Ploche ONE: Zvýšená microRNA-630 expresie v karcinómu žalúdka je spojená s celkovo neuspokojivé Survival

abstraktné

mikroRNA sú nekódujúca RNA, ktoré regulujú rozmanité bunkové procesy v priebehu progresie rakoviny. Medzi rôznymi mikroRNA, Mir-630 sa v poslednej dobe bolo zistené, ktoré majú byť zapojené do mnohých kritických procesov v ľudských malignít. Naším cieľom bolo preskúmať význam a prognostickú hodnotu Mir-630 v ľudskej rakoviny žalúdka. Rakovina žalúdka a priľahlé normálne vzorky od 236 pacientov zo ktorí nedostali neoadjuvantnej chemoterapie boli zhromaždené. Expresie MIR-630 bol skúmaný kvantitatívnej real-time PCR testu a jeho spojenie s celkovým prežitím pacientov bola analyzovaná pomocou štatistickej analýzy. MIR-630 hladina expresie bola významne zvýšená u karcinómu žalúdka v porovnaní s normálnymi susedných vzoriek. Je tiež dokázané, že mier-630 výraz bol, že sú spojené s rakovinou žalúdka inváziou, lymfatických uzlín, vzdialené metastázy a TNM fáze. Okrem toho, analýza prežitia ukázali, že zvýšená expresia MIR-630 je spojená so zlou celkovým prežitím pacientov. Analýza s mnohými premennými prežitie tiež ukázal, že mier-630 bol nezávislý prognostický ukazovateľ po očistení o známych prognostických faktorov. Táto štúdia preukázala zvýšená expresia Mir-630 a jeho spojenie s progresiou nádoru v ľudskej rakoviny žalúdka. Je to tiež prvý dôkaz, že mier-630 expresie bol nezávislý prognostický faktor u pacientov s karcinómom žalúdka, ktorý by mohol byť potenciálnym cenným biomarker pre rakovinu žalúdka

Citácia :. Chu D, Zhao Z, Li Y, Ak J, Zheng J, Wang W, et al. (2014) Zvýšený microRNA-630 expresie v karcinómu žalúdka je spojená s celkovo neuspokojivé prežitie. PLoS ONE 9 (3): e90526. doi: 10,1371 /journal.pone.0090526

Editor: Alfons Navarro, University of Barcelona, ​​Španielsko |

Prijaté: 14. septembra 2013; Prijaté: 03.2.2014; Publikované: 12.03.2014

Copyright: © 2014 Chu et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Toto dielo bol podporený dotácií z Národného Natural Science Foundation Číny (No. 81201927, 81272204 a 31270812) a China Postdoctoral Science Foundation (č 2012M521862). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka je jedným z najčastejších nádorových ochorení na celom svete [1]. Prognóza karcinómu žalúdka je nízka a pacienti sú zvyčajne diagnostikovaná v pomerne pokročilom štádiu vo väčšine krajín [2], [3]. To znamená, že celkový 5-ročné prežitie je asi 40%, a to u pacientov s vzdialených metastáz, je menšia ako 5% [4] - [8]. Približne 700 tisíc pacientov s rakovinou žalúdka zomrie ročne, čo je druhou najčastejšou príčinou úmrtí na nádorové ochorenie na celom svete. Dáta ukázali, že surový miera úmrtnosti na rakovinu žalúdka bol 25,2 za 100000 (32,8 na 100.000 u mužov a 17,0 na 100000 u žien) [1]. Ale existuje ešte pozoruhodné geografické rozdiely vo výskyte rakoviny žalúdka u východných krajinách, ako je Čína a Japonsko majú najvyšší výskyt rakoviny žalúdka než západných krajín [9], [10]. V Číne, rakovina žalúdka je druhou najčastejšie diagnostikovanou rakovinou a treťou najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu, s odhadom 464 439 nových prípadov a 352 315 úmrtí na rakovinu v roku 2008. Celková odhadovaná miera výskytu upravenú k veku v roku 2008 bol 29,9 na 100.000 ľudia v Číne [9]. Takže, rakovina žalúdka zostáva významným celosvetovým problémom aj napriek klesajúcej výskyt u nielen západných krajinách, ale aj v Číne.

