PLoS ONE: caveolin-1 Expression Niveau i cancer associeret fibroblaster Forudsiger Outcome i Gastric Cancer

Abstrakt

Mål

Ændret udtryk for epitelial eller stroma caveolin-1 (Cav-1) er observeret i forskellige typer af humane kræftformer. Men den kliniske betydning af Cav-1-ekspression i gastrisk cancer (GC) forbliver stort set ukendt. Nærværende undersøgelse har til formål at udforske den klinisk-patologisk betydning og prognostisk værdi af både tumorceller og cancer associeret fibroblaster (CAFS) Cav-1 i GC.

Metoder og Resultater

Quantum prikker blev udført immunofluorescens histokemi at undersøge ekspressionen af ​​Cav-1 i 20 tilfælde af gastritis uden intestinal metaplasi (IM), 20 tilfælde af gastritis med IM og 286 tilfælde af GC. Positive satser epitel Cav-1 i gastritis uden IM, gastritis med IM og GC viste en faldende tendens ( P
= 0,012). Lav udtryk for Cav-1 i CAF men ikke i tumorceller var en uafhængig indikator for dårlig prognose i GC patienter ( P
= 0,034 og 0,005 henholdsvis sygdomsfri overlevelse og samlet overlevelse). Cav-1-niveau i tumorceller og CAF viste ingen signifikant sammenhæng med klassiske klinisk-patologiske træk.

Konklusioner

Tab af epitelial Cav-1 kan fremme ondartet progression og lave CAF Cav-1-niveau Herald værre resultatet af GC patient, hvilket tyder på CAF Cav-1 kan være en kandidat terapeutisk mål og en nyttig prognostisk markør for GC

Henvisning:. Zhao X, He Y, Gao J, Fan L, Li Z, Yang G, et al. (2013) caveolin-1 Expression Niveau i Cancer Associated fibroblaster forudser Outcome i Gastric Cancer. PLoS ONE 8 (3): e59102. doi: 10,1371 /journal.pone.0059102

Redaktør: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, USA

Modtaget: December 6, 2012; Accepteret: 11 Feb 2013; Udgivet: 19 Mar 2013

Copyright: © 2013 Zhao et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering:. Dette arbejde blev støttet af National Undergraduate Innovation Project Kina (NO. 111.048.670) og National Natural Sciences Foundation of China (NO. 30.900.652). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet "

Konkurrerende interesser:. Guilin Fanpu Biotechnology Co., Ltd gav teknologisk støtte til TMA byggeri. Der er ingen patenter, produkter i udvikling eller markedsførte produkter til at erklære. Dette ændrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikker om datadeling og materialer.

Introduktion

Ligesom normale væv, er tumorer, der består af to diskrete men interaktive rum, parenkym og stroma. I tumorer, selve tumorcellerne er parenkym, hvorimod stroma indbefatter en blanding af ekstracellulær matrix (ECM) elementer og ikke-maligne celler, såsom cancerceller associeret fibroblaster (CAF), vaskulære endotelceller og immun- og inflammatoriske celler [1], [2], [3]. I de senere år har de dybtgående indflydelse tumor stroma på væksten og metastaser i forskellige typer af tumorer blevet bredt belyst [2], [3]. Tumorceller kan udløse afsætning af et reaktivt stroma indeholdende aktiverede CAF, immun- og inflammatoriske celler, ECM elementer, der kan støtte invasion og metastase af cancere [2], [3]. Desuden, selv om bestemte roller proteiner i molekylær krydstale mellem tumor og stromal celle fortsat uklare, ændret ekspression af stromale proteiner er blevet manifesteret som nye biomarkører i forskellige typer af humane cancere, herunder bryst- [4], [5], [6] [7], prostata [8], nasopharynx [9] og basal celle kræft [10]

