Plos ONE: Povečana MicroRNA-630 Expression želodčnega raka je povezana s splošno slabo preživetje

Povzetek

MicroRNAs so nekodirano RNA, ki urejajo različne celične procese med napredovanje raka. Med različnimi microRNAs, MIR-630 je pred kratkim ugotovil, da se vpleteni v mnogih kritičnih procesov v človeških malignih bolezni. Naš namen je raziskati pomen in napovedno vrednost miR-630 pri raku človeške želodčne. Rak želodca in sosednjih običajni primerki iz 236 bolnikov iz, ki niso prejeli novi dopolnilni kemoterapiji so bili zbrani. Izraz miR-630 je bil raziskan s kvantitativno PCR v realnem času testa in njegova zveza s splošno preživetje bolnikov je bila analizirana z statistično analizo. MIR-630 nivo izražanja je bistveno povišano raka želodca v primerjavi s sosednjimi normalnih osebkov. Prav tako je dokazano, da je bil miR-630 izraz, ki je povezana z želodčno invazijo raka, bezgavk metastaze, oddaljenih metastaz in stopnji TNM. Poleg tega je analiza preživetja izkazalo, da je bila povišana miR-630 ekspresijo povezana s slabim splošnim preživetja bolnikov. Multivariatna analiza preživetja tako dokazal, da je bil miR-630 neodvisni napovedni dvojno podajo po prilagojeni za znane prognostičnih dejavnikov. Sedanja študija izkazal prevelike izraz miR-630 in njegove povezave z napredovanja tumorja pri raku človeške želodčne. tudi če je prvi dokaz, da je bil miR-630 izraz neodvisen napovedni dejavnik pri bolnikih z rakom želodca, ki bi lahko potencialno dragocen biološki marker raka želodca

Navedba. Chu D, Zhao Z, Li Y, li J Zheng J Wang W, et al. (2014) Povečana MicroRNA-630 Expression želodčnega raka je povezana s splošno slabo preživetje. PLoS ONE 9 (3): e90526. doi: 10,1371 /journal.pone.0090526

Urednik: Alfons Navarro, Univerza v Barceloni, Španija

Prejeto: 14. september 2013; Sprejeto: 3. februar, 2014; Objavljeno: 12. marec 2014

Copyright: © 2014 Chu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprta s sredstvi iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (št 81201927, 81272204 in 31270812) in China podoktorski znanstvene fundacije (št 2012M521862). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je eden izmed najpogostejših malignih bolezni po celem svetu [1]. Prognoza raka želodca, je slaba in bolniki so običajno diagnosticirali na precej višji stopnji v večini držav [2], [3]. Tako je celotna 5-letna stopnja preživetja je približno 40%, in da je bolnikov z oddaljene metastaze znaša manj kot 5% [4] - [8]. Približno 700.000 bolnikov z rakom želodca letno umre, zaradi česar je drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka po vsem svetu. Podatki so pokazali, da je stopnja surovo umrljivosti zaradi raka želodca 25,2 na 100.000 (32,8 na 100.000 pri moških in 17,0 na 100.000 pri ženskah) [1]. Toda obstaja izjemen geografske razlike v pojavnosti raka želodca za vzhodnih državah, kot sta Kitajska in Japonska imajo najvišjo stopnjo raka želodca kot zahodnih držav [9], [10]. Na Kitajskem, želodčni rak je drugi najpogosteje diagnosticiran rak in tretji vodilni vzrok smrti zaradi raka, z ocenjenih 464 439 novih primerov in 352 315 smrti zaradi raka v letu 2008. Skupna ocenjena starost prilagojena stopnja pojavnosti v letu 2008 znašala 29,9 na 100.000 ljudje na Kitajskem [9]. Torej, želodčni rak ostaja velik problem po vsem svetu kljub upadanju incidenco ne le zahodnih državah, pač pa tudi na Kitajskem.

