PLoS ONE: Identifizierung von hsa-miR-335 als prognostischer Signatur in Gastric Cancer

Abstrakt

Hintergrund

Magenkrebs (GC) ist eine der häufigsten Krebserkrankung und primäre Ursache Tod in der chinesischen Krebspatienten. Recurrence ist ein wichtiger Faktor zu Therapieversagen und niedrige Niveau der 5-Jahres-Überlebensrate bei GC Patienten nach der chirurgischen Resektion führt. Daher Identifizierung von Biomarkern mit Potenzial in Rezidivrisiko der Vorhersage ist das Hauptproblem der Prognose bei GC-Patienten.

Patienten und Methoden

Insgesamt 74 GC Patienten zur systematischen Analyse ausgewählt wurden, die aus von 31 Patienten mit Rezidiv und 43 Patienten ohne Rezidiv. Zunächst wurden miRNAs Microarray und bioinformatische Methoden verwendet Differential ausgedrückt miRNAs aus primären Tumorproben zu charakterisieren. Im Anschluss an verwendeten wir eine ROC-Methode mit den besten Sensitivität und Spezifität Signatur auszuwählen. Schließlich validiert wir die Signatur in GC-Proben (gefroren frisch und Blutproben) mittels quantitativer PCR.

Ergebnisse |

Wir haben 12 Differential miRNAs identifiziert, darunter 7 hochreguliert und 5 nach unten reguliert miRNAs in Wiederholung Gruppe. zu erkennen, Wiederholung und nicht wiederkehr Fälle in den Trainingsproben unter Verwendung von ROC-Methode wir weiter hsa-miR-335 als Signatur ermittelt. Darüber hinaus validiert wir diese Signatur mit quantitativen PCR-Methode in 64 Testproben mit konsistentes Ergebnis mit Trainingssatz. Ein Hochfrequenz-Wiederholung und schlechte Überleben wurden in GC Fällen mit hohen hsa-miR-335 (; 0,001 P
<) beobachtet. Darüber hinaus untersuchten wir, dass hsa-miR-335 bei der Regulierung der Zielgene in mehreren onkogenen Signalwegen beteiligt waren, wie p53 MAPK, TGF-β, Wnt, ErbB, mTOR, Toll-like-Rezeptor und focal adhesion.

Fazit

Unsere Ergebnisse zeigen, dass die hsa-miR-335 das Potenzial hat, das Wiederholungsrisiko und beziehen sich auf die Prognose von GC Patienten

Citation zu erkennen. Yan Z, Xiong Y, Xu W, Gao J, Cheng Y, Wang Z, et al. (2012) Identifizierung von hsa-miR-335 als prognostischer Signatur in Magenkrebs. PLoS ONE 7 (7): e40037. doi: 10.1371 /journal.pone.0040037

Editor: Alfons Navarro, Universität Barcelona, ​​Spanien

Empfangen: 21. Februar 2012; Akzeptiert: 30. Mai 2012; Veröffentlicht am: 3. Juli 2012

Copyright: © 2012 Yan et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Autoren haben keine Unterstützung oder Finanzierung zu berichten

konkurrierende Interessen:.. die Autoren, dass keine Interessenkonflikte bestehen erklärt haben

Einführung

zur Zeit der Operation ist noch immer die wichtigste Option für die Behandlung Magenkrebs (GC), aber auch nach kurativer Resektion durchgeführt wird, etwa 40-65% der GC-Patienten ein Wiederauftreten der Krankheit erfahren möglicherweise Lokalrezidiv, Peritonealdialyse Verbreitung oder hämatogene Metastasierung umfasst [1], [2]. Aus diesem Grund war die 5-Jahres-Überlebensrate von GC-Patienten immer noch in einem niedrigen Niveau. Eine große Herausforderung der klinischen Ergebnisse für die Verbesserung ist besser molekularen Mechanismen verstehen und robuste Unterschriften für die Prognose von GC zu erkennen.