caveolin gen familien har tre medlemmer:. CAV1
, CAV2
og CAV3
, der koder for proteinerne caveolin-1 (Cav-1), caveolin-2 og caveolin-3, henholdsvis [11]. CAV1
er placeret på kromosom 7 (locus 7q31.1) og indeholder tre exons (35, 165 og 324 bp) og to introns (1,5 og 32 kb) [11]. Cav-1 udgør den største strukturelle komponent i caveolae, som er kolbe-formede vesikulær invaginationer af plasmamembranen [12], [13]. Forskellige receptorer og signalmolekyler er lokaliseret i caveolae og er negativt reguleret af KAV-1 via sin stillads domæne. Desuden Cav-1 interagerer direkte med dobbeltlag af kolesterol og sphingolipider inden caveolin derfor påvirke lipid homeostase og transport [12], [13]. I cancere, er det i stigende grad klart, at KAV-1 er impliceret i reguleringen af ​​flere cancerassocierede processer, der spænder fra cellulær transformation, tumorvækst, invasion og metastase, til multiresistens og angiogenese [14]. KAV-1 viser et rum-afhængige rolle på tumorer. I epitel rum, Cav-1 virkninger både positivt og negativt på tumor udvikling. I tumor stroma, især CAF, lav udtryk for Cav-1 protein forudsiger negativ resultat i bryst- og prostatakræft [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Alligevel kliniske værdier af KAV-1 i GC forbliver ikke helt klar. Baseret på tidligere undersøgelser, vi hypotese, at roller Cav-1 i epitel og stroma kan være anderledes, roller epitelial Cav-1 er usikkert, men lav udtryk for Cav-1 i CAF kan fremmer GC progression og korrelerer med negative udfald af GC patienter .

for at afklare forholdet mellem Cav-1 og GC progression eller undertrykkelse, har vi analyseret specifikt både stromale og epitelcelle udtryk for Cav-1 i væv sektioner, via de avancerede quantum dots (QDs) -baseret immunofluorescens histokemi (QDs-IHC), der var blevet udviklet i vores tidligere undersøgelser, og som har været almindeligt anerkendt og anvendt i laboratorier [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Fluorescerende halvledernanokrystal QDs er en ny klasse af multifunktionelle uorganiske fluoroforer, der har mange begunstigede egenskaber, såsom snævre emission band toppe, bølgelængde på deres fluorescens afhænger meget af deres størrelser og forskellige QD farver kan samtidig ophidset af en enkelt lyskilde med minimal spektral overlappende [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Disse egenskaber gør QDs yderst nyttig for multiplex molekylær immunfluorescent imaging [21], [23]. Den avancerede flere mål mærkningsteknologi af QDs-IHC aktiveret en præcis analyse af KAV-1-ekspression i CAF, ved samtidig påvisning af alfa-glatmuskelactin (α-SMA), som er en markør for CAF og KAV-1-protein.

Materialer og metoder

patienter og Opfølgende

Da tiden var begrænset og nogle patienter var ude af hospitalet, så det er vanskeligt at opnå skriftlig tilladelse. Vi kaldt til hver patient, forklarede vores undersøgelse blev brugt til kun akademisk udveksling, og var ikke skadeligt for deres helbred, og ikke indeholdt deres private oplysninger. Når vi kaldes, en notar var til stede, og vi fik mobiltelefonen kort besked, som vi krævede patienter, der samtykke studiet til at sende til os. Hvis patienten har døde, fik vi samtykke fra hans eller hendes værge. Endelig fik vi verbal samtykke fra alle de 300 patienter. I alt 340 formalinfikserede, paraffinindlejrede væv blev opnået fra patienter diagnosticeret i perioden fra juli 2005 til februar 2012, herunder 300 GCS, 20 gastritis uden tarm metaplasi (IM) væv og 20 gastritis med IM væv. Den gastritis uden IM og med IM prøver blev afledt fra adenocarcinom paracancerous væv. Serial sektion bekræftet ingen tumorvævet blev fundet i disse prøver. Prøver blev indsamlet fra arkiverne i Patologisk Institut, Zhongnan Hospital i Wuhan University (Hubei, P. R. Kina). Histologisk diagnose og kvaliteter af differentiering blev bestemt i overensstemmelse med World Health Organization (WHO) kriterier for GC. Alle de GC-prøver blev klassificeret baseret på den UICC TNM klassifikationen (2009). To bord-certificeret patologer (Yang GF og Fan LF) bekræftede de histopatologiske funktioner i disse prøver. 326 prøver lykkedes bevaret for yderligere analyse; i mellemtiden blev 14 GC prøver tabt fra slide under immunfarvning. Klinisk-patologiske faktorer af GC patienter blev opregnet i tabel 1. For 247 GC patienter der var tilstrækkelig væv til analyse af tumorceller og cancer associeret fibroblastisk Cav-1-immunfarvning. Alle disse 300 patienter blev behandlet med radikal resektion eller cytoreduktive kirurgi af GC, før administration af kemoterapi eller strålebehandling. Denne undersøgelse blev godkendt af Institute Research Medicinsk Ethics Committee of School of Basic Medical Science, Wuhan University.

