU értéket a CEER assay egy adott biomarker. Azok a betegek, nagyobb, mint a harmadik kvartilis cutoff tekintettük a nagyobb kockázattal, hogy az emelkedett biomarker szint és ezért potenciálisan aktivált jelátviteli utak. Későbbi túlélési elemzés készült, hogy értékelje a predikatív minősége ezeknek cutoffs. Katalógusa

A biomarker profil a tumor minták képviselte hőtérkép. Minden cella színezett alapján decilis rangot aktiválását, hogy marker. Egyes markerek rangsorol tized által képviselt határozott árnyék, a mutató skála színe. Mind a sorban (beteg) és az oszlop (marker) csoportosítással látható. A teljes kötés algoritmust alkalmaztunk a hierarchikus klaszter (vagy dendrogram) sorrendben csoportosításával a leginkább korrelál megfigyelések segítségével hclust funkció R, hívják a heatmap.2 funkció áll rendelkezésre a gplots könyvtár a statisztikai környezet R: A nyelv és környezetet Statisztikai Computing (http://www.r-project.org/). Alcsoportok markerek által meghatározott csoportosítás, amely lehetővé tette összehasonlítását marker profilok a betegek számára. Katalógusa

CTC és ATC szigetelés katalógusa

CTC értékelés 7,5 ml vért vettünk, 10 ml-es evakuált etilén- tetraecetsav (EDTA) csövekbe. A CellSearch Rendszer (Veridex) használtuk immuno-mágneses CTC izolálására, a korábban leírt protokoll [6] segítségével ferrofluid konjugálva Ab ellen epiteliális sejtadhéziós molekula. ATC értékelés, celluláris tartalmát dúsított 50-100 ml aszcitesz folyadékból centrifugálással, és immun-mágneses tumorsejt izolálás végeztünk hasonló módon. Több szett ATC kezeltek koktélok növekedési faktorok (EGF, HRG, HGF és IGF1) vagy anélkül lapatinib és PHA-665752 inhibitor pályára. Katalógusa

Eredmények és katalógusa

Betegjellemzők

jellemzői 434 GC betegek az 1. táblázat Minden beteg kapott gastrectomiák D2 nyirokcsomó-eltávolítás a 242 (55,8%) kapó betegek subtotalis gastrectomiák. Szerint AJCC 2002 stádium rendszerben 86 betegnél kóros I. stádiumú, 116 stádiumú II 126 volt színpadi III és 106 stádiumú IV (35 áttétes betegek M1) GC. Abban az időben az elemzés, 226 beteg halt meg és 237 betegnél dokumentáltak megismétlődését. 70 betegnél pecsétgyűrű sejtes carcinoma. Az 5 éves teljes és betegségmentes túlélés aránya 52,4%, illetve 50,0% volt. Az elsődleges GC szöveteket beszerezni a műtét idején, és azonnal bepattintható fagyasztani későbbi molekuláris elemzése. Katalógusa

CEER alapuló vizsgálatok azt igazolták heterogenitás HER2 és jelenléte HER2 csonka változata, p95HER2, HER2 (+) gyomor rákok

korábban már beszámoltunk a fejlesztés immun-microarray alapú CEER vizsgálatok [6], [15]. Használtuk a CEER-alapú HER2 vizsgálata A HER2-státus a HER2 (+) és a HER2 (-) a mintákat a mi GC pácienscsoporton, amelyek elkülönülnek alapuló szabványos IHC HercepTest /FISH-analízissel. Az előnye, CEER-alapú esszék az ő magasabb érzékenységi és specificitási képest IHC-alapú esszék [6]. A jelenlegi HER2 (+) definíciókat GC [13], [14], azaz mintát HER2-IHC pontszámot 3+ vagy 2+ és pozitív HER2 katalógusa gén amplifikációs státusza, 50 434 (11,5%) a mintákat a mi GC pácienscsoporton voltak HER2 (+) IHC HercepTest /FISH-analízis (táblázat S1). Ezzel szemben, a szerint a IHC iránymutatások specifikus emlőrákok, csak 78% (39/50) Ezen betegek közül HER2 (+) (táblázat S1), amely jelzi a különbségeket a pontozás kritériumok HER2 pozitivitás között gyomor- és emlőrák. A többség a HER2 (+) GC (36 közül 50 minta (72%)) volt a bél altípus helyett diffúz vagy kevert típusú GC egyetértésben nyilvánosságra hozott jelentések [13], [16], [17].

