Plos ONE: Polž urejeno MIR-375 zavira migracije in invazije želodčnega raka celic z usmerjanjem JAK2

Povzetek

MicroRNAs (miRNAs) so poročali, da igrajo ključno vlogo pri invaziji raka in metastaz. Naši prejšnji študija je pokazala, da miR-375 pogosto navzdol reguliranih raka želodca zavira proliferacijo celic z usmerjanjem Janus kinaze 2 (JAK2). Tukaj smo nadalje ugotovili, da je raven izražanja miR-375 v metastatskim želodčnih tkivih rakom bistveno zmanjšal v primerjavi s kontrolno skupino, ki niso metastaz. Zunajmaternična izraz miR-375 zavira migracije in vdor želodčnih rakavih celic deloma z usmerjanjem JAK2. Poleg tega je miR-375 izraz negativno ureja metastaz povezana transkripcijski faktor Polž, ki neposredno veže na domnevno promotor miR-375. Poleg tega lahko čezmernim Polž delno povratne inhibicije migracije želodčnega raka celic z miR-375 povzročil. Če povzamemo, ti podatki kažejo, da se miR-375 lahko negativno ureja Polž in sodeluje pri migraciji želodčni rak celic in invazije lahko z usmerjanjem JAK2

Navedba. Xu Y, Jin J, Liu Y, Huang Z, Deng Y, You T, et al. (2014) Polž urejeno MIR-375 zavira migracije in invazije želodčnega raka celic z usmerjanjem JAK2. PLoS ONE 9 (7): e99516. doi: 10,1371 /journal.pone.0099516

Urednik: Ming Tan, University of South Alabama, Združene države Amerike

Prejeto: 7. februar 2014; Sprejeto: 15. maj 2014; Objavljeno: 23. julij 2014

Copyright: © 2014 Xu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je bila podprta z Natural znanstvena fundacija Kitajske (31301149, 31071221, 31190063, 31125017 in 31100975), Ministrstvo za znanost in tehnologijo Kitajske (2013CB945603, 2012CB945004 in (2011CBA01001), Ministrstvo za šolstvo Kitajske (20110101110103 in (20130101120001), Natural Scientific fundacija province Zhejiang, Kitajska (LQ13H160013, LQ14H160003, Z2100247 in Y2100106) je 111 Project (B13026), Temeljne raziskovalne Sredstva za srednjeevropskih univerz (2014QNA7015) in Program Provincial Zhejiang za gojenje na visoki ravni inovativna zdravje talente. financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. avtorji so izjavili, da niso konkurenčni interesi obstajajo

Uvod

Metastasis je najbolj groznih vidiki raka in so preučevali več kot 100 let [1], [2]. Pri raku želodca, visoka smrtnost predvsem pripisuje zakasnele diagnoze zaradi pomanjkanja posebnih simptomov v zgodnji fazi. In metastaze je odgovoren za želodčni povezane z rakom umrljivost [3], [4]. Migracije in invazijo rakavih celic so bistveni procesi med metastatskega raka procesije, ki je sestavljen iz niza medsebojno povezanih korakov, vključno orožja, nenavezanosti, promet, transport, priporu v organih, spoštovanje žilne stene, ekstravazacijo, vzpostavitev mikrookolja in orožja v oddaljene organe. Pri raku želodca, celice vdor v okoliško tkivo je pomemben zgodnji korak [3], [5]. Vendar pa mehanizmi želodca rakavih celic migracije, invazije in metastaze niso v celoti razumeli.

