PLoS ONE: Erhöhte MicroRNA-630 Expression in Magenkrebs ist im Zusammenhang mit schlechten Gesamt Survival

Abstrakt

MicroRNAs sind nicht-kodierenden RNAs, die mehrere zelluläre Prozesse während der Tumorprogression zu regulieren. Unter den verschiedenen microRNAs hat MiR-630 vor kurzem identifiziert worden in vielen kritischen Prozessen in menschlichen Tumoren beteiligt zu sein. Wir wollten die Bedeutung und prognostischen Wert von miR-630 in der menschlichen Magenkrebs zu untersuchen. Magenkrebs und angrenzenden normalen Proben von 236 Patienten aus, die neoadjuvante Chemotherapie erhalten hatten, wurden gesammelt. Die Expression von miR-630 wurde durch quantitative Echtzeit-PCR-Assay und seine Verbindung mit der Gesamtüberlebenszeit von Patienten untersucht wurde durch eine statistische Analyse analysiert. MiR-630-Expressionsniveau wurde bei Magenkrebs im Vergleich zu benachbarten normalen Proben signifikant erhöht. Es ist auch bewiesen, dass miR-630 Expression mit Magenkrebs Invasion, Lymphknoten-Metastasen, Fernmetastasen und TNM-Stadium assoziiert werden sollte. Darüber hinaus erwies sich die Überlebensanalyse, dass erhöhte miR-630 Expression mit einer schlechten Überlebenszeit von Patienten in Verbindung gebracht wurde. Multivariaten Analyse erwies sich auch, dass miR-630 ein unabhängiger prognostischer Marker nach bereinigt um bekannte prognostische Faktoren war. Die vorliegende Studie erwies sich die Überexpression von miR-630 und seine Verbindung mit der Tumorprogression in menschlichen Magenkrebs. Es stellte auch den ersten Beweis dafür, dass miR-630 Expression ein unabhängiger prognostischer Faktor für Patienten mit Magenkrebs war, was ein potentieller wertvolle Biomarker für Magenkrebs sein könnte

Citation:. Chu D, Zhao Z, Li Y, Li J, Zheng J, Wang W, et al. (2014) Erhöhte MicroRNA-630 Expression in Magenkrebs ist im Zusammenhang mit schlechten Gesamtüberlebens. PLoS ONE 9 (3): e90526. doi: 10.1371 /journal.pone.0090526

Editor: Alfons Navarro, Universität Barcelona, ​​Spanien

Empfangen: 14. September 2013; Akzeptiert: 3. Februar 2014; Veröffentlicht: 12. März 2014

Copyright: © 2014 Chu et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse von der National Natural Science Foundation of China (Nr 81201927, 81272204 und 31270812) und China Postdoctoral Science Foundation (Nr 2012M521862) unterstützt. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Magenkrebs ist eine der häufigsten bösartigen Erkrankungen weltweit [1]. Die Prognose von Magenkrebs ist schlecht, und die Patienten werden in der Regel bei einer ziemlich fortgeschrittenen Stadium in den meisten Ländern [2] bestimmt, [3]. Somit ist die gesamte 5-Jahres-Überlebensrate etwa 40%, und der der Patienten mit Fernmetastasen ist weniger als 5% [4] - [8]. Ungefähr 700.000 Patienten mit Magenkrebs sterben jährlich, es die zweithäufigste Ursache von Krebs-Todesfälle weltweit zu machen. Die Daten zeigten, dass die rohe Sterberate von Magenkrebs betrug 25,2 pro 100.000 (32,8 pro 100.000 bei Männern und 17,0 pro 100.000 bei Frauen) [1]. Aber es gibt bemerkenswerte geografische Unterschiede in der Häufigkeit von Magenkrebs für den östlichen Ländern wie China und Japan haben höchsten Raten von Magenkrebs als westlichen Ländern [9], [10]. In China ist Magenkrebs die am zweithäufigsten diagnostizierte Krebserkrankung und die dritthäufigste Ursache für Krebstod mit schätzungsweise 464 439 neue Fälle und 352 315 Todesfälle durch Krebs im Jahr 2008. Die geschätzten Gesamtaltersbereinigte Inzidenzrate im Jahr 2008 betrug 29,9 pro 100.000 Menschen in China [9]. So bleibt Magenkrebs ein erhebliches Problem weltweit trotz einer rückläufigen Inzidenz nicht nur in den westlichen Ländern, sondern auch China.