mikroRNA (miRNA) sú skupinou vysoko konzervovaných, jednovláknové, malých nekódovacích molekúl RNA, ktoré sú známy ako endogénne regulátory post-transkripčný génovej expresie reguluje expresiu cez translačný represie a messenger RNA štiepenie [11]. Môžu inhibovať génovú expresiu na posttranskripční úrovni väzbou na netranslatované oblasti 3 'cieľových mRNA môže viesť k degradácii mRNA alebo inhibíciu translácie, v závislosti na stupni komplementárneho párovania báz [12], [13]. To bolo všeobecne uznáva, že miRNA zohrávajú kľúčovú úlohu v rôznych biologických procesov, vrátane vývoja, bunkovej proliferácie, diferenciácie, apoptózy a metabolizmus [14]. Nahromadené dôkaz tiež naznačuje, že miRNA podieľať sa na nádorové angiogenézy, invázie a metastáz ľudského malígneho ochorenia [15]. Aberantne expresie miRNA bolo spojené s onkogenézy a niektoré miRNA pôsobiť ako nádorové supresormi, zatiaľ čo iné, ako onkogény, v závislosti na ich cieľov, ktoré môžu poskytnúť pohľad na diagnózu a prognózu ľudských nádorových ochorení [16]. V poslednej dobe sa dôkazy ukázali, že expresia miRNA je deregulovaný v rôznych typoch ľudských nádorových ochorení, ako je rakovina žalúdka, rakovina prsníka, kolorektálny rakoviny, rakoviny prostaty, rakoviny pľúc, rakoviny pankreasu a chronickou lymfatickou leukémiou [17] - [19]. V ľudskom karcinómu žalúdka, boli identifikované viac miRNA s aberantne expresiou, napríklad, MIR-21, MIR-22, MIR-23, MIR-127, MIR-148, mier-202 a mier-433, ktorý hrá onkogénne alebo supresívnu role [20] - [25]. Tieto výsledky ukazujú, že miRNA môže hrať rôznorodé a zásadné úlohy v ľudských nádorových ochorení vrátane rakoviny žalúdka. Avšak výraz profil miRNA je vysoko tkanivo a typ rakoviny špecifické a miRNA špecifická, čo demonštruje funkčné a klinický význam konkrétneho miRNA môže poskytnúť klinicky významné pohľady do funkcie miRNA a efektívneho liečbu rakoviny [12], [15]. Pokiaľ je nám známe, doteraz, klinická a prognostický význam Mir-630 expresiu v karcinómu žalúdka ešte nebola hlásená.

V tejto štúdii sme skúmali hladinu expresie Mir-630 v klinickej žalúdočných vzorky a priľahlé normálneho tkaniva, rovnako ako analyzovať jeho vzťah s celkovým prežitím pacientov.

materiály a metódy

Pacienti a vzorky

Táto štúdia bola schválená touto Etická komisia štvrtého Vojenskej lekárskej univerzity. Všetci členovia sa podieľajú poskytli písomný informovaný súhlas. Čerstvé klinické vzorky rakovinou žalúdka a priľahlé normálneho tkaniva boli odobraté zo 236 pacientov, ktorí podstúpili chirurgický zákrok v období od januára 2007 do decembra 2008 v Xijing nemocnici choroby zažívacieho ústrojenstva, Fourth Military Medical University. Žiadny z týchto pacientov dostalo chemoterapii pred operáciou. Okrem toho, normálne vzorky tkaniva boli odobraté z 18 pacientov, ktorí podstúpili chirurgický zákrok na iné účely než malignity ako normálnych kontrolných vzoriek dôvodov. Histomorphology všetkých vzoriek tkaniva boli potvrdené Ústavu patológie, štvrté Vojenskej lekárskej univerzity. Vzorky boli umiestnené bezprostredne do tekutého dusíka _{2 po chirurgickej resekcii po dobu 10 minút, potom sa na -70 ° C ultra-mrazničky pre izoláciu mRNA. Pacientov klinickej informácie, ako je vek, pohlavie, stav diferenciácie a TNM štádiu, sa zhromaždia a uložené v databáze. Kompletný follow-up bol k dispozícii po dobu najmenej 5 rokov. Celková doba prežitia je definovaná ako čas, ktorý uplynie od operácie do úmrtia pacientov s rakovinou žalúdka. Nadväzujúce informácie o všetkých účastníkov bola aktualizovaná každý tri mesiace telefonicky návštevu a dotazníkových písmen. Smrť účastníkov bolo zistené správ z rodiny a overené preskúmanie verejných záznamov.}