CEER-alapú HER2 assay bizonyította lényegesen magasabb HER2 expressziós szinteket IHC /FISH HER2 (+) daganatok, mint azok a HER2 (-) daganatok (az átlagos érték 77,9 CU vs. 4,3 CU, p-érték 8.18E-10), az 1A ábrán látható. A CEER alapú HER2 adatok bemutatott CU, standard funkcionális egység, amely vezérli sejtvonal ismert HER2 [6], amely lehetővé teszi az összehasonlítást HER2 egész mintát. Csak 32/50 vagy 64% -a IHC /FISH HER2 (+) GC bizonyította HER2 expressziót CEER és szignifikáns szintet heterogenitás HER2 ezekben a mintákban, mint kiderült, a mennyiségi CEER kijelzőit. Heterogenitás HER2 magyarázhatják az oka csak mérsékelt fokú összhang (87,5%) között a IHC és FISH kiolvasott HER2 a ToGA vizsgálat [12]. Ez az ellentmondás lenne közvetlenül befolyásolja a HER2-célzott gyógyszerek, mint az trastuzumab GC. Továbbá, mivel a nagy érzékenység a CEER vizsgálat azt vették észre, hogy körülbelül 20% -a az IHC /FISH HER2 (-) GC még kifejezett teljes HER2 bár lényegesen kisebb mértékben, mint a HER2 (+) betegcsoportban. Katalógusa

a CEER-alapú p95HER2 assay platform, csonkolt formái HER2 specifikusan kimutatható, továbbá a teljes hosszúságú HER2, a GC-k az első alkalommal. p95HER2 expressziót analizáltuk 31/50 HER2 (+) minták és 27/384 HER2 (-) minta), amely azt bizonyította jelentős teljes hosszúságú HER2 expressziót CEER (1b ábra). Az előfordulási p95HER2 HER2 (+) GC volt ~77% -a (24/31 minták) (táblázat S1). Hasonló a teljes hosszúságú HER2 expresszió, a legtöbb p95HER2 expresszió (79% -a p95HER2 kifejezve HER2 (+)) kimutatható volt a bél típusú GC. p95HER2 expressziót is megfigyelhető volt egy kis százaléka a HER2 (-) GC (37% vagy 10/27 minta), amely azt bizonyította teljes hosszúságú HER2 expressziót. Ugyanakkor az átlagos p95HER2 expresszió HER2 (+) GC mintákat szignifikánsan magasabb volt, mint amit a HER2 (-) GC (5083,6 CU HER2 (+) vs. 437,0 CU HER2 (-), a p-érték = 1.27e-05 ). p95HER2 hozzájárulhat trastuzumab kevésbé reagál a GC daganatok, ahogyan azt a 70-80% HER2 expressziót mutató emlőrákok [18]. Trastuzumab standard kemoterápiás nyújtott átfogó választ csak 47% -ban HER2 (+) GC a ToGA vizsgálat [12] utal fennállását lehet trastuzumab rezisztencia mechanizmusok és a képtelenség, hogy pontosan válassza trastuzumab válaszadók. Annak érdekében, hogy klinikailag érvényesítéséhez p95HER2 kifejezést trastuzumab rezisztencia, ami eddig ellentmondásos, különösen, mert a közelmúltban ellentmondó eredmények a GeparQuattro mellrák tanulmányok [19], szigorú p95HER2 assay finomítás szempontjából klinikailag releváns diagnosztikai vizsgálati eljárás vágási meghatározások és alkalmazhatóság a klinikai szükséges. A validálása p95HER2 kifejezés tervezik egy fázis II neoadjuváns kemoterápia lapatinib klinikai vizsgálatban GC betegek több tanulmány használatát javasoljuk lapatinib p95HER2 (+) rák [20], [21]. Katalógusa

Együttesen adataink egyértelműen meghatározzák a HER2 állapotát GC és hasznosságát bizonyítják CEER alapú HER2 diagnosztikában GC betegmintákban meghatározására azok pontos teljes hosszúságú és csonkított HER2. A fejlesztés egy ilyen diagnosztikai erőteljesen befolyásolja a pontos kiválasztása HER2 (+) GC amelyek reagáló trastuzumab és más HER2 ható szerek. Korábban már beszámoltunk a használata CEER alapú HER2 diagnosztika emlőrákos betegeknél [6], [15], amely azt bizonyította nagyobb érzékenység és specificitás képest IHC-diagnosztika. Katalógusa

