PLoS ONE: Identificatie van HSA-miR-335 als voorspellende Signature bij maagkanker

De abstracte

Achtergrond

Maagkanker (GC) is één van de meest voorkomende kwaadaardige tumor en primaire oorzaak van de dood in Chinese kankerpatiënten. Herhaling is een belangrijke factor die leidt tot falen van de behandeling en het lage niveau van de 5-jaarsoverleving in GC patiënten na chirurgische resectie. Daarom is de identificatie van biomarkers met potentie in het voorspellen van recidief risico is het belangrijkste probleem van de prognose in GC patiënten.

Patiënten en Methoden

Een totaal van 74 GC patiënten werden geselecteerd voor een systematische analyse, bestaande uit van 31 patiënten met recidief en 43 patiënten zonder recidief. Ten eerste zijn miRNAs microarray en bioinformatica methoden die worden gebruikt om differentieel tot expressie miRNAs van de primaire tumor samples karakteriseren. Naar aanleiding van, gebruikten we een ROC methode om de handtekening met de beste gevoeligheid en specificiteit te selecteren. Tot slot, we gevalideerd de ondertekening in GC monsters (bevroren vers en bloedmonsters) met behulp van kwantitatieve PCR.

Resultaten

We hebben geïdentificeerd 12 differentieel miRNAs waaronder 7 up-gereguleerd en 5 down-gereguleerd miRNAs in herhaling groep. Met behulp van ROC methode, we verder nagegaan HSA-miR-335 als een handtekening om herhaling en niet-herhaling gevallen in de opleiding monsters te herkennen. Bovendien hebben we gevalideerd deze handtekening met behulp van kwantitatieve PCR-methode in 64 proefmonsters met consistente resultaten met de opleiding set. Een hoge frequentie herhaling en slechte overleving werden waargenomen in GC gevallen met een hoog niveau van HSA-miR-335 ( P Restaurant < 0,001). Daarnaast evalueerden we HSA-miR-335 waren betrokken bij de regulering van doelwitgenen in verschillende oncogene signaal routes, zoals p53 MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-like receptor en focale adhesie.

Conclusie

de resultaten geven aan dat de HSA-miR-335 heeft de potentie om herhaling risico herkennen en hebben betrekking op de prognose voor patiënten GC

Citation:. Yan Z, Xiong Y, Xu w, Gao J, Cheng Y, Z Wang, et al. (2012) Identificatie van HSA-miR-335 als voorspellende Signature bij maagkanker. PLoS ONE 7 (7): e40037. doi: 10.1371 /journal.pone.0040037

Editor: Alfons Navarro, Universiteit van Barcelona, ​​Spanje

Ontvangen: 21 februari 2012; Geaccepteerd: 30 mei 2012; Gepubliceerd: 3 juli 2012

Copyright: © 2012 Yan et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Deze auteurs hebben geen steun of financiering aan te melden

Competing belangen:.. de auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

op dit moment, een operatie is nog steeds de belangrijkste optie voor de behandeling maagkanker (GC), maar zelfs na het uitvoeren curatieve resectie, ongeveer 40-65% van GC patiënten een terugkeer van de ziekte ervaart omvat eventueel lokaal recidief, peritoneale verspreiding of hematogene metastase [1], [2]. Daarom, het 5-jaars overleving van GC patiënten nog steeds in een laag niveau. Een belangrijke uitdaging voor de verbetering van klinische resultaten is beter te begrijpen moleculaire mechanismen en te herkennen robuuste handtekeningen voor de prognose van GC.

Een aantal risicofactoren, zoals pathologische serosa staat, de status van de marge, tumor microvasculaire dichtheid en genexpressie veranderingen in verband met herhaling zijn gerapporteerd [3], [4]. Daarnaast zijn een aantal voorspellende of diagnostische methoden zijn gebruikt om de herhaling risico op basis van genexpressie profilering of een reeks van klinische variabelen te evalueren [5] - [8]. Echter, deze meerdere waarnemingen waaronder diverse gen of eiwit wijzigingen hun klinische toepassing belemmeren. Betrouwbare en geschikte moleculaire merkers voor clinici nodig voor de prognose van GC.

