PLoS One: makrofáginfiltrációt indukál gyomorkarcinóma invazivitásának aktiválásával a β-Catenin útvonal

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

bizonyítékok ellenére, hogy az aktivált makrofágok aktus gyulladásos mikrokörnyezet elősegítése gyomor tumorogenezisben keresztül β-catenin jelátvitel hatását β-catenin jelátvitel a gyomor rákos sejtek metasztázis és a kapcsolat ezeknek a sejteknek a környező tumorasszociált makrofágok nem közvetlenül vizsgálták. katalógusa

módszerek katalógusa

az immunhisztokémiai festést alkalmazunk, hogy elemezze 103 beteg. Egy invázió assay-t alkalmaztunk, hogy értékelje a kapcsolatát a makrofágok és a gyomor rákos sejteket. béta-catenin nyereség-of-function és a veszteség-of-function megközelítések végeztünk. Hogy értékelje a β-catenin szabályozás mechanizmusának gyomorrák sejtek, Western blot és fordított transzkripciós polimeráz láncreakció használtunk. Katalógusa

Eredmények katalógusa

sûrûsödések makrofágok járt előrehaladott stádiumban van és a rossz túlélési . A gyomor rákos sejtvonalak együtt tenyésztett makrofágokat kondicionált tápközeg mutatott fokozott nukleáris felhalmozódása β-catenin és a megnövekedett betörő képességét. AKT de nem ERK szabályozott β-catenin transzlokáció. MMP7 és CD44, mind a β-catenin downstream gének, részt vettek a makrofág aktivált gyomorrák sejtek invázióját. Katalógusa

következtetés (ek) hotelben

Együttesen a klinikai adatok arra utalnak, hogy a makrofáginfiltrációt korrelál fokozott minőségű és rossz prognózisú gyomorrák átesett betegek reszekcióra. A makrofágok indukálhat invazivitásának aktiválásával β-catenin útvonal. Katalógusa

Citation: Wu MH, Lee WJ, Hua KT, Kuo ML, Lin MT (2015) makrofáginfiltrációt indukál gyomorkarcinóma invazivitásának aktiválásával β-Catenin útvonal . PLoS ONE 10 (7): e0134122. doi: 10,1371 /journal.pone.0134122 katalógusa

Szerkesztő: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanità, OLASZORSZÁG katalógusa

Beérkezett: szeptember 16, 2014; Elfogadva: július 6, 2015; Megjelent: július 30, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Wu et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Az adatok elérhetősége: Minden lényeges adatot belül a papír és az azt támogató információs fájlokat. katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatták Nemzeti Tudományos Tanács, Taiwan (NSC 98-2314-B-002-055-MY2). katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák (GC) az egyik leggyakoribb rákos világszerte csaknem kétharmada ilyen betegek fog meghalni betegségük. [1] GC szorosan kapcsolódik a Helicobacter pylori
fertőzés, amely ahhoz vezet, hogy a krónikus gyulladás. [2] Ezt a gyulladásos mikrokörnyezetben jellemzi jelenléte fogadó leukociták főleg makrofágok mind a támogató stroma és tumoros szövetekben. [3] a kutatások azt jelzik, hogy a tumor-asszociált gyulladásos válaszokat, mind helyi, mind szisztémás, fontos független tényező a tumor progresszióját és a metasztázist. [4, 5] azonban a kapcsolatok között ezeket a molekuláris mediátorok és a krónikus gyulladás nem teljesen ismert .

aktiválása Wnt útvonal egy fontos lépés a kialakulásában. Mutációk mentén Wnt-β-catenin útvonal fordul elő körülbelül 90% a kolorektális és hepatocelluláris karcinómák és körülbelül 30% -a GC. [6, 7] Ezen túlmenően, a tumor nekrózis faktor-α (TNF-α) származó aktivált makrofágok elősegíti β-catenin aktivitás GC sejtekben. [8, 9] azonban, annak ellenére, bizonyíték arra, hogy az aktivált makrofágok aktus gyulladásos mikrokörnyezet elősegítése gyomor tumorgenezis keresztül β-catenin jelátvitel a hatása aktivált β-catenin jelátviteli GC sejt metasztázis, és a kapcsolat ezeknek a sejteknek a környező tumorasszociált makrofágok (TAM) nem közvetlenül vizsgálták. katalógusa