A gyomor rák bizonyítani egyidejű aktiválása jelátviteli katalógusa

Mi használtuk CEER vizsgálatban közvetlenül GC mintákat, hogy értékelje a jelenléte az összes és foszforilált (aktivált) formái számos jelátviteli molekulák, amelyekről ismert, célzott gyógyszerek: ezek között számos RTK (HER1, HER2, HER3 cMET, IGF1R) és a PI3K. Reprezentatív képek multiplexált CEER útvonal-tömbök nyolc különböző mintákat ábrán látható a 2A. Ezek a képek egyértelműen bizonyítják a heterogenitás aktivált útvonal aláírások elterjedt a GC. Például mindkét HER1 /HER2 vannak koaktivált mintákban az 1. és 6, mivel csak a HER2 aktiválódik minta 2 Bár HER1, HER2 és cMET vannak magas szinten expresszálódnak. 5. minta bizonyítja aktiválására 5 elemzett RTK beleértve a későbbi PI3K és Shc utak. A következő részben a jelátviteli heterogenitás figyelhető meg a GC pácienscsoporton által meghatározott CEER vizsgálatokban. Katalógusa

A tumorok a 202 beteg (46,5%) nem volt kimutatható aktiválását RTK tesztelt a vizsgálatba. Pathway aktiválás minták a többi a daganatok, ábrázolt utat clustering elemzés (2b ábra), tág tartományban változhat számos néhány GC bizonyító egyidejű aktiválása többszörös RTK-k, mint például a HER2 /HER3, HER1 /2/3, HER1 /3 /cMET vagy HER3 /cMET míg mások foszforilezzük csak egyetlen fehérje. A tumor-tartalom az összes vizsgált minták volt > 70% alapuló szövettani vizsgálatot. Azonban a pan-citokeratin (pan-CK) kifejezés volt kifejezetten változó utal heterogenitás epithelialis tartalmát GC. Ennek alapján a profilalkotás, mi kategóriába a 434 GC minta kohorsz szerint a RTK aktiválás aláírás és a HER2-státust. Katalógusa

HER tengely gyomorrák (2. táblázat & táblázat S1). Katalógusa

Legalább egy receptor tagja a HER tengely aktiváltuk 41% a GC-betegeknél. HER2 foszforiláció volt kimutatható a nem csak a 50% -ában a HER2 (+) GC betegek hanem ~22% HER2 (-) rákok egyetértésben a megfigyelt teljes HER2 expresszió korábban leírtuk. 16/25 HER2 (+) minta, amely azt bizonyította aktivált HER2 is kifejezte p95HER2. Hasonlóképpen, HER3 is foszforilálódik aránya nagyobb HER2 (+) GC (36%), mint a HER2 (-) rák (-24%). Azonban foszforilált HER1 nem volt ilyen előnyben, és ezzel ekvivalens aktivált mindkét GC típusú (26% HER2 (+) és 25% -ban HER2 (-)). Továbbá, a legtöbb a HER tag aktivált GC daganatok (~64%) igazolták, hogy egyidejű aktiválása egyéb RTK-k, azaz a cMET vagy IGF1R. Szövettanilag a többség a HER2 (+), intesztinális típusú GC kifejezett aktivált HER2 (a 22/36 vagy ~61%), majd HER3 (a 13/36 vagy ~36%) átlagosan 36% a bél típusú GC kifejező aktivált HER2 útvonal. Összességében HER2 aktiválás koncentráltabban bél típusa (55/154 vagy 35,7%), mint a diffúz típusú rákok (43/225 vagy 19,1%). Ezzel szemben, az aktivált HER1 ben egyaránt megfigyelhető mind az intesztinális típusú (38/154 vagy 24,7%) és a diffúz típusú (58/225 vagy 25,8%) GC. Az aktivált HER3 is egyenértékűen jelen (29,9%, illetve 21,8%) a két Lauren besorolás altípusa. Katalógusa