V zadnjih letih so različne molekule, na primer, rastnih faktorjev, citokinov, zunajcelični-matrix preoblikovanje molekul in nekaterih transkripcijskih faktorjev kot polž, Twist in ZEB1 [6] [7] [8] [9] [10] [11], so pokazale, da vozi napredek migracije rakavih celic, invaziji in metastaz. V zadnjem času je postalo očitno, da je poleg anomalije, ki kodirajo proteine ​​genov, sprememb v genih, ki ne kodirajo lahko tudi prispevajo k rakavih celic migracije, invazije in metastaz, kot miRNAs, ki so razred malih enoverižni -kodiranje vsaki RNA molekule, ki uravnavajo izražanje genov z velikim potencialom in so bili vpleteni v regulacijo rakavih celic migracije, invazije in metastaz kot aktivatorja ali valov [12], [13] [14] [15] [16] . Do sedaj so bili številni miRNAs preučevali da se vpleten v želodčni rak metastaziranje napredovanja, na primer, miR-218, miR-9, miR-7 in miR-146a [6], [17], [18] [19]. Smo proučevali povezavo med specifično dysregulated miRNA in specifične metastaz korak raka želodca, ki bo omogočila vpogled v možne mehanizme za želodčnega rakavih celic migracije, invazije in metastaz.

V naši prejšnji raziskavi, je bil miR-375 občutno navzdol reguliranih raka želodca in blokiranem želodca rakavih celic orožja z usmerjanjem JAK2 [20]. Zanimivo je, da v tej študiji, smo nadalje ugotovili, da je raven izražanja miR-375 v vzorcih raka želodca celo nižja od bolnikov metastazami-pozitivnih compaired s tisto pri bolnikih metastazami brez. Zato smo predlagali, da bi morali miR-375 vzročno vlogo v želodcu metastaz raka. Naše raziskave odkrili, da zunajmaternične izraz miR-375 zaviral migracije in vdor želodčnih rakavih celic tudi delno z usmerjanjem JAK2. Nadalje smo morali ugotoviti, kako je miR-375 izraz ureja rakom želodca. Rezultati so pokazali, da je bila miR-375 tarča za metastaz povezana transkripcijski faktor Polž in njen izraz je obratno povezana z Polž pri raku želodca. Čezmerno Polž lahko delno povratne inhibicije migracije želodca rakave celice, ki jih miR-375 povzročil. Tako, naše ugotovitve kažejo, da miR-375 zavira želodčne rakavih celic migracije in vdor skozi Polž /miR-375 /uredbe JAK2 poti.

Materiali in metode

Klinični vzorci (Etika Statement) in celic linije

Klinični želodčni rak osebki in njihovi-pair ujema niso maligne želodca vzorcev iz 39 bolnikih z želodčnim resekcijo raka so posredovali Sir Run Run Shaw Hospital (Hangzhou, Kitajska). Vsi vzorci so bili zbrani s pisnim soglasjem iz bolnikov, kot je bilo prej [20] opisano. Oba želodca tumor tkiva in sosednjih nontumorous želodčnih tkiv, zbranih po bila operacija in razdeljen na dva dela. En smo zamrznili v tekočem dušiku takoj za nadaljnjo uporabo, je drugi del shranjen v formalinom za analizo patologije. Bolniki, ki sodelujejo v naši raziskavi so bili ločeni v metastaz brez in metastazami pozitivnih skupin (9/30). celične linije raka želodca (AGS in MGC-803) in en ne-maligni želodca epitelijskih celic linija (GES-1) je bilo prej opisano [20].

RNA ekstrakcija

Total RNA iz želodca vzorcev in celičnih linij je bila vzeta z mirVana Mirna Izolacija Kit (Ambion, TX, ZDA) po protokolu proizvodnji je.

Kvantitativni PCR v realnem času analize

izraz miR-375 je bil preskusimo z TaqMan MicroRNA testi (Applied Biosystems, CA, ZDA) s posebnimi primerja (P /N: 4373151, Applied Biosystems). Reverzna transkripcijska reakcija je potekalo od 10 ng celotne RNK z uporabo zanka primerjev. Kvantitativni PCR v realnem času (QRT-PCR) smo izvedli z uporabo standardnega TaqMan MicroRNA testih protokol o sistemu ABI7500 PCR v realnem času za zaznavanje. Metoda ΔΔCt za relativno kvantizacije je bila uporabljena za določitev Mirne izraz. CT je število delnim cikel, pri katerem fluorescenčni vsakega vzorca prehaja fiksni prag. ΔCt je bila izračunana z odštevanjem CT snRNA U6 (RNU6B, P /N: 4373381, Applied Biosystems) s CT Mirne obresti. ΔΔCt je bila izračunana tako, da se ΔCt referenčnega vzorca (seznanjenih niso maligne tkivo za kirurške vzorcev, normalnih tkiv in GES-1 celice za zdravljenje želodčnih raka celičnih linijah) z ΔCt vsakega vzorca. Krat sprememba je bila določena kot 2 ^-ΔΔCt.

