PLoS ONE: Caveolin-1 expressie in Cancer Associated fibroblasten voorspelt Outcome bij maagkanker

De abstracte

Doelstellingen

Veranderde expressie van epitheliale en stromale caveolin-1 (Cav-1) wordt waargenomen in verschillende typen menselijke kankers. Echter, de klinische betekenis van Cav-1 expressie bij maagkanker (GC) blijft grotendeels onbekend. Deze studie heeft tot doel de clinicopathologische betekenis en prognostische waarde van zowel tumorcellen en kanker geassocieerd fibroblasten (cafe's) verkennen Cav-1 in GC.

Methoden en Resultaten

Quantum dots immunofluorescentie histochemie werd uitgevoerd de expressie van Cav-1 in 20 gevallen van gastritis zonder intestinale metaplasie (IM), 20 gevallen van gastritis met IM en 286 gevallen van GC onderzocht. Positieve tarieven van epitheliale Cav-1 in gastritis zonder IM, gastritis met een IM en GC toonde een dalende trend ( P
= 0.012). Lage expressie van Cav-1 in cafe's maar niet in tumorcellen een onafhankelijke voorspeller van een slechte prognose bij patiënten GC ( P
= 0,034 en 0,005 respectievelijk ziektevrije overleving en totale overleving). Cav-1 niveau in tumorcellen en cafe's toonde geen significante correlatie met de klassieke klinische en pathologische kenmerken.

Conclusies

Verlies van epitheliale Cav-1 kan kwaadaardige progressie en lage cafe's Cav-1 niveau herald erger te bevorderen uitkomst van GC patiënt, wat suggereert cafe's Cav-1 kan een kandidaat therapeutisch doelwit en een bruikbare prognostische marker van GC zijn

Visum:. Zhao X, Y Hij, Gao J, Fan L, Li Z, Yang G, et al. (2013) Caveolin-1 expressie in Cancer Associated fibroblasten voorspelt Outcome bij maagkanker. PLoS ONE 8 (3): e59102. doi: 10.1371 /journal.pone.0059102

Editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, de Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen: 6 december 2012; Aanvaard: 11 februari 2013; Gepubliceerd: 19 maart 2013

Copyright: © 2013 Zhao et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Dit werk werd gesteund door de National Undergraduate Innovatie Project van China (NO. 111048670) en de National Natural Sciences Foundation of China (NO. 30900652). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de bereiding van het manuscript "

Competing belangen:. Guilin Fanpu Biotechnologie Co, Ltd gaf technologische ondersteuning voor TMA bouw. Er zijn geen octrooien, producten in ontwikkeling of producten op de markt te verklaren. Dit betekent niet naleving van de auteurs te veranderen om alle PLoS ONE beleid op het delen van gegevens en materialen.

Introductie

Net als normale weefsels, tumoren zijn samengesteld uit twee afzonderlijke, maar interactieve compartimenten, het parenchym en het stroma. In tumoren, de tumorcellen zelf zijn parenchym, terwijl de stroma omvat een mengsel van extracellulaire matrix (ECM) elementen en niet-maligne cellen, zoals kanker geassocieerde fibroblasten (CAF), vasculaire endotheelcellen en immuun- en ontstekingscellen [1], [2], [3]. In de afgelopen jaren, de diepgaande invloed van tumor stroma op de groei en metastase van verschillende typen tumoren zijn uitgebreid toegelicht [2], [3]. Tumorcellen kunnen de depositie van een reactieve stroma met geactiveerde CAF, immuun- en ontstekingscellen, ECM elementen die invasie en metastase van kanker [2] kan worden bevoordeeld leiden, [3]. Bovendien, hoewel bepaalde rol van eiwitten bij moleculaire overspraak tussen tumor en stromale cellen onduidelijke veranderde expressie van stromale proteïnen zijn geopenbaard als nieuwe biomarkers in verschillende typen menselijke kankers, waaronder borstkanker [4], [5], [6] [7], prostaat [8], nasofarynx [9] en basale cel kanker [10]