a fentiek alapján megállapítások azt feltételeztük, hogy a β-catenin útvonal is szabályozásában vesz részt makrofágindukált GC áttét. Ebben a vizsgálatban először vizsgálta a sűrűsége a beszivárgott makrofágok és a kifejezés a β-catenin a gyomor karcinóma szövetek immunhisztokémiai (IHC). A klinikopatológiai jellemzők a gyomorrák és a prognózis is bizonyított. Továbbá azt találtuk, hogy a makrofágok indukáló nukleáris transzlokációját β-catenin és fokozza az invázió képességét GC sejteket. Eredményeink bizonyítják, és továbbra is támogatni fontos kapocs TAM és jelátviteli mediátor, β-catenin, szabályozásában GC áttét. Katalógusa

Anyag és módszer katalógusa

A betegeket és mintákat katalógusa

a tanulmány által jóváhagyott intézményi Review Board és az emberi Etikai Bizottsága tajvani Nemzeti Egyetemi Kórház. Írásos hozzájárulás a minták kutatási célokra kapunk minden betegnél a műtét előtt. Beteg információt névtelenítjük és azonosítására alkalmatlanok az analízis előtt. Katalógusa

A tanulmány retrospektív bevont 205 betegnél diagnosztizáltak GC akik radikális sebészi eltávolítását a Általános Sebészeti Osztály, Tajvani Nemzeti Egyetem 1998 januárjától 2002. január Of Közülük 102 beteg, akik nem rendelkeznek a nyomon követés adatok vagy akik meghaltak a perioperatív komplikációk kizárták, és a fennmaradó 103 beteget vontak be elemzések. Klinikopatológiai változók szerint osztályoztuk TNM besorolás (5. kiadás, 1997) és a jellemzőit foglalja össze az 1. táblázat Teljes túlélés (OS) definiálták közötti intervallum műtét és a halál között, vagy műtét, és az utolsó nyomon követése a túlélő betegek.

monoklonális antitestek és IHC katalógusa

A kimetszett mintákat a GC formalinnal fixáltuk, majd paraffinba ágyaztuk. Metszeteket vizsgáltunk, TAM infiltráció és β-catenin monoklonális anti-CD68 antitesttel (klón KP1, DakoCytomation, Glostrup, Dánia), és a monoklonális β-catenin antitesttel (klón 15B8, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), ill.

értékelése Immunfestést katalógusa

Hogy értékelje a sűrűsége szövet infiltráló CD68 + makrofágok, metszeteket átvizsgáljuk a fedélzeten tanúsított patológus (CI Jan) alacsony teljesítmény (100 ×) és az öt leginkább jellemző mezőket kiválasztott 400 × nagyítással. Az eredmények megszámoljuk kézzel fejeztük összegeként sejtek számának öt 400 × látómezőket minden terület minden mintának. Katalógusa

Cell Culture katalógusa

GC sejtek AGS, N87 (vásárolt az American Type Culture Collection (Manassas, VA)), MKN45 (vásárolt a Health Science Research Resources Bank (Osaka, Japán)) és TSGH (vásárolt a Bioresource Gyűjtemény és Kutató Központ (Hsinchu, Taiwan)) és a humán monocita sejt vonal THP-1 (vásárolt American Type Culture Collection (Manassas, VA)) sejteket tenyésztünk RPMI-1640 tápközegben (Life Technologies, Inc., Rockville, MD), amely 10% magzati borjúszérumot (FBS, Life Technologies, Inc. ) és 2 mM L-glutamint (Life Technologies, Inc.).

THP-1-sejteket oltottunk tenyészet csészékbe, és indukálódik a differenciálódni makrofágok által inkubálás 100 ng /ml 12-O-tetradekanoil-forbol-13 -acetát (TPA, Sigma-Aldrich) 24 órán át. A makrofágok háromszor mostuk RPMI közegben, amely 10% FBS-t, inkubáljuk ebben a tápközegben további 24 órán, hogy megszüntesse a hatását a TPA és inkubáljuk szérummentes közegben további 24 órán át. A betakarított és összegyűjtjük tenyészet-felülúszókat használjuk makrofág kondicionált közeg (CM) az előzőekben leírt. [5, 10]

proliferációs /életképesség teszt

GC sejteket szélesztettünk 96 mérőhelyes lemezeken, és együtt tenyésztett vagy anélkül makrofág CM. A proliferációs /életképességének határoztuk meg kolorimetriás assay 3- (4,5-dimetil-tiazol-2-il) -2,5-difenil-bromid (MTT) (Sigma-Aldrich).