Opfølgning begyndte på datoen for kirurgi og sluttede i august 2012. Blandt de resterende 286 GC væv fra patienter , 257 indskrevet i vores opfølgende kohorte og 116 patienter, der med succes nåede et femårigt opfølgning eller døde på grund af GC blev inkluderet i overlevelse analyse. Patienter, der ikke nåede fem år opfølgning og døde af andre sygdomme eller på grund af uventede begivenheder, blev udelukket fra overlevelse studiet. Den mediane opfølgning af de 116 patienter var 62 (spændvidde: 1-85) måneder. Samlet overlevelse blev defineret som intervallet fra datoen for kirurgi til døden. Sygdomsfri overlevelse blev defineret som intervallet fra datoen for kirurgi til tilbagefald. Diagnose af tilbagefald var baseret på følgende kriterier: lokalt recidiv findes ved endoskopisk biopsi eller med relaparotomy; metastase på radiologisk, ultralyd eller cytologisk undersøgelse.

Tissue Microarray Construction

To sæt væv microarrays (TMAS) blev konstrueret. Hvert sæt indeholdt 5 TMA'er der blev monteret med 340 prøver. De mest repræsentative tumor områder blev defineret på hematoxylin- og eosin-farvede sektioner, og markeret på dias. Den måde, vi bygget TMA'erne og microarray-systemet instrument var det samme med vores tidligere undersøgelse [24], [25]. Som tidligere undersøgelser ikke rapportere intratumoral heterogenitet Cav-1-ekspression i GC og vores feasibility eksperiment viste, at en kerne pr tumor på TMA og store dele viste en god konsistens [26], [27], [28] derfor i test forsøg blev en kerne udtaget i hvert enkelt tilfælde. Kort beskrevet blev en kerne med en diameter på 1,5 mm taget fra hver prøve og indsat i tomme "modtager" paraffinblokke; disse blokke blev skåret i sektioner (4 um tyk) og anvendt til QDs-IHC-analyse.

QDs-baserede Immunofluorescens Histochemistry

Cav-1 immunreaktivitet blev påvist i et sæt TMAs. De antistoffer, QDs konjugeret streptavidin sonder (QDs-SA) med 605 nm emission bølgelængde og relaterede reagenser til Cav-1 afsløring var den samme som før [16] med følgende væsentlige procedurer: deparaffinizing → antigen hentning → blokere → primært antistof for Cav -1 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) → vask og blokering → biotinyleret IgG → vask og blokering → 605 nm-QDs-SA → vask → montering og observation. Den opnåede fra mærkning celler signal blev detekteret via brug af Olympus BX51 fluorescensmikroskopi (CCD DP72). Den QDs signalet var target specifik, rød, og fotostabilt. Autofluorescens af væv-baggrund var grøn. Siden Cav-1 normalt lokaliserer i endotelceller i blodkar [27], [29], der undersøgte i hvert TMA, kan det blive serveret som intern positiv og kvalitetskontrol i QDs-IHC. TBS stedet for KAV-1 primært antistof fungerede som negativ kontrol.

