PLoS ONE: прогностическое значение связанных с апоптозом биологических маркеров в китайских больных раком желудка

Абстрактный

Фон и цель

The
прогноз варьировали среди пациентов с той же стадии, поэтому возникла потребность в новых прогностические и прогностических факторов. Целью данного исследования было оценить взаимосвязь связанных с апоптозом биологических маркеров, таких как р53, Bcl-2, Вах, и с-Мус и клинико-патологическими особенностями и их прогностическое значение.

Методы
<р> с 1996 по 2007 год, 4426 пациентов подверглись целебное D2 гастрэктомию для рака желудка в университете Фудань в Шанхае онкологического центра. Среди 501 пациентов, уровни экспрессии р53, Bcl-2, Bax, и с-Мус были исследованы с помощью иммуногистохимии. Прогностическое значение биологических маркеров и корреляция между биологическими маркерами и другими клинико-патологическими факторами были исследованы.

Результаты
<р> Были 339 мужчин и 162 женщины со средним возрастом 57. Проценты положительной экспрессия р53, Bcl-2, Bax, и с-Мус составили 65%, 22%, 43% и 58%, соответственно. Был сильная корреляция между р53, Bax и выражение с-Мус ( P
= 0.00). Был значимая связь между Bcl-2, и выражение Вах ( P
&л; 0,05). экспрессии p53 коррелирует с гистологическим класса ( P
= 0,01); выражение Bcl-2 с патологической стадии ( P
= 0,00); Вах выражение с мужскими ( P
= 0,02), гистологическая оценка ( P
= 0,01), тип Бормана ( P
= 0,01), локализация опухоли ( P
= 0,00), метастазов в лимфатических узлах ( P
= 0,03), и патологическая стадия ( P
= 0,03); Выражение с-Мус с типом Бормана ( P
= 0,00). выражение Bcl-2 была связана с хорошей выживаемости в одномерном анализе ( P
= 0,01). Многофакторный анализ показал, что Bcl-2 экспрессия и патологической стадии были определены как независимые прогностические факторы. Были значительные различия в общие показатели 5-летней выживаемости в соответствии с выражением Bcl-2 или нет на стадии IIB ( P
= 0,03).

