PLoS ONE: улитка-Регулируется MIR-375 Угнетает миграции и инвазии клеток рака желудка с помощью таргетинга JAK2

Абстрактный

микроРНК (миРНК), как сообщалось, играют решающую роль в инвазии и метастазирования рака. Наше предыдущее исследование показало, что микроРНК-375 часто подавляются при раке желудка подавляет пролиферацию клеток путем пристреливать Янус-киназы 2 (JAK2). Здесь мы также обнаружили, что уровень экспрессии микроРНК-375 значительно снижается в метастатических раковых тканей желудка по сравнению с контрольной группой, не метастазирования. Эктопическая экспрессия микроРНК-375 ингибирует миграцию и инвазию клеток рака желудка частично путем охвата JAK2. Более того, экспрессия микроРНК-375 негативно регулируется метастаз связанный фактор транскрипции Snail, который непосредственно связывается с предположительным промотора микроРНК-375. Кроме того, избыточная экспрессия Snail может частично обратить вспять ингибирование миграции клеток рака желудка, вызванного микроРНК-375. Взятые вместе, эти данные свидетельствуют о том, что микроРНК-375 может быть негативно регулируется с помощью Улитка и участвует в желудочном миграции раковых клеток и вторжения потенциально таргетинг JAK2
<р> Образец цитирования:. Сюй Y, Jin J, Лю Y, Z Хуан, Дэн Y, Вы Т, и др. (2014) Улитка застройку MIR-375 Угнетает миграции и инвазии клеток рака желудка с помощью таргетинга JAK2. PLoS ONE 9 (7): e99516. DOI: 10.1371 /journal.pone.0099516
<р> Редактор: Мин Тан, Университет Южной Алабамы, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 7 февраля 2014 года; Принято: 15 мая 2014 года; Опубликовано: 23 июля 2014
<р> Copyright: © 2014 Xu и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа была поддержана природного научного фонда Китая (31301149, 31071221, 31190063, 31125017 и 31100975), Министерство науки и техники Китая (2013CB945603, 2012CB945004 и (2011CBA01001), Министерства образования Китая (20110101110103 и (20130101120001), естественнонаучная Фонд провинции Чжэцзян, Китай (LQ13H160013, LQ14H160003, Z2100247 и Y2100106), 111 проекта (B13026), Фундаментальные исследования Средства для центральных университетов (2014QNA7015) и программу провинциальной Чжэцзян для выращивания высокого уровня инновационных талантов здоровья. спонсорам не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> конкурирующие интересы:.. авторы заявили, что никакие конкурирующие интересы не существуют