Kvantitatívne PCR v reálnom čase

Celková RNA bola očistená od všetkých rakovinou žalúdka na 236 a zodpovedajúce priľahlé normálne vzorky výrobcom za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Iba celkovej RNA vzorky s OD A260 /A280 pomer blíži hodnote 2,0, čo naznačuje, že RNA je čistá, boli následne analyzované. Vnútorná kontrola špecifické cDNA Mir-630 a RNU44 boli syntetizované z celkovej RNA za použitia génovo špecifických primerov podľa testov protokolu TaqMan microRNA (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Produkty reverznej transkripcie boli potom amplifikovanej a detegované pomocou PCR v reálnom čase za použitia TaqMan Assay microRNA (Applied Biosystems), špecifická pre HSA-MIR-630. Každá vzorka sa skúmal v troch opakovaniach a surové dáta bola prezentovaná ako relatívna kvantifikácii expresie MIR-630 vyhodnotené metódou porovnávací prah cyklu (CT), normalizované vzhľadom k RNU44. Znamená normalizovanú MIR-630 expresie ± štandardná odchýlka (SD) bola vypočítaná z trojnásobnej analýzy. Real-time PCR bola vykonaná s použitím systému ABI 7500 (Applied Biosystems) a tabuľku 2 ^{-ΔΔCt analýza bola vykonaná za použitia SDS software 2.2.2 (Applied Biosystems).}

Štatistická analýza

združenia medzi MIR-630 expresie a klinicko-charakteristiky boli analyzované pomocou Mann-Whitneyho test a Kruskal-Wallis test, podľa potreby. Krivky prežitia boli odhadnuté použitím metódy Kaplan-Meier a rozdiely v rozdelení prežitie boli hodnotené na log-rank testu. Cox proporcionálny nebezpečenstvo modelovanie faktorov, ktoré by mohli súvisieť s prežitím bola vykonaná s cieľom zistiť, ktoré by mohli mať faktory významný vplyv na prežitie a kontroly z hľadiska veku, pohlavia a stav diferenciácie. Rozdiely s P
hodnote 0,05 alebo menej boli považované za štatisticky významné.

Výsledky

MIR-630 expresia detekovaná u karcinómu žalúdka

real-time PCR, 236 prípadov rakoviny žalúdka, zodpovedajúce priľahlé normálne vzorky a 18 prípadov normálnych kontrolných vzoriek boli skúmané. Bolo zistené, relatívna expresia MIR-630 normalizované na RNU44 v karcinómu žalúdka, aby sa 8,51 ± 1,63 (priemer ± SD), zatiaľ čo v zodpovedajúcej priľahlej normálne bol 3,25 ± 0,63. Štatistické výsledky ukázali, že expresia Mir-630 v karcinómu žalúdka bola významne vyššia ako v susedných a normálne vzorky kontroly ( P Hotel &0,05). Tieto výsledky ukazujú, že mier-630 by mohol hrať úlohu v onkogénne rakoviny žalúdka. S cieľom uľahčiť ďalšiu analýzu o pridružení medzi MIR-630 prejavu a klinických príznakov, ručne definované rakovinu žalúdka s Mir-630 vyjadrenia nižšie ako 3,88 (stredná hodnota + výraz SD Mir-630 v priľahlých vzoriek) tak nízke, MIR-630 expresie skupina while vzorky s Mir-630 expresie nie je nižšia ako 3,88 boli definované ako vysoko MIR-630 výraz skupinu. Tak, medzi 236 prípadov rakoviny žalúdka, 98 prípadov bolo priradené nízka expresia skupiny, zatiaľ čo 138 prípadov bolo priradené k vysokej expresii skupiny.