In vitro invázió Assay

Az invázió vizsgálatot végzünk transzwell sejttenyészet kamrák (Millipore Corp., Billerica, MA). A behatoló sejteket megszámoltuk 400 × nagyítással, 10 különböző területeken minden betét. A kísérletet háromszor megismételtük.

RNS kivonása és az RT-PCR-rel

Miután stimuláció vagy anélkül makrofág CM 6 órán, GC sejteket összegyűjtöttük, és a teljes RNS-t extraháltuk a Trizol reagens készlet ( Invitrogen, Carlsbad, CA), a gyártó utasításai szerint. cDNS-t amplifikáltunk polimeráz-láncreakcióval (PCR) primerek felhasználásával az MMP7 (előre: 5'AGTCAATCCTGCCTTCTTAGCC, fordított: 5'GCTCCCACCTTCCCTCTTGG), CD44 (előre: 5'TGCCGCTTTGCAGGTGTAT, fordított: 5'TCCCATGTGAGTGTCTGGTAGC), a ciklin D1 ( előre: 5'CCCAGCCATGGAACACCA, fordított: 5'GGAGGGCGGATTGGAAATGA), c-myc (forward: 5'AAAGAAGGTGTTGGGGTCGG, fordított: 5'TGGCTCCCCCTGTTATTTGG) és GAPDH (forward: 5'GGGTGATGCAGGTGCTACTT, fordított: 5'GGCAGGTTTCTCAAGACGGA) .

nukleáris és citoplazmatikus frakcionálása

Miután stimuláció vagy anélkül makrofág CM 6 órán, GC sejteket lizáltuk 300 ul lízispufferben jégen és centrifugáljuk 5400 rpm-en. Felülúszót összegyűjtöttük, mint a citoszol frakciót. Nukleáris frakciókat összegyűjtjük, majd futni nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis (SDS-PAGE) a Western blot analízissel.

Western-blot-analízis

Miután stimulálás makrofág CM, a sejteket PBS-sel mostuk , kaparjuk RIPA pufferben és lecentrifugáltuk. A sejtlizátumokat vetettük alá 10% -os SDS-PAGE, és átvisszük egy polivinilidén-fluorid (PVDF) membránra (Millipore Corp.) A membránt próbáztuk primer antitestek β-catenin, Akt, ERK, JNK (SC1496, SC8312, SC154, SC474, santa Cruz Laboratories, santa Cruz, CA, USA), az MMP7 (MAB3322, Chemicon, Temecula, CA, USA), a CD44 (ab51037, ABCAM, Cambridge, MA, USA), a c-myc (GTX103436, GeneTex, Hsinchu Város Tajvan), a ciklin D1 (SC246, santa Cruz Laboratories, santa Cruz, CA), β-aktin (ab8226, ABCAM) HDAC1, p-Akt, a p-ERK, a p-JNK (SC7872, SC7985-R, SC7383, SC6254, santa Cruz Laboratories, santa Cruz, CA) és a másodlagos antitesttel (santa Cruz Biotechnology).

Immuncitokémia

Anti-teljes β-catenin antitestet használtunk a primer antitest, és az anti- egér immunglobulin G (IgG) Alexa 594 használtunk másodlagos antitesttel. Kenjük ezután rögzíthető a rögzítő tartalmazó közegben DAPI nukleáris festéshez. Katalógusa

