PLoS ONE: Caveolin-1 išraiška lygis vėžiu asocijuotųjų fibroblastų prognozuoja baigtis Skrandžio Cancer

Anotacija

Tikslai

stebimas Altered išraiška epitelio arba stromos caveolin-1 (CAV-1) įvairių tipų žmogaus vėžio. Tačiau klinikinė reikšmė CAV-1 išraiškos skrandžio vėžiu (GC) lieka iš esmės nežinoma. Šis tyrimas siekiama ištirti klinikos reikšmę ir prognostinę vertę tiek vėžinių ląstelių ir vėžio susijęs fibroblastų (CAFS) CAV-1 GC.

Metodai ir rezultatai

kvantinių taškų imunofluorescencinio histocheminio buvo atliktas išnagrinėti CAV-1 išraišką 20 atvejais gastritas be žarnyno metaplazijos (IM), 20 atvejais gastritas su IM ir 286 atvejai GC. Teigiami rodikliai epitelio CAV-1 gastritas be MP, gastritas su IM ir GC mažėjimo tendencija ( P
= 0,012). Žemas išraiška CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje, bet ne vėžinių ląstelių buvo nepriklausoma prognozuoti prastos prognozės GC pacientų ( P
= 0,034 ir 0,005 atitinkamai ligos reiškinių išgyventas ir bendro išgyvenamumo). CAV-1 lygis vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje neparodė reikšmingos koreliacijos su klasikinių klinikos funkcijų.

Išvados

praradimas epitelio CAV-1 gali skatinti piktybinio progresavimą ir žemos CAFS CAV-1 lygis Herald blogiau rezultatas GC pacientui, o tai rodo kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 gali būti kandidatas terapinis taikinys ir naudinga prognostinė žymuo GC

nurodomoji dalis:. Zhao X Jis Y Gao J Ventiliatoriaus L Li Z Yang G ir kt. (2013) Caveolin-1 išraiška lygis vėžiu Associated fibroblastų prognozuoja rezultatus, skrandžio vėžio. PLoS ONE 8 (3): e59102. Doi: 10,1371 /journal.pone.0059102

redaktorius: DunFa Peng, Vanderbilt universiteto medicinos centras, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Gruodžio 6, 2012 m Priėmė: Vasario 11, 2013 m Paskelbta: Kovo 19, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Zhao et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė Nacionalinės Bakalauro naujovių diegimo projektas Kinijos (111048670 NR.) ir Nacionalinės gamtos mokslų fondo Kinijos (30.900.652 nėra.). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį "

konkuruojančių interesų. Guilinas Fanpu Biotechnologijos Co, Ltd" davė technologinę paramą TMA statybos. Nėra patentai, produktų kūrimo ar parduodamų produktų deklaruoti. Tai nekeičia autorių laikytis visų PLoS ONE politikos dalijimosi duomenimis ir medžiagų.

Įvadas

Kaip ir normaliuose audiniuose, navikai sudarytas iš dviejų atskirų, bet interaktyvių padalinių parenchimos ir stromos. Navikuose, patys naviko ląstelės yra Parenchyma, kadangi stromos apima matriksą (ECM); elementų ir nepiktybinių ląstelių, tokių kaip vėžys susijęs fibroblastų (CAFS), kraujagyslių endotelio ląstelių ir imuninės ir uždegiminių ląstelių [1] mišinį, [2], [3]. Pastaraisiais metais tokio stipraus įtakos naviko stromos dėl augimo ir metastazių įvairių tipų navikų buvo plačiai ištirtas [2], [3]. Naviko ląstelės gali sukelti reaktyvinės stromos, kuriame aktyvuota kovos su sukčiavimu strategijoje, imuninės ir uždegiminių ląstelių, ECM elementus, kurie gali pasisakančius invazija ir metastazes vėžio [2] nusėdimą, [3]. Be to, nors neabejotinas vaidmenys baltymų molekulinės kryžminio aptarimas tarp naviko ir stromos ląstelių lieka neaišku, pakitęs išraiška stromos baltymų buvo pasireiškia kaip naujų biologinių žymenų įvairių tipų žmogaus vėžio, įskaitant krūties [4], [5], [6] [7], prostatos [8], nosiaryklės [9] ir bazinių ląstelių vėžys [10]