Mehrere Risikofaktoren, einschließlich pathologischer serosa Zustand, Randstatus, Tumorgefäßdichte und Veränderungen der Genexpression im Zusammenhang mit Rezidiv berichtet worden [3], [4]. Darüber hinaus wurden einige prädiktive oder diagnostischen Verfahren verwendet, um die Wiederholung von Risikoprofilen basierend auf die Genexpression zu bewerten oder eine Reihe von klinischen Variablen [5] - [8]. Allerdings sind diese mehrere Beobachtungen mehrere Gen oder Protein Veränderungen einschließlich können ihre klinische Anwendung behindern. Zuverlässig und bequem molekulare Marker für die klinische Praktiker werden für die Prognose bei GC erforderlich.

Eine kürzlich von miRNAs entdeckt werden in den Genomen von wirbellosen Tieren, Wirbeltiere und Pflanzen hoch konserviert. Sie dienen dazu, kritische Funktionen in mehreren biologischen Prozessen [9] einschließlich Entwicklungs Timing, Strukturierung und Embryonalentwicklung, Differenzierung, Organogenese und Apoptose [10]. Aufgrund seiner vielfältigen wesentlichen biologischen Funktionen, ist es nicht verwunderlich, dass der anormale miRNAs Ausdruck zu Krankheiten führen und sogar Krebs [11].

miRNAs haben als effektive potentielle Biomarker für die Verfolgung der Gewebeherkunft in bösartigen Tumoren präsentiert von unbekanntem Primär Herkunft [12]; miRNAs Expressionsprofile sind in der Lage, die Entwicklungs Linie und differenzierten Zustand der Tumoren zu reflektieren [11]. Die systematische Analyse auf die Stabilität von miRNAs sowie optimierte Bedingungen für die Expressionsanalyse unter Verwendung von Formalin-fixierten und in Paraffin eingebettet und Blutproben wurden zuvor berichtet [13] - [15], ein Licht auf ihre unerwartete diagnostische Potential zu vergießen. Es gibt eine begrenzte Anzahl von miRNAs [16] in dem menschlichen Genom, die bekannt sind etwa 30% der Gene zu regulieren [17]. Diese Attribute von miRNAs können uns mit einer einfachen Methode bieten die Rezidivrisiko für Krebspatienten zu prognostizieren.

In dieser Studie haben wir eine miRNA (hsa-miR-335) mit Potenzial identifiziert Wiederholungsrisiko von GC zu prognostizieren auf Basis von Mikroarrays und klinische Daten eines kleinforma Probe in Chinese GC-Patienten. Unsere Ergebnisse zeigten, dass hsa-miR-335 fungieren als eine klinische prognostische Signatur für GC sein könnte.

Methoden

Klinische Proben

Diese Studie wurde von der Ethikkommission genehmigt von Wuhan General Hospital of Guangzhou Befehl, PLA. Alle Patienten mit Magenkrebs und Nicht-Krebs-Patienten mit Erkrankungen des Verdauungssystems eine schriftliche Einverständniserklärung zur Verfügung gestellt in unserer Studie.

Die Patienten Gastrektomie an der Wuhan General Hospital von Guangzhou Militärkommandos für potenziell heilbar GC unterzogen, wurden Probanden in dieser Studie. Die Berechtigung für die Aufnahme in die Studie eingeschlossen histologisch Adenokarzinom des Magens oder gastroösophagealen Übergang bestätigt. Alle Patienten hatten komplette Resektionen erhalten mit einem Versuch, eine vollständige Tumorentfernung mit Einbeziehung der breiten negativen Margen und erweitert retroperitoneale Lymphadenektomie (D2-Typ). Informationen über den klinisch-pathologische, therapeutische und Ergebnisparameter der Patienten von Mai 2005 bis Februar 2012 wurde retrospektiv gesammelt. Cancer Staging wurde entsprechend durchgeführt der fünften Ausgabe des amerikanischen Joint Commission on Cancer TNM Kriterien.

