PLoS ONE: infiltraciju makrofaga inducira rak želuca invazivnosti aktiviranjem β-katenina stazu

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Iako je dokazano da aktivirani makrofagi djeluju na upalne mikro okolinu za promicanje želučane tumorigenezi preko β-katenina signalizacije, efekti β-katenina signalizacije na želučanu stanica raka metastaza, te odnos tih stanica s okolnim tumora povezana makrofagi nisu izravno proučavati. pregled

Metode pregled

Imunohistokemijsko bojanje je zaposlen za analizu 103 pacijenata. Invazija test je korišten za procjenu odnosa između makrofaga i želuca stanica raka. P-katenina dobitak-of-funkcije i gubitak-of-funkcije pristupa su izvedeni. korišteni su za procjenu mehanizma regulacije β-katenina u želučanih stanica raka, Western hibridizacija i lančanom reakcijom polimeraze s reverznom transkripcijom. pregled

Rezultati

Povećana gustoća makrofaga bio povezan s uznapredovalom stadiju i slabe opstanak , Želučani stanične linije raka ko-kultivirani s makrofagima uvjetovanog medija pokazala povećan nuklearne nakupljanje beta-katenina i povećana invaziju sposobnosti. AKT ali ne ERK reguliranu β-katenina translokacije. MMP7 i CD44, i β-katenina nizvodno geni, bili su uključeni u invaziji želučane stanice raka makrofaga aktiviraju. Pregled

Zaključak (i) pregled

Zajedno, klinički podaci pokazuju da makrofaga infiltracija je u korelaciji s povećan stupanj i loša prognoza za pacijente s rakom želuca koji su se podvrgnuli radikalna resekcija. Makrofagi mogu izazvati invazivnosti aktiviranjem β-katenina put

Citation. Wu MH, Lee WJ, Hua KT, Kuo ML, Lin MT (2015) infiltraciju makrofaga izaziva rak želuca invazivnosti aktiviranjem P-katenina stazu , PLoS ONE 10 (7): e0134122. doi: 10,1371 /journal.pone.0134122 pregled

Urednik: Fabrizio Mattei, Istituto Superiore di Sanita, ITALIJA pregled

Primljeno: 16. rujna 2014.; Prihvaćeno: 6. srpnja 2015; Objavljeno: 30. srpnja 2015 pregled

Copyright: © 2015 Wu i sur. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Podaci Dostupnost: sve relevantne podatke su u radu i njegove popratne podatke datoteka pregled

Financiranje:.. Ovaj rad je podržan od strane potpore iz Nacionalnog vijeća za znanost, Tajvan (NSC 98-2314-B-002-055-MY2) pregled

suprotstavljenih interesa: autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca (GC) je među najčešćim oblicima raka diljem svijeta, a gotovo dvije trećine takvih pacijenata će umrijeti od. bolesti. [1] GC je usko povezan s Helicobacter pylori infekcija pregled, što dovodi do kronične upale, [2] Ovaj upalni mikrookoliš karakterizira prisutnost domaćina leukocita sa uglavnom makrofagima u obje nosive strome i tumorsko tkivo. [3] Istraživanja pokazuju da tumor-povezani upalne reakcije i lokalne i sistemske, važni su neovisni čimbenici u progresiji tumora i metastaza. [4, 5] Međutim, veza između tih molekularnih medijatora i kronične upale se nije u potpunosti razumio . pregled

Aktivacija Wnt put je važan korak u procesu karcinogeneze. Mutacije uz Wnt-β-katenina put pojavljuju se u oko 90% slučajeva kolorektalnih i hepatocelularnim karcinomima i u oko 30% GCS, [6, 7] Dodatno, faktor tumorske nekroze-α (TNF-α) koji je izveden iz aktiviranih makrofaga potiče β-katenina aktivnost u GC stanicama. [8, 9] Međutim, bez obzira na dokaz da aktivirani makrofagi djeluju na upalnu mikrookolini promovirati želučane tumorigenesis preko β-katenina signaliziranje učinke aktivnog β-katenina signalizacije na GC stanica metastazama i odnos tih stanica s okolnim tumora povezana makrofagima (TAMs) nisu izravno studirao. pregled