De caveolin gen-familie bestaat uit drie leden:. CAV1
, CAV2
en CAV3
, coderend voor de eiwitten caveolin-1 (Cav-1), caveolin-2 en caveolin-3 respectievelijk [11]. CAV1
ligt op chromosoom 7 (locus 7q31.1) en bevat drie exons (35, 165 en 324 bp) en twee introns (1,5 en 32 kb) [11]. Cav-1 vormt de belangrijkste structurele component van caveolae die kolf-vormige vesiculaire invaginaties van plasmamembraan [12] zijn [13]. Verschillende receptoren en signaalmoleculen zijn gelokaliseerd in de caveolae en negatief gereguleerd door Cav-1 door middel van haar steigers domein. Daarnaast Cav-1 interageert direct met de dubbellaag van cholesterol en sfingolipiden in caveolin derhalve beïnvloeden de lipide homeostase en transport [12], [13]. Bij kanker is steeds duidelijker dat Cav-1 is betrokken bij het reguleren meerdere kanker geassocieerde processen variërend van cellulaire transformatie, tumorgroei, invasie en metastase, om multidrug resistentie en angiogenese [14]. Cav-1 toont een compartiment afhankelijke functie op tumoren. In de epitheliale compartiment Cav-1 effecten zowel positief als negatief op tumorontwikkeling. In tumor stroma, vooral de cafe's, lage expressie van Cav-1 eiwit voorspelt negatieve uitkomst bij borst- en prostaatkanker [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Niettemin klinische waarden van Cav-1 in GC nog niet helemaal duidelijk. Op basis van eerdere onderzoeken, we hypothese dat de rol van Cav-1 in het epitheel en stroma verschillend kunnen zijn, rol van epitheliale Cav-1 is onzeker, maar lage expressie van Cav-1 in cafe's kunnen bevorderen GC progressie correleert met negatieve uitkomst van GC patiënten .

de relatie tussen Cav-1 en GC progressie of onderdrukking verduidelijken, hebben we speciaal geanalyseerd zowel stromale en epitheelcellen expressie van Cav-1 in weefsel secties, via de geavanceerde quantum dots (QD) -gebaseerde immunofluorescentie histochemie (QDs-IHC), dat ontwikkeld was in onze vorige studies en die op grote schaal erkend zijn en gebruikt worden in laboratoria [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Fluorescerende halfgeleider nanokristal QD zijn een nieuwe klasse van multifunctionele anorganische fluoroforen dat veel voordeel eigenschappen, zoals smalle emissieband pieken, golflengte van de fluorescentie sterk afhankelijk van hun grootte en verschillende QD kleuren tegelijkertijd worden geëxciteerd door een enkele lichtbron met minimale spectrale overlappende [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Deze eigenschappen maken QDs uiterst nuttig voor multiplex moleculaire beeldvorming immunofluorescentie [21], [23]. De geavanceerde meerdere doelen labelingtechnologie van QD-IHC maakte een nauwkeurige analyse van Cav-1 expressie in CAF, door gelijktijdige detectie van alfa-gladde spier actine (α-SMA), een marker van cafe's en Cav-1 eiwit.

Materialen en methoden

patiënten en follow-up

Omdat de tijd was beperkt en sommige patiënten waren uit het ziekenhuis, dus het is moeilijk om schriftelijke toestemming te verkrijgen. We belden om elke patiënt, legde onze studie werd alleen gebruikt voor academische uitwisselingen, en was niet schadelijk is voor hun gezondheid, en niet hun prive-informatie. Toen we belden, was een notaris aanwezig, en we kregen de mobiele telefoon korte boodschap die we nodig hadden de patiënten die het onderzoek te sturen naar ons toestemming. Als de patiënt dood is, kregen we toestemming van zijn of haar wettelijke vertegenwoordiger. Tenslotte kregen we verbale toestemming van de 300 patiënten. Een totaal van 340-formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde weefsels werden verkregen van patiënten gediagnosticeerd in de periode van juli 2005 tot februari 2012, met inbegrip van 300 GC, 20 gastritis zonder intestinale metaplasie (IM) weefsels en 20 gastritis met IM weefsels. De gastritis zonder IM en IM monsters werden afgeleid van adenocarcinoom paracancerous weefsels. Serial sectie bevestigde geen tumorweefsel werd gevonden in deze monsters. Monsters werden verzameld uit de archieven van de afdeling Pathologie, Zhongnan Ziekenhuis van Wuhan University (Hubei, P.R. China). Histologische diagnose en graden van differentiatie werden bepaald volgens de World Health Organization (WHO) criteria voor GC. Alle GC monsters werden ingedeeld op basis van de UICC TNM classificatie (2009). Twee-board-gecertificeerd pathologen (Yang GF en Fan LF) herbevestigd de histopathologische kenmerken van deze monsters. 326 monsters werden met succes bewaard voor verdere analyse; Ondertussen werden 14 GC monsters verloren van de glijbaan tijdens immunokleuring. Klinisch-pathologische factoren GC patiënten werden opgenomen in Tabel 1. GC 247 patiënten er voldoende weefsel voor analyse van tumorcellen en kankergeassocieerd fibroblastische Cav-1 immunokleuring. Al deze 300 patiënten werden behandeld met radicale resectie of cytoreductieve chirurgie GC, vóór toediening van chemotherapie of radiotherapie. Deze studie werd goedgekeurd door het Instituut voor Onderzoek Medisch Ethische Commissie van de School of Basic Medische Wetenschappen, Wuhan University.