caveolin genų šeima turi tris narius:. CAV1
CAV2
, ir CAV3
, koduojanti baltymų caveolin-1 (CAV-1), caveolin-2 ir caveolin-3, atitinkamai [11]. CAV1
įsikūręs chromosoma 7 (locus 7q31.1) ir yra trys egzonų (35, 165 ir 324 bp) ir du intronai (1,5 ir 32 Kb) [11]. CAV-1 yra esminių struktūrinių komponentas caveolae, kurie yra kolbos formos vezikulinės invaginations iš plazminės membranos [12], [13]. Įvairūs receptoriai ir signalinės molekulės yra lokalizuotas caveolae ir yra neigiamai reguliuoja CAV-1 per savo pastolių domeno. Be to, CAV-1 sąveikauja tiesiogiai su cholesterolio ir sfingolipidų per caveolin bisluoksnio, todėl daro įtaką lipidų homeostazę ir transportą [12], [13]. Be vėžio, tai vis aiškiau, kad CAV-1 padariusiu reguliuoti kelis vėžį susijusios procesus, pradedant nuo ląstelių transformacijos, naviko augimas, invazija ir metastazių, atsparumo vaistams ir angiogenezę [14]. CAV-1 rodo skyrelio priklausoma vaidmenį navikų. Be epitelio skyriuje, CAV-1 poveikį ir teigiamai ir neigiamai auglių vystymuisi. Naviko stromos, ypač kovos su sukčiavimu strategijoje, žemos raiškos CAV-1 baltymo prognozuoja neigiamą rezultatą, krūties ir prostatos vėžio [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Nepaisant to, klinikiniai vertės CAV-1 GC lieka ne visai aišku. Remiantis ankstesniais tyrimais, mes hipotezę, kad vaidmenys CAV-1 epitelio ir stromos gali būti skirtingi, vaidmenys epitelio CAV-1 yra neaiški, bet mažai išraiška CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje gali skatina GC progresavimą ir koreliuoja su neigiamo rezultato GC pacientų .

Jei išaiškinti CAV-1 ir GC progresavimo ar slopinimo santykius, mes specialiai analizuojamas tiek stromos ir epitelio ląstelių išraiška CAV-1 audinių skyriuose, per pažangių kvantinių taškų (QDs) pagrįsti imunofluorescencinio histocheminio (QDs-IHC), kuri buvo sukurta mūsų ankstesnių tyrimų ir kurie buvo plačiai pripažintas ir naudojamas laboratorijose [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Liuminescencinės puslaidininkių nanocrystal QDs yra romanas klasė daugiafunkcinių neorganinių fluoroforezės, kad turi daug kurioms savybėmis, pavyzdžiui, siauri emisijos juostos smailės bangos ilgio jų fluorescencijos labai priklauso nuo jų dydžio ir skirtingų QD spalvų vienu metu gali būti susijaudinęs vieno šviesos šaltinio su minimaliomis Spektrinis sutampa [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Šios savybės padaryti QDs labai naudinga multipleksuojamų molekulinės imunofluorescencinių vaizdavimo [21], [23]. Išplėstinė keli tikslai ženklinimo technologija QDs-IHC leido tiksliai analizę CAV-1 išraiškos kovos su sukčiavimu strategijoje, kurią vienu metu aptikti alfa-lygiųjų raumenų aktino (α-SMA), kuris yra kovos su sukčiavimu strategijoje ir CAV-1 baltymo žymeklis.

medžiagos ir metodai

pacientai ir tolesnės

Kadangi laikas buvo ribotas, o kai kurie pacientai iš ligoninės, todėl sunku gauti raštišką sutikimą. Mes pašaukti kiekvieną pacientą, paaiškino mūsų tyrime buvo naudojamas tik akademinių mainų, ir buvo nekenkia jų sveikatai, o ne pateikta jų asmeninę informaciją. Kai mes vadinami, notaras buvo pateikti, ir mes gavome mobiliojo telefono trumpą pranešimą, kuriame mes reikiamą pacientų, kurie sutikimo tyrimą siųsti mums. Jei pacientas turi miręs, mes turime sutikimą iš savo teisinio atstovo. Galiausiai gavome žodinį sutikimą iš visų 300 pacientų. 340 formalinu fiksuotos, parafino-embedded audiniuose viso buvo gauti iš pacientų, kuriems diagnozuota per laikotarpį nuo 2005 liepos iki 2012 vasario, įskaitant 300 GCS, 20 gastritas be žarnyno Metaplasia (IM) audinių ir 20 gastritas su MP audiniuose. Gastritas be MP ir MP mėginių buvo kilęs iš adenokarcinoma paracancerous audiniuose. Serijos skyrius patvirtino ne vėžinių audinių buvo rastas šių mėginių. Mėginiai buvo imami iš patologijos katedros Zhongnan ligoninės Wuhan universiteto (Hubei, Kinijos Liaudies Respublika) archyvuose. Histologinis diagnostika ir rūšių diferencijavimo buvo nustatyta pagal Pasaulio sveikatos organizacija (PSO) kriterijus, pagal GC. Visi GC mėginių buvo klasifikuojami remiantis UICC TNM klasifikaciją (2009). Du valdybos sertifikuota patologų (Yang GF Fan LF) patvirtinami histopatologinis bruožus šių mėginių. 326 mėginiai buvo sėkmingai išsaugotas tolesnei analizei; Tuo tarpu 14 GC mėginiai buvo prarasta nuo imunodažymu metu skaidrę. Klinikos veiksniai GC pacientų buvo išvardytos 1 lentelėje 247 GC pacientų buvo pakankamai audinių analizės vėžinių ląstelių ir vėžys susijęs fibroblastų CAV-1 imunodažymu. Visi šie 300 pacientai buvo gydomi radikaliai rezekcija ar citoredukcinės chirurgijos GC, prieš vartojimą chemoterapijos arba radioterapijos. Šis tyrimas buvo patvirtinta Instituto mokslinių tyrimų medicinos etikos komiteto mokyklos pagrindinio Medicina, Wuhan universitetas.