na temelju gore navedenih nalaza, pretpostavili smo da je β-katenina put također mogu biti uključeni u regulaciju makrofaga izazvanog GC metastaza. U ovom istraživanju, prvo smo ispitali gustoću uvukle makrofaga i ekspresiju P-katenina u želučanog tkiva karcinoma pomoću imunohistokemije (IHH). su demonstrirali kliničkopatološkim karakteristike želučanog karcinoma i prognozu. Nadalje, utvrdili smo da makrofagi izazivati ​​nuklearne translokacije beta-katenina i poboljšati invazije sposobnost GC stanicama. Naši rezultati pokazuju i dalje podržavaju važnu vezu između TAM i njegove nizvodne signalne posrednika, beta-katenina, u reguliranju GC metastaza. Pregled

Materijal i metode

Pacijenti i Primjerci pregled

istraživanje je odobreno od strane odbora Institutional Review Board i ljudska etika National Taiwan University Hospital. Pismeni pristanak za korištenje uzoraka za istraživačke svrhe, koji je dobiven od svih bolesnika prije operacije. Pacijent informacije anonimne i identifikacijski prije analize. Pregled

Studija naknadno upisao 205 bolesnika s GC koja je primila radikalne kirurške resekcije na Odsjeku za opću kirurgiju dijagnoze, National University Tajvan od siječnja 1998. do siječnja 2002. Od tih, 102 pacijenata koji nisu imali follow-up podataka, ili koji su umrli od Perioperacijska komplikacija su isključeni, a preostali 103 pacijenata bili su uključeni u analize. Kliničkopatološkim varijable su klasificirani prema TNM klasifikaciji (5. izdanje, 1997) i obilježja sažeto su prikazani u Tablici 1. Ukupno preživljenje (OS) je definiran kao interval između operacije i smrti, ili između operacije i posljednji nastavak za preživljavanje pacijenata.

monoklonskih protutijela i IHC pregled

resected primjerci GC su fiksirani u formalinu i uklopljene u parafin. Rezovi su ispitani na TAM infiltriranje i P-katenina upotrebom monoklonskih anti-CD68 protutijela (klon KP1, DakoCytomation, Glostrup, Danska) i monoklonska β-katenina antitijela (klon 15B8, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), redom.

Procjena imunobojanja Netlogu

Da bi se procijenila gustoća tkiva-infiltracije CD68 + makrofagima, sekcije tkiva su probrane zajednica ovjerena patologa (CI Jan) na male snage (100 ×) i pet najreprezentativniji polja su izabrani na 400 × uvećanja. Rezultati su računati ručno, a izražene su kao zbroj broja stanica u pet 400 × mikroskopskih polja za svako područje svakog uzorka. Pregled

Kultura Cell pregled

GC stanice AGS, N87 (kupljen iz American Type Culture Collection (Manassas, VA)), MKN45 (kupljen od Health Science Research potencijala banke (Osaka, Japan)) i TSGH (kupljen od Bioresource prikupljanje i Research Center (Hsinchu, Taiwan)) i humane stanične linije THP-1 (dobavljene iz American Type Culture Collection (Manassas, VA)) stanice su uzgojene u RPMI-1640 mediju (Life Technologies, Inc., Rockville, MD) i 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS, Life Technologies, Inc. ) i 2 mM L-glutamina (Life Technologies, Inc.). pregled

THP-1 stanice su posađene u zdjelice za kulturu i inducirane za diferencijaciju u makrofagima inkubacijom s 100 ng /ml 12-tetradekanoilforbol-13 acetat (TPA, Sigma-Aldrich) tijekom 24 h. Makrofagi se isperu tri puta s RPMI mediju koji sadrži 10% FBS i inkubirane u ovom mediju na još 24 sata kako bi se uklonili učinak TPA i inkubira u mediju bez seruma za još 24 sata. Prikupljene i Skupljene su supenatanti kultura koristi kao makrofaga uvjetovani medij (CM) kako je prethodno opisano. [5, 10] pregled

proliferacije /Vijabilnost Test pregled

GC stanice su posađene u pločice s 96 jamica i ko-kultivirane sa ili bez makrofaga CM. Proliferaciju /vijabilnost određena je kolorimetrijski upotrebom 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolijevog bromida (MTT) (Sigma-Aldrich). Pregled

