PLoS ONE: Helicobacter pylori Skatina epitelio-mezenchiminių perėjimas Skrandžio vėžio Downregulating programuota ląstelių mirtis Protein 4 (PDCD4)

Anotacija

Helicobacter pylori
, yra gram-neigiamas, microaerophilic bakterija rasta skrandyje, yra manoma, kad būti susijęs su kancerogenezės, invazija ir metastazių virškinimo sistemos ligos. Citotoksinas susijęs genas A (CagA) yra onkogeninė baltymas H. pylori
, kad yra koduotas CAG patogeniškumo salos, susijusių su skrandžio vėžio išsivystymo. Epitelio-mezenchiminių perėjimas (EMT) yra pagrindinis biologinis renginys invazijos ar metastazių epitelio ląstelių. h. pylori
gali skatinti EMT į žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas, tačiau konkretūs mechanizmai vis dar miglota. Mes ištirti pagrindinės molekulinės mechanizmą EMT sukeltos H. pylori
CagA skrandžio vėžio. Mūsų straipsnyje mes nustatėme, skrandžio vėžys egzempliorių ir gretimų nevėžinės pavyzdžius imunohistocheminiu ir nustatė padidėjusią raišką EMT susijusių reguliavimo baltymų TWIST1 ir mezenchimos žymeklio vimentin vėžiu audinių, o programuota ląstelių mirtis koeficientas 4 (PDCD4) ir epitelio žymeklis El cad išraiška sumažėjo vėžiu egzempliorių. Šie pokyčiai buvo susiję su laipsnio audinių piktybinis navikas. Be to, PDCD4 ir TWIST1 koncentracija buvo susijusi. Skrandžio vėžio ląstelių cocultured su CagA ekspresijos plazmidės, CagA aktyvuota TWIST1 ir vimentin išraiška, ir slopinamas El cad ekspresiją downregulating PDCD4. CagA pat skatinamas judumas skrandžio vėžio ląstelių reguliuojant PDCD4. Taigi, h. pylori
CagA sukeltas EMT skrandžio vėžio ląstelių, kurios atskleidžia naują signalizacijos kelią iš EMT skrandžio vėžio ląstelių linijų

nurodomoji dalis:. J. O Zeng J Liang X Wang W Zhou Y Saulės Y, ir kt. (2014), Helicobacter pylori
Skatina epitelio-mezenchiminių perėjimas Skrandžio vėžio Downregulating programuota ląstelių mirtis baltymų 4 (PDCD4). PLoS ONE 9 (8): e105306. Doi: 10,1371 /journal.pone.0105306

redaktorius: Rajeev Samant, Alabamos universitetas Birmingeme, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Vasario 12, 2014 m Priėmė: Lie 21, 2014 m Paskelbta 21 Rugpjūčio 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 J. et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė Nacionalinės pagrindinių mokslinių tyrimų programą Kinijos (ne 973 programa 2012CB911202.), Nacionalinis gamtos mokslų fondas Kinijos (Nr: 81.171.536, 81.371.781, 81.272.654, 81.372.680 ir 81.170.514), medicinos mokslo ir technologijų plėtros programa Shandong (ne 2013WS0209.) ir Nepriklausomų inovacijų fondas Shandong University (2012TS106 Nr.). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Helicobacter pylori
( h. pylori
) yra spiralės formos, gramneigiamų bakterijų susijęs su virškinimo ligomis, įskaitant lėtinį gastritą, dvylikapirštės žarnos opa, skrandžio vėžio, ir gleivinės susijęs limfoidinio audinio limfoma. h. pylori
buvo klasifikuojama kaip Pasaulio sveikatos organizacijos ir Tarptautinės agentūros vėžio tyrimų (WHO /IARC) kancerogenas 1994 [1], [2].

h. pylori
genai turėti citotoksinas susijęs genas A (CagA) patogeniškumo salą, kuri koduoja didžiąją virulentiškumo baltymų CagA ir IV tipo sekrecijos sistemos (T4SS). CagA pristatomas surengti ląsteles T4SS ir skatina vėžio formavimąsi ir progresavimo [3]. h. pylori
gali dereguliavimo ląstelių proliferaciją, paveikti normalų Apoptozė kelią, įtaką ląstelių formą, panaikinti junctional veiklą ir palengvinti epitelio-į-mezenchiminių perėjimo (EMT) fenotipą po to translocates į šeimininko ląstelę [4], [5]. h. pylori
efektorinių baltymų CagA paveikia daugumą šių būdų. vivo
eksperimentai parodė, kad transgeninių išraiška CagA gali sukelti keletą piktybinių navikų pelių, įskaitant skrandžio epitelio hiperplazija, mieloleukemija ir B-ląstelių limfomos ar skrandžio polipus ir adenokarcinomos skrandžio ir plonosios žarnos [6]. Tačiau molekulinės mechanizmas H. pylori
CagA bendrauja nuo šeimininko ląstelės vis dar neaišku.