Follow-up begon op de datum van de operatie en eindigde in augustus 2012. Van de resterende 286 GC weefsels van patiënten , 257 ingeschreven in onze follow-up cohort en 116 patiënten die met succes een periode van vijf jaar follow-up bereikt of overleden als gevolg van GC zijn opgenomen in de survival analyse. Patiënten, die vijf jaar follow-up en bereikte overleden aan andere ziekten of door onverwachte gebeurtenissen, werden uitgesloten van de studie overleven. De mediane follow-up van de 116 patiënten was 62 (range: 1-85) maanden. Overall overleving werd gedefinieerd als het interval tussen de datum van de operatie gedood. Ziektevrije overleving werd gedefinieerd als het interval tussen de datum van de operatie om herhaling. De diagnose van herhaling was gebaseerd op de volgende criteria: een lokaal recidief gevonden door endoscopische biopsie of met relaparotomie; metastase op radiologische, ultrasone of cytologisch onderzoek.

Tissue Microarray Bouw

Twee sets van weefsel microarrays (TMA) werden gebouwd. Elke set bevatte 5 TMA's die met 340 exemplaren werden gemonteerd. De meest representatieve tumor gebieden werden gedefinieerd op hematoxylin- en eosine gekleurde coupes en gemarkeerd op de dia. De manier waarop we de TMA's gebouwd en de microarray systeem instrument waren hetzelfde met onze eerdere studie [24], [25]. Zoals eerder studies geen verslag intratumorale heterogeniteit van Cav-1 expressie in GC en onze haalbaarheid experiment bleek dat één ader per tumor op TMA en grote delen toonde een goede consistentie [26], [27], [28] dan ook in testen experiment, één ader werd bemonsterd deelneemt. Kort samengevat, een kern met een diameter van 1,5 mm werd uit elk monster en in lege "ontvangende" paraffineblokken geplaatst; deze blokken werden gesneden in secties (4 micrometer dik) en gebruikt voor QDs-IHC-analyse.

QD-gebaseerde Immunofluorescentie Histochemistry

Cav-1 immunoreactiviteit werd gedetecteerd in een set van TMA's. De antilichamen, QD geconjugeerd streptavidine probes (QD-SA) met een golflengte van 605 nm emissie en bijbehorende reagentia voor Cav-1 detectie was hetzelfde als voorheen [16] met de volgende belangrijke procedures: deparaffiniseren → antigeenterugtrekking → blokkeren → primair antilichaam voor Cav -1 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) → wassen en het blokkeren → gebiotinyleerd IgG → wassen en het blokkeren → 605 nm-QDs-SA → wassen → montage en observatie. Het signaal verkregen uit de etikettering cellen werd ontdekt via het gebruik van Olympus BX51 fluorescentie microscopie (CCD DP72). De QDs signaal was doelwit van specifieke, rood en photostable. Autofluorescentie van weefsel-achtergrond was groen. Aangezien Cav-1 normaliter lokaliseert in endotheelcellen van bloedvaten [27], [29] dat in elk TMA onderzocht kan worden bediend als interne positieve en kwaliteitscontrole QD-IHC. TBS in plaats van Cav-1 primair antilichaam diende als negatieve controle.