In Vitro invazije pregled

test invazije je provedeno pomoću transjažičnih komora stanične kulture (Millipore Corp., Billerica, MA). Napadačkih stanice su prebrojane na 400 × uvećanja u 10 različitih područja za svaki umetak. Pokus je ponovljen tri puta. Pregled

RNA ekstrakcija i RT-PCR pregled

Nakon stimuliranja, uz ili bez makrofaga CM tijekom 6 h, GC stanice su skupljene, a ukupna RNA ekstrahirana pomoću trizolne Reagent ( Invitrogen, Carlsbad, CA) u skladu s uputama proizvođača. cDNA je lančanom reakcijom polimeraze (PCR) pomoću primera za MMP7 (naprijed: 5'AGTCAATCCTGCCTTCTTAGCC, obrnuti 5'GCTCCCACCTTCCCTCTTGG), CD44 (naprijed 5'TGCCGCTTTGCAGGTGTAT, obrnuti 5'TCCCATGTGAGTGTCTGGTAGC), ciklin D1 ( naprijed 5'CCCAGCCATGGAACACCA, obrnuti 5'GGAGGGCGGATTGGAAATGA), c-myc (naprijed 5'AAAGAAGGTGTTGGGGTCGG, obrnuti 5'TGGCTCCCCCTGTTATTTGG) i GAPDH (naprijed 5'GGGTGATGCAGGTGCTACTT, obrnuti 5'GGCAGGTTTCTCAAGACGGA) . pregled

jezgri i u citoplazmi frakcioniranja pregled

Nakon stimuliranja, uz ili bez makrofaga CM 6 sati, GC stanice su lizirane u 300 ul pufera za lizu na ledu i centrifugirati na 5400 okretaja u minuti. Supernatant je sakupljen kao citosolnog frakcije. Nuklearne frakcije su skupljene, a zatim se izvoditi u natrij dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE) za Western blot analizu. Pregled

Western blotting analiza pregled

Nakon stimulacije makrofaga CM, stanice su isprane s PBS-om , struganje u Ripa tampon i centrifugira. Stanični lizati su podvrgnuti 10% SDS-PAGE i prenesen u polivinilidenfluorid (PVDF) membranu (Millipore Corp.) Membrane su ispitane upotrebom primarnih antitijela na P-katenina, AKT, ERK, JNK (SC1496, SC8312, SC154, SC474, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA, USA), MMP7 (MAB3322, Chemicon, Temecula, CA, USA), CD44 (ab51037, Abcam, Cambridge, MA, USA), c-myc (GTX103436, GeneTex, Hsinchu City Tajvan), ciklin D1 (SC246, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA), β-aktin (ab8226, Abcam), HDAC1, p-AKT, p-ERK, p-JNK (SC7872, SC7985-R, SC7383, SC6254, Santa Cruz Laboratories, Santa Cruz, CA) i sekundarnih protutijela (Santa Cruz Biotechnology), pregled

imunocitokemiju pregled

protiv ukupno β-katenina antitijela korištena je kao primarno antitijelo i anti mišji imunoglobulin G (IgG) Alexa 594 je korišten kao sekundarno antitijelo. Prekrivene su potom montirati pomoću noseće medij koji sadrži DAPI za nuklearnu bojenje. Pregled