Tolesni prasidėjo operacijos dieną ir baigėsi 2012 rugpjūčio Tarp likusių 286 GC audinių iš pacientų , 257 įstojo į mūsų tolesnių kohortos ir 116 pacientai, kurie sėkmingai pasiekė penkerių metų tolesnių arba mirė dėl GC buvo įtraukta į išgyvenamumo analizė. Pacientai, kurie nebuvo pasiekti penkerių metų tolesnių ir mirė nuo kitų ligų arba dėl netikėtų įvykių, buvo pašalinti iš išgyvenimo tyrimas. Mediana tolesnių iš 116 pacientų buvo 62 (diapazonas: 1-85) mėnesius. Bendrasis išgyvenimas buvo apibrėžtas kaip intervale nuo operacijos dienos iki mirties. Liga išgyvenimo be buvo apibrėžtas kaip intervale nuo operacijos dienos iki pasikartojimo. Diagnozė pasikartojimo buvo grindžiamas šiais kriterijais: vietinis pasikartojimo rasti endoskopinės biopsija arba tokios operacijos; metastazės į radiologinės, ultragarso arba citologinis tyrimas.

Audinių mikrogardeliq Statybos

Dvi audinių mikrogardelių (TMA) buvo pastatytas. Kiekvienas rinkinys pateikta 5 TMA, kurie buvo sumontuoti su 340 egzempliorių. Tipiškiausių naviko plotai buvo apibrėžtos remiantis hematoxylin- ir eozinas tamsintas skyriuose ir pažymėtas ant skaidrės. Kaip mes pastatytas TMA ir mikrogardeliq sistema priemonė buvo tas pats su mūsų ankstesniame tyrime [24], [25]. Kaip anksčiau tyrimai nepranešė apie naviką heterogeniškumą CAV-1 ekspresijos GC ir mūsų galimybių eksperimentas parodė, kad vienas pagrindinių už naviko apie TMA ir didelių skyriuose parodė gerą nuoseklumą [26], [27], [28], todėl, bandymų eksperimentas, vienas branduolys buvo imami mėginiai, kiekvienu atveju. Trumpai, vienas branduolys su 1,5 mm skersmens buvo paimtas iš kiekvieno mėginio ir įdedama į tuščių "paslaugos gavėjas" parafino blokus; Šie blokai buvo supjaustyti (4 mkm storio) skyriuose ir naudojama QDs-IHC analizė.

QDs pagrindu Imunofluorescentinis histocheminio

CAV-1 reaktyvumas buvo aptiktas vieną rinkinį TMA. Antikūnai, QDs konjuguotų avidino zondai (QDs-SA) su 605 nm emisijos bangos ilgiui ir susijusių reagentai CAV-1 aptikimo buvo tas pats kaip ir anksčiau [16] su šių pagrindinių procedūrų: deparaffinizing → antigeno paieškos → blokuoja → pirminiais antikūnais už CAV -1 (Mobilusis Signalizacijos technologijos Beverly, MA) → plovimo ir blokuoja → biotinilinta IgG → plovimo ir blokuoja → 605 nM-QDs-SA → plovimo → montavimo ir stebėjimo. Gautas ženklinimo ląstelių signalas buvo aptiktas per naudojant "Olympus BX51 fluorescencijos mikroskopijos (CCD DP72). QDs signalas buvo tikslas specifinis, raudona, ir photostable. Autofluorescenciją iš audinių fone buvo žalia. Nuo CAV-1 paprastai localizes endotelio ląstelių kraujagyslių [27], [29], kad nagrinėtų kiekvieną TMA, jis gali būti įteiktas kaip vidaus teigiamas ir kokybės kontrolės QDs-IHC. TBS vietoj CAV-1 pirminio antikūno tarnavo kaip neigiama kontrolė.