Введение
<р> метастазы самые страшные аспекты рака и изучено более 100 лет [1], [2]. При раке желудка, высокая смертность, главным образом приписывает замедленным диагноза из-за отсутствия специфических симптомов на ранней стадии. И метастаз отвечает за желудка, связанной с раком смертности [3], [4]. Миграция и вторжение раковых клеток основные процессы при раке метастатическим процессии, которая состоит из ряда взаимосвязанных этапов, включая пролиферацию, отслоение, обращения, транспорта, арест в органах, присоединение к стенке сосуда, кровоподтек, создание микросреды и пролиферации в отдаленные органы. При раке желудка, клетки инвазия в окружающие ткани является важным первым шагом [3], [5]. Тем не менее, механизмы клеток рака желудка миграции, инвазии и метастазирования не были полностью изучены.
<Р> В последние годы, различные молекулы, например, факторы роста, цитокины, внеклеточного матрикса ремоделирования молекул, а также некоторые факторы транскрипции таких, как улитка, Twist и ZEB1 [6], [7], [8], [9], [10], [11], было выявлено вести прогресс раковых клеток миграции, инвазии и метастазированию. В последнее время стало очевидным, что, в дополнение к отклонениям в белок-кодирующих генов, изменения в некодирующих генов могут также способствовать миграции раковых клеток, инвазию и метастазирование, таких как микроРНК, которые представляют собой класс небольших одноцепочечной некодирующие молекулы РНК, которые регулируют экспрессию генов с большим потенциалом и участвуют в регуляции раковых клеток миграции, инвазии и метастазированию в качестве активаторов или супрессоры [12], [13], [14], [15], [16] , На сегодняшний день ряд микроРНК были изучены быть вовлечены в прогрессии метастазирования рака желудка, например, микроРНК-218, микроРНК-9, микроРНК-7, и микроРНК-146а [6], [17], [18], [19]. Мы изучали взаимосвязь между определенными дизрегуляции микроРНК и специфической стадии метастазирования рака желудка, который обеспечит понимание потенциальных механизмов клеток рака желудка миграции, инвазии и метастазированию.
<Р> В нашем предыдущем исследовании, микроРНК-375 был значительно подавлена ​​при раке желудка и заторможенной пролиферации клеток рака желудка путем охвата JAK2 [20]. Интересно отметить, что в настоящем исследовании мы также обнаружили, что уровень экспрессии микроРНК-375 был еще ниже в образцах рака желудка у пациентов с метастазированием положительным compaired с этим у пациентов без метастазов. Таким образом, мы предположили, что микроРНК-375 может иметь причинную роль в желудочном метастазирования рака. Наши исследования обнаружили, что эктопическая экспрессия микроРНК-375 ингибирует миграцию и инвазию клеток рака желудка также частично ориентации JAK2. Мы также предложено, чтобы выяснить, как выражение микроРНК-375 регулируется при раке желудка. Результаты показали, что микроРНК-375 был мишенью метастаз связанный фактор транскрипции Snail и его экспрессия обратно коррелирует с Улитка при раке желудка. Сверхэкспрессия Улитка может частично обратить вспять ингибирование миграции клеток рака желудка, вызванного микроРНК-375. Таким образом, наши результаты показывают, что микроРНК-375 ингибирует клеток рака желудка миграцию и инвазию через Snail /микроРНК-375 /регулирования JAK2 пути.

Материалы и методы

Клинические образцы (Заявление по этике) и ячейка линии
<р> Клинические желудка образцов рака и их пара подобранная доброкачественных желудка образцов из 39 пациентов, перенесших резекцию желудка рака были обеспечены сэром Run Run Shaw больницы (Ханчжоу, Китай). Все образцы были собраны с письменного согласия от пациентов, как описано ранее [20]. Оба желудочные ткани опухоли и прилегающих к ним неопухолевых желудка тканей, собранных после операции были и разделены на две части. Один замораживали в жидком азоте сразу для дальнейшего использования, другая часть хранилась в формалине для анализа патологии. Пациенты, участвующие в нашем исследовании, были разделены на Безметастатическая и метастазирование-позитивных групп (9/30). Линии рака желудка клеток (AGS и MGC-803) и один доброкачественное эпителия желудка клеточная линия (GES-1) были описаны ранее [20].

РНК экстракция
<р> Общая РНК из образцы желудочного и клеточные линии экстрагировали с помощью изоляции Kit Mirvana микроРНК (Амбион, штат Техас, США) в соответствии с протоколом изготовления.

Количественная ПЦР в реальном времени анализ
<р> выражение MIR-375 было анализировали с использованием Taqman микроРНК анализа (Applied Biosystems, CA, USA) со специфическими праймерами (P /N: 4373151, Applied Biosystems). Реакцию обратной транскрипции сделано, начиная с 10 нг общей РНК с использованием праймеров, петельные. Количественная ПЦР в реальном времени (QRT-ПЦР) проводили с использованием стандартного протокола TaqMan микроРНК тестирований ABI7500 в режиме реального времени системы обнаружения ПЦР. Метод ΔΔCt для относительного квантования использовали для определения экспрессии микроРНК. Ct является дробным числом циклов, при котором флуоресценцию каждого образца проходит фиксированный порог. Δ CТ была рассчитывается путем вычитания из Ct мяРНК U6 (RNU6B, P /N: 4373381, Applied Biosystems) из Ct от микроРНК интересов. ΔΔCt рассчитывалась путем вычитания Δ CТ эталонного образца (парный незловредный ткани для хирургического образцов, нормальных тканей и ГЭС-1 клетки для желудка линий раковых клеток) от Δ CТ каждого образца. Сложите изменение было определено, как 2 ^-ΔΔCt.