lentivírus termelés és fertőzés katalógusa

Rövid hajtű RNS (shRNS) beszerezve az Országos RNSi mag Facility Academic Sinica (Taipei, Tajvan). A célpont szekvenciáját β-catenin shRNS 1 volt 5'- CCGGTCTAACCTCACTTGCAATAATCTCGAGATTATTGCAAGTGAGGTTAGATTTTTG-3 '; hogy a β-catenin shRNS 2 volt 5'-CCGGTTGTTATCAGAGGACT-AAATACTCGAGTATTTAGTCCTCTGATAACAATTTTTG-3 '. A lentivirális vektor és csomagolása vektorokat transzfektáljuk 293T csomagolás sejteket, a kalcium-foszfát transzfekció. Röviden, 293T sejteket szétosztottuk (10 ^{6) 10 cm 2 fogás előtt 1 nappal transzfekció. Ezután sejteket transzfektáltunk 10 ng shRNS vektorokat és 10 ug pCMVΔR8.91 (a csomagoláson vektor) és 1 ug pMD.G (a boríték vektor). Az elegyet 5 óra inkubálás transzfekciós tápközeget helyettesítettük friss tenyésztő tápközegben. Negyvennyolc órával később, lentivírus-tartalmú tápközeget gyűjtöttünk transzfekció és lecentrifugáltuk 1500 rpm-en 5 percig kiülepítjük a sejttörmeléket, a felülúszót átszűrjük egy 0,45 jim-es szűrőn, és a megcélzott sejteket fertőztünk friss lentivírus-tartalmú táptalajjal (kiegészítve 8 ng /ml polibren) 24 órán át.}

Statisztikai elemzés

Statisztikai analízis a klinikai jellemzők alkalmazásával végeztük χ ^{2 teszt és milyen mértékben a beszivárgás között a két csoport összehasonlították t-teszt. Túlélő betegekre vonatkozó görbéket a Kaplan-Meier-módszerrel és a statisztikai szignifikancia elemeztük a log-rank teszt. A p-érték kevesebb, mint 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

korrelációja immunhisztokémiai változókat klinikai és funkciók a GC betegeket katalógusa

Az immunhisztokémiai analízis egy citoplazmatikus CD68 festési mintázat makrofágok. CD68 + makrofágok eloszló peritumorális és intratumorális szövetekben, de csak ritkán szétszórtan a normál nyálkahártya (1A ábra-1C). A sűrűsége CD68 + makrofágok különösen magas volt a kóros daganat stádiuma 4 (pT4) tumorlézió képest pT1 elváltozások (1d). Annak megállapításához, a szövetség között a klinikai jellemzők és CD68 + makrofágok sűrűségével, rendbeli CD68 + makrofágok osztották azok felett és alatt az átlagos értékeket. A számú CD68 + makrofágok azt találtuk, hogy összefügg a tumor mélység és stádiumával (p = 0,001 és p = 0,043, sorrendben) (1. táblázat). Ez a megfigyelés azt sugallja, hogy a CD68 + makrofágok fontos lehet előmozdításában tumor invázió. A további elemzés Kaplan-Meier túlélési görbéket, hogy meghatározzák az egyesület a makrofágok túlélés (2. ábra). A sűrűsége CD68 + makrofágok a tumorszövetben negatívan kapcsolódó teljes túlélés (p = 0,0073). A betegek nagy számban tumoros CD68 + makrofágok rövidebb volt a teljes túlélés, mint az alacsony számú CD68 + makrofágok. Katalógusa

fokozott expressziója és erősebb jelet β-catenin észleltek az IHC-festéssel tumorokban. A legtöbb esetben a β-catenin expressziója elsősorban található a citoplazmában (3A ábra). Érdekes módon, erős nukleáris festődése β-catenin GC sejtek társított CD68 + makrofágok a tumoros léziók, különösen előtt a tumor invázió (3B ábra). A fenti eredmények alapján feltételeztük, hogy a makrofáginfiltrációt aktiválhatja β-catenin jelátvitel gyomor tumor sejtek, amelyek aztán valószínűleg vezet invázió a gyomor rosszindulatú. Katalógusa

szükségletét makrofágok tumor invázió a GC és aktivált makrofágindukált invázió GC Cells katalógusa

Ahhoz, hogy tovább erősítse a klinikai tünetek in vitro katalógusa, először együtt tenyésztett makrofágok különböző GC sejtvonalak (AGS, N87, MKN-45 és TSGH) . Minden GC vizsgált sejtvonalban lenne makrofágok vándorolnak és a makrofág-toborzó képesség függött fokú a malignitás a rákos sejtek által meghatározott a inváziós (ábra 4A). [11], hogy értékelje, hogy invazív vagy proliferációjának GC sejtek kell szabályozni makrofágok, AGS, N87, MKN45 és TSGH együtt tenyésztettünk és anélkül makrofágok vagy CM származó makrofág 24 órán és azok invázióját és proliferációját képességeit tesztelt. Minden sejttípus együtt tenyésztett makrofág vagy CM származó makrofág mutatott közel 2-szeres növekedést számának betörő sejtek (a negatív kontrollokénál, p < 0,05), amely nem kapcsolódik a proliferáció képesség (ábra 4B-4D ).