QD-gebaseerde Double Immunofluorescentie Labeling

We gebruikten een set van TMA voor Cav-1 /α-SMA colocalization, gedetecteerd door QDs -gebaseerde dubbele immunofluorescentie labeling technologie volgens de instructies van de fabrikant (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.). Alle verdunningsstappen (antilichamen en QDs) werden uitgevoerd in TBS met 2% runderserumalbumine (BSA, Sigma, St. Louis, MO, USA). Antigeenterugtrekking werd uitgevoerd in citroenzuur (10 mM, pH 6,0) bij 95 ° C gedurende 10 minuten, gevolgd door afkoelen gedurende 30 minuten. TMA's werden eerst geïncubeerd in 2% BSA buffer bij 37 ° C gedurende 30 min, en vervolgens bij 4 ° C overnacht bij konijnen anti-Cav-1 polyklonaal antilichaam en muis anti-α-SMA monoklonaal antilichaam (verdunning 1:300, Abcam, Cambridge, MA) om antilichamen bindingen. Daarna werden TMA driemaal gewassen met TBS-T (0,5% Tween in TBS) gedurende 5 min per keer en geïncubeerd in gebiotinyleerd geit anti-muis IgG (1:400 verdunning, Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) bij 37 ° C gedurende 30 min. Voor QDs conjugatie het antilichaam-bindende TMA werden geïncubeerd in 2% BSA buffer bij 37 ° C gedurende 10 min, geïncubeerd in QD (525 nm) geconjugeerd aan streptavidine (1:200, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) en QD (605 nm) geconjugeerd anti-konijnen IgG geit (1:100, Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.) gedurende 50 minuten, driemaal gespoeld met TBS-T gedurende 5 minuten elk. Tenslotte TMA's werden afgesloten met 90% glycerine (Sigma). De immunofluorescentie signaal werd waargenomen door de Beugel's multispectrale microscopie imaging systemen (Remklauw Life Sciences). Omdat de immunofluorescentie signaal van enkele etikettering en dubbele etikettering respectievelijk knapte door CCD DP72 en multispectrale microscopie imaging systemen, we gekalibreerde resultaten van de twee instrumenten om de vergelijkbaarheid van deze experimenten te waarborgen. Positief signaal van α-SMA was groen en Cav-1 was rood. Cav-1 expressie in endotheelcellen van bloedvaten [27], [29], α-SMA expressie in bloedvaten en het positieve weefsel worden beschouwd als de positieve controles. TBS in plaats van twee primaire antilichamen dienden als negatieve controles, slechts het tonen van autofluorescentie-signaal.

Scoring van de Immunofluorescentie Resultaten

De resultaten werden geëvalueerd door twee pathologen (Yang GF en Fan LF) gelijktijdig in dezelfde displayer , onafhankelijke en blind voor de klinische kenmerken van de studie. De scores van de twee pathologen werden vergeleken en eventuele afwijkende scores werden opnieuw door herwaardering van het gekleurde weefsel specimen door de twee pathologen om een ​​consensus te score te behalen. De methode voor het maken van Cav-1 kleuring van tumorcellen en CAF waren hetzelfde. Scores werden bepaald door het combineren van het aantal positief gekleurde cellen en de intensiteit van kleuring. De secties werden aanvankelijk gescand op laag vermogen. Dan cellen van vijf representatieve velden van elk monster bij een hoge vergrotingsfactor (200 ×) werden geteld voor Cav-1-gekleurde tumorcellen of cafe's. Het gebied van positieve (AP) worden ingedeeld de cellen als volgt: 0 (geen positieve gebied of positieve area < 5%), 1 (positieve gebied 5-25%), 2 (positieve gebied 26-50%), 3 ( positieve gebied 51-75%) en 4 (positieve gebied > 75%). Cav-1 intensiteit van de kleuring (IS) van de numerieke waarde resulteerde in scores: 0 (negatief: geen positief signaal), 1 (zwak: licht of donker rood signaal) en 2 (sterk: helder rood signaal). Expressie niveaus van Cav-1 werden berekend op basis van de totale score als de volgende vergelijking:. Intensiteit distributie (ID) = AP × IS

De cut-off waarde voor hoge en lage expressie werd bepaald op de receiver operating characteristic ( ROC) curve analyse met betrekking tot de totale overleving. Volgens de optimale gevoeligheid en specificiteit van de ROC-curve door algehele overleving, 1.5 werd gedefinieerd als de optimale cutoff voor Cav-1 immunofluorescentie score in cafe's (een ID score ≥1.5 gedefinieerd hoge expressie en ID-score < 1,5 aangegeven lage expressie) , 3,5 werd gedefinieerd als de optimale cutoff voor Cav-1 immunofluorescentie score in tumorcellen (een ID-score ≥3.5 gedefinieerd hoge expressie en ID-score < 3,5 aangegeven lage expressie).