QDs-baserede Double Immunfluorescerende Labeling

Vi bruges ét sæt TMAs for KAV-1 /α-SMA colokalisering, påvist ved QDs -baseret dobbelt teknologi immunfluorescent mærkning i henhold til producentens anvisninger (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co Ltd). Alle fortyndingstrin (antistoffer og QDs) blev udført i TBS indeholdende 2% bovint serumalbumin (BSA, Sigma, St. Louis, MO, USA). Antigen genfinding blev udført i citronsyre (10 mM, pH 6,0) ved 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af afkøling i 30 minutter. TMA'erne blev først inkuberet i 2% BSA-buffer ved 37 ° C i 30 minutter og derefter ved 4 ° C natten over i kanin-anti-Cav-1 polyklonale antistof og muse-anti-α-SMA monoklonalt antistof (1:300 fortynding Abcam, Cambridge, MA) for at antistof-bindinger. Derefter TMAs blev vasket tre gange med TBS-T (0,5% Tween i TBS) i 5 min hver gang og inkuberet i biotinyleret ged anti-mus IgG (1:400 fortynding, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) ved 37 ° C i 30 min. For QDs konjugation, antistof-bindende TMAs blev inkuberet i 2% BSA-buffer ved 37 ° C i 10 minutter, inkuberet i QDs (525 nm) konjugeret til streptavidin (1:200, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) og QDs (605 nm) konjugeret til gede anti-kanin IgG (1:100, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) i 50 min, skyllet tre gange med TBS-T i 5 min hver. Endelig blev TMAs forseglet med 90% glycerin (Sigma). Den immunfluorescent signal blev observeret af Caliper s multispektrale mikroskopi billedsystemer (Caliper Life Sciences). Fordi immunfluorescent signal om enkelt mærkning og dobbelt mærkning blev snappet af CCD DP72 og multispektrale mikroskopi billedsystemer henholdsvis vi kalibrerede resultater af de to instrumenter for at sikre sammenlignelighed af disse eksperimenter. Positivt signal for α-SMA var grøn, og Cav-1 var rødt. KAV-1-ekspression i endotelceller i blodkar [27], [29], α-SMA-ekspression i blodkar og kendt positivt væv betragtes som den positive kontrol. TBS i stedet for to primære antistoffer tjente som negative kontroller, der kun viser autofluorescens signal.

Scoring af Immunofluorescerende Resultater

Resultaterne blev evalueret af to patologer (Yang GF og Fan LF) samtidigt i samme fremviser , der er uafhængige og blindet til de kliniske funktioner i undersøgelsen. Pointene fra de to patologer blev sammenlignet, og eventuelle afvigende scoringer blev revurderet ved revurdering af de farvede vævsprøven af ​​de to patologer at opnå en konsensus score. Metoden til at lave Cav-1-farvning af tumorceller og CAF var de samme. Scores blev bestemt ved at kombinere andelen af ​​positivt farvede celler og intensiteten af ​​farvning. Snittene blev oprindeligt scannet ved lav effekt. Derefter celler fra fem repræsentative områder af hver prøve ved stor forstørrelse (200 x) blev talt for KAV-1-farvede tumorceller eller CAF. Området positive (AP) sorteres cellerne som følger: 0 (ingen positiv område eller positive område < 5%), 1 (positiv område 5-25%), 2 (positiv område 26-50%), 3 ( positive område 51-75%) og 4 (positiv område > 75%). Cav-1 intensiteten af ​​farvning (IS), som den numeriske værdi resulteret i scoringer: 0 (negativ: ingen positiv signal), en (svag: lys eller mørk rød signal) og 2 (stærk: lys rød signal). Ekspressionsniveauer af KAV-1 blev beregnet baseret på den samlede score som følgende ligning:. Intensitetsfordeling (ID) = AP × IS

Afskæringsværdien for høj og lav ekspression blev bestemt på modtageren opererer karakteristik ( ROC) kurve analyse med hensyn til den samlede overlevelse. Ifølge den optimale følsomhed og specificitet ROC kurven ved den samlede overlevelse status, 1,5 blev defineret som den optimale cutoff for Cav-1 immunfluorescent score i CAF (et ID score ≥1.5 definerede høj ekspression og ID-score < 1,5 indikeret lav udtryk) , 3,5 blev defineret som den optimale cutoff for KAV-1 immunfluorescerende score i tumorceller (et ID score ≥3.5 defineret høj ekspression og ID score < 3,5 indikeret lav ekspression).