migracije in invazije test

Celice so transfekciji s 20 Nm pred miR-375 ali negativne kontrole z uporabo transfekciji Agent (Ambion, TX, ZDA) po protokolu proizvodnji pri 24-vdolbinami. 24 ur po transfekciji so Transwell migracije test in poskus vdora v Matrigel izvaja ločeno po 24-dobro Transwell vložki z 8 velikostjo um por (Corning Costar Corp). Za Transwell migracij testa, 2 × 10 ^{4 AGS ali 3 x 10 4 celice MGC-803 suspendirane v 100 ml ustreza gojitvenem mediju brez fetalnega govejega seruma (FBS) so bili naloženi v zgornjo komoro transwell vložka s tretjimi obložena membrana. Za poskus vdora v Matrigel, 5 x 10 4 AGS ali MGC-803 celice zasadimo v 100 ul mediju brez seruma v zgornjem Matrigelove obloženih komori namesto. V obeh testih smo spodnja komora vsebuje 600 ul mediju z 20% FBS. Celice so bile nato pustimo, da migrira ali napadel 12 ur pri 37 ° C. Celice, ki preselili ali vdrli v spodnji komori so bile določene, obarvali s 4 ", 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI, 1:1000), vizualizirali pod fazno kontrastnim mikroskopom in fotografirali. Skupno število preseljenih ali napadel celic smo s štetjem IPP (Image-Pro Plus 6.0) programske opreme. Vsi poskusi so neodvisno ponoviti vsaj trikrat.}

Scratch-celjenje ran test

Celice smo transficirali kot je opisano prej in pustimo, da rastejo do sotočja. Celice smo nato kultivirali v ustreznem mediju brez FBS 12 h in potem opraskan s pipeto. Ran območja so bili označeni in fotografirali pri 0 h, 12 h, 24 h in 36 h oz. Stopnja celic migracij je bila ocenjena tako fotografiranje in količinsko na selili razdaljo celic preselil iz rane robom v smeri proti centru s pomočjo IPP 6.0 sistem. Vse poskuse smo ponovili trikrat.

gradniki

Za proizvodnjo pGL3-375pro plazmida, zaporedje DNA, ki vsebuje PRI-miR-375 (primarni miR-375) promotor je ojačano z RT-PCR z uporabo primerji 5'-ATCG CTCGAG ACA GAC SCT GCT AAG CGA CTC-3 'in 5' ATCG AAGCTT ACG SCT TGG AGC TTG TCC-3 'in nato klonirali v pGL3-bazni vektor (Promega). Za izdelavo plazmida, ki izraža Polž v celicah, je bil odprt bralni okvir (ORF) zaporedje Polž klonirali v sesalcih izraz vektor pEGFP-C1 (Clontech, CA, ZDA) z uporabo primerje 5'ATCG AA GCT TCG ATG CCG CGC TCT TTC CTC G-3 'in 5' ATCG GGA TCC TCA GCG GGG ACA TCC TGA GCA-3 ". Za zunajmaternične izražanje-FLAG označena JAK2 je človek JAK2 kodiranje regijo klonirali v pCMV-Tag 2C vektorja. Za izdelavo plazmida, ki izraža MIR-375 v celicah sesalcev so v parih oligonukleotidi, ki temeljijo na primarnem zaporedju je, miR-375 in s spremljajočimi regije smo klonirali v sesalski ekspresijski vektor, pEGFP-C1 (Clontech, CA, ZDA). Vsi konstruktov smo potrdili s sekvenciranjem.

luciferazni test

Štirideset tisoč Celice smo zasejali v 24-vdolbinami 24 ur pred transfekcijo. Celice smo transfektirali z bodisi pGL3-375pro ali pGL3-Basic vektor. PRL-TK vektor (Promega, WI, ZDA), ki vsebuje Renilla
Luciferazno kotransfektiramo tudi kot referenčno kontrolo. Firefly in Renilla
luciferazne aktivnosti so bile izmerjene z uporabo Dual-luciferaza Reporter testom (Promega), 24 ur po transfekciji. Firefly je luciferazno aktivnost preračuna Renilla luciferazne aktivnosti.