QDs pagrindu Dvivietis imunofluorescencinių Žymėjimas

Mes naudojome vieną rinkinį TMA už CAV-1 /α-SMA colocalization, aptikta QDs pagrindu sudarytas dvigubo imunofluorescencinių ženklinimo technologija, pagal gamintojo nurodymus (Uhanas Jiayuan kvantinių taškų Co, Ltd). Visi atskiesti žingsniai (antikūnus ir QDs) buvo atlikti TBS, kurių sudėtyje yra 2% galvijų serumo albumino (BSA, Sigma, St Louis, MO, JAV). Antigenas paieška buvo atlikta citrinų rūgšties (10 mM, pH 6,0), esant 95 ° C temperatūroje 10 min, po to atšaldant 30 min. TMA, buvo pirmą kartą inkubuojami 2% BSA buferis, kurio 37 ° C temperatūroje 30 min, o po to, esant 4 ° C temperatūroje per naktį triušių anti-CAV-1 polikloninis antikūnas ir pelės anti-α-SMA monokloninis antikūnas (1:300 praskiedimo, Abcam, Kembridžo MA), siekiant antikūnų apkaustais. Tada TMA tris kartus buvo plaunamos su TBS-T (0,5% Tween į TBS) 5 min kiekvieną kartą, ir inkubuojami biotinilinta ožkos anti-pelės IgG (1:400 praskiedimo, Jackson ImmunoResearch, Vakarų Grove, PA), esant 37 ° C 30 min. Už QDs konjugacija, antikūnas surišantis TMA buvo inkubuojamos 2% BSA buferis, kurio 37 ° C temperatūroje 10 min, inkubuojami QDs (525 nm) konjuguotas su streptavidino (1:200, Uhanas Jiayuan kvantiniai taškai Co, Ltd) ir QDs (605 nm), konjuguoto su ožkos anti-triušio IgG (1:100, Uhanas Jiayuan kvantinių taškų Co, Ltd) 50 min, nuplauti tris kartus TBS-T kiekvieno 5 min. Galiausiai, TMA buvo užklijuoti 90% glicerino (Sigma). Imunofluorescencinių signalas buvo stebimas CALIPER anketa daugiaspektriai mikroskopavimas vizualizavimo sistemoms (CALIPER Life Sciences). Kadangi imunofluorescencinių signalas vienu ženklinimo ir dvigubo ženklinimo buvo išpirko iki CCD DP72 ir daugiaspektriai mikroskopavimas vizualizavimo sistemoms, atitinkamai, mes kalibruotas rezultatus iš šių dviejų priemonių, siekiant užtikrinti palyginamumą šių eksperimentų. Teigiamas signalas alfa-SMA buvo žalia, o CAV-1 buvo raudona. CAV-1 ekspresija endotelio ląstelių kraujagyslių [27], [29], α-SMA raiškos kraujagyslių ir žinomu teigiamu audinių, laikomi teigiamais kontrolės. TBS vietoj dviejų pirminių antikūnų tarnavo kaip neigiamus kontrolinius mėginius, tik rodo autofluorescenciją signalą.

Balai kamuolį į imunofluorescencinių rezultatai

Rezultatai buvo vertinami du patologai (Yang GF Fan LF) vienu metu tuo pačiu displayer , kurie yra nepriklausomi ir apakinti su klinikiniais požymiais tyrime. Šių dviejų patologai balai buvo palyginti ir bet prieštaringi balai buvo iš naujo įvertintas iki pakartotiniam įvertinimui iš tamsintas audinių bandinio dviejų patologai pasiekti sutarimo rezultatas. Už netikėtai CAV-1 dėmės auglio ląstelėse ir CAFS metodika yra tokie patys. Rezultatas buvo nustatomas derinant teigiamai dažytų ląstelių dalį ir dažymo intensyvumą. Skyriai pradžių buvo nuskaityti mažos galios. Tada ląstelės penkių tipinių srityse yra didelė priartinimas (200 ×) kiekvieną egzempliorių buvo suskaičiuoti už CAV-1-tamsintas vėžinių ląstelių arba kovos su sukčiavimu strategijoje. Kai gaunamas teigiamas plotas (AP) yra rūšiuojami ląsteles taip: 0 (ne teigiamą zoną, arba teigiamą plotas < 5%), 1 (teigiamas plotas 5-25%), 2 (teigiamas plotas 26-50%), 3 ( teigiamas plotas 51-75%) ir 4 (teigiamas plotas > 75%). CAV-1 intensyvumas dažymo (IS), kurį skaitine verte yra lėmė balai: 0 (neigiamas: ne teigiamas signalas), 1 (silpna: šviesiai arba tamsiai raudonas signalas) ir 2 (stiprus: ryškiai raudonas signalas). buvo apskaičiuojamas ekspresijos lygis CAV-1, skaičiuojant nuo bendros rezultatą, kai šią lygtį:. stiprio pasiskirstymo (ID) = AP × IS

testo ribinė vertė aukštos ir žemos raiškos buvo nustatytas, remiantis ROC kreivė ( ROC) kreivės analizė su atsižvelgiant į bendrą išgyvenamumą. Pasak optimalaus jautrumo ir specifiškumo ROC kreive remiantis bendro išgyvenamumo statusą, 1,5 buvo apibrėžiama kaip optimalus nukirpimas už CAV-1 imunofluorescencinių partitūros kovos su sukčiavimu strategijoje (tapatybės rezultatas ≥1.5 apibrėžta aukštos raiškos ir ID, rezultatas "< 1,5 nurodomas mažas išraiška) 3,5 buvo apibrėžiama kaip optimalus nukirpimas už CAV-1 imunofluorescencinių partitūros vėžinių ląstelių (tapatybės rezultatas ≥3.5 apibrėžta aukštos raiškos ir ID, rezultatas "< 3,5 nurodomas mažas išraiška).

