PLOS ONE: makrofaginfiltration Orsakar Gastric Cancer invasivitet genom att aktivera β-catenin Pathway

Abstrakt

Bakgrund

Trots bevis för att aktiverade makrofager agerar i en inflammatorisk mikro att främja gastric tumörbildning via β- catenin signalering, effekterna av β-catenin signalering på magcancer cell metastaser och förhållandet mellan dessa celler med omgivande tumörassocierade makrofager har inte direkt studerats.

Metoder

Immunhistokemisk färgning användes för att analysera 103 patienter. En invasion analys användes för att utvärdera förhållandet mellan makrofager och gastriska cancerceller. p-catenin vinst-of-funktion och förlust av funktions metoder genomfördes. För att bedöma den mekanism β-catenin reglering i gastric cancerceller, Western blotting och omvänd transkription polymeraskedjereaktion användes.

Resultat

Ökad täthet av makrofager var associerad med långt framskriden och dålig överlevnad . Gastriska cancercellinjer samodlade med makrofager konditionerat medium visade ökad nukleär ackumulering av β-catenin och ökad invaderande förmåga. AKT men inte ERK reglerad β-catenin translokation. nedströms gener MMP7 och CD44, både β-catenin, var inblandade i makrofag-aktiverad magcancer cellinvasion.

Slutsats (s) Review

Tillsammans de kliniska data tyder på att makrofaginfiltration är korrelerad med ökad kvalitet och dålig prognos för magcancer patienter som genomgick radikal resektion. Makrofager kan inducera invasivitet genom att aktivera β-catenin vägen

Citation. Wu MH, Lee WJ, Hua KT, Kuo ML, Lin MT (2015) makrofaginfiltration Orsakar Gastric Cancer invasivitet genom att aktivera β-catenin Pathway . PLoS ONE 10 (7): e0134122. doi: 10.1371 /journal.pone.0134122

Redaktör: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, Italien

Mottagna: 16 september, 2014. Accepteras: 6 juli 2015, Publicerad: 30 juli 2015

Copyright: © 2015 Wu et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

datatillgänglighet: Alla relevanta uppgifter är inom pappers- och dess stödjande information filer

Finansiering:.. Detta arbete har finansierats med bidrag från National Science Council, Taiwan (NSC 98-2314-B-002-055-MY2) katalog

konkurrerande intressen: författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

Gastric cancer (GC) är bland de vanligaste cancersjukdomarna i världen och nästan två tredjedelar av dessa patienter kommer att dö av. deras sjukdom. [1] GC är nära förknippad med Helicobacter pylori
infektion, vilket leder till kronisk inflammation. [2] Denna inflammatoriska mikrokännetecknas av närvaron av värd leukocyter med huvudsakligen makrofager i båda stöd stroma och tumörvävnad. [3] Undersökningar tyder på att tumörassocierade inflammatoriska svar, både lokala och systemiska, är viktiga oberoende faktorer i tumörprogression och metastasering. [4, 5] Men sambanden mellan dessa molekylära mediatorer och kronisk inflammation är inte helt klarlagda .

Aktivering av Wnt banan är ett viktigt steg i cancer. Mutationer längs Wnt-β-catenin reaktionsvägen förekommer hos cirka 90% av kolorektal och hepatocellulära karcinom och i omkring 30% av GC. [6, 7] Dessutom, tumörnekrosfaktor-α (TNF-α) härlett från aktiverade makrofager befrämjar β-catenin aktivitet i GC-celler. [8, 9] trots bevis för att aktiverade makrofager agerar i en inflammatorisk mikromiljö för att främja gastrisk tumörgenes via β-catenin signalering, effekterna av aktiverad β-catenin signalering på GC-cellmetastaser och förhållandet av dessa celler med omgivande tumörassocierade makrofager (TAMs) har inte direkt studerats.

Baserat på ovanstående resultat, vi hypotesen att β-catenin vägen också kan vara inblandade i regleringen av makrofag-inducerad GC metastaser. I denna studie undersökte vi densiteten hos infiltrerade makrofager och uttrycket av β-catenin i gastriska karcinomvävnader med användning av immunohistokemi (IHC). De kliniskt patologiska egenskaper magcancer och prognos demonstrerades. Vidare fann vi att makrofager inducerar nukleär translokation av β-catenin och öka invasionen förmågan hos GC-celler. Våra resultat visar och ytterligare stödja en viktig länk mellan TAM och dess nedströms signalering medlare, β-catenin, vid reglering av GC metastaser.