sejtmagba β-catenin GC sejtek aktivált makrofágok katalógusa

Mi végzett kísérlet in vitro hogy megértsék, hogy β-catenin jelátvitel részt makrofág aktivált GC sejt inváziót. Ábrán látható 5A, β-catenin immunreaktivitást találtak a nukleáris frakció N87 sejtek már 15 perc után makrofág CM kezelés, és az összeget a nukleáris β-catenin fehérje megnövekedett idő-függő módon. Összhangban a fenti megállapításokat, immunfluoreszcens megmutatta felhalmozódása és sejtmagi lokalizációját β-catenin GC sejteket együtt tenyésztettünk makrofág CM kezeletlen kontrollokhoz viszonyítva együtt tenyésztjük N87 (5B ábra). Ezek az eredmények határozottan arra utalnak, hogy az oldható faktorok származó makrofágok segít közvetíteni a felhalmozódása és nukleáris transzlokációját β-catenin GC sejtekben. Mi átmenetileg leütött β-catenin által shRNS és megállapította csökkent β-catenin fehérje expresszió 24 órán belül. Genetikai abláció β-catenin a N87 sejtekben nem, hogy növeljék az invazív képességét után makrofág CM kezelést. Ezzel szemben a nem-transzfektált és ellenőrzési shRNS nem volt változás a inváziós képesség N87 cellák alatt makrofág CM kezelés (ábra 5C). Az összeg a nukleáris β-catenin fehérje is növekedett az AGS és MKN45 sejteken makrofág CM kezelés (S1 ábra). Katalógusa

hatásai makrofág szóló kifejezése β-catenin és a Downstream gének N87 Cells

értékeltük hagyományos Wnt /β-catenin downstream gének MMP7, CD44, c-myc és a ciklin D1 Meghatározni, ha azok által aktivált makrofágokban. Az mRNS és fehérje szint MMP7, CD44 és c-myc gén szignifikánsan emelkedett N87 inkubált sejtek makrofágok CM és a szintek ciklin D1 enyhén emelkedett (6A). Bekéri csökkent invázió tevékenység leütéssel β-catenin, MMP7, CD44 és ciklin D1, de nem c-myc izolátumok leszabályozza (6B). Megerősíteni a kapcsolatát invázió képesség és MMP7 és CD44, teszteltük a képességét semlegesítő ellenanyag blokkolja MMP7 és CD44 tevékenységet. Invasion képessége jelentősen veszélybe előkezelés 2,5 ug /ml anti-MMP7-val és 10 ug /ml anti-CD44 (ábra a 6C) rendre, ami arra utal bevonása mindkét gén makrofág-aktivált GC sejt invázió. Megtaláltuk a fehérje szint CD44 és ciklin D1 gén nőtt a többi GC sejtvonalak (AGS és MKN45) inkubáltuk makrofág CM de MMP7 és c-myc nem szignifikáns változott (S2 ábra). Katalógusa

Egyéb arról számoltak be, egy lehetséges metszéspontja a MAPK útvonal a Wnt /β-catenin jelátviteli. [12, 13] ezért végeztünk az idő függvényében vizsgálva, és megállapította, hogy csak foszfo-Akt és foszfo-ERK expressziót túlszabályozott amikor kezelt makrofág CM (S3A ábra). Annak igazolására, a kölcsönhatás a Akt /ERK útvonal és β-catenin, mi előkezelt sejtekben sem a ERK inhibitor (U0126), vagy az Akt inhibitor (LY294002). Csökkenése β-catenin transzlokáció a sejtmagba csak találtak kezelt sejtekben a Akt inhibitor, de nem az ERK-inhibitor, jelezve, makrofág-avtivated Wnt /β-catenin jelátviteli lehet szabályozni Akt (S3B ábra). GC-sejtek, az AKT hatás úgy tűnik, hogy uralja a makrofág aktivált Wnt /β-catenin jelátviteli. Korábbi vizsgálatok azt is javasolta, hogy a TNF-α által termelt makrofágok kulcsfontosságú közvetítő gyulladás és esetleg elősegíti β-catenin aktivitás a tumorsejtekben. Azt találtuk, hogy kihasználva a neutralizáló antitestek ellen a TNF-α az N87 elnyomni β-catenin aktiválás alatt kitett makrofágok CM (S4 ábra). Katalógusa