Een recent ontdekte van miRNAs zijn sterk geconserveerd in de genomen van invertebraten, vertebraten en planten. Ze dienen belangrijke functies in verschillende biologische processen [9] onder faseveranderingen, patronen en embryogenese, differentiatie, organogenese, en apoptose [10]. Gezien zijn meerdere essentiële biologische functies, is het niet verwonderlijk dat de abnormale miRNAs expressie zal leiden tot ziekte en zelfs kanker [11].

miRNAs zijn gepresenteerd zo effectief mogelijke biomarkers voor het traceren van het weefsel oorsprong in kwaadaardige tumoren van onbekende primaire oorsprong [12]; miRNAs expressieprofielen kunnen de ontwikkeling afstamming en gedifferentieerde toestand van de tumoren [11] geven. Systematische analyse van de stabiliteit van miRNAs en optimale omstandigheden voor expressie analyse met formaline gefixeerde in paraffine ingebedde en bloedmonsters werden eerder gerapporteerd [13] - [15], belichten hun onverwachte diagnostische mogelijkheden. Er zijn een beperkt aantal miRNAs [16] in het menselijk genoom waarvan bekend is dat ongeveer 30% van genen [17] te reguleren. Deze attributen van miRNAs kan ons te voorzien van een eenvoudige methode om herhaling risico voor kankerpatiënten te voorspellen.

In deze studie hebben we een miRNA (HSA-miR-335) met potentiële geïdentificeerd om herhaling risico van GC voorspellen op basis van microarray en klinische gegevens van een klein formaat steekproef in het Chinees GC patiënten. Onze resultaten toonden aan dat HSA-miR-335 fungeren als een klinische prognostische handtekening voor GC zou kunnen zijn.

Methods

klinische monsters

Deze studie is goedgekeurd door de ethische commissie van Wuhan General Hospital van Guangzhou Command, PLA. Alle maag-kankerpatiënten en niet-kankerpatiënten met spijsverteringsaandoeningen mits schriftelijke toestemming in onze studie.

Patiënten gastrectomy ondergaan voor potentieel te genezen GC in het algemeen ziekenhuis Wuhan, Guangzhou militaire commando waren proefpersonen in deze studie. In aanmerking te komen voor opname in deze studie omvatte histologisch bevestigd adenocarcinoom van de maag of de gastro-oesofageale overgang. Alle patiënten hadden volledige resections waaronder een poging tot volledige tumor verwijderen met opname van grote negatieve marges en uitgebreid retroperitoneale lymphadenectomy (D2 type) ontvangen. Informatie over clinicopathologic, therapeutische en uitkomstmaten van de patiënten van mei 2005 tot en met februari 2012 werd met terugwerkende kracht verzameld. enscenering kanker werd uitgevoerd volgens de vijfde editie van de Gemengde Commissie Amerikaan op kanker TNM criteria.

Recidief werd gedefinieerd als een kanker terugkeert inclusief lymfeklieren, overblijfsel maag, lokale, peritoneale en hematogene metastasen. Alle patiënten die herhaling van kanker ervaren werden klinisch of radiografisch gediagnosticeerd, en bevestigd door biopsie via gastro-intestinale endoscoop of percutane punctie. De radiografische standaard voor de herhaling diagnose opgenomen CT of MRI van de borst, buik, bekken, hoofd en bot-scans, of andere diagnostische tests, die alleen onder bijzondere omstandigheden werden gebruikt. Alle monsters werden verkregen uit chirurgische monsters van patiënten met maagdarmkanker en alle patiënten gaven schriftelijke toestemming voor het gebruik van deze weefsels voor onderzoeksdoeleinden. We kozen voor monsters (met inbegrip van bevroren verse en bloedmonsters) van 74 patiënten met en zonder GC herhaling.

miRNA microarray

De miRNA microarray-analyse werd uitgevoerd zoals beschreven in detail op de website van CapitalBio ( http://www.capitalbio.com) en ook volgens procedure Hua's [18]. Kort samengevat, 50-100 ug totaal RNA werd gebruikt miRNAs met een miRNA AM1560 isolatiekit (Ambion, USA) extract. -Fluoresceïne gelabelde miRNAs werden gebruikt voor hybridisatie op Affymetrix miRNA Chip met 1075 probes. Het fluorescentiesignaal werd gescand door GeneChip Scanner 3000 7G (Affymetrix, USA). Ruwe gegevens werden genormaliseerd en GeneChip opdrachtenconsole geanalyseerd 1,1 software (Affymetrix, USA).