Mivel a jelátviteli funkciója a HER kináz-tengely függ aktivált receptor dimerizáció, néztük a különböző párokat HER tag coactivations. Koaktivációja HER2 és HER3 volt előnyös HER2 (+) rák (13/50 vagy 26%) a 13/07 HER2: HER3 aktivált GC nélkül HER1 koaktivációja. Mintegy 54% -át a HER2: HER3 koaktivált HER2 (+) GC koexpresszáljon p95HER2. Másrészt, a HER2 (-) GC nem mutatott előnyben semmilyen konkrét HER-kináz-dimer pár mindhárom lehetséges aktivált dimer pár (HER1: HER2, HER1: HER3 és HER2: HER3) kifejezve ~15% each HER2 (-) mintákban. Hármas aktiválása HER1 /2/3-receptorok volt megfigyelhető 11,1% glükokortikoid egy marginálisan magasabb eloszlást HER2 (-) rák. Katalógusa

cMET aktivált gyomorrák (3. táblázat & táblázat S1). Katalógusa

Hasonló a HER1, cMET foszforilációja egyenértékűen között megoszlatjuk HER2 (+) (22%) és a HER2 (-) (-25%) a GCS. Továbbá, aktivált cMET eloszlás alapján Lauren Szövettípus hasonló volt a bél (48/154 vagy 31,2%) és a diffúz típusú (55/225 vagy 24,4%) GC. Katalógusa

Többsége cMET aktivált GC mintát (~ 71% -os vagy 77/108) kimutatták egyidejű aktiválása HER-kináz receptor tagjai. Az összes mintát egy foszforilált cMET bizonyította cMET
amplifikáció (az adatokat nem mutatjuk be). Megvizsgáltuk az előnyös HER tengely receptorok áthallás a cMET útvonal. A 77 GC minta bizonyító cMET koaktivációja a HER tag 66 mintát (~86%) voltak HER1. Összességében is, cMET volt preferenciálisan koaktivált a HER1 (15,2%), mint a HER2 (10,1%), vagy HER3 (9,7%). Ezek a megfigyelések arra utalnak, hogy a lehető közötti áthallás a cMET és HER1 jelátviteli utak GC. cMET aktiválás soha együtt létezett aktivált HER3 hacsak HER1 és /vagy HER2 foszforilált volt, ugyanabban a mintában. Körülbelül 7% GC betegek bizonyította koaktivációja mindhárom HER tengely receptor tagok cMET. Aktivált cMET co-létezett p95HER2 expresszáló mintákat 5/24 és 1/10 HER2 (+) és a HER2 (-) GC, ill.

IGF1R aktivált gyomor rák (4. táblázat & táblázat S1).

Hasonló a HER3 aktiválás, a jelátviteli hajtja a IGF1 receptor aktív volt nagyobb százalékban a HER2 (+) GC (30%), mint a HER2 (-) GC (24,7%). Továbbá, mivel megfigyelhető foszforilezett HER3, aktivált IGF1R volt egyenértékűen között megoszlatjuk a bél (26%) és diffúz típusú (-24%) A GCS. Ez az eloszlás vezet bennünket, hogy megvizsgáljuk, van-e olyan IGF1R: HER3 koaktivációja a GC betegcsoportban. IGF1R valóban maximálisan koaktivált p-HER3 különösen HER2 (+) GC ahol 22%, illetve 11/50 HER2 (+) GC tanúbizonyságot IGF1R: HER3 koaktivációja. Mindazonáltal, a HER2 (-) GC, százalékában IGF1R koaktivációja a HER3 (In 51/384 mintákat vagy 13,8%) hasonló volt a IGF1R koaktivációja a HER1 (In 53/384 mintákat vagy 13,3%). IGF1R: HER2 koaktivációja (a 45/384 mintát vagy 11,7%), majd szorosan mögötte. Összességében 34/434 GC minták bizonyították koaktivációja minden tagjának a HER-kináz tengely IGF1R amelyből 28 mintából is bemutatta cMET koaktivációja. Azonban cMET ritkán volt co-aktivált IGF1R hiányában a HER-kináz-receptor tag koaktivációja. Továbbá, a c-MET: IGF1R coactivations elsősorban megfigyelhető HER2 (-) A GCS.

GC mintákat hierarchikusan csoportosulnak alapján tized-alapú marker aktiválás profilok (2b ábra). A vizsgálat kimutatta, hogy a cMET: HER1, HER2: HER3 és IGF1R: PI3K aktiválása mintákat szorosan korrelál a cMET: HER1 klaszterek kialakítása elkülönült alrendszerét.

• PLoS One: Expression az AFP és STAT3 részt vesz az arzén-trioxid-indukált apoptózis gátlása és a proliferációs AFP-termelő gyomorkarcinóma Cells
• PLoS One: Funkcionális Promoter -308G > A Variant a tumor nekrózis faktor alfa gén asszociált Kockázat és progresszió a gyomorrák a kínai népesség