Recurrence wurde wie jedes Wiederauftreten von Krebs einschließlich Lymphknoten, Rest Magen, lokal, Peritonealdialyse und hämatogene Metastasen definiert. Alle Patienten, die Wiederauftreten von Krebs erfahren wurden klinisch oder röntgenologisch diagnostiziert und durch eine Biopsie über oberen Magen-Darm Endoskop oder perkutane Einstich bestätigt. Die röntgenologischen Standard für die Wiederholung Diagnose enthalten CT oder MRT der Brust, Bauch, Becken, Kopf und Knochen-Scans oder anderen diagnostischen Tests, die nur unter besonderen Umständen verwendet wurden. Alle Proben wurden aus chirurgischen Proben von Patienten mit Magen-Adenokarzinom und alle Patienten Zustimmung zur Verwendung dieser Gewebe für Forschungszwecke geschrieben gab erhalten. Wir ausgewählten Proben (einschließlich gefrorene frische und Blutproben) von 74 Patienten mit und ohne GC Rezidiv.

miRNA Microarray

Die Analyse miRNA-Microarray wurde durchgeführt, wie sie im Detail auf der Website von CapitalBio beschrieben ( http://www.capitalbio.com) sowie Hua Verfahren gemäß [18]. Kurz gesagt wurden 50-100 ug Gesamt-RNA verwendet miRNAs unter Verwendung eines miRNA Isolierungskit AM1560 (Ambion, USA) zu extrahieren. Fluoreszenzmarkierte miRNAs wurden für die Hybridisierung auf Affymetrix miRNA Chip enthält 1075 Sonden verwendet. Das Fluoreszenzsignal wurde durch GenChip Scanner 3000 7G (Affymetrix, USA) gescannt. Die Rohdaten wurden normalisiert und in GenChip Command Console 1.1-Software (Affymetrix, USA) analysiert.

RNA-Extraktion aus Gefrorene Frische und Blutproben

RNA wurde aus gefrorenem Frisch GC Gewebe extrahiert, um eine Standard-Trizol mit Protokoll (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Für Blutproben wurden mit der miRNA miRNease Kit (Qiagen) extrahiert. Kurz gesagt, wurden 700 &mgr; l Reagenz QIAzol bis 200 &mgr; l Plasmaprobe hinzugegeben und für 5 min bei Raumtemperatur inkubiert. Dann wurden 140 ul Chloroform zugegeben, gevortext und 15 sec 3 min bei Raumtemperatur inkubiert. Dies wurde für 15 min bei 4 ° C durch eine Zentrifugation von 14000 rpm gefolgt. Die obere, wässrige Phase wurde entfernt, und das 1,5-fache seines Volumens aufgenommen in 100% Ethanol. Jeweils 700 &mgr; l der Mischung wurden auf eine Säule gegeben und für 15 Sekunden bei 13000 Upm bei Raumtemperatur zentrifugiert. Im Anschluss wurde für 2 min bei Raumtemperatur bei 13000 rpm auf die Säule zentrifugiert und 500 &mgr; l Buffer RPL zugegeben. Die Säule wurde dann bei 13000 Upm bei Raumtemperatur zentrifugiert, um sie zu trocknen. Im Folgenden wurde der Elutionsschritt mit 20 ul Nuklease-freies Wasser. Die eluierte RNA bei -70 ° C gelagert wurde.

Real-time quantitative PCR

Reife miRNA-Sequenzen aus dem Sanger Institute miRBase Sequence Database erworben wurden (http://microrna.sanger.ac .uk /Sequenzen /). Stem-loop reverse Transkription (RT) Primer wurden nach Chen worden [19]. Die RT-Reaktionsbedingungen für 30 min bei 16 ° C beteiligt Inkubationen verwendet; 37 ° C für 30 min und dann 72 ° C für 10 min. Das thermische Cycling-Protokoll für die PCR beteiligten einen anfänglichen Denaturierungsschritt bei 95 ° C für 5 min, gefolgt von 40 Zyklen bei 95 ° C für 30 s, 57 ° C für 30 s und 72 ° C für 30 s. Die Schmelzkurven für jede PCR wurden sorgfältig jede unspezifische Amplifikation zu bestimmen, analysiert. Die Expression jedes miRNA berechnet wurde mit der 2 ^{-ΔΔ C
_{T Formel und normiert auf U6 snRNA Ausdruck [20].}}

Unüberwachte Algorithmus

SAM [21] wurde verwendet, um die nicht überwachte clustering Berechnung auszuführen. Die Cutoff für Signifikanz wurde durch einen Einstellungsparameter Delta bestimmt, durch die auf der Grundlage der falsch-positive Rate Benutzer ausgewählt und durch den q-Wert dargestellt. Wir entschieden uns für eine Falte Änderung von mehr als 2, und q = 0, wie die Auswahlkriterien für die unterschiedliche Expression von miRNAs.