Statistische analyse

We gebruikten SPSS 17.0 software (Chicago, IL, USA) alle statistische analyses uit te voeren. Friedman-test werd gebruikt om het verschil van Cav-1 origineel scores over verschillende maaglesies analyseren. ROC-curve analyse werd uitgevoerd om de cutoff punt van de hoge of lage Cav-1 te bepalen en evalueren van de voorspellende waarde van Cav-1 uitdrukking voor de totale overleving. De χ2-test of Fisher's exact test werd gebruikt om de correlatie tussen de klinisch-pathologische parameters en Cav-1 expressie te analyseren. Spearman rangcorrelatietoets werd uitgevoerd om de associatie tussen Cav-1 expressie te analyseren in tumorcellen en cafe's. De totale overleving en ziektevrije overleving werden geschat met behulp van de Kaplan-Meier-methode en vergeleken met behulp van de lange-rank test. Multivariate analyse met behulp van Cox regressie model werd gebruikt om de onafhankelijke prognose waarden te testen. Twee tailed P
-waarden. ≪ 0,05 werden beschouwd als statistisch significant

Resultaten

Expressie van Cav-1 in verschillende Maaglaesies

De lokalisatie en expressie van Cav-1 in gastritis zonder IM, gastritis met een IM en GC werden beoordeeld door QDs-IHC met behulp van de Cav-1 polyklonaal antilichaam. De sterke intensiteit donut-vormige positief signaal Cav-1 in de tumor stroma was de interne controle van endotheliale expressie (Fig. 1A). In gastritis zonder IM weefsels, negatieve Cav-1-signaal voornamelijk in het oppervlak slijm cellen (Fig 1A.) En positief signaal voornamelijk in de basis en de nek van fundic klier cellen (Fig. 1C). In gastritis met IM weefsels, sommige gevallen toonde geen Cav-1 distributie (afb. 1E) en enkele toonden positieve Cav-1 kleuring in het absorberende cel en goblet cel van metaplastische klieren (fig. 1G). Expressie van Cav-1 immunoreactiviteit werd voornamelijk waargenomen op het celmembraan (fig. 1 l) en cytoplasma. De kwaliteit van het signaal te scoren werd weergegeven in figuur. 1I-K en representatieve voorbeelden van Cav-1 expressie in GC werden toonde in figuur. 2. colocalization van Cav-1 en α-SMA eiwitten werd gedetecteerd door QD-gebaseerde dubbele immunofluorescentie labeling in de GC en geanalyseerd door multispectrale systemen nauwkeurig worden vastgesteld Cav-1 expressie in CAF (fig. 3). De verdeling van het signaal van Cav-1 in fibroblasten is willekeurig en heeft geen relatie met de Cav-1 status tumorcellen.

Tabel 2 samengevat de oorspronkelijke scores van Cav-1 expressie in gastritis zonder IM, gastritis met IM en GC. In epitheliale compartiment, 30% (6/20) van gastritis zonder IM, 55% (11/20) van gastritis met een IM, 75% (15/20) van GC werden gescoord 0, toont Cav-1 eiwit expressie niveau geleidelijk afnemende . Friedman test toonde aan dat het verschil van Cav-1 kleuring score tussen gastritis zonder IM, gastritis met een IM en GC was statistisch significant ( P
= 0.012).

Correlatie Expressie van Cav-1 tussen tumorcellen en CAF

De correlatie tussen tumorcellen en CAF in Cav-1 expressie werd geanalyseerd. Zoals aangegeven in tabel 3, onder 226 gevallen met een lage Cav-1expression in tumorcellen, 121 (53,5%) gevallen bleek lage expressie van Cav-1 in cafe's (Fig. 2A), en tussen de 21 gevallen met een hoge Cav-1 expressie in tumorcellen, weergegeven 9 (42,9%) gevallen high Cav-1 expressie in cafe's (Fig. 2C). De andere 117cases toonden verschillende status expressie in tumorcellen en cafe's (Fig. 2E en G). Geen significante correlatie werd opgericht tussen tumorcellen en cafe's Cav-1 expressie (r = -0,20, P
= 0,751).

Klinische betekenis van Cav-1 expressie in tumorcellen en cafe's van GC

Alle 286 GC monsters waren beschikbaar voor analyse van Cav-1 immunokleuring in tumorcellen en 247 (86,4%) gevallen had voldoende weefsel voor de analyse van Cav-1 immunokleuring in cafe's. Tabel 3 vat de correlatie tussen tumorcellen of CAF in Cav-1 expressie en de klassieke clinicopathologische parameters van GC, zoals leeftijd, geslacht, T stadium en lymfeklier status univariate analyse. Er werd echter geen significante relatie gevonden.