Vzťah MIR-630 na klinicko Charakteristika rakovina žalúdka

ako sa naše vyšetrovanie preukázalo, že mier-630 expresia bola zvýšená u karcinómu žalúdka, čo ukazuje, že mier-630 môže pôsobiť ako onkogénne úlohu v karcinómu žalúdka. Ďalej sme skúmali súvislosť s Mir-630 expresie s klinicko-charakteristikami pacientov preskúmať jej potenciálnu úlohu v progresii rakoviny žalúdka. Štatistické výsledky analýzy ukázali, v tabuľke 1, sa ukázalo, že zvýšená expresia MIR-630 bolo spojené s pokročilou rakovinou žalúdka invázie od vysoko MIR-630 výraz bol častejšie, ktoré majú byť detekované v T3 a T4 tumorov ( P = 0,007
). Pokiaľ ide o metastázy tumorov bol považovaný, zvýšené MIR-630 bola expresie spojené s pozitívne lymfatické uzliny a vzdialené metastázy pre vysokú expresiu MIR-630 bolo častejšie ktorý má byť identifikovaná v nádoroch s pozitívnym lymfatických uzlín ( P Hotel < 0,001), alebo vzdialené metastázy ( P
= 0,002). Okrem toho, keď sa meria klinické príznaky pacientov podľa TNM predstavovať systém, sme zistili, že mier-630 expresia bola významne spojená s TNM štádiu rakoviny žalúdka, pretože vysoko MIR-630 expresia bola väčšia pravdepodobnosť, že budú detekované v nádoroch s pokročilým TNM stupňami ( P Hotel <0,001). Tieto výsledky naznačujú, že mier-630 by mohol hrať úlohu v onkogénne progresii rakoviny žalúdka. Avšak, nebol nájdený pozitívny prídel MIR-630, ktoré majú byť spojené s pohlavím pacientov ( P
= 0,788), vek ( P
= 0,471), stav diferenciácie ( P
= 0,890), tumor miesto ( P
= 0,835), alebo Lauren klasifikácia ( P
= 0,160).

Vzťah MIR-630 k celkovej prežitie pacientov 's rakovinou žalúdka

Počas celého sledovaného obdobia, 130 zo 236 pacientov (55,1%) s karcinómom žalúdka zomrel a stredné celkové prežitie všetkých zahrnutých pacientov bol 48 mesiacov. Kaplan-Meierovej analýzy bola použitá preskúmať prognostickú hodnotu MIR-630 vyjadrenia k celkové prežívanie pacientov s rakovinou žalúdka. Výsledky preukázali, že u pacientov s rakovinou žalúdka vysokej MIR-630 expresie tendenciu mať horšie celkové prežívanie (log rank testu: P Hotel &0,001, obrázok 1). Stredná doba prežitia u pacientov s nízkou expresiou Mir-630 nie je možné určiť, pretože viac ako 50% pacientov v priebehu sledovaného obdobia prežil. Kým pooperačné stredná doba prežitia pacientov s vysokou expresiu Mir-630 bolo 34 mesiacov (95% CI: 28,2-39,8). Keď neupravené pomer rizika (HR) bola považovaná za nízku MIR-630 expresiu ako odkaz (1,00), pacienti s rakovinou žalúdka vysokej MIR-630 prejave mal 2,28 násobne vyššie riziko úmrtia (95% CI: 1.57-3.32; P Hotel <0,001). Čo sa týka boli považované klinicko-patologické rysy, lymfatických uzlín (log rank testu: P
= 0,002), vzdialených metastáz (log rank testu: P Hotel <0,001) a TNM štádium (log rank test: P Hotel < boli tiež ukázala byť spájaný s celkovým prežitím, pretože pacienti s rakovinou žalúdka lymfatických uzlín, vzdialených metastáz alebo pokročilom stupni tendenciu mať horšie celkové prežívanie a vyššie riziko úmrtia 0,001). Avšak, pohlavie (log rank testu: P
= 0,168), vek (log rank testu: P
= 0,572) Stav diferenciácie (log rank testu: P
= 0,156), tumor webu (log rank testu: P
= 0,632) alebo klasifikácie Laurena (log rank testu: P
= 0,573) nemal prognostickú hodnotu na celkové prežívanie pacientov s karcinómom žalúdka .