RNA-extractie uit bevroren verse en bloedmonsters

RNA werd geëxtraheerd uit bevroren verse GC weefsels met een standaard Trizol protocol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Bloedmonsters werden miRNA geëxtraheerd met de miRNease kit (Qiagen). In het kort werd 700 ul QIAzol reagens 200 pl plasmamonster toegevoegd en gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. Vervolgens, 140 pl chloroform werd toegevoegd, gevortext gedurende 15 seconden en gedurende 3 minuten bij kamertemperatuur. Dit werd gevolgd door een centrifugatie van 14.000 rpm bij 4 ° C gedurende 15 minuten. De bovenste, waterige fase werd verwijderd en 1,5 maal zijn volume toegevoegd in 100% ethanol. Elke 700 ui mengsel werd op een kolom gebracht en gecentrifugeerd bij 13.000 rpm bij kamertemperatuur gedurende 15 sec. Hierna werd 500 ul buffer RPL aan de kolom toegevoegd en gecentrifugeerd bij 13.000 rpm bij kamertemperatuur gedurende 2 minuten. De kolom werd vervolgens gecentrifugeerd bij 13.000 rpm bij kamertemperatuur te drogen. De volgende stap was de elutie met 20 ul nuclease-vrij water. De geëlueerde RNA werd opgeslagen bij -70 ° C.

Real-time kwantitatieve PCR

De rijpe miRNA sequenties werden uit de Sanger Institute miRBase Sequence Database verworven (http://microrna.sanger.ac .uk /reeksen /). Stamlus reverse transcriptie (RT) primers werden ontworpen volgens Chen [19]. De RT-reactie toegepaste betrokken incubaties bij 16 ° C gedurende 30 min; 37 ° C gedurende 30 minuten en vervolgens 72 ° C gedurende 10 minuten. De thermale cycli van de PCR protocol om in een initiële denaturatiestap bij 95 ° C gedurende 5 minuten gevolgd door 40 cycli bij 95 ° C gedurende 30 s, 57 ° C gedurende 30 s en 72 ° C gedurende 30 s. De smelt curven voor elke PCR werden zorgvuldig geanalyseerd om elke niet-specifieke amplificatie te bepalen. De expressie van elk miRNA werd berekend met behulp van de 2 ^{-ΔΔ C
_{T formule en genormaliseerd op U6 snRNA expressie [20].}}

Unsupervised Algoritme

SAM [21] werd gebruikt om de berekening uit te voeren zonder toezicht clustering. De cutoff voor significantie werd bepaald door een tuning parameter delta, door de gebruiker op basis van de foute positieve verhouding en vertegenwoordigd door de q-waarde gekozen. We kozen voor een fold change groter dan 2, en q = 0 als de selectiecriteria voor de differentiële expressie van miRNAs.

ROC en Kaplan-Meier Survival Curve Analysis

ROC-curve analyse werd uitgevoerd met behulp de MedCalc softwarepakketten (verison 8.2.1.0, Mariakerke, België). De AUC krommen ontvangen een maat voor de prestaties van een diagnostische test. De verhouding van miRNA signaalintensiteiten en Ct waarde van elke miRNA werden gebruikt voor berekening ROC monsters. Survival analyses werden ook uitgevoerd door de MedCalc softwarepakket.

Statistische analyse

De klinische gegevens werden geanalyseerd met behulp van de Chi-kwadraat test. De cumulatieve survival curve werd vergeleken door de log-rank test. Voor alle analyses, een verschil met de P
. ≪ 0,05 werd beschouwd als statistisch significant

miRNA Targeted Gene Voorspelling en Signal Pathway Analyses

We gebruik gemaakt van een miRNA doelwit genpredictie databank TargetScan (http://www.targetscan.org) tot plausibele doelen van het differentieel tot expressie miRNAs te selecteren. Een geïntegreerde gen ontologie databank moleculaire annotatie systeem (MAS3.0, http://www.capitalbio.com) werd gebruikt om de miRNA gerichte genen en hun betrokkenheid bij de verschillende signaal paden te onderzoeken.