lentivirasni proizvodnja i infekcije pregled

Kratki ukosnica RNA (shRNAs) kupljeni su od Nacionalnog RNAi jezgre objekta u akademskom Sinica (Taipei, Tajvan). Meta sekvencija P-katenina shRNA 1 je bio 5'CCGGTCTAACCTCACTTGCAATAATCTCGAGATTATTGCAAGTGAGGTTAGATTTTTG-3 '; da P-katenina shRNA 2 bio je 5'-CCGGTTGTTATCAGAGGACT-AAATACTCGAGTATTTAGTCCTCTGATAACAATTTTTG-3 '. Lentivirusni vektor i ambalaže vektori su bili transfektirani u 293T pakiranje stanice transfekcijom kalcij fosfatom. Ukratko, 293T stanice su podijeljene (10 ^{6) u 10 cm 2 jela 1 dan prije ubacivanja. Zatim, stanice su transfektirane s 10 ug shRNA vektora i 10 ug pCMVΔR8.91 (ambalaža vektor) i 1 ug pMD.G (kuverta vektor). Nakon 5 sati inkubacije transfekcijski medij je zamijenjen sa svježim medijem za kulture. Četrdeset osam sati kasnije, medij lentivirus sadržava je sakupljen iz transfekcije te centrifugira na 1500 okretaja u minuti tijekom 5 minuta do pelete staničnog ostatka, a supernatant je filtriran kroz 0,45 um filter i ciljne stanice su inficirane sa svježim lentivirus sadržava medij (uz dodatak 8 ug /ml polibrena) tijekom 24 sata. pregled}

Statistička analiza pregled

Statistička analiza kliničkih značajki izvršena je pomoću χ ^{2 testa i stupanj infiltracije između dvije skupine je uspoređen korištenjem t-testa. Krivulje preživljavanja su konstruirane pomoću Kaplan-Meier metodi i analizirana je statistička značajnost pomoću log-rank testa. P-vrijednost manja od 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled}

Rezultati

Korelacija imunohistokemijska varijable s kliničko Značajke u GC pacijenata

imunohistokemijska analiza pokazala citoplazmatski CD68 bojenje uzorak makrofaga. CD68 + makrofagi se distribuiraju u cijeloj peritumorskih i intratumoralno tkiva, ali samo rijetko raspršena u normalnoj sluznici (Slika 1A-1C). Gustoća CD68 + makrofaga bio je posebno visok u patološko tumora Faza 4 (pT4) tumorskim lezijama u usporedbi s pT1 lezija (Slika 1D). Da bi se odredila povezanost između kliničkih karakteristika i CD68 + makrofaga gustoće, grofovima CD68 + makrofaga su bili podijeljeni u one iznad i ispod srednje vrijednosti. Broj CD68 + makrofaga nađeno je da je povezan s dubinom tumora i stadiju (p = 0.001 i p = 0.043, pojedinačno) (tablica 1). To opažanje sugerira da CD68 + makrofagi mogu biti važni u promociji invazije tumora. Za daljnju analizu, Kaplan-Meier krivulje preživljavanja crtano je odrediti povezanost makrofaga s preživljavanjem (Slika 2). Gustoća CD68 + makrofaga u tkivu tumora negativno povezana s ukupnom preživljavanju (p = 0,0073). Bolesnici s visokim brojem tumorskih CD68 + makrofaga imali kraće ukupno preživljenje od onih s niskim brojem CD68 + makrofaga. Pregled

Povećana ekspresija i jači signal P-katenina promatrane su IHC bojenja u tumorima. U većini slučajeva, izraz β-katenina prvenstveno nalazi u citoplazmi (slika 3A). Zanimljivo, jaka nuklearna bojanje β-katenina GC stanica povezano je s CD68 + makrofaga u tumorskim lezijama, naročito ispred tumorske invazije (slika 3B). Na temelju tih rezultata, pretpostavili smo da infiltraciju makrofaga može aktivirati β-katenina signalizaciju u želučanim tumorskih stanica, koje se onda vjerojatno dovodi do invazije u želučanoj malignosti. Pregled

Zahtjev makrofaga za tumorske invazije u GC i aktivirano makrofaga izazvan Invazija GC stanicama pregled

Kako bi dodatno potvrdili naše klinički nalaz In vitro pregled, prvo smo ko-kultivirani makrofagi s različitim GC staničnih linija (AGS, N87, MKN-45 i TSGH) , Svi GC ispitanih staničnih linija će privući makrofage migraciju i makrofaga zapošljavanje sposobnost ovisila je o stupnjem malignosti stanicama raka kao što je određeno preko njihovih invazivnosti (Slika 4A). [11] Kako bi se procijenilo da li invazivnosti ili proliferacije GC stanicama mogu biti regulirano od strane makrofaga, AGS, N87, MKN45 i TSGH su ko-kultivirane sa i bez makrofagima ili CM iz makrofaga 24 h, a njihove invazije i proliferacije sposobnosti testirane. Sve vrste stanica ko-kultivirani s makrofagima ili CM iz makrofaga pokazali blizu 2-struko povećanje broja invazivnih stanica (u usporedbi s negativnim kontrolama, p 0.05), koja nije povezana s njihovom proliferacije sposobnošću (Slika 4B-4D ). pregled