EMT pradžių buvo pripažintas embriogenezės funkcija, gyvybiškai proceso morfogenezę metu embriono ir širdies vystymuisi. Tačiau, ji taip pat prisideda prie audinių fibrozė, naviko invazija ir metastazių. EMT pasižymi keletu skirtingų bruožų, pavyzdžiui, nuostolių ląstelių sukibimą, padidintą ląstelių mobilumo, atsparumas apoptozės, o kai kamieninių ląstelių savybes. Su EMT, epitelio žymekliai, tokių kaip El-cad šou sumažėjo išraiška ir mezenchiminių tokios žymės kaip vimentin šou padidėjo išraiška. Kitos reguliavimo molekulės, pavyzdžiui, sraigė, pasukti ir Slug Rodyti pasikeitė išraišką [7], [8], [9]. Onkogeniniam keliai, kurie gali sukelti EMT apima keičia augimo faktoriaus beta (TGF-beta) Src, ETS, Rasa, WNT /β-kateninai, Notch, branduolinės faktoriaus κB ir integrino [10], [11], [12].

infekcija su žmogaus patogeniškumo veiksnys H. pylori
Daroma prielaida, kad sukelti EMT, invazijos ar metastazių skrandžio vėžio. Pavyzdžiui, ląstelę matricos metaloproteinazės 7 patogeninių H. pylori
iš dalies priklauso nuo Gastrino ir gali turėti funkciją skrandžio vėžio vystymąsi, potencialiai per EMT, kurią netiesiogiai skatinančiais lygių tirpios heparino privalomas endotelio augimo faktorius [13]. h. pylori
CagA dalyvauja invazijos į vėžinių ląstelių liberalizavimo c-met receptorių signalizacijos [14]. Kaip gerai, CagA gali padidinti WNT /β-kateninai signalinio kelio aktyvacija sutrikdyti E-cad-β-kateninai komplekso stabilizavimas. Taigi, CagA vaidina svarbų vaidmenį žarnyno metaplazijos [15] plėtrai. Be to, Mikrogardelė analizė pasiūlė, kad fosforilinimo statusas CagA gali turėti įtakos EMT susijusių genų ekspresiją skrandžio vėžio ląstelių [16]. Tačiau mažai žinoma apie mechanizmus, kurie grindžiami EMT sukeltas CagA.

programuota ląstelių mirtis baltymų 4 (PDCD4) yra lokalizuota į branduolį besidauginančiose ląstelių [17]. Kaip svarbų po transkripcijos tikslo MicroRNA (MIR) Pasaulis-21, PDCD4 yra susijęs su naviko progresavimo ir prognozės žmogaus plaučių, gaubtinės, krūties ir skrandžio vėžio [18], [19]. Navikas slopintuvas PDCD4 gali prisijungti prie eIF4A ar eIF4G ir slopina vertimą. PDCD4 gali reguliuoti mitogenu aktyvinto proteino 4 kinazės 1 arba urokinazė plasminogeno aktyvatorius receptorių (uPAR) išraišką slopinti karcinoma invazija ir intravasation [20], [21]. PDCD4 taip pat galėtų įtakoti genų transkripciją. Ji sąveikauja su DNR rišantis domenas TWIST1 ir slopina Y-dėžutė surišantis baltymas 1 išraiška [22]. Kaip gerai, praradimas PDCD4 išraiška yra susijęs su piktybinę transformaciją skrandžio vėžio [23], [24]. Downregulation iš PDCD4 yra susijęs su naviko diferenciacijos virškinamojo trakto vėžio [25]. Tačiau, ar PDCD4 dalyvauja EMT sukeltos CagA skrandžio vėžio ir konkretaus mechanizmo vis dar reikia eta.