Миграция и инвазия анализ

Клетки трансфицировали 20 нМ предварительно микроРНК-375 или отрицательного контроля с использованием агента (трансфекции Амбион, TX, США) в соответствии с протоколом изготовления в 24-луночных планшетах. 24 ч после трансфекции Transwell анализа миграции и инвазию анализа Матригель проводили отдельно с использованием 24-луночного Transwell вставки с размером пор 8 мкм (Corning Costar Corp). Для анализа миграции Transwell, 2 × 10 ^{4 АГС или 3 × 10 4 МГЦ-803 клеток, суспендированных в 100 мкл соответствующей клеточной среде без эмбриональной бычьей сыворотки (FBS), были загружены в верхнюю камеру Transwell вставки с не -покрытие мембраны. Для вторжения анализа Матригель, 5 × 10 4 АГС или клетки МГЦ-803 помещали в 100 мкл бессывороточной среды в верхней камере матригелем вместо. В обоих тестах, нижняя камера, содержащая 600 мкл среды с 20% FBS. Затем клетки позволили мигрировали или захвачена в течение 12 ч при 37 ° С. Клетки, которые мигрировали или захватившие в нижнюю камеру фиксировали, окрашивали 4 ', 6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI, 1:1000), визуализировали под фазово-контрастного микроскопа и фотографировали. Общее количество мигрировавших или вторгшихся клеток подсчитывали с помощью IPP программного обеспечения (Image-Pro Plus 6.0). Все эксперименты были независимо друг от друга повторяют по меньшей мере три раза.}

Скретч-ранозаживляющее анализ
<р> Клетки трансфицировали, как описано выше, и позволяли расти до слияния. Затем клетки культивировали в соответствующей среде без FBS в течение 12 ч, а затем царапали кончиком пипетки. Раны области были отмечены и фотографировали при 0 ч, 12 ч, 24 ч и 36 ч соответственно. Скорость миграции клеток оценивали как фотографирование и количественной оценки перенесенной расстояние клеток, перемещаемого из края раны по направлению к центру, используя систему IPP 6.0. Все эксперименты повторяли три раза.

Формирует
<р> Для получения pGL3-375pro плазмиды, последовательность ДНК, содержащую Pri-микроРНК-375 (первичный микроРНК-375), промотор амплифицировали с помощью RT-PCR с использованием праймеры 5'-ATCG CTCGAG АСА GAC CCT GCT AAG CGA CTC-3 'и 5'-ATCG AAGCTT ACG ССТ TGG АРУ TTG ТСС-3', а затем клонировали в pGL3-основной вектор (Promega). Для построения плазмиды, выражающую улитка в клетках, последовательность открытой рамки считывания (ORF), улиток, был клонирован в векторе экспрессии млекопитающих pEGFP-C1 (Clontech, CA, USA) с использованием праймеров 5'- ATCG А.А. GCT TCG ATG CGC CCG TCT TTC CTC G-3 'и 5'-ATCG GGA TCC TCA GCG GGG ACA TCC TGA GCA-3'. Для эктопической экспрессии FLAG-меченый JAK2, человек JAK2 с кодирующей областью был клонирован в вектор 2С PCMV-Tag. Для построения плазмиды, которая экспрессирует MIR-375 в клетках млекопитающих, спаренные олигонуклеотиды, основанные на первичной последовательности имеет-микроРНК-375 и его фланкирующие области были клонированы в экспрессирующий вектор млекопитающих pEGFP-C1 (Clontech, CA, США). Все конструкции были подтверждены секвенированием.