MicroRNAs (miRNAs) sind eine Klasse von hochkonservierten, einzelsträngige, kleine nicht-kodierende RNA-Moleküle, die sind bekannt als endogene Regulatoren der posttranskriptionales Regulation der Genexpression Ausdruck durch translationale Repression und Boten-RNA-Spaltung [11]. Sie können durch die Genexpression auf der posttranskriptionellen Ebene hemmen zum 3'-untranslatierten Region der Ziel-mRNAs Bindung kann in mRNA Degradation oder Translationshemmung führen, abhängig vom Grad der komplementären Basenpaarung [12], [13]. Es wurde allgemein akzeptiert, dass miRNAs eine entscheidende Rolle in verschiedenen biologischen Prozessen, einschließlich der Entwicklung, die Zellproliferation, Differenzierung, Apoptose und Metabolismus [14]. Kumulierte Es gibt auch Hinweise, dass miRNAs in der Tumor-Angiogenese, Invasion und Metastasierung von menschlichen malignen Erkrankungen teilnehmen [15]. Aberrant miRNA Expression wurde mit der Onkogenese verbunden sind, und einige miRNAs dienen als Tumorsuppressoren, während andere, wie Onkogene, auf ihre Ziele abhängig, die einen Einblick in die Diagnose und Prognose von Humankrebserkrankungen bereitstellen kann [16]. Vor kurzem haben Beweise, dass die Expression von miRNAs gezeigt in verschiedenen Arten von menschlichen Malignitäten wie Magenkrebs dereguliert ist, Brustkrebs, Darmkrebs, Prostatakrebs, Lungenkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs und chronische lymphatische Leukämie [17] - [19]. In der menschlichen Magenkrebs, haben mehrere miRNAs mit einer abweichenden Expression identifiziert worden ist, zum Beispiel, miR-21, miR-22, miR-23, miR-127, miR-148, miR-202 und miR-433, die gespielt onkogenen oder suppressive Rolle [20] - [25]. Diese Ergebnisse zeigten, dass miRNAs können vielfältig und eine entscheidende Rolle bei menschlichen Tumoren einschließlich Magenkrebs spielen. Allerdings ist das Expressionsprofil von miRNAs hochGewebe und Krebstyp spezifisch und miRNA spezifisch, damit die funktionelle und klinische Bedeutung einer bestimmten miRNA demonstrieren kann klinisch relevante Einblicke in miRNA Funktion und wirksame Krebsbehandlung bereitzustellen [12], [15]. Unseres Wissens nach, bis jetzt, die klinischen und prognostische Bedeutung von miR-630 Expression in Magenkrebs wurde bisher noch nicht gemeldet.

In der vorliegenden Studie haben wir die Expression von miR-630 in der klinischen Magen untersucht Proben und angrenzenden normalen Gewebe, sowie seine Verbindung mit Gesamtüberleben von Patienten zu analysieren.