Statistinė analizė

Mes naudojome SPSS 17.0 programinę įrangą (Čikaga, IL, USA) atlikti visas statistines analizes. Friedmanas testas buvo naudojamas analizuoti CAV-1 originalas balai skirtumą tarp įvairių skrandžio pakitimų. ROC kreivė analizė buvo atlikta siekiant nustatyti lizdu aukštos arba žemos CAV-1 lygio ir įvertinti prognostinė vertė yra CAV-1 išraiškos bendro išgyvenamumo. Χ2 testas ar tiksli Fišerio testas buvo naudojamas analizuoti tarp klinikos parametrus ir CAV-1 išraiškos koreliaciją. Spearman rango koreliacijos testas buvo atliktas analizuoti tarp CAV-1 išraiškos asociaciją vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje. Bendras išgyvenamumas ir ligų nemokamai išgyvenamumas buvo apskaičiuota naudojant Kaplan-Meier metodą ir lyginant naudojant ilgą rank testas. Daugiamatė analizė, naudojant Cox proporcinės pavojaus regresijos modelį buvo naudojamas išbandyti nepriklausomų prognozavimo vertybes. Du uodega P
k dydžiai. ≪ 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Rezultatai

išreiškimas CAV-1 skiriasi skrandžio pažeidimai

lokalizavimo ir išraiška CAV-1 gastritas be MP, gastritas su MP ir GC buvo įvertintas QDs-IHC naudoti CAV-1 polikloninį antikūnų. Stiprus intensyvumas doughnut-formos teigiamą signalą apie CAV-1 auglio stromos buvo vidaus kontrolė endotelio išraiškos (pav. 1A). Gastritas be MP audinių, neigiama CAV-1 signalas daugiausia paviršinių gleivinės ląstelių (1A pav.) Ir teigiamu signalu daugiausia pagrindo ir kaklą fundic liaukų ląstelių (pav. 1c). Gastritas su MP audiniuose, kai kurie atvejai rodo, jog CAV-1 paskirstymą (1E pav.), O kai parodė teigiamą CAV-1 dažymo į įsisavinimo elementų ir taurė ląstelė metaplastic liaukų (1G pav.). visų pirma buvo pastebėtas išraiška CAV-1 reaktyvumas prie ląstelės membranos (1L pav.) ir citoplazmos. Signalinių balais standartas buvo rodoma paveiksle. 1I-K ir atstovybių pavyzdžiai CAV-1 išraiškos GC buvo parodė paveiksle. 2. Colocalization iš CAV-1 ir α-SMA baltymai buvo aptikta QDs pagrindu dvigubai imunofluorescencines ženklinimo GC, ir analizuojami DAUGIASPEKTRES vizualizavimo sistemoms, tiksliai nustatyti CAV-1 išraiška CAFS (3 pav.). Iš prie CAV-1 signalo fibroblastų pasiskirstymas yra atsitiktinis ir neturi jokio ryšio su CAV-1 statusu vėžinių ląstelių.

2 lentelė apibendrino originalius dešimtys CAV-1 išraiškos gastritas be MP, gastritas su IM ir GC. Epitelį skyriuje, 30% (6/20) gastritas be MP, 55% (11/20) gastritas su IM, 75% (15/20) GC pelnė 0, rodo CAV-1 baltymo ekspresija lygio mažėjimo palaipsniui , Friedmanas tyrimas parodė, kad CAV-1 dažymo rezultatą tarp gastritas skirtumas be MP, gastritas su MP ir GC buvo statistiškai reikšmingas ( P
= 0,012).

Koreliacija išraiška CAV-1 tarp vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje

taip pat buvo analizuojami Koreliacija tarp vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje ir CAV-1 išraiška. Kaip buvo parodyta 3 lentelėje, tarp 226 atvejų mažo CAV-1expression naviko ląstelėse, 121 (53,5%) atvejai parodė mažą raišką CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje (. 2A pav), o tarp 21 atvejų su dideliu CAV-1 išraiškos auglio ląstelėse, 9 (42,9%) atvejai rodomas aukštą CAV-1 išraiška CAFS (2C pav.). Kiti 117cases parodė ryškų išraiška statusą naviko ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje (pav. 2E ir g). Nėra reikšminga koreliacija buvo įkurta tarp vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 išraiškos (r = -0,20 P
= 0,751).

klinikinė reikšmė CAV-1 ekspresija vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje dėl GC

Visi 286 GC mėginiai buvo galima 247 analize CAV-1 imunodažymu vėžinių ląstelių ir (86,4%) atvejų, turėjo pakankamą audinių analizės CAV-1 imunodažymu į kovos su sukčiavimu strategijoje. 3 lentelė apibendrino tarp vėžinių ląstelių arba CAFS koreliaciją į CAV-1 laisvę ir klasikinių klinikos parametrus GC, tokių kaip amžius, lytis, T stadijos ir limfmazgių būklę pagal vieną požymį analizė. Tačiau reikšmingo ryšio nebuvo nustatyta.