Verder onderzochten we de prognostische waarde van Cav-1 expressie in tumorcellen en cafe's. Kaplan-Meier-analyse en de log-rank test toonde aan dat lage expressie van Cav-1 in cafe's in plaats van in tumorcellen voorspelde slechte overleving. Mediane overleving van low cafe's Cav-1 expressie subgroep was 73,0 maanden (95% CI, 55,589-90,411), terwijl in de follow-up interval, de hoge cafe's Cav-1 expressie subgroep had een berekende overlevingskans van ongeveer 0,8 (Fig . 4A). Zoals te zien in figuur. 4B, lage expressie van Cav-1 in cafe's voorspelde ook vroege herhaling van GC patiënten. Figuur 4C en D aangegeven dat tumorcellen Cav-1-status had geen significante correlatie met de algemene overleving en ziektevrije overleving ( P
= 0,178 en 0,104, respectievelijk). Bovendien is de cumulatieve 5 jaars overleving van patiënten met tumoren vertoonden hoge cafe's Cav-1 expressie was 75,5% (95% CI, 0,642-0,868), terwijl het was slechts 57,4% (95% CI, 0,456-0,692) in lage cafe's Cav-1 groep ( P
= 0,053).

In univariate analyse, TNM stadium, T-stadium, de status van de lymfeklieren en cafe's Cav-1 niveau bleken significant geassocieerd met de ziekte GC overleving van patiënten ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 en 0,029, respectievelijk Tabel 4). TNM stadium, T stadium en cafe's Cav-1 niveau waren significant gecorreleerd met de totale overleving ( P
= 0,012, 0,006 en 0,013, respectievelijk tabel 4). Om te bepalen of cafe's Cav-1 expressie was een onafhankelijke voorspeller van herhaling en de overleving GC patiënten, werd een multivariate analyse uitgevoerd met behulp van Cox regressie model, samen met de leeftijd, T indeling, TNM stadium en andere tumor kenmerken. Opnieuw werd Cav-1 niveau CAF zelfstandig en significant geassocieerd met recidief GC patiënt en het resultaat ( P
= 0,034 en 0,005, respectievelijk Tabel 4). Integendeel, tumorcellen Cav-1 niveau niet recidief en overleving GC patiënt de gelijktijdige model (Tabel 4) voorspellen.

De dood voorspellende waarde van Cav-1 drempel in tumorcellen en in CAF werd geanalyseerd ook. Zoals bleek in figuur 5, Cav-1 niveau in cafe's voorspelde dood met goede prestaties; het gebied onder de curve was 0,627 (95% CI: 0,515-0,738; P
= 0,032). Overwegende dat Cav-1 niveau in tumorcellen niet dood te voorspellen, met een oppervlakte onder de curve van 0,551. (95% BI: 0,438-0,664; P
= 0,393)

Discussie

Hier hebben we gemeld dat Cav-1 immunoreactiviteit voornamelijk waargenomen op het celmembraan en cytoplasma. In gastritis zonder IM weefsels, is Cav-1-signaal voornamelijk gedetecteerd in de basis en de nek van fundic kliercellen. In gastritis met IM weefsels, Cav-1 kleuring lokaliseert voornamelijk in de absorberende cel en goblet cel van metaplastische klieren. Dit resultaat komt overeen met een andere studie die Cav-1 geanalyseerd maagweefsel via immunohistochemie [27]. Cav-1 expressie geleidelijk afneemt met de progressie van GC en de expressie niveau CAF plaats in tumorcellen tot op zekere hoogte voorspelt recidief en overleving bij patiënten GC.