Material och metoder

Patienter och Prover

studien godkändes av Institutional Review Board och Human etikkommitté National Taiwan University Hospital. Skriftligt samtycke för att använda proven för forskningsändamål erhölls från samtliga patienter före operation. Patientinformation var anonyma och avidentifierade före analys.

I studien efterhand inskrivna 205 patienter diagnostiserade med GC som fick radikal kirurgisk resektion vid institutionen för allmän kirurgi, National Taiwan University från januari 1998 till januari 2002. Av dessa var 102 patienter som saknade uppföljningsdata eller som dött av perioperativa komplikationer uteslutas och de återstående 103 patienter ingick i analyserna. Kliniskt patologiska variabler klassificerades enligt TNM klassificering (5: e upplagan, 1997) och egenskaper sammanfattas i Tabell 1. Överlevnad (OS) definierades som intervallet mellan kirurgi och död eller mellan kirurgi och den sista uppföljningen för överlevande patienter.

monoklonala antikroppar och IHC

utskurna exemplar av GC fixerades i formalin och bäddades in i paraffin. undersöktes sektioner för TAM infiltration och β-catenin användning av monoklonal anti-CD68-antikropp (klon KP1, Dako, Glostrup, Danmark) och monoklonal β-catenin antikropp (klon 15B8, Sigma-Aldrich, St Louis, MO), respektive.

Utvärdering av immunfärgning

för att utvärdera densiteten av vävnads infiltrera CD68 + makrofager, har vävnadssnitt screenades genom en certifierad patolog (CI jan) med låg effekt (100 ×) och fem mest representativa fälten selekterades vid 400 gångers förstoring. Resultaten räknades manuellt och uttrycktes som summan av antalet celler i fem 400 × mikroskopiska fält för varje område av varje prov.

Cell Culture

GC celler AGS, N87 (köpt från American Type Culture Collection (Manassas, VA)), MKN45 (inköpt från Health Science Research Resources Bank (Osaka, Japan)) och TSGH (inköpt från Bioresource Collection och Research Center (Hsinchu, Taiwan)) och humana monocytiska cell linjen THP-1 (inköpt från American Type Culture CoUection (Manassas, VA)) celler odlades i RPMI-1640-medium (Life Technologies, Inc., Rockville, MD) med 10% fetalt bovint serum (FBS, Life Technologies, Inc. ) och 2 mM L-glutamin (Life Technologies, Inc.).

THP-1-celler ympades i odlingsskålar och inducerades att differentieras till makrofager genom inkubation med 100 ng /ml 12-O-tetradekanoylforbol-13 -acetat (TPA, Sigma-Aldrich) under 24 timmar. Makrofagerna tvättades tre gånger med RPMI-medium innehållande 10% FBS, odlades i detta medium under ytterligare 24 h för att eliminera effekten av TPA och inkuberades i serumfritt medium under ytterligare 24 timmar. De skördade och poolade odlingssupernatanter användes som makrofag-konditionerat medium (CM) såsom tidigare beskrivits. [5, 10]

Proliferation /Viability Assay

GC-celler ympades i 96-brunnsplattor och samodlade med eller utan makrofag CM. Proliferationen /viabilitet bestämdes genom en kolorimetrisk analys med användning av 3- (4,5-dimetyltiazol-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) (Sigma-Aldrich).

In Vitro Invasion Assay

invasionsanalys utfördes med användning av Transwell-cellodlingskammare (Millipore Corp., Billerica, MA). De invaderande cellerna räknades vid 400 gångers förstoring i 10 olika områden för varje insats. Experimentet upprepades tre gånger.

RNA-extraktion och RT-PCR

Efter stimulering med eller utan makrofag CM under 6 h, GC-celler samlades upp och totalt RNA extraherades med användning av Trizol-reagens-kit ( Invitrogen, Carlsbad, CA) genom att följa tillverkarens instruktioner. cDNA amplifierades genom polymerase chain reaction (PCR) med användning av primers för MMP7 (framåt: 5'AGTCAATCCTGCCTTCTTAGCC omvänd: 5'GCTCCCACCTTCCCTCTTGG), CD44 (framåt: 5'TGCCGCTTTGCAGGTGTAT omvänd: 5'TCCCATGTGAGTGTCTGGTAGC), cyklin D1 ( framåt: 5'CCCAGCCATGGAACACCA omvänd: 5'GGAGGGCGGATTGGAAATGA), c-myc (framåt: 5'AAAGAAGGTGTTGGGGTCGG omvänd: 5'TGGCTCCCCCTGTTATTTGG) och GAPDH (framåt: 5'GGGTGATGCAGGTGCTACTT omvänd: 5'GGCAGGTTTCTCAAGACGGA) .