Čia mes ištirti EMT susijusių baltymų ir PDCD4 raiškos reguliavimas skrandžio vėžio audinio ir CagA aktyvavimo TWIST1 saviraiškos ir slopinimo E-cad ir PDCD4 raiškos skrandžio vėžio ląsteles.

medžiagos ir metodai

pacientai ir audinių egzemplioriai

tyrimas patvirtino etiką komitetas Shandong University School of Medicine, ir visi mėginiai ir informacija buvo surinkta raštišką informuotumu pagrįstą sutikimą. Skrandžio naviko audiniai ir jų suderintos ne vėžiniai audiniai chirurgijos Qilu ligoninė, Shandong University (Jinan, Kinija) nuo 2010 iki 2012 m Nė vienas iš pacientų, metu derlius iš 30 pacientų gavo adjuvantinis chemoterapija arba radioterapija prieš operaciją. Diagnozė skrandžio vėžio buvo histopathologically patvirtino hematoksilinu ir eozino dažymo.

Mobilusis kultūra ir transfekcija

Žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas (AGS, BGC-823 ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901) buvo gauti iš Kinijos "Academia Sinica Mobilusis saugyklos (Šanchajus). Ląstelės buvo inkubuotos rekomenduojamas laikmenos ir drėgnoje atmosferoje sudėtyje yra 5% CO _{2 esant 37 ° C be antibiotikų. SGC-7901 ląstelės ir BGC-823 ląstelės buvo auginamos RPMI 1640 vidutinės papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS), ir AGS ląstelės buvo auginamos F12 terpėje, papildytoje 10% FBS. Žiniasklaida ir FBS buvo įsigytas iš Invitrogen (JAV). Tada ląstelės buvo laikinai perkeltų su plazmidžių pCDNA3.1 ar pCDNA3.1-CagA (dovana nuo dr Yongliang Zhu, Zhejiang universiteto, Kinija) ir pEGFP-C1 arba pEGFP-C1-PDCD4 (pagaminta ir pateikta dr Youhai Chen , Perelman medicinos mokyklos universiteto Pennsylvania, Philadelphia, JAV), naudojant rentgeno treme GENE HP transfekcijq reagentas (Roche Diagnostics, Vokietija) pagal gamintojo protokolus.}

RNR išskyrimas, atvirkštinę transkripciją ir KRL PGR

bendra RNR buvo išskirta iš ląstelių naudojant Trizol reagento (Invitrogen, JAV). Atvirkštinės transkripcijos apėmė Viršutinis III Pirma grandinės sintezei rinkinį (Invitrogen). Genų buvo aptiktas naudojant kiekybinių realaus laiko PGR SYBR Pašaro Ex Taq (Takara, Kinija) ir normalizuoti apėmė 2 ^{- △△ CT metodas, palyginti su beta-aktino. Gruntas sekos buvo už PDCD4, jausmas, 5'-CAGTTGGTGGGCCAGTTTATTG-3 "ir antiprasmiq, 5'-AGAAGCACGGTAGCCTTATCCA-3"; E-cad, jausmą, 5'-AATCCAAAGCCTCAGGTCATAAACA-3 'ir Priešprasminis, 5'-TTGGGTCGTTGTACTGAATGGTC-3'; CagA, jausmą, 5'-CCGGGGTACCAATTGGAGAGCAGAACCG-3 'ir Priešprasminis, 5'-CCGTCGAGTTAAGATTTTTGGAAACC-3'; ir TWIST1, jausmą, 5'-GGCATCACTATGGACTTTCTCTATT-3 'ir Priešprasminis, 5'-GGCCAGTTTGATCCCAGTATT-3'; vimentin, jausmą, 5'-CTCTTCCAAACTTTTCCTCCC-3 'ir Priešprasminis, 5'-AGTTTCGTTGATAACCTGTCC-3'; SRAIGĖ, jausmą, 5'-GGAAGCCTAACTACAGCGAGCT-3 'ir Priešprasminis, 5'-TCCCAGATGAGCATTGGCA-3'; β-aktino, jausmą, 5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3 'ir Priešprasminis, 5'-CTCCTTAATGTCACGCACGATTT-3'.}