люциферазы
<р> Сорок тысяч клеток высевали в 24-луночные планшеты за 24 ч до трансфекции. Клетки трансфицировали либо pGL3-375pro или pGL3-основной вектор. СПР-TK вектор (Promega, WI, USA), содержащий Renilla
люциферазы также котрансфицируют в качестве опорного элемента управления. Светлячок и рениллы
люциферазные активность измеряли с помощью двойного люциферазы анализа (Promega) через 24 ч после трансфекции. Firefly активность люциферазы нормализовали к активности люциферазы Renilla.

Статистический анализ
<р> Данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка (SE) из трех независимых экспериментов. Отношения между выражением микроРНК-375 и экспрессию мРНК Snail были исследованы
коэффициент корреляции Пирсона, который был описан ранее [20]. Студенческая т
-test и X
2 испытания были проведены для определения статистической значимости. P
&л; 0,05 считали статистически значимыми

Результаты

MIR-375 резко подавлена ​​в желудочном раковых клеток и тканей от метастазирования-положительных пациентов
. <р> Для того, чтобы выяснить, является ли связан микроРНК-375 с желудочным метастазирования рака, мы впервые обнаруженный уровень экспрессии микроРНК-375 в первичных раковых тканей желудка от метастазирования-положительных и Безметастатическая пациентов. При сравнении с образцами от пациентов без метастазов, уровень экспрессии микроРНК-375 был почти двукратное снижение в тканях с метастазами-положительных пациентов ( P
&л; 0,05) (Рис. 1А) В созвучии с этим результатом, уровень экспрессии микроРНК-375 в желудочном клеточных линий отрицательно связан с возможностями клеток миграции и вторжения. были охарактеризованы Метастатические свойства желудочного эпителиальных клеточных линий (GES-1, MGC-803, AGS). Как показано на рисунке 1C и 1D, миграции и инвазии способности клеточной линии AGS были больше, чем у MGC-803 и ГЭС-1 клеточные линии ( P
≪ 0,01). И наоборот, микроРНК-375 экспрессия в клетках AGS был ниже, чем у MGC-803 и ГЭС-1 клеток ( P
≪ 0,01) (Фигура 1В). Одним словом, микроРНК-375 подавляются в желудочном раковых тканей от метастазирования-положительных пациентов и у клеток рака желудка с большими миграционными и инвазионных способностей. Это соотношение показывает, что микроРНК-375 может иметь причинную роль в желудочном метастазирования рака.

Гиперэкспрессия MIR-375 ингибирует клеток рака желудка миграцию и вторжение
<р> Чтобы исследовать роль микроРНК-375 в желудка метастазы рака, мы исследовали влияние микроРНК-375 избыточной экспрессии на миграцию и вторжение в AGS и MGC-803 клеток рака желудка с низкой endougenous экспрессии микроРНК-375. Клетки трансфицировали либо микроРНК-375 предшественника (MIR-375) или олигонуклеотиды контроля над прекурсорами отрицательным (отрицательный) или ни один из выше (Мок). Анализа миграции Transwell показали, что избыточная экспрессия микроРНК-375 значительно ингибирует миграцию AGS (рис 2А, 2В) и клеток МГЦ-803 (рис S1a, S1B). В соответствии с этими результатами, к царапинам заживления ран анализ также показал, что скорости AGS (рис 2C, 2D) и MGC-803 клеток (рис S1C, S1D) миграции в сторону области раны были значительно снижены после того, как избыточная экспрессия микроРНК-375 , Кроме того, мы использовали Matrigel вторжения анализа и обнаружили, что избыточная экспрессия микроРНК-375 привело к более чем двукратному снижению инвазионных свойств AGS (рис 3A, 3B) и МГЦ-803 клеток (рис 3С, 3D). В совокупности эти результаты указывают на то, что избыточная экспрессия микроРНК-375 является достаточным для ингибирования миграции как и вторжение способности клеток рака желудка.