Be to, mes ištirti prognostinę vertę CAV-1 išraiškos naviko ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje. Kaplan-Meier analizė ir log-rank testas parodė, kad mažas išraiška CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje, o ne vėžinių ląstelių prognozuojama prasta išlikimą. Bendro išgyvenamumo mediana žemo kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 išraiška pogrupis buvo 73,0 mėnesio (95% PI, 55,589-90,411), o tolesnių intervalu, didelis kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 išraiška pogrupis turėjo apskaičiuotą išgyvenamumas maždaug 0,8 (pav 4A.). Kaip parodyta paveiksle. 4B, mažai išraiška CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje taip pat prognozavo ankstyvą pasikartojimo GC pacientams. 4C ir D pav nurodė, kad vėžinių ląstelių CAV-1 būklė neturėjo reikšmingos koreliacijos su bendro išgyvenamumo ir ligų nemokamai išlikimo ( P
= 0,178 ir 0,104, atitinkamai). Be to, sukauptas 5 metų išgyvenamumas pacientų, kurių augliai eksponuojami dideli CAFS CAV-1 išraiška buvo 75,5% (95% PI, 0,642-0,868), o tai buvo tik 57,4% (95% PI, 0,456-0,692) mažo CAFS CAV-1 grupė ( p
= 0,053).

pagal vieną požymį analizė, TNM etape, T etape, limfmazgių būklę ir kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 lygio buvo nustatyta, kad reikšmingai susijęs su liga išgyvenamumas be GC pacientams ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 ir 0,029, atitinkamai; 4 lentelė). TNM stadija T etapas ir kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 lygis buvo statistiškai patikimai koreliavo su bendro išgyvenamumo ( P
= 0,012, 0,006 ir 0,013, atitinkamai; 4 lentelė). Norėdami nustatyti, ar kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 išraiška buvo nepriklausoma prognozuoti GC pacientų pasikartojimo ir išlikimo, daugiamatis analizė atlikta naudojant Cox proporcinės pavojaus regresijos modelį, kartu su amžiumi, T klasifikavimo, TNM etape ir kitų vėžinių savybių. Vėlgi, CAV-1 lygis kovos su sukčiavimu strategijoje buvo savarankiškai ir reikšmingai susijęs su GC pacientų pasikartojimo ir rezultatus ( P pervežimas = 0,034 ir 0,005, atitinkamai, 4 lentelė). Priešingai, naviko ląstelės CAV-1 lygis nepavyko prognozuoti GC paciento pasikartojimui ir išlikimas vienu metu modelis (4 lentelė).

Išanalizuota mirties prognozavimo vertė CAV-1 slenksčių naviko ląstelėse ir kovos su sukčiavimu strategijoje taip pat. Kaip parodė 5 paveiksle, CAV-1 lygis kovos su sukčiavimu strategijoje prognozuojama mirtį su gera rezultatus; po kreive plotas buvo 0,627 (95% PI: 0,515-0,738; P
= 0,032). Kadangi, CAV-1 lygis vėžinių ląstelių nepavyko nuspėti mirtį, kurios plotas pagal 0.551 kreivė. (95% PI: 0.438-0.664 P
= 0,393)

Diskusijos

Čia, mes pranešė, kad CAV-1 reaktyvumas yra daugiausia stebimas ląstelių membranos ir citoplazmoje. Gastritas be MP audinių, CAV-1 signalas daugiausia aptikta pagrindo ir kaklą fundic liaukų ląstelėse. Gastritas su MP audinių, CAV-1 dažymo daugiausia aptinka įsisavinimo ląstelių ir taurė ląstelės metaplastic liaukų. Šis rezultatas koreliuoja su kitu tyrimą, kuriame išnagrinėjo CAV-1 skrandžio audinio per imunohistocheminiu [27]. CAV-1 išraiška palaipsniui mažėja su GC progresavimo ir ekspresijos lygio kovos su sukčiavimu strategijoje, o ne vėžinių ląstelių tam tikra apimtimi prognozuoja pasikartojimo ir išlikimas GC pacientams.