nukleära och cytoplasmiska Fraktione

efter stimulering med eller utan makrofag CM under 6 timmar, var GC-celler lyserades i 300 pl lyseringsbuffert på is och centrifugera vid 5400 rpm. Supernatant samlades som en cytosoliska fraktionen. Nukleära fraktioner uppsamlades, kör sedan i natriumdodecylsulfat polyakrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE) för Western blot-analys.

Western Blotting Analys

Efter stimulering med makrofag CM, cellerna tvättades med PBS , skrapas in i RIPA-buffert och centrifugerades. Cellysaten utsattes för 10% SDS-PAGE och överfördes till en polyvinylidenfluorid (PVDF) membran (Millipore Corp.) Membranet sonderades med användning av primära antikroppar för β-catenin, AKT, ERK, JNK (SC1496, SC8312, SC154, SC474, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA, USA), MMP7 (MAB3322, CHEMICON, Temecula, CA, USA), CD44 (ab51037, Abcam, Cambridge, MA, USA), c-myc (GTX103436, GeneTex, Hsinchu , Taiwan), cyklin D1 (SC246, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA), β-aktin (ab8226, Abcam), HDAC1, p-AKT, p-ERK, p-JNK (SC7872, SC7985-R, SC7383, SC6254, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA) och sekundär antikropp (Santa Cruz Biotechnology).

Immuncytokemi

Anti-total β-catenin antikropp användes som den primära antikroppen och anti- mus Immunoglobulin G (IgG) Alexa 594 användes som den sekundära antikroppen. Täckglas var sedan monteras med hjälp av monteringsmedel innehållande DAPI för nukleär färgning.

Lentiviral produktion och infektion

Kort hårnål RNA (shRNAs) köptes från National RNAi kärn Facility vid Academia Sinica (Taipei, Taiwan). Målsekvensen av β-catenin shRNA 1 var 5'CCGGTCTAACCTCACTTGCAATAATCTCGAGATTATTGCAAGTGAGGTTAGATTTTTG-3 '; den hos β-catenin shRNA 2 var 5'-CCGGTTGTTATCAGAGGACT-AAATACTCGAGTATTTAGTCCTCTGATAACAATTTTTG-3 '. Lentiviral vektor och dess förpacknings vektorer transfekterades in i 293T förpacknings celler genom kalciumfosfat-transfektion. I korthet var 293T celler delas (10 ^{6) i 10 cm 2 rätter en dag före transfektion. Därefter transfekterades cellerna med 10 | ig shRNA vektorer och 10 ^ g av pCMVΔR8.91 (förpacknings vektor) och 1 fig av pMD.G (kuvertet vektor). Efter 5 h av inkubation tillsattes transfektion ersattes mediet med färskt odlingsmedium. Fyrtioåtta timmar senare tillsattes lentivirus innehållande mediet uppsamlas från transfektion och centrifugerades ned vid 1500 rpm i 5 min för att pelletera cellrester, supernatanten filtrerades genom ett 0,45-pm filter, och målceller infekterades med färsk lentivirus-innehållande medium (kompletterat med 8 mikrogram /ml polybren) under 24 timmar.}

Statistisk analys

Statistisk analys av de kliniska funktionerna gjordes med hjälp av χ ^{2 test och graden av infiltration mellan de två grupperna jämfördes med användning av t-test. Överlevnadskurvor konstruerades med användning av Kaplan-Meier-metoden och statistisk signifikans analyserades med användning av log-rank test. Ett p-värde på mindre än 0,05 ansågs statistiskt signifikant.}

Resultat

Korrelation av Immunohistokemiska Variabler med clinicopathologic funktioner i GC Patienter