ROC und Kaplan-Meier-Überlebenskurve Analyse

ROC Kurvenanalyse wurde durchgeführt unter Verwendung von die MedCalc Software-Pakete (verison 8.2.1.0; Mariakerke, Belgien). Die AUC-Kurven vorgesehen ein Maß für die Gesamtleistung eines diagnostischen Tests. Das Verhältnis von miRNA Signalintensitäten und Ct-Wert von je miRNA wurden für ROC Berechnung in Proben verwendet. Survival-Analysen wurden auch von der MedCalc Software-Paket ausgeführt.

Statistische Analyse

Die klinischen Daten wurden die Chi-Quadrat-Test analysiert. Die kumulative Überlebenskurve wurde durch die Log-Rank-Test verglichen. Für alle Analysen, ein Unterschied mit P
. ≪ 0,05 wurde als statistisch signifikant betrachtet

miRNA Gezielte Genvorhersage und Signal Pathway-Analysen

Wir haben ein miRNA Ziel Genvorhersage Datenbank verwendet TargetScan (http://www.targetscan.org) plausible Ziele der Differenz ausgedrückt miRNAs zu wählen. Eine integrierte Gen-Ontologie Datenbank Molekular Annotation System (MAS3.0, http://www.capitalbio.com) wurde verwendet, um die miRNA gezielt Gene und ihre Beteiligung an verschiedenen Signalwege zu untersuchen.

Ergebnisse |

Klinische Merkmale der GC Patienten

insgesamt 74 Patienten mit /ohne Wiederkehr für die systematische Analyse ausgewählt wurden. 31 Patienten hatten eine wiederkehrende GC, die pathologisch durch Biopsie bei Anastomose Standorten über Endoskopie nachgewiesen. 43 Patienten ohne Rezidiv wurden als Kontrollgruppe mit Streichhölzern in Geschlecht, Alter bei der Diagnose, TNM, Behandlung und die Anzahl der beteiligten Lymphknoten (Tabelle 1) ausgewählt.

Es gibt keine signifikanten Unterschied in der Sex waren ( P
= 0,469), Alter ( P
= 0,502), Tumorstelle ( P
= 0,299), Differenzierung ( P
= 0,511) , Lymphknotenresektion ( P
= 0,217) und den Status von einer adjuvanten Chemotherapie ( P
= 0,214). Es gab erhebliche Unterschiede in UICC-Stadium ( P
= 0,108) und das Überleben /Tode-Verhältnis festgestellt (8/23 in Rezidiv-Gruppe vs. 34/9 in Wegfalls Gruppe, P
<0.001), mit einer medianen Überlebenszeit von 18,9 Monaten Rezidiv vs. 43,9 Monate in Wegfalls Gruppe jeweils ( P
<;. 0,001) (Tabelle 1)

miRNA Expressionsprofile Assoziierte mit GC Recurrence

Wir haben ein miRNAs Microarray-Chip zu miRNAs Expressionsniveaus in 10 GC-Proben mit /ohne Wiederkehr (5/5) als Trainingssatz messen. Beim Vergleich miRNA-Expression zwischen den Gruppen, 7 hochreguliert und 5 nach unten reguliert miRNAs wurden gefunden, die statistisch signifikant in der GC rezidivierenden Gruppe (Tabelle 2) waren. Diese 12 miRNAs könnte verwendet werden, um zwischen GC zu unterscheiden, mit und ohne Wiederholung basierend auf einer hierarchischen Clusteranalyse (Abbildung 1).

hsa-miR-335 ist die beste Signatur für Klassifizieren GC mit und ohne Wiederholung im Training Set