Заключение
<р> Выражение Bcl-2 был независимым прогностическим фактором для больных раком желудка; это может быть кандидатом для желудка постановка системы рака
<р> Цитирование:. Лю X, Цай H, Хуан H, Длинный Z, Y Ши, Ван Y (2011) прогностическое значение связанных с апоптозом биологических маркеров в китайские больных раком желудка. PLoS ONE 6 (12): e29670. DOI: 10.1371 /journal.pone.0029670
<р> Редактор: Масару Като, Национальный центр рака, Япония
<р> Поступила: 29 июня 2011 года; Принято: 2 декабря 2011 года; Опубликовано: 28 Декабря, 2011
<р> Copyright: © 2011 Лю и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Авторы не имеют никакой поддержки или финансирования сообщать
<р> конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> Хотя заболеваемость раком желудка была существенно снижается. в течение нескольких десятилетий, он был еще четвертый наиболее распространенным видом рака и второй наиболее частой причиной смерти от рака [1], [2]. Это было очень важно, чтобы точно предсказать риск неблагоприятного прогноза в целях максимального терапевтического эффекта и свести к минимуму отрицательные последствия в лечении онкологических больных. Среди прогностических факторов в настоящее время доступны для рака желудка, наиболее точным и важным прогностическим фактором был этап UICC TNM. В результате изменчивости прогноза в пределах той же стадии рака желудка, нельзя было точно предсказать прогноз через обычные процедуры постановки. Таким образом, крайне важно, чтобы искать другие специфические факторы, чтобы определить подгруппы пациентов с более агрессивным течением заболевания. В последнее время некоторые исследования показали, что другие патологические факторы, такие как число положительных лимфатических узлов, наличие участия экстракапсулярного лимфатических узлов, а также размер опухоли имели дополнительное прогностическое значение [3] - [5]. Учитывая, что некоторые биологические маркеры, такие как онкогены, гены опухолевых супрессоров, регуляторы клеточного цикла и генов репарации ДНК, были связаны с опухолью генезиса, роста, инвазии и метастазированию, многие ученые были посвящены поиску новых прогностических факторов с этими молекулярные маркеры. Несмотря на то, что некоторые из исследований оценивали прогностическое значение маркеров, таких как р53, Bcl-2, Bax, и с-Мус в раке желудка, результаты были спорными [6] - [11]. Кроме того, эти предыдущие исследования были проведены для исследования дополнительное прогностическое значение маркеров на 6-м этапе UICC TNM, нужно было срочно выяснить отношения между этими органами и 7-м этапе UICC TNM. В конце концов, не было никаких исследований, оценивающих экспрессию этих молекулярных прогностическое значение в больных раком желудка в Китае. Таким образом, мы оценивали выраженность биологических маркеров, таких как р53, Bcl-2, Bax, и с-Мус в этом исследовании.
<Р> р53 белки были продуктами генов опухолевых супрессоров-, действовавшие путем модуляции пролиферации клеток через контроль G1 арест контрольной точки клеточного цикла [12], [13]. Bcl-2 и Вах принадлежал к семейству Bcl-2, а последний был одним из наиболее важных классов апоптозом регуляторных молекул. Семейство Bcl-2 были разделены на два подсемейства: антиапоптоз белки (Bcl-2, Bcl-XL, Bcl-W, BFL-1, хвастун-1, и MCL-1) и про-апоптозом белки (Bax, Бака , Bcl-Xs, плохой, ставка, и HRK) [14]. Было показано, что Bax к Bcl-2 может повлиять на относительную чувствительность или устойчивость клеток к апоптическая simuli [15]. с-Мус белок был тип фактора транскрипции. Предыдущее исследование показало, с-Мус выражение было связано с клеточной пролиферации [16].
<Р> В этом исследовании мы оценивали экспрессию биологических маркеров, таких как р53, Bcl-2, Вах, и с-Мус, коррелируют свое выражение в клинико-патологическими характеристиками и оценивали их прогностическое значение.

Материалы и методы

пациенты

в течение января 1996 года по декабрь 2007 года 4426 пациентов с гистологически подтвержденным первичной аденокарциномы желудка Прошел лечебная D2 резекция в отделении рака желудка и саркома мягких тканей в шанхайского университета Фудань онкологического центра. Из этих пациентов, 501 случаев были отобраны, так как их образцы были окрашены иммуногистохимическое после операции с рутинного гистологического исследования. Данные были получены из оперативных и патологических отчетов пациентов, и последующие данные были получены по телефону, письмом и клинической базы данных амбулаторных условиях. Это исследование включало 339 мужчин и 162 женщин в возрасте от 22 до 82 лет, средний возраст составил 57 лет. Постановка была выполнена в соответствии с Staging классификации UICC TNM для рака желудка (седьмое издание, 2010). Последующий всех пациентов проводили в соответствии с нашим стандартным протоколом (каждые три месяца в течение по крайней мере 2-х лет, каждые шесть месяцев в течение следующих 3-х лет, а через 5 лет через каждые 12 месяцев для жизни). Элементы проверочные включены физическое обследование, опухоль-маркерный исследование, УЗИ, рентгенографию грудной клетки, компьютерная томографию и эндоскопическое исследование. Средняя продолжительность наблюдения составила 44,6 месяцев на момент анализа. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов, и это исследование было одобрено Комитетом по этике Шанхай онкологического центра университета Фудань мимо. Исследование было ретроспективным.