Western blot analizė

Baltymų buvo ekstrahuojamas iš mėginių ir atskirti SDS-PAGE , tada perkeliamas ant PVDF membranų (Millipore "Corp., BILLERICA, MA, JAV), kurie buvo užblokuotų iš karto su 5% Nonfat pieno TBST, kuriame yra 1% Tween-20 1,5 h kambario temperatūroje. Po to, kai plaunami fosfato buferinis tirpalas (PBS) 3 kartus, membranos buvo inkubuojami su antikūnų PDCD4 (1:500; Mobilusis Signalizacijos Technologijos, JAV), TWIST1 (1:2000, Novus biologinių preparatų, JAV), SRAIGĖ (1:1000 , Mobilusis Signalizacijos technologijos, JAV), CagA (1:500, Santa Cruz biotechnologijos, Santa Krusas, Kalifornija), E-cad (1:1000, Mobilusis Signalizacijos technologijos, JAV), vimentin (1:1000, Mobilusis Signalizacijos technologijos, JAV ), ir β-aktino (1:2000, Sigma-Aldrich, JAV), o normalizavimo kontrolės, esant 4 ° C temperatūroje per naktį, po to su krienų peroksidazės-konjuguoto antrinių antikūnų kambario temperatūroje 1 valandą, o. Po plovimo, imunoreaktyvių juostos buvo regimos sustiprintas cheminės liuminescencijos (miliporų Corp. Billerica, MA, JAV). Imunoblotingu buvo atliktas 3 kartus kiekvienam mėginiui. Baltymų buvo pakrauta 20 iki 50 mikrogramų per eismo juostą.

imunohistocheminis

Parafino įterptųjų audinio mėginiai buvo de-paraffinized su ksileno ir dehidratuotas su rūšiavo serijos alkoholio. Antigenas paieškos termiškai apdorojant atliekamas 0,1 M citrato buferio. Ir blokavimas savaiminio peroksidazės aktyvumo buvo naudojamas 3% H _{2O 2. Tada skaidres buvo inkubuojami su antikūnų prieš PDCD4 (1:200), Twist1 (1:500), vimentin (1:100) arba E-cad (1:500), ir atitinkamų krienų peroksidazės konjuguoto antrinių antikūnų ir DAB už branduolių. Antikūnai imunohistochemiškai dažymo buvo tie, kurie naudojami Vakarų dėmė. Pagaliau, hematoksilinu buvo naudojamas counterstaining skaidres. Naviko diferenciacija vėžio audiniuose buvo nustatyta aklu būdu. Pirmasis antikūnų buvo pakeistas fosfatinio buferio druskų tirpalo, kaip neigiamos kontrolės. Mėginiai buvo peržiūrėtas pagal Nikon Eclipse E800 ( "Nikon", Tokijas, Japonija) mikroskopu.}

nepastebėta ir įmušė 2 nepriklausomų apakinti tyrėjų Visi tamsintas skyriai ir skaidres buvo suteikta bendra dažymo indeksą (SI) rezultatas pagal dažymo intensyvumas, o teigiamų vėžinių ląstelių procentas. Dažymo intensyvumas buvo įvertintas kaip 0, be dėmių; 1, silpnas dažymo; 2, vidutinio dažymo; ir 3, stipri dėmių. Naviko ląstelių dalis buvo įmuštas kaip 0, ≤20% teigiamų vėžinių ląstelių; 1, 20% -40% teigiamas naviko ląstelės; 2, 40% -60% teigiamas naviko ląstelės; 3, 60% -80% teigiamas naviko ląstelės; ir 4, ≥80% teigiami vėžinių ląstelių. Įvertinant SI, dažymo rezultatai pagaliau buvo registruojami kaip 0-4, žemos raiškos; 4-6, vidutinio išraiška; ir 6-12, aukštos išraiška. Jei dėmės aiškinimas skyrėsi tarp tyrėjų, už skyriaus duomenys buvo išmesti.

Matrigel invazija tyrimas

Matrigel invazija tyrimas apėmė transwell kamerą (costar, Niujorkas, JAV). SGC-7901 ląstelės buvo pernešta su 2 mikrogramų pCDNA3.1, pEGFP-C1; pCDNA3.1-CagA, pEGFP-C1; arba pCDNA3.1-CagA, pEGFP-C1-PDCD4. Po 48 h, 1 × 10 ^{5 post-perkeltų ląstelės buvo tripsinizuojamos ir padengtas ant transwell rūmų precoated 20 mikrogramų Matrigel. Terpę, turinčią 20% FBS į apatinę kamerą tarnavo kaip chemoattractant, o viršutinė kamera buvo užpildyta su terpę, turinčią 10% FBS. Ne migravo ląstelės buvo pašalintas su medvilniniais tamponais po 24 arba 48 h. Ląstelės migruoja į filtro apačios buvo tamsintas su 0,1% violetinei ir suskaičiuoti ant mikroskopu. Galiausiai, likusios ląstelės buvo paruošta baltymų ir RNR išskyrimo. Kiekvienas gydymas kartojamas 3 kartus.}