Materialien und Methoden

Patienten und Proben

die vorliegende Studie wurde von der genehmigt Ethik-Komitee der Vierten Military Medical University. Alle Mitglieder beteiligt haben eine schriftliche Einverständniserklärung zur Verfügung gestellt. Frische klinische Magenkrebs Proben und angrenzenden normalen Gewebe wurden von 236 Patienten gesammelt, die eine Operation zwischen Januar 2007 und Dezember 2008 in Xijing Hospital of Digestive Diseases, Vierte Military Medical University unterzog. Keiner dieser Patienten hatte eine Chemotherapie vor der Operation erhalten. Zusätzlich wurden normale Gewebeproben von 18 Patienten genommen, die aus Gründen operiert außer Malignität als normale Kontrollproben. Die Histomorphologie aller Gewebeproben wurden von der Abteilung für Pathologie, Vierte Military Medical University bestätigt. Die Proben wurden für 10 min sofort in flüssigem N _{2 nach der chirurgischen Resektion setzen, dann in einen -70 ° C Ultratiefkühltruhe für die mRNA-Isolierung. Patienten klinischen Daten wie Alter, Geschlecht, Differenzierungsstatus und TNM Stufe wurde in einer Datenbank gesammelt und gespeichert. Komplette Follow-up wurde für mindestens 5 Jahren zur Verfügung gestellt. Das Gesamtüberleben wird als die Zeit von der Operation bis zum Tod von Patienten mit Magenkrebs verstrichene definiert. Follow-up-Informationen aller Teilnehmer wurde alle drei Monate per Telefon Besuch und Fragebogen Buchstaben aktualisiert. Der Tod der Teilnehmer wurde durch die Berichterstattung aus der Familie ermittelt und durch Überprüfung der öffentlichen Aufzeichnungen überprüft.}

Quantitative Real-time PCR

Gesamt-RNA wurde von allen 236 Magenkrebs gereinigt und angrenzenden normalen Proben passend vom Hersteller mit Trizolreagenz (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Nur die Gesamt-RNA-Proben mit OD-A260 /A280-Verhältnis nahe Wert von 2,0, was darauf hindeutet, dass die RNA rein ist, wurden anschließend analysiert. Die miR-630 und RNU44 internen Kontroll spezifische cDNA wurden aus Gesamt-RNA unter Verwendung von Gen-spezifischen Primer synthetisiert nach dem TaqMan MicroRNA-Assays Protokoll (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Die reverse Transkription Produkte wurden dann verstärkt und detektiert durch Echtzeit-PCR unter Verwendung von TaqMan MicroRNA Assays (Applied Biosystems) spezifisch für hsa-miR-630. Jede Probe wurde dreifach geprüft und die Rohdaten wurden als relative Quantifizierung von miR-630 Expression durch die Vergleichszyklusschwellenwert (CT) -Verfahren, normiert auf RNU44 ausgewertet dargestellt. Die mittlere normalisierte miR-630 Expression ± Standardabweichung (SD) aus dreifachen Analyse berechnet wurde. Echtzeit-PCR wurde mit einem ABI 7500-System (Applied Biosystems) und Vergleichsdurchgeführt unter Verwendung von 2 ^{-ΔΔCt Analyse wurde SDS 2.2.2 Software (Applied Biosystems) verwendet wird.}

Statistische Analyse

Verbände zwischen miR-630 Expression und klinisch-pathologischen Eigenschaften wurden von Mann-Whitney-Test und Kruskal-Wallis-Test, entsprechend analysiert. Überlebenskurven wurden unter Verwendung der Kaplan-Meier-Methode und Unterschiede in der Überlebensverteilungen geschätzt wurden von der Log-Rank-Test ausgewertet. Cox Proportional-Hazards-Modellierung von Faktoren, die möglicherweise auf das Überleben im Zusammenhang wurde durchgeführt, um zu ermitteln, welche Faktoren könnten einen erheblichen Einfluss auf das Überleben haben und Controlling für Alter, Geschlecht und Differenzierungsstatus. Unterschiede mit einem P
Wert von 0,05 oder weniger wurden als statistisch signifikant.

Ergebnisse

• PLoS ONE: Ein MAP3K1 SNP Predicts Überleben von Magenkrebs in einem chinesischen Population
• PLoS ONE: Clinicopathological Bedeutung und prognostischen Wert von Lactatdehydrogenase A Expression in Magenkrebs Patients