Immunhistokemisk analys visade en cytoplasmatisk CD68 färgningsmönster för makrofager. CD68 + makrofager fördelade över peritumorala och intratumorala vävnader men endast glest utspridda i normal slemhinna (Fig 1A-1C). Densiteten av CD68 + makrofager var särskilt hög i patologiska tumörstadium 4 (pT4) tumörlesioner jämfört med PT1 lesioner (Fig 1D). För att bestämma sambandet mellan kliniska egenskaper och CD68 + makrofager densitet, har fall av CD68 + makrofager delas in i de över och under medianvärdena. Antalet CD68 + makrofager visade sig vara associerad med tumördjup och steget (p = 0,001 och p = 0,043, respektive) (Tabell 1). Denna observation antyder att CD68 + makrofager kan vara viktigt för att främja tumörinvasion. För ytterligare analys, var Kaplan-Meier överlevnadskurvor plottas för att bestämma associationen av makrofager med överlevnad (Fig 2). Densiteten hos CD68 + makrofager i tumörvävnaden negativt associerad med total överlevnad (p = 0,0073). Patienter med ett stort antal tumör CD68 + makrofager hade kortare total överlevnad än de med lågt antal CD68 + makrofager.

Ökad uttryck och starkare signal av β-catenin observerades av IHC färgning i tumörer. I de flesta fall var β-catenin expression huvudsakligen i cytoplasman (fig 3A). Intressant nog var stark nukleär färgning av β-catenin GC-celler associerade med CD68 + makrofager i tumör lesioner, i synnerhet framför tumörinvasion (fig 3B). På grundval av dessa resultat, hypotes vi att makrofaginfiltration kan aktivera β-catenin signalering i gastric tumörceller, vilket då sannolikt leder till invasion i mag malignitet.

Krav på makrofager för tumörinvasion i GC och Aktiverad makrofag-inducerad Invasion av GC celler

för att ytterligare bekräfta våra kliniska fynd in vitro
, vi första co-odlade makrofager med olika GC cellinjer (AGS, N87, MKN-45 och TSGH) . Alla GC testade cellinjer skulle rekrytera makrofager för att migrera och makrofag-rekryteringsförmåga var beroende på graden av malignitet av cancercellerna som bestäms av deras invasivitet (fig 4A). [11] För att utvärdera om invasivitet eller proliferation av GC-celler kan regleras av makrofager, AGS, N87, MKN45 och TSGH samodlades med och utan makrofager eller CM från makrofager under 24 timmar och deras invasion och spridning förmågor testas. Alla celltyper co-odlade med makrofager eller CM från makrofager uppvisade en nära två-faldig ökning av antalet invaderande celler (jämfört med negativa kontroller, p < 0,05), som inte är förknippade med deras spridning förmåga (Fig 4B-4D ).

nukleär translokation av β-catenin i GC-celler av aktiverade makrofager

Vi har utfört ett experiment in vitro att förstå om β-catenin signalering var inblandad i makrofag-aktiverad GC cellinvasion. Som visas i figur 5A, var β-catenin immunreaktivitet återfinns i den nukleära fraktionen av N87-celler så tidigt som 15 minuter efter makrofager CM behandling, och mängden kärn β-catenin protein ökat på ett tidsberoende sätt. I linje med dessa resultat, immunofluorescens visade ackumulering och nukleär lokalisering av β-catenin i GC-celler samodlade med makrofager CM jämfört med kontroller samodlades i N87 (figur 5B). Dessa resultat tyder starkt på att de lösliga faktorer som härrör från makrofager hjälpa medla anhopning och nukleär translokation av β-catenin i GC-celler. Vi knackade tillfälligt ner β-catenin av shRNA och fann minskad β-catenin proteinuttryck inom 24 timmar. Genetisk ablation av β-catenin i N87 celler inte öka sin invasiva förmåga efter makrofager CM behandling. Däremot icke-transfekterade och kontroll shRNA hade ingen förändring i den invasiva förmåga i N87 celler under makrofag CM behandling (fig 5C). Mängden kärn β-catenin proteinet också ökat i AGS och MKN45 celler efter makrofager CM behandling (S1 FIG).

Effekter av Macrophage på uttryck av β-catenin och nedströms gener i N87 celler

Vi utvärderade nedströms generna traditionell Wnt /β-catenin MMP7, CD44, c-myc och cyklin D1 själv fastställa om de aktiveras av makrofager. MRNA och proteinnivåer MMP7, CD44 och c-myc-generna var alla signifikant ökad i N87-celler inkuberade med makrofager CM och nivåerna av cyklin D1 ökade något (Fig 6A). Efter uppmaning minskad invasion aktivitet från knacka ner β-catenin, MMP7, CD44 och cyklin D1 men inte c-myc visade protein nedreglering (Fig 6B). För att bekräfta sambandet mellan invasionen förmåga och MMP7 och CD44, testade vi förmågan hos en neutraliserande antikropp att blockera MMP7 och CD44-aktivitet. Invasion förmåga signifikant äventyras genom förbehandling med 2,5 ng /ml anti-MMP7 och med 10 mikrogram /ml anti-CD44 (Fig 6C) respektive, vilket tyder på inblandning av båda generna i makrofag-aktiverad GC cellinvasion. Vi hittade proteinnivåer CD44 och cyklin D1-generna ökade i de övriga GC cellinjer (AGS och MKN45) inkuberades med makrofag CM men MMP7 och c-myc inte signifikant ändras (S2 Bild).