Statistične analize

Podatki so predstavljeni kot povprečje ± standardna napaka (SE) treh neodvisnih poskusov. Razmerja med izražanjem miR-375 in izražanje Polž mRNA bile raziskane s Pearsonov
koeficient korelacije, ki je bilo prej opisano [20]. Študent je t
-test in X
^{2 Test smo izvedli za ugotavljanje statistične pomembnosti. P
< 0.05 se je štelo, da je statistično značilno}

Rezultati

MIR-375 je drastično navzdol reguliranih v želodčnih rakavih celic in tkiv pri bolnikih metastazami-pozitiven.

Če želite ugotoviti, ali je miR-375 povezana z želodčno metastaz raka, smo prvič zaznali nivoja izražanja miR-375 v osnovnih želodčnega tkiva rakavih pacientov metastazami pozitivnih in metastazami brez. V primerjavi z vzorci pacientov metastazami brez, je bila stopnja izraz miR-375 skoraj dva-kratno zmanjšanje tkiv pri bolnikih metastazami pozitivnih ( P
< 0,05) (slika 1A). V skladnega s tem rezultatom se je stopnja izražanja miR-375 v celičnih linijah želodčnih negativno povezana s sposobnostmi migracije celic in invazijo. V metastatskim lastnosti želodčnih epitelijskih celičnih linijah (GES-1, MGC-803, AGS) je bilo značilno. Kot je prikazano na sliki 1C in 1D sta migracije in invasion sposobnosti celične linije AGS večja od MGC-803 in ges-1 celičnih linijah ( P
< 0,01). Nasprotno pa je bil miR-375 izraz v AGS celicah nižja od MGC-803 in ges-1 celic ( P
< 0,01) (slika 1B). Z eno besedo, ki je miR-375 navzdol reguliranih v želodčnih tkivih rakavih pacientov metastazami pozitivnih in želodčne rakavih celic z večjimi migracijskimi in invazijo sposobnosti. Ta povezava kaže, da morda miR-375 vzročno vlogo v želodcu metastaz raka.

Čezmerno miR-375 zavira želodčni rak celic migracije in invazije

Če želite raziskati vlogo miR-375 v želodčni rak metastaze, smo preučili vpliv miR-375 prekomerno o migraciji in invazije na letnem pregledu rasti in MGC-803 želodčnih rakavih celic z nizko endougenous izražanja miR-375. Celice so transfekciji s bodisi miR-375 predhodnik (miR-375) ali oligonukleotidov nadzora predhodnikov-negativen (slabo), ali nobena od zgoraj (Mock). Transwell migracije testa so pokazali, da je prekomerno miR-375 močno zaviral migracije AGS (slika 2A, 2B) in MGC-803 celice (slika S1A, S1B). V skladu s temi rezultati, scratch-celjenje ran test je tudi pokazala, da so bile hitrosti v letnem pregledu rasti (slika 2C, 2D) in MGC 803-celice (Slika S1C, S1D) migracije proti poškodovane površine bistveno zmanjšana, ko prekomerno miR-375 . nadalje smo uporabili poskus vdora v Matrigel in ugotovili, da je prekomerno miR-375 privedla do več kot dvakratno znižanje invazivnih lastnosti AGS (slika 3a, 3b) in MGC-803 celice (slika 3C, 3D). Kolektivno, ti rezultati kažejo, da je prekomerno miR-375 zadostuje, da inhibira tako migracije in invazijo sposobnosti želodca rakavih celic.