Nuklearna Premještaj p-katenina u GC stanice aktivirani makrofagi

proveli smo eksperiment in vitro shvatiti da li β-katenina signalizacija bila uključena u invaziji GC stanica makrofaga se aktivira. Kao što je prikazano na slici 5A, β-katenina imunoreaktivnost je pronađena u nuklearnom frakciji N87 stanica već u 15 minuta nakon makrofaga CM obrade i količinu nuklearnog β-katenina proteina povećana na vremenski ovisan način. U skladu s tim nalazima, imunofluorescencija pokazala akumulacije i nuklearnu lokalizaciju beta-katenina u GC stanice ko-kultiviranih s makrofaga CM u usporedbi s kontrolama cocultured u N87 (Slika 5b). Ovi rezultati jasno ukazuju da su topivih faktora izvedene iz makrofaga pomoć posreduju nakupljanje nuklearne translokacije P-katenina u GC stanicama. Mi prolazno srušen P-katenina by shRNA i pronašao smanjena ekspresija β-katenina proteina unutar 24 sata. Genetska ablacija P-katenina u N87 stanicama ne povećaju svoju invazivni sposobnost nakon makrofaga CM liječenja. Suprotno tome, ne-transfektirana kontrolu shRNA nema promjene u invazivnom mogućnosti u N87 stanicama pod makrofaga CM liječenja (Slika 5C). Količina nuklearnog β-katenina proteina također se povećao u AGS i MKN45 stanice nakon makrofaga CM liječenja (S1 sl). Pregled

Efekti makrofaga na ekspresiju P-katenina i nizvodnog gena u N87 stanica

procijenjena je tradicionalna Wnt /β-katenina nizvodno gene MMP7, CD44, c-myc i ciklin D1 Utvrđivanje ako su aktivirani makrofagi. MRNA i proteina nivoi MMP7, CD44 i c-myc gena sve značajno povećana u stanicama inkubiranim sa N87 makrofaga CM i razine ciklina D1 blago povećana (Slika 6A). Nakon što je navelo smanjena invazije aktivnost iz rušeći P-katenina, MMP7, CD44 i ciklin D1, ali ne i c-myc pokazala protein-dolje reguliranje (Slika 6b). Za potvrdu odnos između invazije sposobnosti i MMP7 i CD44, mi smo testirali sposobnost neutralizacije protutijela da blokira MMP7 i CD44 aktivnost. Invazija sposobnost značajno ugrožena predobradom s 2.5 ug /ml anti-MMP7 i 10 ug /ml anti-CD44 (slika 6C) respektivno, što ukazuje na sudjelovanje oba gena u invaziji GC stanica makrofaga aktiviran. Našli smo se razina proteina od CD44 i ciklin D1 gena su povećani u drugim GC staničnim linijama (AGS i MKN45) inkubiraju s makrofaga cm ali MMP7 i c-myc nisu značajno promijenili (S2 sl).

Ostalo izvijestili su mogući presjek MAPK putanje s Wnt /β-katenina signalnog puta. [12, 13] stoga su studiju vrijeme tečaja i otkrili da je samo fosfo-AKT i fosfo-ERK izraz su regulira prema gore kada se tretira s makrofaga CM (S3A sl). Potvrditi interakcije AKT /ERK staze i P-katenina, prethodno obrađene su stanice s bilo inhibitora ERK (U0126) ili inhibitora AKT (LY294002). Smanjenje β-katenina translokaciju u jezgru samo je pronađena u stanicama koje su tretirane s inhibitorom AKT, ali ne i inhibitora ERK ukazuje makrofaga-avtivated Wnt /β-katenina signalni put može biti regulirana AKT (S3B sl). U GC stanicama, AKT učinak, kako se čini dominantna u makrofage aktivnim Wnt /β-katenina signalni put. Prethodna istraživanja su također predložili da je TNF-α proizvode makrofazi je ključni medijator upale i mogu promicati β-katenina aktivnost tumorskih stanica. Otkrili smo da je korištenje neutraliziranje antitijela protiv TNF-a u N87 aktivacije za suzbijanje β-katenina pod izlaganja makrofaga CM (S4 sl). pregled