Vaidmenys CAV-1 baltymo auglių vystymuisi yra Su naviku priklauso ir skyrius-priklauso [12], [30]. CAV-1 genas yra lokalizuota į locus D7S522 žmogaus chromosomų 7q31.1, kuris dažnai ištrintas kai kurių auglių [11] tipams. Be to, CAV-1 Susijęs caveolin pastolių domeno ir gali sukelti slopinimą citokinų receptorių signalizacijos [14], o tai rodo, kad auglio slopinamojo vaidmenį CAV-1. Navikas skatinti aktyvumą CAV-1 buvo plačiai patvirtintas atidžiai nustatyti savo išraiška lygius ir klinikinių vertybes veislių vėžio, pavyzdžiui, liežuvis suragėjusių ląstelių karcinoma, stemplės suragėjusių ląstelių karcinoma, šlapimo pūslės pereinamojo laikotarpio ląstelių karcinomos, nosiaryklės karcinomą ir kaklo plokščiųjų ląstelių karcinoma [16], [31], [32], [33], [34]. CAV-1 turi skirtingus vaidmenis vėžinių ląstelių ir stromos ląstelėse. Pavyzdžiui, krūties ir prostatos vėžio, praradimo stromos CAV-1, bet ne vėžinių ląstelių CAV-1 šaukliai nedaug galimybių išgyventi [6], [8], [12], [14], nurodant sekcijų-priklauso vaidmenis Cav- 1.

Mūsų rezultatai parodė, kad CAV-1 išraiška lygis epiteliniuose ląstelių palaipsniui mažėjo piktybinio progresavimo GC. Panašūs rezultatai buvo pranešta kitą tyrimą [26] tyrimo CAV-1 išraišką IM ir GC, o tai reiškia CAV-1 gali būti laikomas naviko slopintuvas į GC plėtrai. Be to, abi vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 baltymo ekspresijos būklė buvo ne koreliuoja su tipiškų klinikos parametrų, pavyzdžiui, T etape, TNM etape ir Lauren klasifikacija. Tai buvo priešingai Kitame tyrime [26], kuris parodė, kad mažas išraiška vėžinių ląstelių CAV-1 baltymo koreliavo su aukštos T etape, TNM etape ir limfmazgių metastazių. Skirtumas gali būti dėl to, vertinimo būdą: mes įvertino dažymo padauginus intensyvumą ir ląstelių tamsintas dalį ir nustatė lizdu, kuri turėjo optimalaus jautrumo ir specifiškumo ROC kreive pagal bendrą išgyvenimo būklę; tuo tarpu kitų tyrimų buvo įvertintas tik imunoteigiamų ląstelių procentas ir teigiamas arba neigiamas ribos nebuvo pateikta. Be to, kuo didesnis imties dydis mūsų tyrime įtakos rezultatams, taip pat.

CAFS yra tarp svarbiausių komponentų naviko stromos, su svarbios funkcijos paskatinti iš ECM nusėdimą, reguliuojant epitelio diferenciaciją ir uždegiminę reakciją ir bendrauja su mikrokraujagyslių išskyrė matricos metaloproteinazes ir kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus [35]. Nuo CAV-1 baltymas yra reikalingas struktūrinis komponentas caveolae, pakeisti išraiška CAV-1 baltymo kovos su sukčiavimu strategijoje turėtų įtakos įvairių patologinių procesų ir todėl skatinti navikų vystymąsi. Praradimas CAV-1 baltymo CAFS skatina CAFS aktyvavimo per aktyvuoti TGF- kelią, todėl palengvinti naviko mikroaplinka atsinaujinimą ir naviko vystymąsi [12]. Tačiau kitas tyrimas paskelbtas Mobilusis
pranešė prieštaraujančius funkcijas CAFS CAV-1 baltymo, stromos CAV-1 palanki naviko invazija ir metastazes dėl force priklauso nuo architektūros reguliavimo mikroaplinkos [36]. Todėl kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 vaidmuo išlieka neaiški. Čia pateikti rezultatai parodė, nepriklausomą prognostinę prognozuoti GC dalyvavo CAV-1 ekspresijos lygį kovos su sukčiavimu strategijoje. Žemas išraiška CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje, bet ne vėžinių ląstelių nepriklausomai Prognozuojama anksti pasikartojimui ir prastos išlikimą GC pacientams. ROC analizė parodė, kad mirties prognozuoti vertės žemo CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje. Rezultatai numanomų naviko slopina vaidmenį kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 baltymo ir atitiko krūties ir prostatos vėžio išvada, kuri nušvietė, kad stromos CAV-1 nuostolių pranašauja prastą prognozę [8], [12], [15]. Be to, krūties vėžio, yra aišku, kad su vėžio išsivystymo, vėžinių mikroaplinka tampa kraujagyslių, hipoksinių ir blogai mityba nišą, skatinti autofagija į kovos su sukčiavimu strategijoje. Tada nenormalus aktyvuota autofagija pablogina CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje. Žinoma, ar panašūs mechanizmai egzistuoja GC reikia daugiau vitro
studijas.