Rollen van Cav-1 eiwit in tumor ontwikkeling tumor-afhankelijke en compartiment-afhankelijke [12], [30]. Cav-1-gen is gelokaliseerd op D7S522 locus van humaan chromosoom 7q31.1, die vaak verwijderd bij sommige soorten tumoren [11]. Voorts Cav-1 is betrokken bij de caveolin steigers domein en kan inhibitie van de cytokine receptor signalering [14] induceren, wat suggereert dat de tumor suppressor functie van Cav-1. De tumor bevorderende werking van Cav-1 is algemeen bevestigd door zorgvuldig detecteren van de expressie niveaus en klinische waarden soorten kanker, zoals tong plaveiselcelcarcinoom, esophageal plaveiselcelcarcinoom, blaas overgangsperiode cel carcinomen, nasofaryngeale carcinomen en hals plaveiselcel carcinoma [16], [31], [32], [33], [34]. Cav-1 heeft verschillende functies in tumorcellen en stromale cellen. Bijvoorbeeld in borst- en prostaatkanker, verlies van stromale Cav-1, maar niet tumorcellen Cav-1 kondigt een slechte prognose [6], [8], [12], [14], met vermelding van het compartiment-afhankelijke rol van CAV 1.

Onze resultaten geven aan dat Cav-1 expressie in epitheel cellen geleidelijk af met de kwaadaardige progressie van GC. Soortgelijke resultaten werden bij een ander onderzoek [26] onderzoeken Cav-1 expressie van IM en GC, impliceren Cav-1 kan als een tumor suppressor in de ontwikkeling van GC beschouwd. Bovendien werden zowel tumorcellen en CAF Cav-1-status eiwitexpressie niet gecorreleerd met de typische clinicopathologische parameters, zoals T stadium TNM en Lauren classificatie. Het was in tegenstelling tot de andere studie [26] die aantoonden dat de lage expressie van tumorcellen Cav-1 eiwit werd gecorreleerd met hoge T-stadium, TNM en lymfeklier. Het verschil kan worden veroorzaakt door de evaluatiemethode: evalueerden we de kleuring met de intensiteit en de hoeveelheid cellen gekleurd vermenigvuldigen en bepaald het afsnijpunt die optimale gevoeligheid en specificiteit van de ROC curve gebaseerd op algehele overleving hadden; terwijl in het andere onderzoek alleen het percentage immunopositieve cellen werd geëvalueerd en de drempel van positieve of negatieve niet gepresenteerd. Daarnaast grotere steekproefomvang van onze studie beïnvloedde de resultaten en.

CAF behoren tot de meest essentiële onderdelen van tumor stroma, met belangrijke functies induceren van de afzetting van ECM regelen epitheliale differentiatie en ontstekingsreactie en interactie met de microvasculatuur secreteren matrix metalloproteïnasen en vasculaire endotheliale groeifactor [35]. Sinds Cav-1 eiwit is de noodzakelijke structurele component van caveolae, veranderde expressie van Cav-1 eiwit in cafe's zouden verschillende pathologische processen beïnvloeden en dus te bevorderen de ontwikkeling van tumoren. Verlies van Cav-1 eiwit in CAF bevordert de activering van cafe's via activerende TGF-β pathway, dus het vergemakkelijken van de tumor micro remodeling en tumorontwikkeling [12]. Echter, een andere studie gepubliceerd in Mobiele
gemeld in strijd functies van cafe's Cav-1 eiwit dat stromale Cav-1 bevordert tumor invasie en metastase door geweld-afhankelijke architectonische regulering van de micro-omgeving [36]. Daarom is de rol van cafe's Cav-1 blijft onzeker. De hier gepresenteerde resultaten toonden een onafhankelijke prognostische predictor van GC met betrekking tot de Cav-1 expressie niveau in cafe's. Lage expressie van Cav-1 in cafe's, maar niet in tumorcellen onafhankelijk geprognotiseerde vroeg recidief en een slechte overleving van GC patiënten. ROC analyse gaf de dood voorspellen waarde van low Cav-1 in cafe's. De resultaten impliciet de tumor remmende rol van de cafe's Cav-1 eiwit en waren in overeenstemming met de bevinding in borst- en prostaatkanker, die dat het verlies van stromale Cav-1 toegelicht kondigt een slechte prognose [8], [12], [15]. Ook bij borstkanker, is het duidelijk dat de ontwikkeling van kanker, de tumor micro-omgeving wordt een hypoxische en slechte voeding niche, stimuleren autofagie in CAF. Dan breekt de abnormale geactiveerd autofagie Cav-1 in cafe's. Natuurlijk of soortgelijke mechanismen bestaan ​​in GC vereist meer In vitro
studies.