ako MIR-630 expresie bolo preukázané, že je spájaný s celkovým prežitím pacientov v jednorozmerné analýze prežitie, sme ďalej skúmali, či MIR-630 by mohol slúžiť ako nezávislý prognostický marker u pacientov s karcinómom žalúdka. Vzhľadom k tomu, lymfatických uzlín a vzdialené metastázy informácia bola zahrnutá v údajoch TNM štádiu, sme vykonali Coxovho modelu proporcionálneho rizika, ktorá je upravená pohlavia, veku a TNM štádiu. Výsledky ukázali, že upravená HR vysokej MIR-630 expresie skupine bol 3,51 (95% CI: 1,83-6,72; P Hotel <0,001). Tieto výsledky ukázali, že mier-630 bol nezávislý prognostický faktor celkového prežitia u pacientov s rakovinou žalúdka. Tak, zvýšená expresia MIR-630 by mohla byť indikátorom zlé celkového prežitia bez ohľadu na vek, pohlavie alebo TNM fáze (tabuľka 2).

Diskusia

Podľa posledných štúdií, viac ako 1.900 boli identifikované ľudské miRNA, ktorá sa odhaduje na viac ako 60% reguláciu génov u cicavcov [26]. Vzhľadom na ich veľký význam pri regulácii génovej expresie, to bolo široko uznávané, že miRNA sú zapojené do rôznych bunkových funkcií, vrátane proliferácie, apoptózy a diferenciácie, a tým, boli vykonané v rôznych fyziologických a patologických procesov od vývoja rakoviny [27 ] - [29]. Predchádzajúci prieskum opýtaných expresné profily miRNA vo fáze I, non-malobunkovým karcinómom pľúc identifikovať vzory, ktoré by mohli predpovedať recidívu po chirurgickej resekcii zistil, že mir-630 bol jedným z najčastejšie miRNA medzi 1000 klasifikátormi identifikovaných [30]. Ďalšie štúdie na nemalobunkový karcinóm pľúc zistené, že mier-630 by mohla upravovať vyvolané cisplatinou odumretie nádorových buniek, čo ukazuje, mier-630 bol potenciálny modulátor reakcie cisplatiny u nemalobunkového karcinómu pľúc [31]. MIR-630 bolo tiež zistené, že je up-regulovaná v oblasti hlavy a krku karcinómu dlaždicových buniek po liečbe cisplatinou a môžu modulovať expresiu proteínu, ATG5 ATG6 /BECN1, ATG10, ATG12, ATG16L1 a UVRAG [32], [33]. Nedávna štúdia preukázala, že zvýšenie expresie Mir-630 v pankreatických nádorových bunkách by mohlo vyvolať apoptózu cielenie IGF-1R [34]. Vzhľadom k tomu, jednotlivé miRNA v rôznych typov rakoviny môže mať veľké množstvo rôznych cieľov génov, tak, majú rôzne funkcie v rôznych nádorových ochorení. Tak, funkčné objav jednotlivých miRNA môže umožniť hlbší pohľad do regulácie génovej expresie a zložitosti progresie rakoviny.