Wir haben ROC Methode, um die Sensitivität und Spezifität der Biomarker-Kandidaten auf miRNA Microarray-Daten auf Basis zu analysieren. Wir erhielten zwei miRNAs hsa-miR-335 und hsa-miR-128b mit besten Sensitivität und Spezifität in GC-Proben mit der Klassifizierung und ohne Rezidiv (Abbildung 2, Tabelle 3). In Kombination mit dem FC-Wert (FC _{hsa-miR-335 = 4,675; FC hsa-miR-128b = 1,453) jedes Biomarkers, wählen wir hsa-miR-335 für eine weitere Studie}

Validierung der Signatur in Testproben von Real-time PCR

das Expressionsniveau von hsa-miR-335 wurde durch real-time PCR in 64 Test GC-Proben verglichen mit dem angepassten benachbartes Gewebe als Kontrolle nachgewiesen. Die Ergebnisse zeigten, dass in 26 Fällen mit einem Rezidiv, 21 Fälle (21/26, 80,8%) waren hoch ausgedrückt von hsa-miR-335; und in 38 Fällen ohne Rezidiv, 29 Fälle (29/38, 76,3%) waren mit niedrigem ausgedrückt von hsa-miR-335 (Abbildung 3). Die gleichen Ergebnisse wurden in Blutproben unter Verwendung eines gemischten Blutprobe von 20 Nicht-Krebspatienten mit Erkrankungen des Verdauungssystems als Kontrolle beobachtet: In 26 Fällen mit einem Rezidiv, 19 Fälle (19/26, 73,1%) waren hoch ausgedrückt von hsa-miR -335; und in 38 Fällen ohne Rezidiv, 30 Fälle (30/38, 78,9%) waren mit niedrigem ausgedrückt von hsa-miR-335 (Abbildung 3). Es gab 11 Fälle (11/64, 17,2%) keine Übereinstimmung in der Expression von hsa-miR-335 im Vergleich der Ergebnisse zwischen gefrorenen frischen und Blutproben.

Darüber hinaus entdeckten wir das Expressionsniveau von hsa-miR-128b in 64 GC Blutproben real-time PCR. Die Ergebnisse zeigten, dass in 26 Fällen mit einem Rezidiv, 18 Fälle (18/26, 69,2%) waren hoch ausgedrückt von hsa-miR-128b; und in 38 Fällen ohne Rezidiv, 27 Fälle (27/38, 71.1%) waren mit niedrigem ausgedrückt von hsa-miR-128b. Der FC-Wert von hsa-miR-128b und hsa-miR-335 waren 1,647 und 3,589 im Vergleich Wiederholung mit Wegfalls Proben, bzw. (4A). Wir analysierten auch die Sensitivität und Spezifität von hsa-miR-335, hsa-miR-128b und hsa-miR-335 /128b (in Kombination mit miR-335 und miR-128b als Signatur) auf Basis der Echtzeit-PCR-Daten. Die Ergebnisse zeigten, dass hsa-miR-335 empfindlicher und spezifischer mit einem AUC-Wert von 0,88 als hsa-miR-128b (AUC = 0,79) und hsa-miR-335 /128b (AUC = 0,84) war bei der Klassifizierung von Rezidiven und nicht- Wiederholung Proben (4B, Tabelle 3).

hsa-miR-335 als eine Unterschrift Krankheitsprogression Rekurrensrisiko Predict in GC Patienten

Die 74 GC-Patienten wurden in zwei Gruppen eingeteilt, darunter 31 Patienten mit einem Rezidiv als Gruppe und 43 Patienten ohne Rezidiv als Gruppe. Die Patienten, die eine Wiederholung der GC erlebt hatte eine deutlich reduzierte mittlere Überlebensrate ( P
< 0,001; 5A). Wir haben festgestellt, die die Expressionsniveaus von hsa-miR-335 in allen 74 GC-Proben. Ein signifikanter Unterschied wurde in zwei Gruppen beobachtet, die mit hoher ausgedrückt von hsa-miR-335-Gruppe darstellen und Nieder ausgedrückt von hsa-miR-335-Gruppe wie folgt: miR-335 (+) und miR-375 (-). GC-Patienten (n = 35) mit miR-335 (+) deutlich mediane Überlebenszeit reduziert im Vergleich zu denen (n = 39) mit miR-375 (-) ( P
< 0,001; 5B).