MicroRNAs (miRNAs) so razred visoko konzerviranim, enojno vijačnico, malih nekodirano RNA molekule, ki so znan kot endogeni regulatorji post-transkripcijski izražanje genov, ki ureja izražanja skozi translacijske represijo in messenger RNA cepitvijo [11]. Jih lahko inhibira izražanje genov na posttranscriptional ravni vezavo na neprevedene regije 3 'ciljnih mRNA lahko povzroči degradacije mRNA ali inhibicijo prevajanja, odvisno od stopnje komplementarne bazne parjenje [12], [13]. Ugotovljeno je bilo splošno sprejeto, da miRNAs igrati osrednje vloge v različnih bioloških procesov, vključno z razvojem, celično proliferacijo, diferenciacijo, apoptoza in presnovo [14]. Bilančni dokazi tudi kažejo, da miRNAs sodelujejo v tumorsko angiogenezo, invazije in metastazami človeškega maligne bolezni [15]. Abnormalnih miRNA izraz je bila povezana z onkogenezo, in nekateri miRNAs deluje kot tumor razbijal, medtem ko so druge kot onkogeni, odvisno od ciljev, ki so lahko vpogled v diagnozo in prognozo človekovih malignih bolezni [16]. Nedavno so dokazi pokazali, da ekspresija miRNAs je dereguliran v različnih vrstah človeških malignostmi, kot so rak želodca, raka dojke, kolorektalnega raka, raka prostate, pljučnega raka, raka trebušne slinavke in kronično limfocitno levkemijo [17] - [19]. Pri raku človeškega želodca, je bilo ugotovljeno več miRNAs z odklonskega izražanja, na primer, miR-21, miR-22, miR-23, miR-127, miR-148, miR-202 in miR-433, ki je igrala onkogeni ali omejevalno vloga [20] - [25]. Ti rezultati so pokazali, da lahko miRNAs igrajo različne in ključne vloge pri človeških malignih bolezni, vključno z rakom želodca. Vendar pa izraz profil miRNAs je zelo tkiva in vrste raka specifične in miRNA specifična, kar kaže na funkcionalno in klinični pomen določenega miRNA lahko zagotovi klinično pomembne vpoglede v delovanje miRNA in učinkovito upravljanje raka [12], [15]. Da nam je znano, do sedaj, klinični in prognostični pomen miR-630 izražanja rakom želodca, še ni bila prijavljena.

V tej študiji smo raziskovali nivoja izražanja miR-630 v kliničnih želodca osebki in sosednje normalno tkiva, kot tudi analizo njeni pridružitvi celotnem preživetju bolnikov.

materiali in metode

Bolniki in osebki

Ta študija je bila odobrena z Odbor za etiko četrtega vojaške Medical University. Vsi člani so vključeni so predložili soglasje pisno obveščeno. Sveže klinični želodca raka osebki in sosednje normalne tkiva so bili zbrani od 236 bolnikov, ki so bili operirani v obdobju od januarja 2007 do decembra 2008 v bolnišnici Xijing za bolezni prebavil, četrtega vojaške Medical University. Nobeden od teh bolnikov so dobivali kemoterapijo pred operacijo. Poleg tega so bile običajne vzorce tkiva vzeta iz 18 bolnikov, ki so bili operirani za druge maligne bolezni, kot običajnih kontrolnih vzorcev razlogov. Histomorfologija vseh vzorcev tkiva so bile potrjene z oddelka za patologijo, četrtega vojaške Medical University. Osebki so mu takoj na tekočem N _{2 po kirurški odstranitvi za 10 minut, nato pa na -70 ° C, ultra-zamrzovalnik za mRNA izolacijo. Klinični podatki bolnikov, kot so starost, spol, status diferenciacije in stopnji TNM, so bili zbrani in shranjeni v bazi podatkov. Popolna nadaljevanje je bila na voljo za najmanj 5 let. Celokupno preživetje je opredeljen kot čas, ki je potekel od operacije do smrti bolnikov z rakom želodca. Nadaljnje informacije o vseh udeležencev je bila posodobljena vsake tri mesec telefon obiska in vprašalnikov črkami. Smrt udeležencev je bila ugotovljena s poročanjem iz družine in preverila s pregledom javnih evidenc.}

Kvantitativna Real-time PCR

Total RNA smo očistili iz vseh raka na 236 želodca in ujemanje sosednjih normalnih osebkov ki jih proizvajalec uporablja TRIzola reagenta (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA). Samo tisti skupni RNA vzorcev z OD A260 /A280 razmerje blizu vrednosti 2,0, kar kaže, da je RNA čista, nato pa so bili analizirani. MIR-630 in RNU44 notranji nadzor specifičnih cDNA smo sintetizirali iz celotne RNA z uporabo genskih specifičnih oligonukleotidov, po testih protokola TaqMan MicroRNA (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA). Za povratne prepisu izdelki so bili nato pomnožili in s PCR v realnem času zazna uporabo TaqMan MicroRNA testom (Applied Biosystems), specifična za HSA-pokoj-630. Vsak vzorec je bil preučiti v treh izvodih in surovi podatki so bili predstavljeni kot relativno kvantifikacijo miR-630 izražanja po metodi prag primerjalno cikel (CT), normalizirane glede na RNU44 ovrednoten. Pomeni normalizirano miR-630 izraz ± bil standardni odklon (SD), izračunan iz trojno analizo. PCR v realnem času smo izvedli z uporabo sistema ABI 7500 (Applied Biosystems) in primerjalna 2 ^{-ΔΔCt Analiza je bila opravljena s pomočjo SDS 2.2.2 programske opreme (Applied Biosystems).}