MIR-375-регулируемых JAK2 участвует в регуляции клеток рака желудка миграции и инвазии
<р> Наше предыдущее исследование выявило JAK2 как нижестоящий мишень MIR-375 [20]. Здесь мы заинтересованы в изучении ли JAK2 участвует в регуляции клеток рака желудка миграции и инвазии. Мы использовали вектор на основе техники RNAi истощать эндогенные JAK2 и обнаружили, что миграция и инвазия деятельность AGS (рисунок 4) и клеток MGC-803 (рис S2) оба были тормозится сильно. Одновременно с этим мы изучали, может ли JAK2 противодействовать ингибирующий эффект клеток рака желудка миграции и вторжения, вызванного микроРНК-375. Клетки котрансфицируют с микроРНК-375 и предшественника либо сверхэкспрессии вектора JAK2 (MIR-375 + JAK2) или контроль пустого вектора (микроРНК-375 + Vec). Сверхэкспрессия JAK2 явно способствовало клеток миграции и инвазии, как показано на рисунке 4 и S2. Таким образом, в соответствии с нашей гипотезе, микроРНК-375 может ингибировать миграцию и инвазию клеток рака желудка частично путем охвата JAK2. Кроме того, мы определили, что JAK2 избыточная экспрессия не оказывает никакого влияния на уровень экспрессии микроРНК-375, как показано на рисунке S3. Тем не менее, мы не можем исключить возможность того, что нарушение регуляции MIR-375 препятствует другие цели, необходимые для клеток рака желудка миграции и инвазии.

Улитка выражение микроРНК подавляет-375
<р> Приведенные выше результаты указывают на то, что микроРНК-375 может быть мишенью определенных факторов транскрипции, которые связаны с вторжением рака и процесс метастазирования. Естественно, мы концентрируем внимание на том, как регулируется экспрессия микроРНК-375. Сначала мы обнаружили участок ДНК беседовал вверх по течению от ИРП-микроРНК-375 гена, который был представлен содержать промотор гена PRI-микроРНК-375 [21]. Затем мы проводили программу Consite (http://asp.ii.uib.no:8090/cgi-bin/CONSITE/consite) и обнаружили, что там было шесть сайтов связывания фактора транскрипции Улитка в области ДНК (рис 5А). Область ДНК клонировали в pGL3-основной вектор (Promega) (pGL3-375pro) для измерения активности промотора. В соответствии с данными из группы Walker [21], полученные нами результаты показали, что эта область ДНК содержит промотор гена ИРП-микроРНК-375 и способна направлять экспрессию люциферазы (Фиг.5В). Активность люциферазы эффективно репрессирован когда pGL3-375pro вектор котрансфицировали с вектором экспрессии, Snail (Snail), но не тогда, когда котрансфицируемым с пустым контрольным вектором (Мок) (5С). Кроме того, избыточная экспрессия Snail может привести к снижению уровня экспрессии микроРНК-375 на 46% (рис 5D). Для того чтобы определить клиническую значимость этих результатов, мы в дальнейшем коррелировать уровень экспрессии микроРНК-375 с уровнем мРНК улитка в одних и тех же больных раком желудка. Как показано на рисунке 5E, особым местом обратная корреляция между уровнем экспрессии микроРНК-375 и мРНК Snail ( P
&л; 0,05, г = -0,6). Таким образом, эти наблюдения показывают, что улитка является потенциальным перед регулятором экспрессии микроРНК-375.

Snail участвует в регуляции желудочной миграции раковых клеток путем охвата микроРНК-375
<р> Для дальнейшего выяснения корреляция микроРНК-375 и Улитка, мы изучали ли участвует Улитка в регуляции желудочной миграции раковых клеток путем охвата микроРНК-375. Мы использовали вектор на основе техники для апрегулируются улитка уровня экспрессии и обнаружили, что миграционная активность клеток AGS (рисунок 6) были в значительной степени способствовали. Одновременно с этим мы изучали, может ли улитка противодействовать ингибирующий эффект клеток рака желудка миграции, вызванной микроРНК-375. Клетки котрансфицируют с повышенной экспрессией вектором микроРНК-375 и сверхэкспрессии вектора Snail (Snail + MIR-375). Сверхэкспрессия Улитка явно способствовало миграции ячеек и может частично противодействовать ингибирующий эффект клеток рака желудка миграции, вызванной микроРНК-375, как показано на рисунке 6. Таким образом, в соответствии с нашей гипотезе, улитка может ингибировать миграцию клеток рака желудка частично путем пристреливать микроРНК-375.