Statistical Analysis

Vi brugte SPSS 17,0 software (Chicago, IL, USA) at udføre alle statistiske analyser. Friedman test blev anvendt til at analysere forskellen på KAV-1 original scorer mellem forskellige gastriske læsioner. ROC kurve analyse blev udført for at bestemme cutoff punkt høj eller lav Cav-1-niveau og evaluere den prædiktive værdi af Cav-1-ekspression for samlet overlevelse. Den χ2 test eller Fishers eksakte test blev anvendt til at analysere sammenhængen mellem de klinisk-patologiske parametre og KAV-1-ekspression. Spearman rang korrelation test blev udført for at analysere associationen mellem Cav-1-ekspression i tumorceller og CAF. Den samlede overlevelse og sygdomsfri overlevelsesrate blev estimeret ved anvendelse af Kaplan-Meier-metoden og sammenlignet med den lange rank test. Multivariat analyse ved hjælp af Cox proportional hazard regressionsmodel blev brugt til at teste uafhængige prognose værdier. To halet P
-værdier. ≪ 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant

Resultater

Expression af Cav-1 i forskellige Gastric Læsioner

lokalisering og ekspressionen af ​​Cav-1 i gastritis uden IM, gastritis med IM og GC blev vurderet ved QDs-IHC hjælp af Cav-1 polyklonale antistof. Den stærke intensitet doughnut-formede positivt signal af Cav-1 i tumoren stroma var intern kontrol af endotel udtryk (fig. 1A). I gastritis uden IM væv, negativ Cav-1 signal, overvejende overfladen mukøse celler (Fig. 1A) og positivt signal, overvejende basen og halsen af ​​fundiske kirtel celler (Fig. 1C). I gastritis med IM væv, viste nogle tilfælde ingen Cav-1 distribution (fig. 1E) og nogle viste positiv Cav-1-farvning i det absorberende celle og bægercelle af metaplastiske kirtler (fig. 1G). Ekspression af KAV-1 immunreaktivitet blev hovedsageligt observeret ved cellemembranen (fig. 1 I) og cytoplasma. Standarden for signal scoring blev vist i fig. 1I-K og repræsentative eksempler på KAV-1-ekspression i GC var viste i fig. 2. co-lokalisering af KAV-1 og α-SMA-proteiner blev detekteret ved QDs-baserede dobbelt immunfluorescerende mærkning i GC og analyseret ved multispektrale billedsystemer, til præcist at identificere Cav-1 ekspression i CAF (fig. 3). Fordelingen af ​​signalet af Cav-1 i fibroblaster er tilfældig og har ingen relation med Cav-1-status i tumorceller.

Tabel 2 opsummeres de oprindelige snesevis af Cav-1-ekspression i gastritis uden IM, gastritis med IM og GC. I epithelial rum, 30% (6/20) af gastritis uden IM, 55% (11/20) af gastritis med IM, 75% (15/20) af GC blev scoret 0, viser Cav-1-protein-ekspression niveau falde gradvis . Friedman test viste, at forskellen i Cav-1 farvning score mellem gastritis uden IM, gastritis med IM og GC var statistisk signifikant ( P
= 0,012).

Correlation Ekspression af Cav-1 mellem tumorceller og CAF

blev også analyseret Sammenhæng mellem tumorceller og CAF i Cav-1-ekspression. Som det fremgår af tabel 3, blandt 226 tilfælde med lav Cav-1expression i tumorceller, viste 121 (53,5%) tilfælde lav ekspression af KAV-1 i CAF (fig. 2A), og blandt 21 tilfælde med stor Cav-1-ekspression i tumorceller, 9 (42,9%) tilfælde viste høj Cav-1-ekspression i CAF (fig. 2C). De andre 117cases viste tydelig udtryk status i tumorceller og CAF (fig. 2E og G). Ingen signifikant korrelation blev grundlagt mellem tumorceller og CAF Cav-1-ekspression (r = -0,20, P
= 0,751).

kliniske betydning af Cav-1 ekspression i tumorceller og CAF af GC

Alle 286 GC prøver var tilgængelige for analyse af Cav-1 immunfarvning i tumorceller og 247 (86,4%) tilfælde havde tilstrækkelige væv til analyse af Cav-1 immunfarvning i CAF. Tabel 3 samlet sammenhængen mellem tumorceller eller CAF i KAV-1 ekspression og de klassiske klinisk-patologiske parametre af GC, såsom status alder, køn, T scenen og lymfeknude i univariat analyse. Der blev imidlertid ikke signifikant sammenhæng fundet.