Signalweg und Gene Ontology Analysen von hsa-miR-335 Gezielte Gene

um die möglichen Regulationsmechanismen des hsa-miR-335 in den Prozess der GC eine Wiederholung zu untersuchen, verwendeten wir ein Bioinformatik-Datenbank plausible Ziele dieser miRNA auszuwählen. Insgesamt 255 Gene wurden als Zielgene von HSA-miR-335 vorhergesagt. Signalweg Analysen zeigten, dass die meisten Zielgene, die durch geregelt wurden hsa-miR-335 wurden in den gleichen Bahnen beteiligt sind, wie p53 MAPK, TGF-β, Wnt, ErbB, mTOR, Toll-like-Rezeptor, focal adhesion ( Tabelle 4, Abbildung 6). Wir haben vorgeschlagen, dass diese mehrere Weg Veränderungen könnten in der klinischen pathologischen Merkmale und Patienten Ergebnisse der GC beteiligt sein. Inzwischen haben wir eine integrierte Gen-Ontologie Datenbank, um die molekulare Funktion der miRNA gezielt Gene zu annotieren. Die Ergebnisse zeigten, dass Gene von hsa-miR-335 reguliert nahmen die meisten der wichtigen biologischen Prozess mit menschlichem Krebs assoziiert (Tabelle 5).

Diskussion

Rezidive sind häufig in GC-Patienten nach der Operation; daher ist es wichtig, Fällen mit einem hohen Rezidivrisiko zu identifizieren. Traditionelle Klinik pathologischen Faktoren sind mitunter unzureichend für die Vorhersage eines Rezidivs bei Individuen und viele Forschungsgruppen versucht haben, Biomarker mit Hilfe neuer Technologien zu identifizieren, die diese Hochrisiko-Fälle zu unterscheiden könnten. Eine Reihe neuerer Untersuchungen haben miRNA Veränderungen zu dokumentieren, die bei der Initiierung und dem Fortschreiten der menschlichen Krebsarten beteiligt sind. miRNA-Expressionsprofilerstellung von menschlichen Tumoren mit Diagnose, Staging, Progression, Prognose und Ansprechen auf die Behandlung assoziierten Signaturen Ausdruck identifiziert haben.

In dieser Studie analysierten wir primäre GC Fälle, um ein Rezidiv zu prognostizieren und definiert nicht wiederkehrenden Fällen als frei von GC die für mindestens ein Jahr nach kurativer Resektion. Wir identifizierten hsa-miR-335 als eine plausible Prognose Signatur von GC auf der Basis der Microarray-Daten von 10 GC-Proben als Trainingssatz. Darüber hinaus validiert wir diese Signatur auf 64 Testproben mit mehr als durchschnittlich 85% Sensitivität und Spezifität. Die Überlebensanalysen Ergebnisse zeigten, dass Patienten mit einer hohen Expression von HSA-miR-335 die Gesamtüberlebensrate reduziert hatte im Vergleich zu denen mit niedrigen Expressionsniveaus von HSA-miR-335. Diese Ergebnisse zeigen, dass diese Unterschrift das Potential hatte, Wiederholung von GC zu prognostizieren.

Microarray-Technologie erheblich weiterentwickelt hat und sich zu einem umfassenden und nützliche Methode, um uns zu helfen besser versteht Krebserkrankungen [22]. Es ist jetzt allgemein die funktionellen Rollen von miRNAs in vielen Arten von Krebs [23] mit mehreren signifikanten miRNA Auswirkungen auf Onkogene und Tumorsuppressorgene identifiziert Studie verwendet. Von den 12 in dieser Studie identifizierten miRNAs, hsa-miR-373 war einer der herunterregulierten miRNAs in der wiederkehrenden Gruppe. Dies kann ein Onkogen durch den bekannten p53-Signalweg funktionieren, die in der Karzinogenese beteiligt ist [24]. Einige miRNAs, wie HSA-miR-19a und HSA- miR-32, werden in Krebs-assoziierte genomische Regionen, die in Malignitäten durch Deletion beteiligt sein könnten, Amplifikation oder epigenetischen Modifikation Mechanismen [25]. Zusätzlich hsa-miR-429 waren hochreguliert in Rezidiven und Cluster auf Chromosom 1, was bestätigt, dass einige miRNAs wie hsa-miR-200b mit hsa-miR-429 gruppiert sind und in der Lage, ihre gezielte Gene zusammen regulieren [26 ].