Andra har rapporterat en möjlig skärningspunkten mellan MAPK-vägen med Wnt /β-catenin signalväg. [12, 13] Vi utförde därför en tidsförloppsstudie och fann att endast fosfo-AKT och fosfo-ERK-expression uppregleras vid behandling med makrofag CM (S3A fig). För att bekräfta interaktionen mellan AKT /ERK-vägen och β-catenin, förbehandlade vi celler med antingen ERK inhibitor (U0126) eller AKT-hämmare (LY294002). Minskning av β-catenin sloka in i kärnan endast finns i celler som behandlats med AKT-hämmare men inte ERK-hämmare, vilket tyder på makrofag-avtivated Wnt /β-catenin signalväg kan regleras av AKT (S3B Fig). I GC-celler, tycks AKT effekten ska bli dominerande i makrofager aktiverade Wnt /β-catenin signalväg. Tidigare studier tydde också på att TNF-α som produceras av makrofager är en viktig medlare för inflammation och kan främja β-catenin aktivitet i tumörceller. Vi fann att utnyttja neutraliserande antikroppar mot TNF-α i N87 trycka β-catenin aktivering under exponering för makrofager CM (S4 Fig).

Diskussion

mikro av en tumör är av avgörande betydelse för bestämning leukocytfunktion och fenotyp. Motstridiga data har visat antitumorigenic eller protumorigenic funktioner på makrofager i synnerhet, men våra data tyder på makrofager spelar en protumorigenic roll i GC patienter. I de flesta tumörer, TAMs producera en myriad av faktorer som främjar tumörtillväxt och angiogenes. [14, 15] Graden av makrofag infiltration i cancercellen boet är också en betydande prediktor för överlevnad i GC-patienter. [16-18] IHC fynd i denna studie visar tydligt att densiteten för makrofager i GC vävnad är korrelerad med graden av kliniska stadiet (särskilt i tumören [T] steget) och överlevnad hos patienter. De nuvarande studier antyder också att makrofager kan spela skadliga roller i avancerad GC. Detta konstaterande är i harmoni med studier som tyder på att immunmikro kan vara protumoral snarare än antitumör, trots vissa motstridiga uppgifter. [19, 20]

Kärn ackumulering av β-catenin har rapporterats hos cirka en tredjedel av gastriska adenokarcinom, båda intestinala och diffusa typer. [18] β-catenin är ett protein 92 kDa som fungerar direkt i cell-till-cell-adhesion. [21] Mutationer av β-catenin och onormalt uttryck av dess protein har implicerats i tumörinvasion och metastas. [22, 23] i våra IHC fynd, β-catenin var beläget i kärnan vid den invasiva fronten av tumörceller, men inte i den mest centrala delen av de primära tumörer, där det lokaliserar till plasmamembranet . Sådana observationer kan också hittas i kolorektala tumörprover. [24] Wnt /β-catenin aktivering i cancerceller som finns vid den invasiva fronten har antagits som ett viktigt steg i tumörtillväxt och progression. [25]