MIR-375-urejeno JAK2 sodeluje pri urejanju migracij želodca rakavih celic in invazije

Naša predhodna študija je ugotovila JAK2 kot cilj nadaljnjega mir-375 [20]. Tukaj smo zainteresirani za študij ali je JAK2 sodeluje pri urejanju migracij želodca rakavih celic in invazijo. Smo zaposleni, ki temelji na vektorski RNAi tehniko tanjšajo endogenega JAK2 in ugotovila, da so migracije in invazijo dejavnosti AGS (slika 4) in MGC-803 celic (Slika S2) tako močno zaviral. Hkrati smo raziskali, ali bi JAK2 preprečevanje inhibicije učinek migracij želodca rakavih celic in vdor miR-375 povzročil. Celice so co-transfekciji s miR-375 predhodnik in bodisi JAK2 Čezmerno vektorja (miR-375 + JAK2) ali nadzor prazno vektor (miR-375 + Vec). Čezmernim JAK2 jasno spodbuja celice migracije in invazije, kot je prikazano na sliki 4 in S2. Tako je v skladu z našo hipotezo, lahko miR-375 zavirajo migracijo in vdor želodčnih rakavih celic deloma z usmerjanjem JAK2. nadalje smo ugotovili, da ima JAK2 prekomerno ne vpliva na ravni ekspresije miR-375, kot je prikazano na sliki S3. Vendar pa ne moremo izključiti možnosti, da je disregulacijo miR-375 posega v druge cilje, potrebne za prehod želodčne rakavih celic in invazijo.

Polž zmanjša število miR-375 izraz

Zgornji rezultati kažejo, da miR-375 lahko usmerjeni nekateri transkripcijski faktorji, ki so povezane z napadom raka in postopek metastaz. Seveda pa smo se osredotočili na to, kako se miR-375 izraz urejeno. Najprej smo ugotovili, je pogovarjala DNA regijo gorvodno od pri-miR-375 gena, ki je poročal, da vsebuje pri-miR-375 genski promotor [21]. Nato smo izvedli program za Consite (http://asp.ii.uib.no:8090/cgi-bin/CONSITE/consite) in ugotovil, da je bilo šest mesta za vezavo transkripcijski faktor Polž v regiji DNA (slika 5A). Regijo DNA smo klonirali v pGL3-bazni vektor (Promega) (pGL3-375pro) za merjenje aktivnosti promotor. V skladu s podatki iz skupine Walker [21], naši rezultati kažejo, da ta DNA regija vsebuje pri-miR-375 genski promotor in je sposoben usmerjati luciferazno ekspresijo (slika 5B). Luciferazno aktivnost je bila učinkovito zatrta, ko pGL3-375pro vektor je co-transfekciji s Polž izraznim vektorjem (Polž), vendar ne pri sočasni transfekciji s prazno kontrolno vektorja (Mock) (slika 5C). Poleg tega bi polž čezmernim zmanjšajo stopnjo ekspresije miR-375 za 46% (Slika 5D). Da bi določili klinično pomembnost teh rezultatov smo dodatno korelira nivo ekspresije miR-375 s stopnjo polž mRNA pri istih bolnikih z rakom želodca. Kot je prikazano na sliki 5E bil ločen inverzna korelacija ugotovljeno med stopnjo ekspresije miR-375 in Polž mRNA ( P
< 0,05, r = -0,6). Zato so te ugotovitve kažejo, da je polž potencialni pred regulator miR-375 izražanja.

Polž sodeluje pri urejanju migracij želodca rakavih celic z usmerjanjem miR-375

Za dodatno pojasnitev korelacija miR-375 in polž, smo raziskovali, ali je polž sodeluje pri urejanju migracij želodca rakavih celic z usmerjanjem MIR-375. Smo zaposleni, ki temelji na vektorski tehniko upregulate Polž nivo izražanja in ugotovila, da so bile migracije aktivnost AGS celic (slika 6) močno spodbuja. Hkrati smo raziskali, ali bi polž preprečevanje inhibicije učinek rakavih celic migracij želodca s pokoj-375 povzročil. Celice so co-transfekciji s miR-375 Čezmerno vektorja in Polž Čezmerno vektor (Polž + miR-375). Čezmerno Polž jasno spodbujati celicam migracijo in bi lahko delno nevtralizira inhibicije učinek rakavih celic migracij želodca s pokoj-375 je povzročila, kot je prikazano na sliki 6. Tako je v skladu z našo hipotezo, lahko polž delno zavira migracije želodčnih rakavih celic z usmerjanjem miR-375.