Иммуногистохимическое окрашивание
<р> р53, Bcl-2, Вах, и с-Мус были обнаружены иммуногистохимическим методом. Все первичные антитела и моноклональные антитела мыши были приобретены у Dako (Гамбург. Германия). Иммуногистохимическое окрашивание проводили с помощью повышения меченого полимерной системы методом (ELPS), с 10% фиксированных формалином, парафин материалов. Серийные срезы 5 мкм парафиновых были deparaffinised с ксилолом и увлажненной с ehanol /деионизированной воды. Затем срезы инкубировали с метанолом /0,3% Н <к югу> 2О <суб> 2 в течение 10 минут и блокировали неспецифическое окрашивание блокирующий реагент. После инкубации в течение ночи при 4 ° С с анти-p53, Bcl-2, Bax, и с-Мус-антитела (разбавленный 1:100, 1:100, 1:100, 1:100, соответственно), срезы обрабатывали в соответствии со стандартом иммунопероксидазного методы с использованием стрептавидина биотин peroxidise комплексного набора (LSAB + Kit /HRP, Dako). Реакция peroxidise Затем была разработана с диаминобензидино (Dako). Отрицательные контрольные участки были подвергнуты такой же методике, за исключением того, что первое антитело было заменено PBS. Нет положительное окрашивание не наблюдалось в контрольной группе. Положение окрашивания была преимущественно в цитоплазме клеток для Вах и с-Мус, цитоплазмы и cytomembrane для BCL-2 ядра для p53.

Иммуногистохимическое окрашивание скоринг
<р> Все срезы были оценены двумя патологи без знания клинического результата. Процент иммунореактивных клеток и интенсивности окраски оценивали в каждом образце. Процент иммунореактивных клеток оценивали по шкале от 0 до 4: нет окрашивания не оценивается как 0, 1-10% клеток окрашиваются по шкале от 1, 11-50%, так как 2, 51-80%, так как 3, и 81- 100%, так как 4. интенсивности окрашивания оценивали от 0 до 3: 0 определяется как отрицательное, 1, как слабый, 2, как замедлителем, и 3, как сильные, соответственно. Исходные данные были преобразованы в иммуногистохимического балла (ИСС), путем умножения количества и интенсивности баллов. Счет IHS 9-12 считался сильным иммунореактивности (+++), 5-8, как умеренное (++), 1-4, как слабый (+), и 0 в качестве отрицательного (-). На конечном счете, случаи имели оценку менее 1 рассматривались как отрицательные, и ≥1 считался положительным.

Статистический анализ
<р> Связь между клинико-патологическими факторами и биологическими маркеров оценивали критерий хи-квадрат. Выживаемость Пятилетняя рассчитывали по методу Каплана-Мейера, а также различия между кривыми выживаемости были изучены с помощью лог-рангового. Все значимые переменные, наблюдаемые в однофакторного анализа были включены в многомерный анализ выживаемости с использованием модели пропорциональных рисков Кокса. Принятый уровень значимости был P
&л; 0,05. Статистический анализ и графики были выполнены с использованием SPSS 13,0 статистического пакета (SPSS, Inc., Chicago, IL).

Результаты

характеристики клинико-патологическими
<р> Были 339 мужчин и 162 самки (2.09: 1) со средним возрастом 57 лет. Был 57 (11,4%) раннего рака желудка и 444 (88,6%) на поздних стадиях рака желудка. В соответствии с гистологическим типом, наблюдали хорошо дифференцированные опухоли у 9 (1,8%) пациентов, умеренно дифференцированные в 164 (32,7%) больных, и слабо дифференцированной опухоли в остальных 328 (65,5%) пациентов. В зависимости от типа Бормана, 57 (10,4%) были типа 0, 36 (7,2%) типа I, 15 (3,0%) типа II, 371 (74,0%) тип III, 22 (4,4%) типа IV. Из 501 пациентов, 159 (31,7%) имели опухоли, расположенные в верхней трети, 72 (14,4%) имели опухоли в средней трети, 244 (48,7%) имели опухоли в нижней трети желудка, и 26 (5,2%) имели опухоли занимают две трети или более желудка. узел метастаз лимфа наблюдалась у 356 больных, частота метастазирования была 71,1%. Распределение патологической стадии следующим образом: 35 (7,0%) пациентов принадлежали к стадии IA, 52 (10,4%) IB, 60 (12,0%) IIA, 83 (16,5%) IIB, 88 (17.6%) IIIa, 83 ( 16,5%) IIIB, и 100 (20,0%).