Resultaten

klinische kenmerken van GC patiënten

Een totaal van 74 patiënten met /zonder recidief werden geselecteerd voor een systematische analyse. 31 patiënten hadden terugkerende GC dat pathologisch werd bewezen door biopsie bij anastomose plaatsen via endoscopie. 43 patiënten zonder recidief werden geselecteerd als de controlegroep met lucifers in geslacht, leeftijd bij diagnose, TNM, behandeling en het aantal betrokken lymfeknopen (tabel 1).

Er was geen significant verschil in de Sex ( P
= 0,469), leeftijd ( P
= 0,502), Tumor locatie ( P
= 0,299), differentiatie ( P
= 0,511) , Lymfeklier resectie ( P
= 0,217) en de status van adjuvante chemotherapie ( P
= 0,214). Er waren significant verschil in UICC fase ( P
= 0,108) en overleving /gestorven-verhouding genoteerd (8/23 in herhaling groep versus 34/9 in niet-recidief groep, P
<0,001), met een mediane overlevingstijd van 18,9 maanden bij herhaling vs. 43,9 maanden in niet-recidief groep respectievelijk ( P
<. 0,001) (tabel 1)

miRNA expressieprofielen geassocieerde met GC herhaling

We gebruikten een miRNAs microarray chip te miRNAs expressie niveaus in 10 GC stalen met /meten zonder recidief (5/5) als training set. Bij het vergelijken miRNA expressie tussen de groepen 7 opwaarts gereguleerd en 5 down-gereguleerd miRNAs bleken statistisch significant in de GC terugkerende groep (tabel 2) waren. Deze 12 miRNAs kunnen worden gebruikt om te discrimineren tussen GC met en zonder herhaling gebaseerd op een hiërarchische clusteranalyse (figuur 1).

HSA-miR-335 is het beste te classificeren Signature GC met en zonder Herhaling in Training Set

We gebruikten ROC methode om de gevoeligheid en specificiteit van de kandidaat biomarkers gebaseerd op miRNA microarray data te analyseren. We verkregen 2-HSA miRNAs miR-335 en miR-HSA-128b met de beste gevoeligheid en specificiteit classificeren GC monsters met en zonder herhaling (Figuur 2, Tabel 3). In combinatie met de FC-waarde (FC _{HSA-miR-335 = 4,675; FC HSA-miR-128b = 1,453) van elke biomarker, selecteren we HSA-miR-335 voor verdere studie}

Validatie van de Signature in Test monsters van Real-time PCR

de expressie van HSA-miR-335 werd gedetecteerd door real-time PCR-test in 64 GC monsters vergeleken met de aangepaste aangrenzend weefsel als controle. De resultaten toonden aan dat in 26 gevallen met een recidief, 21 gevallen (21/26, 80,8%) waren hoog-uitgedrukt van HSA-miR-335; en in 38 gevallen zonder herhaling, 29 gevallen (29/38, 76,3%) waren laag-tot expressie van HSA-miR-335 (figuur 3). Dezelfde resultaten werden waargenomen in bloedstalen met behulp van een mixed-bloedmonster van 20 niet-kankerpatiënten met spijsverteringsaandoeningen als controle: In 26 gevallen met een recidief, 19 gevallen (19/26, 73,1%) waren hoog-uitgedrukt van HSA-miR -335; en in 38 gevallen zonder herhaling, 30 gevallen (30/38, 78,9%) waren laag-tot expressie van HSA-miR-335 (figuur 3). Er waren 11 gevallen (11/64, 17,2%) niet geëvenaard in de expressie van HSA-miR-335 in vergelijking van de resultaten tussen de bevroren verse en bloedmonsters.

Daarnaast hebben we ontdekt de expressie niveau HSA-miR-128b in 64 GC bloedmonsters met behulp van real-time PCR. De resultaten toonden aan dat in 26 gevallen met een recidief, 18 gevallen (18/26, 69,2%) waren hoog-uitgedrukt van HSA-miR-128b; en in 38 gevallen zonder herhaling, 27 gevallen (27/38, 71,1%) waren laag-tot expressie van HSA-miR-128b. De FC waarde van HSA-miR-128b en HSA-miR-335 was 1,647 en 3,589 in vergelijking recidief met niet-recidief monsters, respectievelijk (Figuur 4A). We hebben ook een analyse van de sensitiviteit en specificiteit van HSA-miR-335, HSA-miR-128b en HSA-miR-335 /128b (gecombineerd met miR-335 en miR-128b als een handtekening) op basis van de real-time PCR data. De resultaten toonden aan dat HSA-miR-335 was gevoeliger en specifieker een AUC-waarde van 0,88 dan HSA-miR-128b (AUC = 0,79) en HSA-miR-335 /128B (AUC = 0,84) bij de indeling recidief en niet- herhaling monsters (figuur 4B, tabel 3).