Обсуждение
<р> микроРНК сообщалось, что регулировать миграцию опухоли, инвазию и метастазирование включая рак желудка [6], [22]. MIR-375 было ранее продемонстрировано, играют важную роль в желудочном пролиферации раковых клеток [20], [23]. Тем не менее, регулирующие механизмы остаются неясными. В настоящем исследовании мы дополнительно изучить функции и потенциальные механизмы микроРНК-375 в миграции и инвазии клеток рака желудка. Мы обнаружили, что избыточная экспрессия микроРНК-375 заторможенной пролиферации, миграции и инвазии клеток рака желудка частично путем охвата JAK2. Прошло более десяти лет с момента JAK2 впервые был клонирован [24]. JAK2 выражается в почти каждой ткани и связано со многими патологическое прогрессирует. Хотя очевидно, что JAK2 действует как онкоген в обоих миелопролиферативных заболеваний и некоторых солидных опухолей [25], [26], [27], без прямого участия в JAK2 миграции рака, сообщается вторжение или метастазы. Возбуждающе, наше исследование впервые продемонстрировали, что сбивание JAK2 по RNAi тормозил миграции и инвазии деятельность клеток рака желудка, аналогичные сверхэкспрессии микроРНК-375. Кроме того, избыточная экспрессия JAK2 может способствовать миграции и инвазии клеток рака желудка. Таким образом, мы предположили, что JAK2 может противодействовать тормозящее действие на миграцию клеток и вторжения, вызванного микроРНК-375. Учитывая критическую роль микроРНК-375 и JAK2 в качестве основных регуляторов в желудочном пролиферации раковых клеток, миграции и вторжения, оба из них имеет терапевтический потенциал в лечении рака желудка. Таким образом, это еще предстоит проверить, действительно ли есть другие цели участия в микроРНК-375, опосредованного метастазирования желудка.
<Р> Особый интерес, мы также изучали, как микроРНК-375 участвует в канцерогенезе желудка. Хотя есть очевидно, что метилирование ДНК и гистонов деацетилирования возможные механизмы, участвующие в негативной регуляции MIR-375 при раке желудка [23]. Механизмы, лежащие в основе микроРНК-375 дисрегуляцию в желудочном метастазирования рака все еще плохо изучены. Существует возможность для транскрипционный блокированию экспрессии генов микроРНК-375 в этом процессе. Здесь мы покажем, что метастаз связанный фактор транскрипции Улитка является потенциальным перед регулятором экспрессии микроРНК-375. Улитка представляет собой ДНК-связывающий белок, цинковый палец и было сообщено, как транскрипционный репрессор [28]. Acumulating свидетельства показывают, что улитка связывается с E-боксов в промоторе E-кадгерина и репрессирует транскрипцию регулировать развитие инвазии опухоли [29]. Кроме того, было обнаружено, избыточная экспрессия Snail в раковых заболеваний, которые будут связаны с метастазов в лимфатических узлах, рецидива опухоли и прогнозом [30], [31], [32], [33], [34], [35]. В соответствии с другими отчетами, наше исследование показало, что мРНК Улитка гиперэкспрессируется в желудочном раковых тканей по сравнению с прилегающими к ним доброкачественных тканей. В качестве промотора активность микроРНК-375 может быть подавлена ​​Улитка и избыточная экспрессия Snail может значительно снизить уровень экспрессии микроРНК-375, далее мы обнаружили четкую обратную корреляцию между уровнем экспрессии микроРНК-375 и уровень мРНК Snail при раке желудка образцы. Улитки также установлено, что участвует в регуляции желудочной миграции раковых клеток путем охвата микроРНК-375.
<Р> В заключение, мы определили, что микроРНК-375 был аберрантно выражается в желудочном раковых тканей от метастазирования-положительных пациентов или желудочные раковые клетки с большей миграцией и инвазии деятельности по сравнению с тканями из Безметастатическая пациентов или неинвазивным желудка эпителиальных клеток линии ГЭС-1 соответственно. Сверхэкспрессия MIR-375 снижается клеток рака желудка миграции и инвазии деятельности, по меньшей мере, частично путем охвата JAK2. Кроме того, улитка может быть выше по течению регулятором MIR-375, который негативно регулирует экспрессию микроРНК-375 и принимал участие в регуляции желудочной миграции раковых клеток путем охвата микроРНК-375. Вместе наши результаты обеспечивают неописанных путь, в котором фактор транскрипции улитка регулирует экспрессию микроРНК-375, который подавляет его непосредственной мишенью JAK2, что приводит к ингибирования миграции и инвазии клеток рака желудка. Наши данные свидетельствуют о том, что восстановление MIR-375 или ингибирование Snail или JAK2 могут быть полезными терапевтические стратегии для лечения рака желудка. Это, безусловно, будет очень интересно для дальнейшего изучения потенциальной эффективности этих молекул, ориентированных на MIR-375, JAK2 или улитка в лечении рака желудка. Еще одна интересная тема для будущих исследований будет выявление других возможных целей микроРНК-375, и, более конкретно, возможное участие JAK2 в желудочном метастазирования рака.