Rasprava pregled

mikro okolini tumora je od presudne važnosti u određivanje funkcije leukocita i fenotip. Sukobljenih podataka pokazala antitumorigenic ili protumorigenic funkcija na makrofagima posebno, međutim, naši podaci pokazuju makrofagi igraju protumorigenic ulogu u GC pacijenata. U većini tumora, TAMs proizvesti bezbroj faktora koji potiču rast tumora i angiogeneze. [14, 15] Stupanj makrofaga infiltracije u stanice raka gnijezdo je također značajan prediktor preživljenja u GC pacijenata. [16-18] IHC nalaz u ovoj studiji jasno pokazuju da je gustoća makrofaga u GC tkiva u korelaciji sa stupnjem kliničke faze (posebno u tumoru [T] stage) i preživljavanje u bolesnika. Sadašnje studije također pokazuju da su makrofagi mogu igrati štetne uloge u naprednom GC. Ovaj nalaz je u skladu sa studijama koje sugeriraju da je imunološki mikrookoliša može biti protumoral nego antitumorskih, unatoč nekim sukobljenih podataka. [19, 20] pregled

Nuklearna nakupljanje beta-katenina je prijavljen u otprilike jednoj trećini želučanog adenokarcinoma, i crijevni i difuzne tipova. [18] β-katenina je 92 kDa protein koji djeluje direktno na stanice do stanične adhezije. [21] Mutacije P-katenina i ekspresiji svog proteina uključen je u invazija tumora i metastaza. [22, 23] u našim IHC nalazima β-katenina se nalazi u jezgri na invazivne ispred tumorskih stanica, ali ne i u većini središnjem dijelu primarnih tumora, gdje je localizes na plazma membrani , Takva promatranja se također mogu naći u kolorektalnog tumora uzorcima. [24] Wnt /β-katenina aktivacije u stanicama raka koji se nalazi na prednjoj invazivne Pretpostavlja kao važan korak rasta i kod napredovanja tumora. [25] pregled

zanimljivo, također našli P-katenina nalazi u jezgri stanica tumora s makrofagima nalazi u blizini, što ukazuje na moguću vezu između makrofaga i nuklearne translokacije beta-katenina na tumorske stanice. β-katenina na invazivne ispred GCS djelomično objašnjava interakcija mikro tumora. Potvrdili smo in vitro pregled koji makrofagi povećavaju invazije sposobnost GC stanicama. Metodom imunofluorescencije konfokalne mikroskopije utvrdili smo lokalizaciju i nakupljanje beta-katenina u jezgri u tretiranih makrofaga. Dakle, mi sumnjamo da citokini koje luče makrofagi izazvati β-katenina nuklearne translokacije u GC stanicama, čime se povećava njihova invazija sposobnosti. Invazivni prednji epitelnih tumora predstavlja mikro okolinu u kojoj su makrofagi interakcije s parenhimskim stanicama proizvodnjom izvanstaničnog matriksa i izlučuju citokine i čimbenike rasta koji lokalno pospješuju proliferaciju stanice i invaziju. [26, 27], ali u našem istraživanju, povećana β-katenina izraz In vitro pregled nije promijenila proliferaciju, što znači da sama po sebi, nije dovoljna za povećanje tumora malignosti. Ovaj nalaz je također ranije pokazali da β-katenina promovira samo vezna mjesta za formiranje fokalno i potiče smjera migraciju i invaziju stanica raka debelog crijeva, ali ne sudjeluje u širenju želuca i prostate stanice raka. [28-30] Ipak, strome stanicu parakrina modulacija Wnt signaliziranja u epitelnim stanicama vjerojatno koordinira složenije mreže promicanja i inhibira izlučivanje faktora. Nizvodnom učinci različitih razina Wnt /β-katenina signalizaciju (a posebno one koji utječu na staničnu proliferaciju, EMT i lokalna invazija) su kao od još slabo razumije. β-katenina translocira se u jezgru gdje se veže na transkriptornih faktora faktora T faktor stanica /limfocita pojačivač (TCF /LEF) obitelji i inicira transkripciju ciljnih gena, kao što su ciklin D1 pregled, c- myc pregled i MMP-7 pregled [31, 32] koji su uključeni u proliferaciju, tumorske invazije i metastaziranja. [33, 34] Naši rezultati sugeriraju da su signalni putevi kroz koje makrofaga izazivati ​​P-katenina djelovati na ekspresija ciljnih gena. U skladu s našim ranijim radovima [5] MMP-7 i CD44 su dva PCR polja identificirani nakon sukulture s makrofagima što su različito izraženi gena povezanih s metastazama u GC stanicama. Degradacija ekstracelularnog matriksa posredovane matričnim metaloproteinazama (MMP) je ključni mehanizam za tumorskoj invaziji i metastaziranju. Takva razgradnje je potrebno stvoriti mikroklima koja podržava rast primarnog tumora i metastaza. Β-katenina /TCF kompleks se zatim aktivira veliki broj onkogena, uključujući VEGF, c-myc, c-jun, fra-1 i gastrin koji mogu također biti uključeni u makrofaga aktivirani β-katenina kasnijih dogođaja. [35]