Statistična analiza

Združenja med miR-630 izražanja in clinicopathological značilnosti smo analizirali s testom Mann-Whitney in testa Kruskal-Wallis, kot je primerno. Krivulji preživetja so bile ocenjene po metodi Kaplan-Meier in razlike v razdelitvi preživetja so bile ocenjene s testom log-ranga. Cox je sorazmernih tveganj modeliranje dejavnikov, ki se nanašajo na preživetje smo izvedli, da bi ugotovili, ki bi lahko imeli dejavniki pomembno vplivajo na preživetje, in nadzor na starost, spol in status diferenciacije. Razlike z P
vrednosti 0,05 ali manj naj bi bile statistično značilne.

Rezultati

MIR-630 Expression zaznal želodčnega raka

v realnem času PCR, 236 primerov raka želodca, ki ustrezajo sosednjih normalnih osebkov in 18 primerov normalnih kontrolnih vzorcev so raziskovali. Relativna izraz miR-630 normalizirano na RNU44 raka želodca Ugotovljeno je bilo 8,51 ± 1,63 (povprečje ± SD), medtem ko je v ujemanje meji normalnega bil 3,25 ± 0,63. Statistični rezultati pokazali, da je bil izraz miR-630 pri raku želodca precej višja kot v sosednjih in normalnih kontrolnih vzorcev ( P
< 0,05). Ti rezultati so pokazali, da bi lahko miR-630 imajo onkogenega vlogo pri raku želodca. Da bi omogočili nadaljnjo analizo povezave med miR-630 izražanja in kliničnih značilnosti, smo ročno določen raka želodca z miR-630 izražanja nižja od 3,88 (Srednja + SD izraz miR-630 v sosednjih osebkov) tako nizko miR-630 izraz skupine, medtem ko vzorci z miR-630 izražanja ni nižja od 3,88 so bili opredeljeni kot visoko miR-630 izraz skupine. Tako je med 236 primerov raka želodca, je bilo 98 primerov dodeljeni nizko izražanja skupini pa je bilo 138 primerov dodeljeni visoki izraz skupine.

Razmerje MIR-630, da Clinicopathological značilnosti želodčnega raka

Ker je naša preiskava dokazala, da je miR-630 izražanje pri raku želodca povečal, ki je pokazala, da bi lahko miR-630 deluje kot onkogenih vlogo pri raku želodca. Nadaljevali smo raziskovali združenje miR-630 izražanja z clinicopathological značilnosti bolnikov, da razišče svojo potencialno vlogo v želodcu napredovanju raka. Statistični rezultati analize, je razvidno iz tabele 1, se je izkazalo, da se je povečala miR-630 izraz povezan z napredno želodca invazijo raka, saj je bil visok miR-630 izraz pogosteje odkrite v T3 in T4 tumorjev ( P
= 0,007 ). Kolikor je zdelo tumor metastaze, je bil povišan miR-630 izraz, povezan s pozitivnim bezgavkah in oddaljenih metastaz za visoko miR-630 izražanja je bolj pogosto, da se odkrijejo v tumorjih s pozitivnim bezgavke ( P
< 0,001) ali daljni metastaze ( P
= 0,002). Poleg tega, ko smo izmerili klinične značilnosti bolnikov s TNM sistem odrov, smo ugotovili, da je bil miR-630 izraz značilno povezana s stopnjo TNM raka želodca, saj je bolj verjetno, da bo odkrita v tumorjih z fazi napredno TNM visoko miR-630 izraz ( P
< 0,001). Ti rezultati kažejo, da bi miR-630 igrajo onkogenega vlogo pri napredovanje raka želodca. Vendar pa je pozitiven obrok miR-630 ni bilo ugotovljeno, da je povezana s spolom bolnikov ( P
= 0.788), starost ( P
= 0,471), stanja diferenciacija ( P
= 0,890), tumor na mestu ( P
= 0,835) ali Lauren razvrstitev ( P
= 0,160).