экспрессии p53 экспрессии p53 МНКР
<р> был положительным в 64,9% всех раковых тканей желудка. окрашивание p53 наблюдалось в ядре клетки карциномы (рисунок 1). экспрессии p53 была связана с Bax и с-Мус (таблица 1). Хорошо дифференцированные гистологию коррелирует с p53 экспрессии. Там не было никакой корреляции с пола, возраста, типа Бормана, локализации опухоли, метастазирование узлов лимфы, и патологической стадии (таблица 2).

Bcl-2 выражение
<р> Bcl-2 выражение было положительным в 22,2% всех раковых тканей желудка. Bcl-2 окрашивание наблюдалось в цитоплазме и cytomembrane карциномы клеток (рисунок 1). выражение Bcl-2 был связан с Bax (таблица 1). Был корреляция с патологической стадии, но никакой корреляции с полом, возрастом, гистологический тип, тип Бормана, расположение опухоли, метастазов в лимфатических узлах, а также (таблица 2).

Выражение Вах

выражение Вах был положительным в 42,9% всех раковых тканей желудка. Вах окрашивание наблюдалось в цитоплазме клеток карциномы (Рисунок 1). Выражение Bax было связано с р53, Bcl-2 и С-Мус (таблица 1). Женский пол, умеренно-дифференцированный, Боррманна II, верхняя треть место, и метастазов в лимфатических узлах коррелирует с экспрессией Вах. По мере увеличения патологическая стадия, экспрессия Вах стали более частыми. Там не было никакой корреляции с возрастом (таблица 2).

с-Мус выражение
<р> с-Мус выражение было положительным в 58,1% всех раковых тканей желудка. с-Мус окрашивание наблюдалось в цитоплазме клеток карциномы (Рисунок 1). с-Мус выражение было связано с p53 и Вах (таблица 1). Бормановское III коррелируют с с-Мус выражением. Там не было никакой корреляции с полом, возрастом, гистологического типа, локализации опухоли, метастазирование узлов лимфы, и патологической стадии (таблица 2). Кроме того, исходные данные по клинико-патологическими особенностями и оценки иммунореактивности для 501 случаев рака желудка был показан в качестве дополнительной таблицы в формате Excel (таблица S1).

Одномерный анализ
<р> Чрезмерная все пять -летний выживаемость составила 53,7% для всех 501 пациентов. Скорость пятилетняя выживаемость была 64,9% и 50,5% в Bcl-2 и Bcl положительных 2-отрицательных пациентов, соответственно, и это различие было статистически значимым (рис. 2). для экспрессии Bcl-2, за исключением, значимые прогностические факторы включают: локализацию опухоли, тип Бормана, состояние лимфатических узлов, и патологическую стадию. Таблица 3 показали результаты на однофакторного анализа прогностических факторов.

многофакторный анализ
<р> Многофакторный анализ выживаемости, включая все значимые прогностические факторы, упомянутые в одномерном анализе, было проведено с целью определения независимых прогностических факторов для рака желудка , Многофакторный анализ с использованием модели пропорциональных рисков Кокса показал, что Bcl-2 экспрессия и патологической стадии являются независимыми прогностическими факторами (таблица 4).

Сравнение выживаемости в соответствии с биологическими маркерами на той же стадии

В соответствии с 7-го UICC TNM Постановка системы, рак желудка была разделена на 7 этапов: этап IA, IB стадия, стадия IIA, IIB, IIIA, IIIB, IIIC. На основании выражения Bcl-2, каждая стадия была разделена на BCL-2 положительных и BCL-2 отрицательной группы. Были существенные различия по-всего 5-летней выживаемости между BCL-2 положительными и BCL-2 отрицательной группы в соответствии со стадией IIB ( P
= 0,003). Кроме того, мы обнаружили, что существуют значительные различия все более-5-летней выживаемости между Bcl 2-положительным и BCL-2 отрицательной группы в соответствии с Бормана III ( P
= 0,002); нет существенных различий в зависимости от стадии II и стадии III (рисунок 3).