Pogovor

so MiRNAs poročali regulirati migracije tumorja, invazijo in metastaze, vključno z rakom želodca [6], [22]. MIR-375 je že dokazano, da igrajo pomembno vlogo pri želodčnem rakavih celic orožja [20], [23]. Vendar pa so regulativni mehanizmi ostajajo nejasne. V tej raziskavi smo podrobneje preučiti delovanje in možne mehanizme miR-375 v migracije in invazije na želodcu rakavih celic. Ugotovili smo, da je čezmerno miR-375 blokiranem proliferacijo, migracijo in invazije na želodcu rakavih celic, deloma z usmerjanjem JAK2. To je bilo več kot desetletje, odkar je bila JAK2 prvi kloniran [24]. JAK2 se izraža v skoraj vseh tkivih in povezana z mnogimi patološki napreduje. Čeprav je jasno, da JAK2 deluje kot onkogen v obeh mieloproliferativne motnje in nekaj solidnih tumorjev [25] [26] [27], ni neposredno povezan z JAK2 preseljevanja raka, so poročali o invaziji ali metastaze. Vznemirljivo, naša študija je prva pokazala, da podreti JAK2 s RNAi zaviral migracije in invazijo dejavnosti želodčnih rakave celice, ki so podobni čezmerni miR-375. Poleg tega bi lahko čezmernim JAK2 spodbujati migracije in vdor želodčnih rakavih celic. Tako smo predpostavili, da bi JAK2 preprečiti, da zavira migracijo celic in vdor miR-375 povzročil. Glede na odločilno vlogo miR-375 in JAK2 kot master regulatorji želodčnega rakavih celic proliferacijo, migracijo in invazije, oba ima terapevtski potencial pri zdravljenju raka želodca. Zato je treba še raziskati, ali obstajajo druge cilje sodelujejo v miR-375 posredovane želodca metastaz.

Še posebej zanimiva, bomo še naprej raziskovali, kako miR-375, vključenih v želodčni rakotvornost. Kljub temu, da je jasno, da se DNA metilacija in histonov Deacetilacijo možnih mehanizmov, vpletenih v downregulation Mir-375 v rakom želodca [23]. Mehanizmi, povezane miR-375 frakcijo želodčnega metastaz raka so še vedno slabo razumemo. Obstaja možnost transkripcijske blokado miR-375 genske ekspresije v tem procesu. Tukaj smo pokazali, da se metastaze povezana transkripcijski faktor polž potencialni pred regulator miR-375 izražanja. Polž je DNA veže cinkov prst protein, ki je bila prijavljena kot transkripcijski represorju [28]. Acumulating dokazi kažejo, da polž veže na E-polja v promotor E-kadherina in zatira svoje prepis urediti razvoj tumorja invazijo [29]. Poleg tega je bilo ugotovljeno čezmernim Polž primerov raka da je povezana z bezgavkah metastazo tumorjev recidiva in prognozo [30], [31], [32], [33], [34], [35]. V skladu z drugimi poročili, naša študija je pokazala, da je polž mRNA izraženi pri želodčnih tkivih raka v primerjavi z njihovimi sosednjimi ni malignih tkivih. Kot bi se promotor dejavnost miR-375 zatreti z Polž in čezmernim Polž bi lahko znatno zmanjšali miR-375 raven izražanja, smo nadalje ugotovljeno izrazito inverzno povezavo med stopnjo ekspresije miR-375 in stopnjo Polž mRNA raka želodca vzorci. najdemo tudi polž, da sodelujejo pri urejanju migracij želodca rakavih celic z usmerjanjem MIR-375.