Odnos z MIR-630 k splošni preživetje bolnikov "z rak želodca

v celotnem obdobju spremljanja, 130 od 236 bolnikov (55,1%) z rakom na želodcu je umrl, mediana skupni čas preživetja vseh vključenih bolnikov je bila 48 mesecev. Kaplan-Meier analiza je bila uporabljena za pregled napovedno vrednost miR-630 izražanja v celotnem preživetju bolnikov z rakom želodca. Dokazali smo, da bolniki z rakom želodca visoko miR-630 izražanja večinoma slabšo celokupno preživetje (log rang test: P
< 0,001, slika 1). Mediana časa preživetja bolnikov z nizko miR-630 izražanja ni mogoče oceniti, saj je več kot 50% bolnikov, ki so preživeli v obdobju spremljanja. Medtem ko je bila pooperativna srednji čas preživetja bolnikov z visokim miR-630 izražanja 34 mesecev (95% IZ: 28,2-39,8). Ko je bila neprilagojena razmerje ogroženosti (HR) je menil, z nizko miR-630 izražanja kot referenco (1,00), so imeli bolniki z rakom želodca visoko miR-630 izražanja 2,28-krat večje tveganje za smrt (95% IZ: 1.57-3.32; P
< 0,001). Kolikor so bile obravnavane clinicopathological značilnosti, bezgavko metastaze (log rang test: P
= 0,002), oddaljenih metastaz (log rang test: P
< 0,001) in faza TNM (log rang test: P
< 0,001) so se izkazali tudi, da je povezana s celotnim preživetjem, saj bolniki z rakom želodca v bezgavkah metastaze, oddaljenih metastaz ali naprednem razredu večinoma slabšo splošno preživetje in večje tveganje za smrt. Vendar pa spol (log rang test: P
= 0,168), starost (log rang test: P
= 0,572) stanje diferenciacije (log rang test: P
= 0,156), tumor na mestu (log rang test: P
= 0,632) ali Lauren razvrstitev (log rang test: P
= 0,573) ni napovedno vrednost na celotnem preživetju bolnikov z rakom želodca .

kot je miR-630 izraz je izkazalo, da je povezana s splošnim preživetje bolnikov v univariantne analizi preživetja, bomo še naprej raziskovali, ali bi miR-630 služi kot neodvisni prognostični označevalec za bolnike z rakom želodca. Ker je bezgavka metastaze in daljni informacije metastaze vključena v podatke fazi TNM, smo opravili Cox sorazmernih tveganj model, ki je prilagojen po spolu, starosti in stopnji TNM. Rezultati so pokazali, da je bila prilagojena HR visoko miR-630 izraz skupine 3,51 (95% IZ: 1,83-6,72; P
< 0,001). Ti rezultati so pokazali, da je bila miR-630 neodvisen napovedni dejavnik za celokupno preživetje bolnikov z rakom želodca. Tako povečana miR-630 izraz je lahko pokazatelj slabe celokupno preživetje brez upoštevanja starost, spol ali stopnjo TNM (tabela 2).

Pogovor

Glede na nedavne študije, več kot 1900 so bile ugotovljene človekovih miRNAs, ki so ocenjeni za ureditev več kot 60% genov pri sesalcih [26]. Zaradi njihovega velikega pomena pri uravnavanju izražanja genov, ki jih je bilo splošno sprejeto, da so miRNAs vključeni v več celičnih funkcij, vključno proliferacije, apoptoza in diferenciacije, zato so bile izvedene v različnih fizioloških in patoloških procesov od razvoja raka [27 ] - [29]. Prejšnja preiskava anketiranih izraz profili miRNA v fazi I nedrobnoceličnim rakom pljuč prepoznati vzorce, ki morda napovedujejo ponovitev po kirurški resekciji ugotovil, da je mir-630 eden izmed najpogosteje miRNA med 1000 razvrščevalce opredeljene [30]. Druga študija o nedrobnoceličnim pljučnim ugotovilo, da bi miR-630 uravnavajo-cisplatin povzroča raka celične smrti, kar kaže, miR-630 je bil možen modulator odziva cisplatina v nedrobnoceličnim pljučnim rakom [31]. MIR-630 je bilo tudi, da se povečana pri glavi in ​​vratu ploščatoceličnim karcinomom po zdravljenju s cisplatinom in lahko uravnavajo izražanje beljakovin ATG5, ATG6 /BECN1, ATG10, ATG12, ATG16L1 in UVRAG [32], [33]. Nedavna študija je dokazala, da lahko Povecanje miR-630 v trebušne slinavke rakave celice povzroči apoptozo z usmerjanjem IGF-1 R [34]. Ker imajo lahko posamezni miRNAs v različnih vrstah raka veliko število različnih genov ciljev, zato imajo različne funkcije v različnih malignostmi. Torej, lahko funkcionalna odkritje posameznih miRNAs omogoči globlji vpogled v regulacije genske ekspresije in kompleksnosti napredovanja raka.