Desuden undersøgte vi den prognostiske værdi af KAV-1-ekspression i tumorceller og CAF. Kaplan-Meier-analyse og log-rank test viste, at lav ekspression af KAV-1 i CAF snarere end i tumorceller forudsagt ringe overlevelse. Median samlet overlevelse af lave CAF Cav-1-ekspression undergruppe var 73.0 måneder (95% CI, 55,589-90,411), mens der i opfølgningen interval, de høje CAF Cav-1-ekspression undergruppe havde en beregnet overlevelsesrate på ca. 0,8 (Fig . 4A). Som vist i fig. 4B, lav udtryk for Cav-1 i CAF forudsagde også tidligt gentagelse af GC patienter. Figur 4C og D viste, at tumorceller Cav-1 status havde ingen signifikant sammenhæng med total overlevelse og sygdomsfri overlevelse ( P
= 0,178 og 0,104 henholdsvis). Desuden den kumulative fem år overlevelsesraten for patienter, hvis tumorer udviste høje CAF Cav-1-ekspression var 75,5% (95% CI, 0,642-0,868), mens det kun var 57,4% (95% CI, 0,456 til 0,692) i lave CAF Cav-1 gruppe ( P
= 0,053).

i univariat analyse, TNM stadie, T scenen, lymfeknude status og CAF Cav-1-niveau viste sig at være signifikant associeret med sygdommen overlevelse af GC patienter ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 og 0,029, henholdsvis; tabel 4). TNM stadie, T scenen og CAF Cav-1-niveau var signifikant korreleret med den samlede overlevelse ( P
= 0,012, 0,006, og 0,013 henholdsvis; tabel 4). For at bestemme om CAF Cav-1-ekspression var en uafhængig prædiktor for GC patienternes recidiv og overlevelse blev en multivariat analyse udføres ved hjælp COX proportional hazard regressionsmodel, sammen med alderen, T klassificering, TNM stadie og andre tumor egenskaber. Igen blev Cav-1 niveauet i CAF selvstændigt og signifikant associeret med GC patienternes recidiv og udfald ( P
= 0,034 og 0,005 henholdsvis; tabel 4). Tværtimod tumorceller Cav-1-niveau ikke prognosticate GC patientens tilbagefald og overlevelse i den samtidige model (tabel 4).

død prædiktive værdi af KAV-1 tærskelværdier i tumorceller og i CAF blev analyseret såvel. Som vist i figur 5, Cav-1 niveauet i CAF forudsagde døden med gode resultater; området under kurven var 0,627 (95% CI: 0,515-0,738; P
= 0,032). Betragtninger, Cav-1-niveau i tumorceller undladt at forudsige døden, med areal under kurven for 0,551. (95% CI: 0,438-0,664; P
= 0,393)

Diskussion

Her har vi beskrevet, at KAV-1 immunreaktivitet hovedsageligt observeres ved cellemembranen og cytoplasma. I gastritis uden IM væv, er Cav-1 signal overvejende påvist i bunden og halsen af ​​fundiske kirtel celler. I gastritis med IM væv, Cav-1-farvning lokaliserer hovedsageligt i absorberende celle og bægercelle af metaplastiske kirtler. Dette resultat korrelerer med en anden undersøgelse, hvor Cav-1 i gastrisk væv via immunhistokemi [27]. KAV-1-ekspression gradvist aftager med progression af GC og ekspressionsniveauet i CAF snarere end i tumorceller i et vist omfang forudsiger tilbagefald og overlevelse i GC patienter.