Be to, praradimas stromos CAV-1 turi didelį prognostinė vertė ER (+), PR (+) HER2 (+), o vadinamieji "Triple-neigiamas krūties vėžiu sergantiems pacientams (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). Tuo pačiu metu iškelta endokrininės terapijos neturi įtakos jo prognostinė vertė, todėl naujas universalus arba plačiai taikoma krūties vėžys prognostinė žymeklis [37]. GC yra ketvirta bendra ir trečia mirtis sukelia vėžį pasaulyje [38], kuris vis dar trūksta pakankamai tinkamų biologinių žymeklių prognoziniam vertinimo ir asmeninį priešvėžinis gydymas. HER2 teigiamas GC pacientai naudos iš trastuzumabo gydymo, tačiau tik keli pacientai yra HER2 teigiami, pavyzdžiui, tik 19% GC pacientų parodė HER2 teigiamas mūsų tyrime. Šiandien, pažangios GC pacientai su neigiamu HER2 vis dar kenčia nuo prastos išlikimui. Taigi nustatant daugiau tikslų, slopinančius GC plėtra yra labai reikalinga. Čia, mes parodė naudojimo stromos baltymų, kaip biologinių žymenų GC, kurie galėtų prisidėti prie molekulinio tipo GC taigi ir GC gydymo, patikrinti pagrindinius vaidmenis naviko stromos naviko vystymosi vertybes. Be to, buvo atlikta perspektyvų studija yra labai rekomenduojama patikrinti prognostinę vertę ir ištirti klinikinės reikšmės aptikti CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje.

Vienas įdomus dalykas yra tai, kad nors kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 būklė gali būti naudojamas kaip prognostinis , kai buvo analizuojami tarp kovos su sukčiavimu strategijoje CAV-1 kiekis ir klasikinių klinikos parametrų GC koreliacija, nėra reikšmingas ryšys buvo rastas. Taigi, skatinti naviko invazija ir metastazes negali būti pagrindiniai mechanizmai, kuriais praradimas CAFS CAV-1 skatina GC plėtrą. Chemoterapija yra labiausiai paplitusi pagalbinė terapija, kurios rekomendavo vidurinės ir pažengęs GC pacientų Kinijoje. Kartu su rezultatais parodyta čia, mes pabrėžė, kad, ar mažas išraiška CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje koreliuoja su atsparumu chemoterapijos gali būti pastebimas problema vertas tolesnio tyrimo.

Galiausiai, mūsų tyrimo duomenimis, per pažangių QDs pagrindu dvigubas imunofluorescencinių ženklinimo technologija, CAV-1 baltymo kovos su sukčiavimu strategijoje buvo tiksliai yra. Pseudo-spalva bendrai lokalizavimo vaizdų leista mums įvertinti CAV-1 lygį CAFS tik, tačiau QDs-IHC ir QDs pagrindu dvigubai imunofluorescencinių ženklinimo technologija nėra plačiai naudojami klinikinių laboratorijų. Imunohistocheminis yra dažniausiai praktikuojamas technologija klinikinių laboratorijų. Mūsų Ankstesnis tyrimas parodė, kad tai QDs-IHC metodas yra jautrus ir specifiškas kaip IHC [22]. Jei norite nustatyti vienu metu dviejų skirtingų baltymų, tokių kaip CAV-1 ir alfa-SMA vienoje skaidrėje, QDs pagrindu dvigubai ženklinimas romaną, patikimą ir alternatyvus metodas, pagal kurį mes galime gauti rezultatus kuo tikslesnis.

Išvados

Taigi, mūsų tyrimo metu buvo įvertinta CAV-1 išraišką tiek vėžinių ląstelių ir kovos su sukčiavimu strategijoje ir ištirti jų klinikinė reikšmė GC pacientams. Pažymėtina, kad CAV-1 ekspresija CAFS o ne vėžinių ląstelių, ypač taikomų prognozuojant anksti pasikartojimui ir prastos išlikimo perspektyvas GC pacientų, o tai rodo CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje gali būti kandidatas terapinis taikinys ir naudinga prognostinė žymuo GC pacientų , Tolesni tyrimai yra reikalingi ištirti būdus, kuriais didelis CAV-1 kovos su sukčiavimu strategijoje slopinančius GC progresavimą ir, galbūt, plėtoti terapijos orientacija CAV-1. Be to, kitų klinikinių tyrimų bus labai svarbu patikrinti prognostinę vertę CAFS CAV-1 GC ir ar ji galėtų prisidėti prie asmeninio priešvėžinis gydymas.

Padėka

Autoriai dėkoja dr Kathryn Solka, Biochemijos katedra, skubėti universiteto medicinos centras raštu pagalbą.

• PLoS ONE: prognozinė vertė vėžio kamieninių ląstelių žymeklis CD133 raiškos skrandžio vėžys: sisteminė apžvalga
• PLoS ONE: Nukreipimas CDH17 Stabdo naviko progresavimas skrandžio vėžio Downregulating WNT /β-kateninai signalizacijos