Обсуждение
<р> Идентификация прогностических факторов при раке желудка имеет важное значение для прогнозирования выживаемости пациентов и определения оптимальных терапевтических стратегий. Многие исследования показали, что глубина инвазии и метастазов в лимфатических узлах были наиболее важными прогностическими факторами при раке желудка [17], [18]. В результате изменчивости прогноза в той же патологической стадии рака желудка, там было много исследований для конкретных биологических маркеров для выявления пациентов с неблагоприятным прогнозом [19] - [21]. В то же время, экспрессия р53, Bcl-2, Bax, и с-Мус были известны как он связан с tumorogenesis. Таким образом, цель данного исследования состояла в том, чтобы исследовать, являются ли эти биологические маркеры могут быть использованы в качестве дополнительных прогностических факторов традиционной стадии TNM при раке желудка. В этом исследовании, экспрессия этих белков была исследована в 501 случаях резекции первичного рака желудка человека.

иммуногистохимические показатели экспрессии р53, Bcl-2, Вах, и с-Мус были 64,9%, 22,2% , 42,9%, 58,1%, соответственно, и эти результаты согласуются со скоростями экспрессии других исследований, упоминаемых в качестве 17-84.1%, 12.7-67%, 42.4-58.0%, 23.5-72.9% соответственно [9], [12 ], [22] - [26]. p53 играет важную роль в апоптозе. Это изменило наиболее часто в раковых заболеваний человека. Белок p53 дикого типа индуцируется остановку роста на /S фазе G1 клеточного цикла в ответ на повреждение ДНК, тем самым предотвращая пролиферацию клеток. Приглушенный типа p53 потерял функцию, и позволила клетки с поврежденной ДНК, чтобы размножаться. В этом исследовании, обратная корреляция между р53 и гистологическим типом был найден, который продемонстрировал, что дерегулирование р53 может привести к неконтролируемой пролиферации при раке желудка. Это согласуется с предыдущим исследованием [22]. Это противоречие, как и для прогностической ценности р53, некоторые исследования показали, что p53 был связан с плохим прогнозом [27], [28], в то время как другие сообщили о том, что p53 не имеет влиятельного на прогноз [29], [30]. Наше исследование показало, что p53 не был связан с прогнозом развития рака желудка. Вах действовал в качестве ускорителя апоптоза на клеточной жизни. Предыдущее исследование предположил, что отношение Bax к Bcl-2 играет важнейшую роль в регуляции апоптоза склонность к [31]. В настоящем исследовании, экспрессия Вах была связана с тем из Bcl-2 и Вах избыточная экспрессия достоверно коррелирует с некоторыми клинико-патологическими особенностями, такими как пол, гистологический тип, тип Бормана, расположение опухоли и метастазов в лимфатических узлах. Мы обнаружили, что пациенты с положительным выражением Вах были склонны представлять метастазов в лимфатических узлах, и Вах не был независимым прогностическим фактором. Этот результат отличается от предыдущих исследований. Anagnostopoulos и др. [24] сообщили, что отрицательное выражение Вах в желудочном было связано с метастазов в лимфатических узлах и плохим клиническим прогнозом. Причины противоречивые результаты не были ясны. Вполне возможно, что генные различия между западными людьми и восточных людей способствовали этому. Прото-онкогенов с-Мус был мастером регулятором клеточной пролиферации и трансформации через оба транскрипционных и nontranscriptional средств, и часто дерегулирование в злокачественных опухолей человека. Ниномия и др. [26] сообщили, что избыточная реактивность по отношению к с-Мус продукта чаще возникали в инвазивного рака, чем в локализованных раковых заболеваний, а также с-Мус выражение производства в ткани рака хорошо коррелировали с перитонеального распространения, а также у больных с с-Мус положительного выражения имели худший прогноз, чем те, с с-Мус отрицательным выражением. В настоящем исследовании мы не обнаружили каких-либо отношений между с-Мус выражения и инвазивного поведения и прогнозирования, кроме типа Бормана. Мы обнаружили, что с-Мус выражение было более связано с Бормана III.