Statistinė analizė

Duomenys pateikti kaip vidurkis ± SD. Studentų , T
bandymas arba chi kvadrato testas buvo naudojamas palyginti 2 grupes. Duomenų analizė dalyvauja SPSS 12.0 (SPSS, Čikaga, IL, JAV). P
< 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Rezultatai

1.. Išraiška TWIST1 E-cad, vimentin ir PDCD4 skrandžio vėžio

Ištirti EMT ir skrandžio vėžio asociaciją, mes derlius 30 klinikinių audinių mėginius iš skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Biopsijos buvo suskirstyti į MIDDLE /žemo diferenciacijos audinio, aukštos diferenciacijos audinio ir ne vėžiniai audinio šalia karcinoma pagal hematoksilinu ir eozino dažymo (pav. 1A). Dėl imunohistocheminis, TWIST1 ir vimentin išraiška buvo didesnis piktybinis audinio nei nevėžinės audinio, o E-cad ir PDCD4 išraiška buvo priešinga kad TWIST1 (pav. 1a-E). TWIST1 ir PDCD4 išraiška buvo susijęs su naviko diferenciacijos laipsnis, bet ne lyties arba amžiaus (p = 0,021 ir p = 0,013, 1 lentelė). Kaip gerai, sumažėjo PDCD4 išraiška buvo atvirkščiai susijęs su pasikeitusiu TWIST1 išraiškos metu skrandžio vėžio (p = 0,035, 2 lentelė). Todėl EMT gali vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio kancerogenezėje ir plėtrą.

2. TWIST1, vimentin arba E-cad išraiška skrandžio ląstelių linijų reglamentuoja CagA

Be to, mes ištirti, ar CagA, kaip virusinės veiksnį H. pylori
, įtakojo EMT, todėl skatinamas invazija ir metastazes skrandžio vėžio. Mes pasirinkome 3 žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas diferenciacijos statusų (AGS, gerai diferencijuotas skrandžio epitelio ląstelių liniją; SGC-7901, vidutiniškai diferencijuoti ląstelių linijos ir BGC-823 prastai diferencijuotas ląstelių linija). CagA išraiška plazmidės buvo pernešta į įvairius skrandžio ląstelių linijų. Nors nebuvo laikomasi morfologiniai pokyčiai CagA-perkeltų ląstelių (duomenys neparodyti), transkripcijos faktorių ir ląstelių žymenų raiška įtakos turėjo CagA. MRNR ir baltymų ekspresija TWIST1 ir vimentin buvo aktyvinama su CagA transfekciją (pav. 2A-G) ir kad PDCD4 ir E-cad buvo downregulated (pav. 2A-G), tačiau jokių reikšmingų pokyčių sraigė išraiška buvo pastebėtas CagA transfekcija grupė. Todėl h. pylori
CagA gali paveikti EMT reguliatoriai įskaitant TWIST1. Be to El cad, kaip svarbų epitelio persekiotoją ir vimentin, kaip mezenchimos persekiotoją reglamentuoja TWIST1, taip pat buvo įtakoja CagA ir EMT susijusių genų PDCD4 buvo downregulated.

3. Išraiška TWIST1, vimentin ir E-cad lėmė PDCD4

Mes šalia analizuojami molekulinės mechanizmas EMT reglamentuoja H. pylori
CagA skrandžio vėžio ląsteles. PDCD4 slopina ląstelių augimą per tiesiogine sąveika su TWIST1 į žmogaus prostatos vėžio [22]. Imunohistocheminis ir statistinė analizė parodė, kad PDCD4 ir TWIST1 aktualumas egzistavo skrandžio karcinoma (1 pav., 2 lentelė). Tačiau mechanizmus, sukeliančius PDCD4 funkciją skrandžio vėžio ląstelės buvo neaišku. Taigi AGS? TGS-7901 ir BGC-823 ląstelių mes perkeltų su ekspresija PDCD4 plazmidės. PDCD4 mRNR ir baltymo ekspresija buvo aktyvinama visose Plazmidės transfekuota ląstelių linijų (pav. 3A-G). Be to, iRNR ir baltymų lygiai TWIST1 ir vimentin, bet ne sraigė, buvo sumažėjo iki įvairių laipsnių, ir buvo padidintos E-cad lygiai (pav. 3A-G). Todėl TWIST1, vimentin ir E-cad išraiška gali būti reguliuojamas PDCD4 skrandžio epitelinių ląstelių.