Intressant nog fann vi även β-catenin ligger i kärnan av tumörceller med makrofager som ligger intill varandra, vilket tyder på ett möjligt samband mellan makrofager och den nukleära translokation av β-catenin i tumörceller. β-catenin vid invasiva framför GC förklaras delvis av interaktioner inom tumörmikromiljö. Vi bekräftade In vitro
att makrofager ökar invasionen förmåga GC-celler. Använda immunofluorescens konfokalmikroskopi, bestämde vi lokalisering och ackumulering av β-catenin i kärnan hos behandlade makrofager. Därför misstänker vi att cytokiner som utsöndras av makrofager inducerar β-catenin nukleär translokation i GC-celler, vilket ökar deras invasion förmåga. Den invasiva fronten av epiteliala tumörer representerar en mikromiljö, i vilken makrofager interagerar med parenkymceller genom att producera extracellulära matrisen och genom att utsöndra cytokiner och tillväxtfaktorer som lokalt befrämjar cellproliferation och invasion. [26, 27] Men i vår studie ökade β-catenin uttryck in vitro
inte ändra proliferation, vilket tyder på att i sig är inte tillräckligt för att öka tumör malignitet. Detta konstaterande är också tidigare visat att β-catenin bara främjar vidhäftnings platser för att bilda fokalt och stimulerar riktad migration och invasion av koloncancerceller men inte inblandade i spridningen av mag- och prostatacancerceller. [28-30] Ändå stromacells- parakrin modulering av Wnt signalering i epitelceller sannolikt samordnas av ett mer komplext nätverk för att främja och hämma sekre faktorer. De efterföljande effekterna av olika nivåer av Wnt /β-catenin signalering (och i synnerhet de som påverkar celltillväxt, EMT och lokal invasion) är än så länge dåligt kända. β-catenin translokerar till kärnan där den binder till transkriptionsfaktorer av T cellfaktor /lymfocyt enhancer faktor (TCF /LEF) familjen och initierar transkription av målgener, såsom cyklin D1
, c- myc Mössor och MMP-7
[31, 32] som är involverade i spridning, tumörinvasion och metastas. [33, 34] tyder Våra resultat att de signalvägar genom vilka makrofager inducerar β-catenin inducerar också expression av målgener. I överensstämmelse med vårt tidigare arbete, [5] MMP-7 och CD44 var två PCR-arrayer som identifierats efter samodling med makrofager som differentiellt uttryckta gener associerade med metastaser av GC-celler. Nedbrytning av den extracellulära matrisen förmedlas av matrix-metalloproteinaser (MMP: er) är en avgörande mekanism under tumörinvasion och metastas. Sådan nedbrytning är nödvändig för att skapa en mikromiljö som stödjer tillväxten av primära tumörer och metastaser. Den β-catenin /TCF komplex därefter aktiverar ett stort antal av onkogener, inklusive VEGF, c-myc, c-jun, fra-1 och gastrin som också kan vara inblandade i händelser makrofag aktiverad β-catenin nedströms. [35]

En mängd vägar sannolikt modulera Wnt /β-catenin-vägen och regleringen av β-catenin signalering kan på liknande sätt komplicerat. Nyligen genomförda studier funnit att makrofager CM utlöser ERK vägen och Wnt aktiverar ERK i endotelceller. [36, 37] Här fann vi att makrofager inducerar fosforylering av både ERK och AKT i GC-celler. Vi visade att behandling med AKT-hämmare men inte ERK-hämmare minskar β-catenin translokation. Dessa resultat tyder på att Akt spelar roller i makrofager aktiverade β-catenin signalering i gastric celltyper.

Slutsatser

Tillsammans de kliniska data tyder på att makrofaginfiltration är korrelerad med ökad kvalitet och sämre prognos för GC patienter som genomgick radikal resektion. Makrofager kan inducera GC invasivitet genom att aktivera β-catenin vägen. Följaktligen undertryckandet av makrofaginfiltrering och undertryckande av aktivering av β-catenin vägen utgör potentiella strategier för behandling av GC.

Bakgrundsinformation
S1 Fig. . Effekt av makrofag CM på β-catenin pathway
β-catenin ackumuleras i nucleus efter behandling med makrofag CM under 30 minuter i AGS och MKN45-celler
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s001
(TIFF) Review S2 Fig. Effekt av makrofager CM på proteinuttryck av β-catenin nedströms gener av AGS och MKN45 celler
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s002
(TIFF) Review S3 Fig. (A) makrofag CM inducerad AKT och ERK aktivering i N87 celler. (B) N87 cellerna förbehandlas med 10 pM av de β-catenin inhibitorer:. LY294002 eller U0126 för en timme sedan odlade i närvaro av makrofag CM för en ytterligare timme
AKT, ERK och β-catenin proteinuttryck bestämdes genom Western blot
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s003
(TIFF) Review S4 Fig. . Neutraliserande antikropp mot TNF-α
N87-celler i närvaro av makrofag CM i 24 timmar förbehandlades med eller utan TNF-α-inhibitor under 1 timme
doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s004
(TIFF) Review

• PLOS ONE: PRR11 är en prognostisk markör och Potential Oncogene hos patienter med magcancer
• PLOS ONE: Lymph Node metastaser, en unik oberoende prognostisk faktor i tidig ventrikelcancer