Roller KAV-1-protein i tumorudvikling er tumor-afhængige og rum-afhængige [12], [30]. KAV-1-genet er lokaliseret til locus D7S522 af humant kromosom 7q31.1, som ofte deleteret i nogle typer af tumorer [11]. Desuden er Cav-1 impliceret i caveolin stilladser domæne og kan inducere inhibering af cytokinreceptor signalering [14], hvilket tyder tumor suppressor rolle Cav-1. Tumoren fremmende aktivitet af KAV-1 er blevet bredt bekræftet ved omhyggeligt at detektere dens ekspressionsniveauer og kliniske værdier i sorter af kræftformer, såsom tungen pladecellecarcinom, esophageal pladecellecarcinom, blære overgangsperiode cellecarcinomer, nasopharyngeal carcinom og hals pladecellecarcinom [16], [31], [32], [33], [34]. KAV-1 har forskellige roller i tumorceller og stromaceller. For eksempel Cav-1 i bryst- og prostatacancer, tab af stromal Cav-1, men ikke tumorceller varsler dårlig prognose [6], [8], [12], [14], hvilket indikerer rummet-afhængige roller Cav- 1.

Vores resultater viste, at Cav-1-ekspression niveau i epiteler celler gradvist faldt med ondartet progression af GC. Lignende resultater blev rapporteret i en anden undersøgelse [26] undersøge Cav-1 ekspression af IM og GC, hvilket indebærer Cav-1 kan anses som en tumorsuppressor i udviklingen af ​​GC. Desuden blev begge tumorceller og CAF Cav-1-protein-ekspression status ikke korreleret til de typiske klinisk-patologiske parametre, såsom T stadium, TNM stadie og Lauren klassifikation. Det var i modsætning til den anden undersøgelse [26], som viste, at den lave ekspression af tumorceller Cav-1 protein blev korreleret med høj T stadium, TNM stadie og lymfeknudemetastase. Forskellen kan skyldes evalueringsmetoden: vi evaluerede farvningen ved at multiplicere intensiteten og andelen af ​​celler farvet og bestemt cutoff punkt, som havde optimal følsomhed og specificitet ROC-kurven baseret på samlet overlevelse status; henviser i den anden udelukkende forskning procentdelen af ​​immunpositive celler blev evalueret og tærsklen på positiv eller negativ ikke blev præsenteret. Desuden, jo større prøvestørrelse på vores undersøgelse påvirkede resultaterne samt. Salg

CAF er blandt de mest essentielle komponenter af tumor stroma, med vigtige funktioner inducere aflejring af ECM, regulering epitheldifferentiering og inflammatorisk respons og interaktion med mikrovaskulaturen ved at udskille matrixmetalloproteinaser og vaskulær endotel vækstfaktor [35]. Siden Cav-1-proteinet er den nødvendige strukturelle komponent caveolae, ændret ekspression af KAV-1-protein i CAF ville påvirke forskellige patologiske processer og dermed fremme tumorudvikling. Tab af KAV-1-protein i CAF fremmer aktiveringen af ​​CAF via aktivering TGF-β-vejen, derfor lette tumormikromiljøet remodellering og tumorudvikling [12]. Men en anden undersøgelse offentliggjort i Cell
rapporterede strid funktioner i CAF Cav-1 protein, stromale Cav-1 favoriserer tumor invasion og metastase gennem kraft-afhængige arkitektonisk regulering af mikromiljø [36]. Derfor rolle CAF Cav-1 er fortsat usikker. Resultaterne præsenteres her viste en uafhængig prognostisk indikator for GC involverer Cav-1-ekspression niveau i CAF. Lav ekspression af KAV-1 i CAF men ikke i tumorceller uafhængigt prognosticated tidligt tilbagefald og ringe overlevelse af GC patienter. ROC-analyse indikerede død forudsige værdien af ​​lav Cav-1 i CAF. Resultaterne indebar tumoren hæmmende rolle CAF Cav-1 protein og var i overensstemmelse med konklusionen i bryst- og prostatakræft, som belyst at tab af stromale Cav-1 varsler dårlig prognose [8], [12], [15]. Også i brystcancer, er det klart, at med udviklingen af ​​cancer, tumor mikromiljø bliver en hypoxisk og dårlig ernæring niche, stimulerende autofagi i CAF. Så det unormale aktiverede autofagi nedbryder Cav-1 i CAF. Selvfølgelig, om der findes lignende mekanismer i GC kræver flere in vitro
studier.