Поддержка данных Рисунок S1
.
Эктопическая экспрессия микроРНК-375 подавляет миграцию клеток MGC-803. MGC-803 клетки, трансфицированные микроРНК-375 предшественника (MIR-375), отрицательный контроль (отрицательный) или ни один из выше (Мок) были подвергнуты анализа миграции Transwell (А) и скретч-ранозаживляющих анализа (C). (А) Представительные поля инвазивных клеток на нижней стороне мембраны, фиксировали и окрашивали с использованием DAPI. (Б) Общее количество мигрировавших клеток на нижней стороне мембраны подсчитывали с помощью IPP 6.0 программного обеспечения. (С) Клетки миграции в раненой области фотографировали с помощью микроскопа при 0 ч, 12 ч, 24 ч и 36 ч после ранению. Пунктирные линии указывают на участки, лишенные клеток. (D) Скорость миграции была исследована путем измерения расстояния ячеек перемещаются от края раны по направлению к центру в течение 36 часов после расчесывания. Данные представлены в виде среднего значения ± SE, по меньшей мере, в трех независимых экспериментах. Бары, 50 мкм. * P
&л; 0,05, ** P
&л; 0,01
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s001
(TIF) Рисунок S2
,
Гиперэкспрессия JAK2 переворачивает микроРНК-375 индуцированное ингибирование MGC-803 клеток миграции и вторжения. Клетки, трансфицированные указанными векторами или олигонуклеотиды были подвергнуты миграции Transwell (А) или инвазии анализа Матригель (C). Эксперименты по спасению для микроРНК-375 оверэкспрессии были выполнены эктопической экспрессии JAK2 без 3'-UTR в микроРНК-375-обработанных клеток. (А, С) были показаны Представительные поля клеток в нижней камере при 12 ч после миграции или инвазии. Шкала баров, 50 мкм. (B, D) Общее количество мигрировавших или инвазивных клеток из девяти случайно выбранных полях подсчитывали IPP 6.0. * P
&л; 0,05, ** P
&л; 0,01
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s002
(TIF) Рисунок S3
,
JAK2 не оказывает никакого влияния на экспрессию микроРНК-375. АГС и клетки МГЦ-803 трансфицировали JAK2 сверхэкспрессии вектором или вектором управления и подвергали анализу RT-PCR для уровня экспрессии микроРНК-375. Уровень РНК U6 был использован в качестве контроля
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0099516.s003
(TIF)

• PLoS ONE: Оценка эффективности Итого и Всего гастрэктомий в роботизированной хирургии рака желудка по сравнению…
• PLoS ONE: Противоопухолевые Эффекты Sirtuin ингибатора, Tenovin-6, против клеток рака желудка через смерть рецептору 5 по…