HSA-miR-335 als een progressie van de ziekte handtekening te herhaling Risk in Voorspel GC patiënten

De 74 GC patiënten werden verdeeld in twee groepen, met inbegrip van 31 met recidief als groep en 43 patiënten zonder recidief als groep. De patiënten die een herhaling van GC ervaren hadden een significant verlaagd mediane overleving ( P Restaurant < 0,001; figuur 5A). We merken op dat de expressie van HSA-miR-335 in alle 74 GC monsters. Een significant verschil werd waargenomen in twee groepen die hoge expressie van HSA-miR-335 groep en vormen lage expressie van HSA-miR-335 groep als volgt: miR-335 (+) en miR-375 (-). GC patiënten (n = 35) met miR-335 (+) waren significant verminderd mediane overleving in vergelijking met die (n = 39) met miR-375 (-) ( P
< 0,001; Figuur 5B).

signaleringsroute en Gene Ontology Analyses van HSA-miR-335 Gerichte Genen

met het oog op de mogelijke mechanismen van de HSA-miR-335 regelgeving te onderzoeken in het proces van GC herhaling, we benut een bioinformatica database om plausibele doelen van deze miRNA selecteren. Een totaal van 255 genen werden voorspeld als het doel genen van HSA-miR-335. Signaleringsroute analyses bleek dat het merendeel van de beoogde genen die zijn gereguleerd door HSA-miR-335 werden bij eenzelfde routes zoals p53 MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-like receptor, focale adhesie ( tabel 4, Figuur 6). We hebben voorgesteld dat deze meerdere pathway veranderingen betrokken kan zijn bij klinisch pathologische kenmerken en patiënten resultaat van GC. Ondertussen, gebruikten we een geïntegreerde gen ontologie database om de moleculaire functie van de beoogde genen miRNA annoteren. De resultaten toonden aan dat genen gereguleerd door HSA-miR-335 deelgenomen aan het merendeel van de belangrijke biologische proces in verband met kanker bij de mens (tabel 5).

Discussie

Herhaling is frequent in GC patiënten na een operatie; Daarom is het belangrijk om zaken identificeren met een hoog risico recidief. Traditionele kliniek pathologische factoren zijn soms ontoereikend voor de voorspelling van recidief bij individuen en vele onderzoeksgroepen hebben geprobeerd om biomarkers met behulp van nieuwe technologieën die deze hoge-risico gevallen kan onderscheiden identificeren. Een aantal recente onderzoeken miRNA veranderingen die betrokken zijn bij de initiatie en progressie van menselijke kankers gedocumenteerd. miRNA expressie profilering van menselijke tumoren hebben expressie handtekeningen in verband met de diagnose, staging, progressie, de prognose en de respons op de behandeling geïdentificeerd.

In deze studie hebben we primair GC gevallen geanalyseerd om de ziekte herhaling te voorspellen en bepaalde niet-recurrente voorwaarden als die vrij van GC gedurende ten minste één jaar na curatieve resectie. We identificeerden HSA-miR-335 als een plausibele prognose handtekening van GC op basis van de microarray gegevens uit 10 GC monsters als training set. Verder hebben we dit Aangetekend 64 proefmonsters met gevalideerde meer dan gemiddeld 85% sensitiviteit en specificiteit. De overleving analyseresultaten toonden aan dat patiënten met hoge expressieniveaus van HSA-miR-335 overall overleving was verminderd in vergelijking met die met lage expressieniveaus van HSA-miR-335. Deze resultaten geven aan dat deze handtekening had het potentieel om herhaling van GC te voorspellen.