4. EMT reglamentuoja CagA per slopina PDCD4 skrandžio epitelinių ląstelių

Remiantis pirmiau pateiktomis išvadomis, mes hipotezės, kad EMT procesas sukeltas H. pylori
CagA įvyko iki downregulating PDCD4, mes cotransfected skrandžio epitelio ląsteles su CagA plazmidžių ir PDCD4 raiška plazmidės. Sumažėjo išraiška PDCD4 buvo susigrąžintos su CagA ir ekspresija PDCD4 transfekcijq. Kaip gerai, padidėjo išraiška TWIST1 ir vimentin buvo slopinamas ir sumažėjo išraiška E-cad buvo aktyvinama į bendrai perkeltų grupei. Šie pokyčiai įvyko tiek mRNR ir baltymų koncentracijos (pav. 4A-G). Iš žmogaus skrandžio vėžys ląstelių linijos SGC-7901 migracija transfekuota su plazmidės buvo nustatomas pagal Matrigel invazijos tyrimu. Rezultatai rodo, kad ji buvo sukeliama CagA plazmidės. Mobilusis migracijos tyrimas taip pat atskleidė, kad PDCD4 raiškos downregulated CagA sukeltos savo invazija ir metastazes galimybę (pav. 5a). Pav. 5B rodo, išsiskyrusio mobilieji numeriai SGC-7901 in CagA transfekciją grupės yra akivaizdžiai daugiau nei kontrolinės grupės, o migravo ląstelių bendrai transfekciją grupės suma yra žymiai mažesnė nei CagA transfekciją grupei. Biologiniai reiškiniai įrodyti EMT skatinimas CagA buvo išieškota dalis padidintais PDCD4 išraiška. Remiantis įrodymais, jis padarė išvadą, kad PDCD4 gali būti reikalaujama H. pylori
CagA tarpininkaujant skrandžio vėžio progresavimo

Diskusijos

Pagrindinės išvados Šio tyrimo apibendrinti taip: 1). h. pylori
CagA yra atsakingas už indukcijos TWIST1 ar vimentin ir slopinimo E-cad skrandžio vėžio ląsteles. 2) CagA sukeltos epitelio-mezenchiminių perėjimas iš dalies priklauso nuo reguliavimo PDCD4. 3) TWIST1 ir PDCD4 apima į skrandžio vėžio EMT.

Skrandžio vėžys yra kelių etapų ir laipsnišką liga. Perteklius proliferacija epitelio ląstelių yra svarbus įtrauktos į pradinę naviko angiogenezę arba ankstyvą augimo [5]. Vėliau, ląstelių invazija, iš pradžių atspindėjo per pamatinės membranos, buvo laikomas galutinio etapo vėžio prognozuoti; galiausiai veda prie metastazuojantys ir mirtingumo [26]. Patogeninis infekcija gali sukelti vėžį tumorgenesis ir piktybinių transformaciją šeimininko ląsteles. Kaip svarbų patogeniškumo rizikos veiksnys Helicobacter pylori
buvo glaudžiai susijusi su pepsinė opa, susijusio su gleivine limfoidinio audinio limfoma skrandžio ir skrandžio adenokarcinoma [20], [27], [28], [29] , CagA, vienas iš labiausiai principas virulentiškumo veiksniai H. pylori
, skatina atsiradimo ir plėtros skrandžio vėžio. Piktybinis transformacija šeimininko ląsteles įtrauktų regulationary tinkle, įskaitant daugelio ląstelių baltymų, nepriklausomas kodavimo RNR ir kitų biologinių veiklos molekulių. Tačiau mechanizmo, lemiančio CagA poveikis skrandžio gleivinės yra tokia sudėtinga ir neaiški.