različitim putovima vjerojatno modulirati Wnt /β-katenina put i regulacija β-katenina signalizacije mogu biti slično komplicirano. Nedavne studije su otkrili da makrofaga CM aktivira ERK staze i Wnt aktivira ERK u endotelnim stanicama. [36, 37] Ovdje, otkrili smo da su makrofagi inducirati fosforilaciju oba ERK i Akt u GC stanicama. Pokazali smo da je liječenje s AKT inhibitora, ali ne i inhibitora ERK smanjuje β-katenina translokacije. Ovi rezultati pokazuju da Akt igra ulogu u makrofaga aktiviraju β-katenina signala u vrste želučanih stanica. Pregled

Zaključci

Zajedno, klinički podaci pokazuju da makrofaga infiltracija u korelaciji s povećanim razreda i lošijom prognozom za GC pacijenti koji su podvrgnuti radikalne resekcije. Makrofagi mogu izazvati GC invazivnosti aktiviranjem β-katenina put. Prema tome, suzbijanje infiltraciju makrofaga i suzbijanju aktiviranje β-katenina puta predstavljaju potencijalne strategije za liječenje GC. Pregled

popratne informacije
S1 Sl. . Učinak makrofaga CM na β-katenina puta pregled β-katenina akumulira u jezgri i nakon tretmana s makrofaga CM 30 minuta u AGS i MKN45 stanice pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s001 pregled (TIFF) pregled S2 slici. Utjecaj makrofaga cm na ekspresiju proteina P-katenina nizvodnog gena AGS i MKN45 stanica pregled doi:. 10.1371 /journal.pone.0134122.s002 pregled (TIFF), pregled S3 Sl. (A) makrofaga CM induciranu Akt i ERK aktivacija u N87 stanicama. (B) N87 stanice su prethodno tretirani sa 10 uM inhibitora β-katenina. LY294002 ili U0126 tijekom 1 sat, zatim uzgajane u prisutnosti makrofaga CM još 1 sat pregled AKT, ERK i β-katenina ekspresija proteina određuje se pomoću Western blot pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0134122.s003 pregled (TIFF) pregled S4 Sl. prethodno su tretirani neutralizirajućih antitijela protiv TNF-a
N87 stanice u prisutnosti makrofaga CM 24 sata sa ili bez inhibitora TNF-a kroz 1 sat pregled doi:., 10,1371 /journal.pone.0134122.s004 pregled (TIFF) pregled

• PLoS ONE: PRR11 je prognostički biljeg i potencijal onkogena u bolesnika sa želučanim Cancer
• PLoS ONE: limfnog čvora metastaziranje, a Jedinstveni Samostalni prognostički čimbenik u ranom raka želuca