Na koncu so ugotovili smo, da je bila miR-375 odklonsko izražajo v želodcu tkivih rakavih bolnikov, ki so metastazami pozitivnih ali želodca rakave celice z večjo migracijo in invazijo dejavnosti v primerjavi z tkiv bolnikov metastazami brez ali neinvazivno želodca epitelijskih celic linije ges-1 oz. Čezmernim miR-375, vsaj delno zmanjšala rakave celice migracije in invazijo dejavnosti želodca z usmerjanjem JAK2. Poleg tega lahko polž biti pred regulator miR-375, ki negativno uravnava izražanje miR-375 in je sodeloval pri urejanju migracij želodca rakavih celic z usmerjanjem MIR-375. Skupaj, naši rezultati zagotoviti undescribed pot, v kateri je transkripcijski faktor polž regulira ekspresijo miR-375, ki zavira njeno neposredno ciljni JAK2, kar zavira migracije in vdor želodčnih rakavih celic. Naši podatki kažejo, da je lahko obnova miR-375 ali inhibicije Polž ali JAK2 koristne terapevtske strategije za zdravljenje raka želodca. Zagotovo bo zelo zanimivo za nadaljnje raziskave o možni učinkovitosti teh molekul, ki ciljajo MIR-375, JAK2 ali Polž pri zdravljenju raka želodca. Še ena zanimiva tema za prihodnje raziskave bo identifikacija drugih možnih ciljev miR-375, in, natančneje, možno vpletenost JAK2 želodčnega metastaz raka.

Podpora Informacije
sliki S1.
zunajmaternična izraz miR-375 zavira migracije MGC-803 celic. MGC-803 transfektiranih s miR-375 predhodnik (miR-375), negativne kontrole (negativna) ali nobena od zgoraj (Mock) so bili izpostavljeni Transwell migracij testom (A) in praske celjenje rane analize (C). (A) Reprezentativni področja invazivnih celic na spodnji strani membrane, ki so bili določeni in obarvajo z DAPI. (B) Skupno število preseljenih celic na spodnji strani membrane je s štetjem IPP 6.0 software. (C) celice prehod na ranjenega področju je bila fotografirana z mikroskopijo na 0 h, 12 h, 24 h in 36 h post-ranjenih. Podčrtane linije označujejo območja manjkajo celice. (D) Stopnja migracije so bile pregledane z merjenjem razdalje celic preselil iz rane roba proti sredini v 36 urah po praskanju. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± SE najmanj treh neodvisnih eksperimentov. Bari, 50 um. * P
< 0,05, ** P
< 0,01
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s001
(IOD)
Slika S2 .
Čezmerno JAK2 obrne miR-375 inducirane inhibicije MGC-803 celic migracije in invazije. Celice transficirane z navedenimi vektorjev ali oligonukleotidi so bili opravljeni s Transwell migracijo (A) ali poskus vdora v Matrigel (C). Reševalne poskusi za miR-375 prekomerno smo izvedli zunajmaternične izražanje JAK2 brez 3'-UTR v miR-375-obdelanih celic. (A, C) so bile prikazane Reprezentativni področja celic na spodnji komori pri 12 h sporočilo migracije ali invazije. Lestvica bari, 50 um. (B, D) Skupno število preseljenih ali invazivnih celic iz devetih naključno izbranih področjih je s štetjem IPP 6.0. * P
< 0,05, ** P
< 0,01
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s002
(IOD)
Slika S3 .
JAK2 nima vpliva na miR-375 izražanja. So AGS in MGC-803 celice smo transfektirali z JAK2 čezmernim vektorjem ali kontrolnega vektorja in podvržemo analizi RT-PCR za stopnjo ekspresije miR-375. Stopnja RNA U6 smo uporabili kot kontrolo
doi:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s003
(TIF)

• Plos ONE: Učinkovitost Vrednotenje Vmesni seštevek in Skupaj Gastrectomies v robotske kirurgije za želodca raka primerjavi s tisto v odprtih in laparoskopske resekcije: metaanalizi
• Plos ONE: protitumorsko Učinki Sirtuin Zaviralec, Tenovin-6, proti želodca raka celic preko Death receptorjev 5 Up-Uredbe