Desuden tab af stromale Cav-1 har stor prædiktiv værdi i ER (+), PR (+), HER2 (+), og de såkaldte tredobbelte-negative brystkræftpatienter (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). Samtidig er nedsat endokrin terapi påvirker ikke dens prædiktiv værdi, hvilket gør det til en ny universel eller bredt anvendelig brystkræft prognostisk markør [37]. GC er den fjerde fælles og tredje død forårsage kræft i verden [38], som stadig mangler nok egnede biomarkører for prognostisk evaluering og personlig anti-cancer behandling. HER2 positiv GC patienter nydt godt af trastuzumab behandling, dog kun få patienter er HER2-positiv, for eksempel kun 19% af GC patienter viste HER2-positiv i vores undersøgelse. I dag er avancerede GC patienter med negativ HER2 stadig lider dårlig overlevelse. Således identificere flere mål, der undertrykker GC udvikling er stærkt behov for. Heri viste vi værdierne ved at bruge stromale proteiner som biomarkører i GC, som kunne bidrage til den molekylære typning af GC og dermed behandlingen af ​​GC, verificere de væsentlige roller tumor stroma i tumor udvikling. Desuden er et prospektivt studie stærkt anbefales at validere den prognostiske værdi og til at undersøge den kliniske betydning af påvisning af Cav-1 i CAF.

En interessant ting er, at selv om CAF Cav-1 status kan bruges som en indikator , når sammenhængen mellem CAFS Cav-1-niveauer og klassiske klinisk-patologiske parametre for GC blev analyseret, blev der ikke signifikant sammenhæng fundet. Således fremmer tumorinvasion og metastase kan ikke være de primære mekanismer, hvormed tabet af CAF Cav-1 fremmer GC udvikling. Kemoterapi er den mest almindelige supplerende behandling, der anbefales til de midterste og avancerede stadie GC patienter i Kina. Kombineret med resultaterne vist her, vi fremhævede, at uanset om lav ekspression af Cav-1 i CAF korreleret med kemoterapi resistens kan være en bemærkelsesværdig problem fortjener yderligere undersøgelse.

Endelig vores undersøgelse, via de avancerede QDs-baserede dobbelt immunfluorescerende mærkning teknologi, Cav-1 protein i CAF var nøjagtigt placeret. De pseudo-farve co-lokalisering billeder tilladt os at evaluere Cav-1 niveauet i CAF udelukkende imidlertid QDs-IHC og QDs-baserede dobbelt immunfluorescerende mærkning teknologi er ikke almindeligt anvendt i kliniske laboratorier. Immunhistokemi er den mest almindeligt praktiserede teknologi i kliniske laboratorier. Vores tidligere undersøgelse manifesterer, at QDs-IHC-metoden er så følsom og specifik som IHC [22]. Hvis du ønsker at opdage samtidigt to forskellige proteiner såsom Cav-1 og α-SMA i ét dias, QDs-baserede dobbelt mærkning er en roman, pålidelig og alternativ metode, som vi kan få de resultater, så præcis som mulig.

konklusioner

Som konklusion, vores undersøgelse evaluerede Cav-1-ekspression i både tumorceller og CAF og undersøgt deres kliniske betydning for GC patienter. Det er bemærkelsesværdigt, at ekspressionen af ​​KAV-1 i CAF snarere end tumorceller særlig anvendelig til at forudsige tidligt tilbagefald og dårlige overlevelsesmuligheder GC patienter, hvilket tyder Cav-1 i CAF kan være kandidat terapeutisk mål og en nyttig prognostisk markør for GC patienter . Yderligere undersøgelser er nødvendige for at undersøge de mekanismer, som høje niveauer af Cav-1 i CAF undertrykker GC progression og eventuelt til at udvikle lægemidler rettet mod Cav-1. Desuden vil yderligere kliniske forsøg være afgørende for at kontrollere den prognostiske værdi af CAF Cav-1 i GC, og om det kunne bidrage til personlig anti-cancer behandling.

anerkendelser

Forfatterne takker Dr. Kathryn A Solka, Institut for Biokemi, Rush University Medical center for at skrive assistance.

• PLoS ONE: prognostiske værdi af Cancer Stem Cell Marker CD133 Expression i Gastric Cancer: En systematisk Review
• PLoS ONE: Målretning CDH17 Undertrykker Tumor Progression i Gastric Cancer ved nedregulering Wnt /β-Catenin Signaling