EMT yra labai užkonservuoti biologiniu procesas embriono organų vystymasis, kuris leidžia epitelio ląstelėms prarasti epitelio fenotipą ir gauti mezenchiminių fenotipą. Tai apima nuostolių ląstelių poliariškumui epitelinių ląstelių, praradimo gebėjimu sujungti su pamatinės membranos, prieiga prie mezenchimos fenotipo, tokių kaip didesnių migracijos ir invazijos, antiapoptozės, ir gebėjimas pabloginti ekstraląstelinę matricą [8], [30] , EMT vaidina svarbų vaidmenį lėtinių uždegiminių ligų, fibrozinių ligų, auglio progresavimo ir audinių atstatymo procesui, ypač migracijos ir invazijos gebėjimas už piktybinių epitelio ląstelių įsigijimu. Nenormalus veikla EMT epith suaugusiųjų epitelio ląstelių slopinamas ląstelių adhezijos molekulių, sukelia sumažėjęs ląstelių sukibimą pajėgumus, ir taip leido navikines ląsteles plisti organizme, galiausiai skatinti naviko metastazių [31], [32], [33]. Todėl EMT manoma, kad invazija ir metastazių pradžia ir taip pat yra stipri gebėjimas invazija ir metastazių naviko ląstelių ženklas. H.pylori
skatina epitelio-mezenchiminių perėjimą TNF-alfa indukuojamojo baltymų [34]. Dabartinė tyrimas rodo CagA gali sukelti epitelio ląstelių morfologinių pokyčių. Jis buvo siūloma, kad CagA išraiška buvo ne tik pakanka sutrikdyti viršūninio sankryžas, bet ir primena epitelio į mezenchimos perėjimo Madin-Darby šunų inkstų ląstelių [35]. užsikrėtę bakterijomis epitelio ląstelės atsirado įvairių genomikos pakeitimus ir apie EMT žymekliai sukeltų H poveikį. pylori
tikriausiai buvo ant cagPaI susijusiai būdu. Duomenys parodė, kad epitelio mezenchiminių perėjimas (EMT) padarė išvadą genai buvo aukštyn arba žemyn reguliuoja CagA teigiamas h. pylori
štamus, AGS [36], [37]. Pažymėtina, kad reguliavimo tinklas CagA įtraukiant į skrandžio vėžio EMT vis dar reikia patikslinti.

Jei ištirti konkretų mechanizmą EMT propaguojamą CagA skrandžio vėžio, mes palyginti genus išraišką gretimame neturinčių navikų audiniuose ir skrandžio karcinoma audiniai imunohistocheminiu. Rezultatai parodė, kad Twist1 /vimentin išraiška karcinoma audiniuose buvo didesnis nei gretimose ne navikų audiniuose, o jo išraiška MIDDLE /žemo diferenciacijos karcinoma audinių didesnis nei aukštos diferenciacijos audiniuose. Tačiau, E-cad ir PDCD4 sumažinta, atsižvelgiant į epitelio-mezenchiminių perėjimo skrandžio vėžio proceso. Įdomu tai, kad egzistuoja neigiamą koreliaciją į TWIST1 ir PDCD4 išraiška. Mūsų tyrimas parodė, kad EMT susijusių genai yra susiję su skrandžio vėžio proceso, nuosekliai su ankstesnių tyrimai stebint praradimą epitelio baltymų ir /arba įgijimo mezenchiminių baltymų raiškos įvyko skrandžio karcinoma. Be to, jie buvo atitinkamai koreliuoja su prastai diferencijuotai histologiją, pažengęs ir prastos pacientų rezultatus [38]. Be to, PDCD4 yra naujai rasti molekulė, kuri vaidina svarbų vaidmenį daugelio biologinių procesų, kurie gali sukelti ligą ar atsiradimo ir plėtros naviko. PDCD4 slopina vertimo procesą, prisijungdamas prie vertimas inicijavimas faktoriaus eIF4A ar eIF4G. Įvairūs induktoriai apoptozės stimuliuoja ląsteles ir upregulate į PDCD4 išraišką, kuri galėtų dar labiau reguliuoti P21, Cdk4, karboanhidrazės II ir JNK /C-Bir /AP-1. PDCD4 gali slopinti invazija susijusių urokinazės plasminogeno aktyvatorius receptorių ekspresijos, invazija ar infiltracija kraujagyslių ir metastazių; Todėl, sumažėjo išraiška PDCD4 vaidina svarbų vaidmenį navikų atsiradimo, plėtros ir prognozavimo [17], [33], [39], [40]. Taigi, mes stebėjomės, jei Twist1 ir PDCD4 dalyvavo CagA sukeltos EMT.