<Р> Bcl-2 гена впервые была описана как онкоген в фолликулярной лимфомы. Было хорошо известно, ингибирует апоптоз [32], но некоторые исследования показали, что избыточная экспрессия Bcl-2 подавлено клеточную пролиферацию и было связано с менее агрессивным биологическим поведением [33], [34]. Bcl-2 сообщалось в различных эпителиальных злокачественных опухолей человека, включая рак желудка. Тем не менее, точная роль и клиническое значение Bcl-2 еще предстоит выяснить. Предыдущие исследования показали, что экспрессия Bcl-2, был связан с лучшим прогнозом при раке легкого, не мелкоклеточный и раком желудка [35], [36]. Pietenpol и др. [37] сообщили, что избыточная экспрессия Bcl-2 ингибирует рост некоторых твердых опухолевых клеточных линий. Saegusa и др. [33] было показано, что большинство из Bcl-2 + раковых клеток в непролиферативной состоянии, а среднее выражение Ki-67 индекс мечения и апоптотической индекс мечения в Bcl-2 + очагах, были значительно ниже, чем в Bcl-2- фокусы. Аидзава и др. [36] показали, что экспрессия Bcl-2 в поздних стадиях рака желудка был связан с более низким индексом апоптоза и лучшим прогнозом. Все эти исследования позволяют предположить, что Bcl-2 не только ингибирует апоптоз, но и подавленную клеточную пролиферативную активность. В настоящем исследовании мы охарактеризовали впервые экспрессии Bcl-2 белков у китайских больных раком желудка. Наши данные показали, что Bcl-2 была достоверно коррелирует с лучшей выживаемостью.
<Р> Идентификация прогностических факторов при раке желудка имеет важное значение для прогнозирования выживаемости пациентов и определения оптимальных терапевтических стратегий. Было хорошо известно, что глубина инвазии и наличие или отсутствие метастазов в лимфатических узлах были наиболее важными прогностическими факторами при раке желудка. Тем не менее, было невозможно точно предсказать прогноз через обычные процедуры стадирования в результате изменчивости прогноза в пределах той же стадии рака желудка. Лю и др. [5] обнаружили, что существуют значительные различия между группой опухоли большего размера и группы опухолей малого размера согласно Stage IIIB и IV. Поэтому крайне важно, чтобы искать другие специфические факторы, чтобы определить подгруппы пациентов с более агрессивным течением заболевания, особенно в 7-м изданиях Перемещения системы UICC TNM. В соответствии с 7-ой классификации UICC TNM, каждая стадия рака желудка была дополнительно разделена на BCL-2 положительных и BCL-2 отрицательной группы. Наши данные показали, что экспрессия Bcl-2, в значительной степени влияют на прогноз стадии IIB. Результаты показали, что экспрессия Bcl-2 может обеспечить дополнительную прогностическую информацию у больных раком желудка.
<Р> Некоторые ограничения этого исследования следует признать. Во-первых, статус Helicobacter Pylori не было описано. В качестве важнейшего канцероген рака желудка, хеликобактер пилори может быть связано с некоторыми другими параметрами, такими как Bcl-2. Во-вторых, отношения между рецидивом опухоли и Bcl-2 не был исследован.
<Р> В заключение отметим, что экспрессия Bcl-2 может служить одним важным показателем для прогнозирования прогноза у больных раком желудка. Таким образом, это может быть кандидатом на постановка системы в дополнение к традиционным факторам.

Поддержка Информация
таблице S1. Данные
Сырье на клинико-патологическими особенностями и оценки иммунореактивности для 501 случаев рака желудка
DOI: 10.1371. /journal.pone.0029670.s001
(XLS)

• PLoS ONE: Stathmin1 Пьесы Онкогенный Роль и является целью микроРНК-223 в желудочном Cancer
• PLoS ONE: Экспрессия генов Подпись Анализ Идентифицирует Vorinostat в качестве кандидата для терапии рака желудка