V tej študiji smo raziskati miR-630 mRNA izražanje PCR v realnem času testu v 236 primerov raka želodca pri bolnikih, ki niso prejeli novi dopolnilni kemoterapiji. Na podlagi izračuna relativna izraz, smo analizirali s pridružitvijo miR-630 z clinicopathological značilnostmi, kot tudi prognozo bolnikov. Rezultati so pokazali, da je bila miR-630 izraz na raka želodca poveča v primerjavi s tistim v sosednjih in normalnih kontrolnih tkiv za visoko ekspresijo iz bil miR-630 bolj verjetno, da bo odkrita v želodčnih vzorcih raka, ki kaže na njeno morebitno udeležbo na rakotvornost. Prav tako je bilo ugotovljeno, da je bila miR-630 izraz tesno povezana z želodčno invazijo raka, bezgavk metastaze, oddaljenih metastaz in stadija TNM za visoko ekspresijo miR-630 je bolj pogosto, da se odkrijejo v tumorjih z globoko invazijo, bezgavk metastaze, daleč metastaze ali faza TNM, kar kaže na morebitno sodelovanje miR-630 na želodčno invaziji raka in metastaz. Skupaj z zgoraj dokazov, zato je bilo predlagano, da se lahko miR-630 imajo pomembno vlogo v želodcu kancerogenosti in napredovanja raka.

Ker je bilo ugotovljeno, miR-630 izraz, ki je povezana z želodčno invazijo raka in metastaz, če upoštevamo invazija raka na sosednjih tkiv in metastaze na distalnih tkiva so ključni dejavniki, ki vplivajo na prognozo bolnikov, miR-630 je lahko potencialni prognostični marker za bolnike z rakom želodca. Da bi raziskali napovedni vlogo miR-630 za rakom želodca, smo izvedli po metodi Kaplan-Meier analizo celokupnega preživetja. Rezultati so pokazali, da imajo bolniki z rakom želodca visoko miR-630 izražanja imajo ponavadi slabši celokupno preživetje v primerjavi z bolniki s tumorjem nizko miR-630 izražanja, ki nakazujejo, da je bila miR-630 izražanja prognostični marker za bolnike z rakom želodca. Da bi še dodatno oceniti napovedni vrednosti miR-630 pri raku želodca, smo opravili Cox sorazmernih tveganj model, ki je prilagojena glede na spol, starost in stopnjo TNM bolnikov. Dokazali smo, da je povečana miR-630 izraz označevalec slabe celokupno preživetje je neodvisna od prilagojenih dejavnikov, zato miR-630 je mogoče uporabiti za določitev prognozo bolnikov z ven upoštevamo fazi TNM. Ti rezultati so pokazali, da bi lahko miR-630 predstavlja molekularno napovedni marker dodatka na odru TNM za bolnike z rakom želodca, prepoznavanje visoke posameznike tveganja, ki so bolj verjetno, da so tumorske ponovitve v klinični praksi, torej dobri kandidati za sprejem bolj agresivno zdravljenje. Ti rezultati so bili v skladu s preiskavami, ki se osredotočajo na nedrobnoceličnim rakom pljuč, ki označuje skladnost v miR-630 funkcije v te vrste tumorja. Tako je pozitivna povezava med miR-630 prekomerno in slabo prognozo se ne sme uporabljati le za identifikacijo bolnikov z rakom želodca z večjim tveganjem za zgodnje ponovitve tumorja, temveč tudi za zagotavljanje dragocene namige za razumevanje možnega mehanizma želodca invazije raka in metastaz.

na koncu smo dokazali, da je bila miR-630 izraz na raka želodca poveča in povezani z napredovanja tumorja. Predloženi Študija je pokazala tudi prvič, da je miR-630 ekspresijo neodvisen napovedni dejavnik bolnikov z rakom želodca. Zato je mogoče, da miR-630 igrajo pomembno vlogo pri invazivnosti in metastaz raka želodca. Možno je tudi, da miR-630 služi kot prognostičnega označevalec v klinični praksi in celo zaviranje za miR-630 z uporabo posebnih inhibitorje lahko postane nova terapevtska metoda za zdravljenje raka želodca.

• Plos ONE: A MAP3k1 SNP napoveduje preživetje želodčnega raka v kitajski Population
• Plos ONE: Clinicopathological Pomen in prognostičnih vrednost laktat-dehidrogenaze izraza želodčnega raka Patients