Tada mes nustatėme EMT susijęs transkripcijos faktorius ir žymekliai išraiška CagA-perkeltų skrandžio vėžio ląstelių linijas. Mūsų duomenys rodo, kad H. pylori
CagA gali iki reguliuoti išraišką TWIST1 ir vimentin bet ne sraigė, ir žemyn reguliuoti E-cad ir PDCD4 skrandžio ląstelių linijas (AGS, SGC-7901 ir bgc-823). Rezultatai buvo neturi įtakos diferenciacijos statuso transfekuota ląstelių. Nors mes nesilaikė morfologinius pokyčius CagA-perkeltų ląstelių invazija ir metastazių gebėjimas skrandžio vėžio ląstelių galima paspartinti CagA per transwell ląstelių invazija tyrimu. Tai yra iš dalies, kurią sukelia funkcinės heterogeniškumo CagA skirtingų audinių. Taigi EMT poveikis sukeltas H. pylori
dar reikia toliau nagrinėti. MIR-21 paaukštintas TGF-β-sukeltas myofibroblast diferenciacijos procesą nukreipiant PDCD4. TGF-β sukeltas Pasaulis-21 raišką fibroblastų ir Mir-183 downregulated PDCD4 ir slopinamas TGF-β-sukeltas apoptozę žmogaus kepenų ląstelių karcinoma ląstelių [41], [42]. Tuo tarpu, TGF-β reglamentuoja sraigės Tvist, ar ZEB1 ir paveikė EMT ir metastazes [43]. Be to, buvo nustatyta, PDCD4 turi būti įtrauktą į transkripcijos per. Iš tiesų, COOH galas Twist1 kuriame pagrindinį Helix-kilpa-helix domeną buvo pasiūlyta, kad tarpininkaujant tiesioginę sąveiką su PDCD4 baltymų. Taigi, PDCD4 sąveikauja su DNR rišantis domenas Twist1 ir slopina jo DNR privalomas gebėjimas nukreipti genų žmogaus prostatos vėžinių ląstelių [22] .Todėl mes dar išbandyti, ar PDCD4 gali reguliuoti TWIST1 skrandžio vėžio ląsteles. Mūsų tyrimas parodė, kad TWIST1 buvo žemyn reguliuoja PDCD4 aukštos raiškos plazmidžių realaus laiko PGR ir Imunoblotingo, o El-cad išraiška buvo priešinga TWIST1 į AGS, SGC-7901 ir BGC-823. MRNR išraiška sraigė buvo downregulated į AGS ir Tarybos generalinis sekretoriatas-7901, o preotein išraiška nebuvo pastebėta tuos pačius pakeitimus. Tai gali būti dėl to, baltymų sintezės sudėtingumo. Ty, baltymas yra ne tik reguliuojama transkripcijos lygiu, bet taip pat vertimo ir apversti lygiu. Ji kartais atrodo, kad mRNR yra ne tiesioginė nuoroda baltymų lygiu ląstelėse. Paskutinis mes atlikome tolesnius tyrimus apie PDCD4 vaidmenį CagA sukeltos epitelio-mezenchiminių perėjimą. Skrandžio epitelio ląstelės buvo pernešta su CagA išraiška plazmidžių ir PDCD4 raiška plazmidžių vienu metu. Restauravimas PDCD4 išraiškos gali slopinti TWIST1 ir vimentin, ir skatinti E-cad, kuris reglamentuoja CagA, PDCD4 pat buvo sertifikuota kurie gali turėti įtakos invazija ir metastazes gebėjimą skrandžio ląstelių Matrigel invazijos metodu. Nors papildomi tyrimai yra būtini siekiant patikrinti šią hipotezę, mes iš esmės nusprendė, kad CagA sukeltos epitelio-mezenchiminių perėjimas iš dalies priklauso nuo reguliavimo PDCD4.

Apibendrinant, mes įrodyti, kad H. pylori
CagA sukelti TWIST1 išraišką ir EMT skrandžio vėžio ląstelių reguliuojant PDCD4 (6 pav.). Mes teikiame įžvalgų molekulinio tinklo skrandžio vėžio sukeltas H. Helicobacter pylori infekcija
ir pateikti teorinį pagrindą PDCD4 kaip biologinio tikslo diagnozės arba gydymo nuo vėžio. Ateities tyrimų įtraukiant pelės modeliai gali lemti geresnį supratimą apie PDCD4 vaidmenį H. pylori
indukuotų EMT skrandžio vėžio.

• PLoS ONE: Pasaulis-30b, žemyn reguliuojama skrandžio vėžio, skatina apoptozę ir slopina naviko augimą nukreipiant plazminogeną aktyvatoriaus inhibitoriaus-1
• PLoS ONE: Helicobacter pylori nuo skrandžio vėžio ir dvylikapirštės žarnos opa Rodyti Tas filogeografinėse kilmės Andų regiono Kolumbijoje