Vita katalógusa

A mikrokörnyezet a tumor kritikus fontosságú meghatározó leukocita funkció és fenotípus. Ellentmondásos adatok azt mutatják, daganatellenes vagy protumorigenic funkciók makrofágok különösen azonban adataink azt jelzi, makrofágok játszanak szerepet protumorigenic GC betegeknél. A legtöbb daganatok, a TAM-ok előállítására számtalan tényezők, amelyek elősegítik a tumor növekedését és az angiogenezist. [14, 15] A mértéke makrofág beszűrődése a rákos sejt fészek is jelentős előrejelzője a túlélés GC betegeknél. [16-18] IHC megállapítások ebben a vizsgálatban egyértelműen bizonyítják, hogy a makrofágok sűrűsége a GC szövetben összefüggésben van a mértéke klinikai stádium (különösen a tumor a [T]) fázisban és a túlélés a betegekben. A jelenlegi vizsgálatok azt is jelenti, hogy a makrofágok játszhat káros szerepet fejlett GC. Ez az eredmény összhangban van a tanulmányok, amelyek arra utalnak, hogy az immunrendszer mikrokörnyezet lehet protumoral helyett tumorellenes ellenére is ellentmondó adatok. [19, 20] katalógusa

A nukleáris felhalmozódása β-catenin számoltak be mintegy egyharmada a gyomor adenokarcinómák, mind intesztinális és diffúz típusú. [18] β-catenin egy 92 kDa-os fehérje, amely funkciókat közvetlenül a sejt-sejt adhéziót. [21] mutációi β-catenin és az aberráns expresszióját annak fehérje hozták összefüggésbe a tumor invázió és metasztázis. [22, 23] a mi IHC megállapítások β-catenin volt található a sejtmagban az invazív elülső tumorsejtek, de nem a legtöbb központi területén a primer tumorok, ahol lokalizálódik a plazma membrán . Az ilyen megfigyelések is megtalálható a kolorektális tumor példányok. [24] Wnt /β-catenin aktiválás rákos sejtekben található invazív elülső Feltételezték, mint egy fontos lépés a tumor növekedését és progresszióját. [25]

Érdekes módon azt is megállapította, β-catenin a sejtmagban helyezkedett el a tumor sejtek makrofágok található szomszédosán, ami arra utal egy lehetséges közötti kapcsolat a makrofágok és a sejtmagba β-catenin a tumorsejtekben. β-catenin az invazív előtt GC részben magyarázza kölcsönhatások tumor mikrokörnyezetében. Igazoltuk in vitro katalógusa hogy a makrofágok növelik az invázió képességét GC sejteket. Használata immunfluoreszcens konfokális mikroszkópiával, meghatároztuk lokalizáció és felhalmozódása a β-catenin a sejtmagban a kezelt makrofágokban. Így azt gyanítja, hogy citokinek makrofágok által okozott β-catenin sejtmagba GC sejtekben, így növelve azok invázió képességét. Az invazív elülső epiteliális tumorok képvisel mikrokörnyezet, amelyben makrofágok kölcsönhatásba parenchymás sejteket termelő extracelluláris mátrix és a szekretáló citokinek és növekedési faktorok, hogy a helyben elősegíti a sejtek proliferációját és invázióját. [26, 27] azonban az általunk vizsgált, fokozott β-catenin kifejezés in vitro
nem változtatta proliferációt, jelezve, hogy az önmagában nem elegendő ahhoz, hogy fokozza a tumor rosszindulatú. Ezt a megállapítást is kimutatták korábban, hogy a β-catenin csak elősegíti adhéziós helyek alkotnak fokálisan és stimulálja irányított migrációs és behatolás a vastagbélrák sejtek, de nem vesz részt a proliferáció a gyomor és a prosztata rákos sejteket. [28-30] Mindazonáltal, a stromális sejt parakrin moduláció Wnt jelátvitel hámsejtek valószínűleg koordinálja bonyolultabb hálózati támogatása és gátló tényezők váladék. A downstream hatásai különböző szintű Wnt /β-catenin jelátvitel (és különösen azokat, amelyek a sejtburjánzást, EMT és a helyi invázió) vannak, mint a még kevéssé ismert. β-catenin a sejtmagba, ahol kötődik a transzkripciós faktorok, a T-sejt-faktor /limfocita fokozó faktor (TCF /LEF) család, és kezdeményezi a célgének transzkripcióját például cyclin D1 katalógusa, C- myc katalógusa és MMP-7 katalógusa [31, 32] részt proliferáció, tumor invázió és metasztázis. [33, 34] Eredményeink azt sugallják, hogy a jelátviteli utak, amelyeken keresztül a makrofágok indukáló β-catenin is indukálhat a célgének expresszióját. Összhangban a korábbi munkája, [5] MMP-7 és CD44 két PCR array követően azonosított kokultivációt makrofágok differenciáltan expresszálódó gének kapcsolódó áttéte GC sejteket. Lebomlás Az extracelluláris mátrix által közvetített mátrix metalloproteinázok (MMP-k) döntő eszköze alatt tumor invázió és metasztázis. A bontást kell létrehozni mikrokörnyezet, amely támogatja a növekedést az elsődleges tumorok és áttétek. A β-catenin /TCF komplex ezt követően aktiválja a nagyszámú onkogének, beleértve a VEGF, a c-myc, c-jun, fra-1 és a gasztrin, amelyek szintén részt vesznek a makrofág aktivált β-catenin downstream eseményeket. [35]