V tejto štúdii sme skúmali MIR-630 expresiu mRNA pomocou real-time PCR testu v 236 prípadov rakoviny žalúdka od pacientov, ktorí doteraz nedostávali neoadjuvantnej chemoterapii. Založený výpočet relatívnej expresie sme analyzovali asociáciu MIR-630 s klinicko-charakteristikami, ako aj prognózu chorých. Výsledky ukázali, že mier-630 expresia bola zvýšená u karcinómu žalúdka v porovnaní s v priľahlých a bežných kontrolných tkanív pre vysokú expresiu MIR-630 sa s väčšou pravdepodobnosťou byť detekované vo vzorkách karcinómu žalúdka, ktoré uvádzajú jeho možnú účasť na karcinogenéze. Je tiež zistilo, že mier-630 bola expresia úzko súvisí s rakovinou žalúdka inváziu, lymfatických uzlín, vzdialené metastázy a TNM fáza pre vysokú expresiu MIR-630 bolo častejšie ktorý má byť identifikovaná v nádoroch s hlbokou inváziou, lymfatických uzlín, vzdialené metastázy alebo pokročilé štádium TNM, čo naznačuje možnú účasť Mir-630 na žalúdočné invázie rakoviny a metastáz. Spolu s vyššie uvedených poznatkov bolo teda navrhnuté, že mier-630 môže hrať dôležitú úlohu v žalúdočnej karcinogenéze rakoviny a progresii.

Keďže sa zistilo, MIR-630 výraz, ktorý má byť spájaný s žalúdočnej inváziou rakoviny a metastáz, vzhľadom k invázia nádoru do okolitých tkanív a metastáz do vzdialených tkanív sú rozhodujúcimi faktormi, ktoré ovplyvňujú prognózu chorých, MIR-630 by mohla byť potenciálnym prognostickým markerom pre pacientov s rakovinou žalúdka. S cieľom preveriť prognostickú úlohu Mir-630 na rakovinu žalúdka, sme vykonali Kaplan-Meierovej analýzy celkového prežívania. Výsledky ukázali, že u pacientov s rakovinou žalúdka vysokej MIR-630 expresie majú tendenciu mať horšie celkové prežívanie v porovnaní s pacientmi s nádorom nízkou Mir-630 expresie, ktoré naznačujú, že mier-630 expresie bol prognostický marker u pacientov s karcinómom žalúdka. Ďalej hodnotiť prognostickú hodnotu Mir-630 v rakoviny žalúdka, sme vykonali Coxovho modelu proporcionálneho rizika, ktorá bola upravená na pohlaví, veku a TNM štádiu pacientov. Výsledky ukázali, že zvýšená expresia MIR-630 bol marker zlého celkového prežitia nezávisle na upravených faktorov, tak, mier-630 by sa mohli využiť na stanovenie prognózy pacientov s von vzhľadom k TNM štádiu. Tieto výsledky ukazujú, že mier-630 by mohla predstavovať molekulárnej prognostický marker prísadu k TNM štádiu u pacientov s rakovinou žalúdka, identifikáciu vysoko rizikových jedincov, ktorí majú väčšiu pravdepodobnosť, že k recidíve ochorenia v klinickej praxi, teda vhodnými kandidátmi pre príjem viac agresívne liečbu. Tieto výsledky boli v súlade s vyšetrovanie zamerané na non-malobunkovým karcinómom pľúc, čo naznačuje, konzistencia MIR-630 funkcie u týchto typov nádoru. To znamená, že pozitívne väzba medzi MIR-630 nadmernou expresiou a zlou prognózou nemusí byť použité iba pre identifikáciu pacientov s rakovinou žalúdka s vyšším rizikom skorého relapsu ochorenia, ale aj pre poskytovanie cenné kľúče k pochopeniu možného mechanizmu žalúdka invázie rakoviny a metastáz.

na záver sme preukázali, že mier-630 expresia bola zvýšená pri rakovine žalúdka a spojená s progresiou nádoru. Táto štúdia tiež ukázala, prvýkrát, že mier-630 bola expresia nezávislý prognostický faktor u pacientov s karcinómom žalúdka. Z tohto dôvodu je možné, že mier-630, môže zohrávať dôležitú úlohu v invazívnosti a metastázy karcinómu žalúdka. Je tiež možné, že mier-630 slúži ako prognostický marker v klinickej praxi, a dokonca aj inhibícia pre mier-630 za použitia špecifických inhibítorov môže stať novú liečebnú metódu pre liečbu rakoviny žalúdka.

• Ploche on: MAP3k1 SNP Predpovedá prežívanie rakoviny žalúdka v čínskej populácie
• Ploche ONE: klinicko Význam a prognostický význam laktátdehydrogenázy výrazu v žalúdočnej pacientov s rakovinou