microarray technologie is sterk ontwikkeld en uitgegroeid tot een uitgebreide en bruikbare methode om ons te helpen beter begrijpt van kanker [22]. Thans wordt algemeen gebruikt om de functionele rol van miRNAs in vele soorten van kanker [23] bestuderen met verscheidene aanzienlijke miRNA effecten op oncogenen en tumorsuppressorgenen geïdentificeerd. Van de 12 miRNAs die in deze studie, HSA-miR-373 was een van de-down gereguleerd miRNAs in de steeds terugkerende groep. Dit kan een oncogen functioneert via bekende p53 route die betrokken is bij carcinogenese [24] zijn. Sommige miRNAs, zoals HSA-miR-19a en HSA-miR-32, zijn in kanker-geassocieerde genoomgebieden, die bij maligniteiten betrokken kunnen via deletie amplificatie of epigenetische modificatiemechanismen [25]. Daarnaast HSA-miR-429 waren up-gereguleerd in terugkerende gevallen en geclusterde op chromosoom 1, bevestigt dat sommige miRNAs, zoals HSA-miR-200b zijn geclusterd met HSA-miR-429 en in staat om samen te reguleren hun gerichte genen [26 ].

tot nu toe aangewezen in deze studie miRNA om de kans op herhaling GC voorspellen zijn niet goed gekarakteriseerd. HSA-miR-335, dat wordt getranscribeerd van de genomische regio chromosoom 7q32.2, is beschreven om differentiële expressie in goedaardige en kwaadaardige tumoren [27]. Belangrijk is ook aangetoond dat miR-335 regelt Rb1 en controles celproliferatie in een p53-afhankelijke wijze [28]; participeert in de ontwikkeling van borstkanker [29]; reguleert de groei en invasie van kwaadaardige cellen [30]. Het meest recente onderzoek meldt dat miR-335 zou kunnen functioneren als een metastase suppressor in GC door zich te richten Bcl-2 en SP1, en verder kunnen worden ontwikkeld als een potentiële voorspellende factor [31]. Om het uitzicht boven samen te vatten, de functie van miR-335 was controversieel. Onze resultaten blijkt dat HSA-miR-335 werd up-gereguleerd in GC herhaling monsters en betrokken bij de meeste oncogene signaalwegen, zoals p53 MAPK, TGF-β, Wnt, erbB, mTOR, Toll-like receptor, focal adhesion . Deze meervoudige signaalroute veranderingen, in het bijzonder met inbegrip van p53-route, kan redelijkerwijs invloed klinische uitkomst met inbegrip van GC recidief risico [32]. Hoewel de prognostische rol van HSA-miR-335 bij maagkanker onbekend is, zijn onze bevindingen bemoedigend.

Bloed is de meest toegankelijke monster in ziekenhuizen. De klinische betekenis van identificatie van biomarkers die gemakkelijk kon worden gedetecteerd net zo HSA-miR-335 is duidelijk. Bovendien, gearchiveerd paraffine ingebedde monsters zijn ook een van de gemakkelijk beschikbare materialen in ziekenhuizen, die vaak over aantoonbare klinische en gegevens worden bewaard. Zij vertegenwoordigen uitstekende bronnen voor prognostische toepassing in zowel fundamenteel onderzoek en klinische studies. miRNAs variëren in grootte 19-25 nt en worden beschermd door de RNA-geïnduceerd silencing complex, waardoor ze minder gevoelig voor afbraak van RNA in vergelijking met mRNA in deze weefsels [33] kunnen maken. Zo konden we miRNA expressie te detecteren in paraffine ingebedde monsters en gericht op de systematische analyse met deze handtekening relevante prognostische waarde. De PCR-gebaseerde classificatie methode dan ook, lijkt ons een manier, met behulp van gemakkelijk beschikbare klinische monsters, tot terugkeer van de ziekte te voorspellen.

Kortom, we hebben een prognose-gerelateerde miRNA die herhaling risico kan voorspellen geïdentificeerd GC patiënten. Door deze handtekening met conventionele clinicopathologic factoren te combineren, moeten we in staat om de ziekte uitkomst van een patiënt nauwkeuriger te voorspellen. Daarnaast is de identificatie van hoog-risico patiënten zou leiden tot de overweging van aanvullende therapeutische interventie en kan dus de arts van een betere follow-up programma te informeren.

Dankwoord

Wij danken Dr. Li Wang (National Institute of Environmental Health Sciences, USA) voor inzicht commentaren en manuscript editing.

• PLoS ONE: verminderde expressie van de ARID1A Gene wordt geassocieerd met een slechte prognose in het jeugdwerk Gastric Cancer
• PLoS ONE: Klinische potentieel van DNA-methylatie bij maagkanker: A Meta-Analysis