a különböző útvonalak valószínűleg modulálja a Wnt /β-catenin útvonal és szabályozásának β-catenin jelátvitel lehet hasonlóképpen bonyolult. A legújabb tanulmányok megállapították, hogy a makrofág CM kiváltja a ERK útvonal és Wnt aktiválja ERK az endoteliális sejtekben. [36, 37] Itt azt találtuk, hogy a makrofágok indukálnak foszforilációja egyaránt ERK és AKT GC sejtekben. Kimutattuk, hogy a kezelés AKT inhibitor, de nem ERK inhibitor csökkenti β-catenin transzlokáció. Ezek az eredmények azt jelzik, hogy az Akt játszik szerepet makrofág aktivált β-catenin jelátviteli gyomor sejttípusokban.

Következtetések

Együttesen a klinikai adatok arra utalnak, hogy a makrofág infiltráció összefüggésben van a megnövekedett minőségű és rosszabb prognózisával GC átesett betegek reszekcióra. Makrofágok indukálhat GC invazivitásának aktiválásával a β-catenin útvonalon. Ennek megfelelően a elnyomása makrofág infiltráció és elnyomása aktiválása a β-catenin útvonal jelentenek potenciális stratégiák kezelésére GC.

Támogató információ
S1 ábra. Hatása makrofág CM on β-catenin útvonalon.
Β-catenin felhalmozódik sejtmagban kezelés után makrofág CM 30 percig AGS és MKN45 sejtekben.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0134122.s001 katalógusa (TIFF) hotelben S2 ábra. Hatása makrofág CM fehérje kifejeződését β-catenin down-stream gének AGS és MKN45 sejteket. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0134122.s002 katalógusa (TIFF) hotelben S3 ábra. (A) A makrofág CM indukált AKT és ERK aktiváció N87 sejtekben. (B) N87 sejteket előre kezeltük 10 nM, a β-catenin-inhibitorok: LY294002 vagy U0126 1 óra, majd tenyésztjük jelenlétében makrofág CM további 1 órán át.
Akt, ERK és a β-catenin fehérje expresszióját határoztuk meg Western blot. katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0134122.s003 katalógusa (TIFF) hotelben S4 ábra. Semlegesítő antitest ellen a TNF-α.
N87 sejtek jelenlétében makrofág CM 24 órán át előkezelt vagy anélkül a TNF-α inhibitor 1 órán át.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0134122.s004 katalógusa (TIFF) hotelben

• PLoS One: PRR11 prognosztikai marker és lehetséges Oncogene a betegek Gyomor Cancer
• PLoS One: nyirokcsomó-metasztázis, a Unique független prognosztikai faktor a korai Gyomor Cancer