bisher wurde die in dieser Studie bezeichnet miRNA haben das Risiko von GC Wiederholung vorherzusagen gut charakterisierte nicht. HSA- miR-335, das von der genomischen Region Chromosom 7q32.2 transkribiert wird, wurde in gutartige und bösartige Tumoren [27] ausgedrückt berichtet Differential. Wichtig ist es auch gezeigt, dass miR-335 Zell Rb1 und Kontrollen Proliferations in einer p53-abhängigen Weise reguliert [28]; an der Entwicklung von Brustkrebs [29]; reguliert Wachstum und Invasion von malignen Zellen [30]. Die neuesten Forschungsergebnisse berichtet, dass miR-335 als Metastasierung Suppressor in GC, indem sie auf Bcl-2 und SP1 funktionieren könnte, und könnte weiter als potenzieller prognostischer Faktor entwickelt werden [31]. Um die Ansichten oben zusammenfassen, war die Funktion von miR-335 umstritten. Unsere Ergebnisse zeigen, dass hsa-miR-335 war in GC Wiederholung Proben hochreguliert und in den meisten der onkogenen Signalwege, wie p53 MAPK, TGF-β, Wnt, ErbB, mTOR, Toll-like-Rezeptor, fokale Adhäsion beteiligt . Diese mehrfachen Signalwegs Veränderungen, vor allem einschließlich p53-Signalweg, vernünftigerweise beeinflussen die klinischen Ergebnisse einschließlich GC Rezidivrisiko [32]. Obwohl die prognostische Bedeutung von hsa-miR-335 in Magenkrebs nicht bekannt ist, unsere Ergebnisse sind ermutigend.

Blut die zugänglichste Probe in Krankenhäusern ist. Die klinische Bedeutung der Identifizierung von Biomarkern, die einfach wie HSA-miR-335 nachgewiesen werden können, ist offensichtlich. Zusätzlich archi Paraffin eingebettete Proben sind auch eine der leicht zugänglichen Materialien in Krankenhäusern, die oft mit gut dokumentiert clinicopathological Daten gehalten werden. Sie stellen eine hervorragende Quelle für prognostische Anwendung sowohl in der Grundlagenforschung und klinische Studien. miRNAs liegen in der Größenordnung von 19 bis 25 nt, und sie werden durch die RNA-induzierten Silencing-Komplex geschützt, was zu RNA-Abbau anfällig gegenüber mRNA in diesen Geweben sie weniger rendern kann [33]. So konnten wir miRNA-Expression in Paraffin eingebettete Proben und konzentrierte sich auf die systematische Analyse mit dieser Signatur für relevante prognostischen Wert zu erkennen. Die PCR-basierte Klassifizierungsmethode scheint daher uns eine Möglichkeit zu bieten, leicht verfügbaren klinischen Proben unter Verwendung, Wiederauftreten der Krankheit vorhersagen.

Insgesamt haben wir eine Prognose im Zusammenhang mit miRNA identifiziert, die Wiederholungsrisiko vorhersagen kann, GC-Patienten. Durch die Kombination dieser Signatur mit konventionellen klinisch-pathologische Faktoren, sollten wir in der Lage sein, einem Patienten die Krankheitsverlauf genauer zu prognostizieren. Zusätzlich wird die Identifizierung von Patienten mit hohem Risiko zur Berücksichtigung von zusätzlichen therapeutischen Intervention führen würde und damit den Arzt ein besseres Follow-up-Programm informieren können.

Acknowledgments

Wir danken Dr. Li Wang (National Institute of Environmental Health Sciences, USA) für Einsicht Kommentare und Manuskript-Bearbeitung.

• PLoS ONE: Verminderte Expression des ARID1A Gene ist im Zusammenhang mit einer schlechten Prognose bei primären Magenkrebs
• PLoS ONE: klinische Potenzial von DNA-Methylierungs-in Magenkrebs: Eine Meta-Analyse