Verder verlies van stromale Cav-1 heeft een grote voorspellende waarde in ER (+), PR (+), HER2 (+), en de zogenaamde triple-negatieve borstkanker (eR (-) /PR (-) /HER2 (-)). Tegelijkertijd ingesteld endocriene therapie niet beïnvloeden de voorspellende waarde, waardoor het een nieuw universeel of breed toepasbaar borstkanker prognostische marker [37]. GC is de vierde gemeenschappelijke en derde dood veroorzaken van kanker in de wereld [38], die nog steeds ontbreekt aan voldoende geschikte biomarkers voor prognostische evaluatie en gepersonaliseerde behandeling tegen kanker. HER2 positieve GC patiënten geprofiteerd van trastuzumab behandeling echter slechts enkele patiënten HER2 positief, bijvoorbeeld slechts 19% van de patiënten vertoonden GC HER2 positief in onze studie. Tegenwoordig zijn geavanceerde GC patiënten met een negatieve HER2 nog steeds te lijden van een slechte overleving. Dus het identificeren van meer doelen die onderdrukken GC ontwikkeling is sterk nodig. Hierin hebben we aangetoond dat de waarde van het gebruik stromale eiwitten biomarkers in GC, wat kan bijdragen tot de moleculaire typering van GC en derhalve de behandeling van GC, verifiëren de essentiële rol van tumor-stroma in tumorontwikkeling. Bovendien wordt een prospectieve studie ten zeerste aanbevolen om de prognostische waarde te valideren en om de klinische betekenis van het opsporen van onderzoeken Cav-1 in cafe's.

Een interessante is dat, hoewel cafe's Cav-1-status kan worden gebruikt als een voorspeller wanneer de correlatie tussen CAF Cav-1 niveaus en klassieke klinisch-parameters van GC geanalyseerd, werd geen significant verband gevonden. Zo, het bevorderen van de tumor invasie en metastase is misschien niet de primaire mechanismen waarmee het verlies van cafe's Cav-1 bevordert GC ontwikkeling. Chemotherapie is de meest voorkomende aanvullende therapie die worden aanbevolen naar het midden en vergevorderd stadium GC patiënten in China. In combinatie met de hier getoonde resultaten, we gewezen dat of lage expressie van Cav-1 in cafe's gecorreleerd met resistentie tegen chemotherapie een opmerkelijk probleem is die verder onderzoek kan worden.

Tenslotte, in onze studie, via de geavanceerde QDs gebaseerde dubbele immunofluorescentie labeling technologie, Cav-1 eiwit in cafe's was precies bevindt. De pseudo-color co-localisatie images toegestaan ​​ons naar de Cav-1 niveau in cafe's uitsluitend echter QDs-IHC en QDs-gebaseerde dubbele immunofluorescentie labeling-technologie wordt niet vaak gebruikt in klinische laboratoria te evalueren. Immunohistochemie is de meest toegepaste technologie in klinische laboratoria. Onze eerdere studie manifesteert dat QD-IHC methode is zo gevoelig en specifiek IHC [22]. Als u tegelijkertijd twee verschillende eiwitten zoals Cav-1 en α-SMA in een dia te detecteren, QD-gebaseerde dubbele etikettering is een nieuwe, betrouwbare en alternatieve methode, waarmee we de resultaten zo precies mogelijk te kunnen krijgen.

Conclusies

tot slot, onze studie evalueerde de Cav-1 expressie in zowel tumorcellen en cafe's en onderzochten hun klinische betekenis voor GC patiënten. Het is opmerkelijk dat de expressie van Cav-1 in cafe's in plaats van tumorcellen in het bijzonder toepasbaar in het voorspellen vroege recidief en slechte overlevingskansen van GC patiënten suggereert Cav-1 in cafe's kandidaat therapeutisch doelwit en een bruikbare prognostische marker GC patiënten kunnen . Verdere studies zijn nodig om de mechanismen die een hoog Cav-1 in cafe's onderdrukken GC progressie en eventueel te onderzoeken, om geneesmiddelen te ontwikkelen gericht Cav-1. Bovendien zal er meer klinische proeven van essentieel belang om de prognostische waarde van cafe's Cav-1 in GC te controleren en of het zou kunnen bijdragen aan gepersonaliseerde behandeling tegen kanker.

Dankwoord

De auteurs danken dr Kathryn A Solka, Vakgroep Biochemie, Rush University Medical Center voor het schrijven van hulp.

• PLoS ONE: prognostische waarde van Cancer Stem Cell Marker CD133 Expression bij maagkanker: een systematische Review
• PLoS ONE: Targeting CDH17 onderdrukt progressie van de tumor bij maagkanker door neerwaarts reguleren Wnt /β-catenine Signaling