Extracto
Objetivo
A la pantalla y caracterizar variantes de la línea germinal para E-cadherina (CDH1) Métodos 59 GC, 59 familiares de primer grado (FDR) de GC, se analizaron 20 metaplásico gastritis atrófica autoinmune (AMAGs) y 52 donantes de sangre (BD) para CDH1 fotos: por secuenciación directa, modelado estructural y bioinformática. impacto funcional de empalme se evaluó en busca de mutaciones intrónicas. Se realizaron E-cadherina /tinción inmunohistoquímica β-catenina y E-cadherina la cuantificación del mRNA mediante RT-PCR Resultados En los GC, 4 variantes de cambio de sentido (p.G274S;. p.A298T; p.T470I; p.A592T), 1 mutación en el 5'UTR (-71C > G) y 1 mutación en el IVS12 intrónica (c.1937-13T > C) región se encontraron. En primer efecto patógeno de la mutación p.A298T fue predicho por el modelo 3D de la proteína. La nueva mutación p.G274S mostró una clara significación funcional. Por otra parte, en primer lugar, IVS12 intrónica (c.1937-13T > C) mutación se ha demostrado conducir a una aberrante CDH1 Versión taquigráfica con el exón 11 de su eliminación. Esta mutación se encontró en 2 GC y en 1 BD. En los FDR, hemos identificado 4 variantes: el polimórfica (p.A592T) y 3 mutaciones en regiones no traducidas con papel funcional identificado a excepción de la 5'UTR (-54G > C) que se había encontrado para disminuir CDH1 En general, nuestro estudio de mejora con respecto a la caracterización actual de CDH1 Visto: Garziera M, CANZONIERI V, Cannizzaro R, S Geremia, Caggiari L, De Zorzi M, et al. (2013) Identificación y Caracterización de CDH1 Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, Estados Unidos de América Recibido: Abril 29, 2013; Aceptado: 5 Septiembre 2013; Publicado: 29 de octubre 2013 Derechos de Autor © 2013 Garziera et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan Financiación:. Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC De Re N. 10266 y AIRC Cannizzaro Programa Especial Molecular Oncología clínica 5x1000 N. 12214), y la dirección Central del Lavoro, Formazione, Università e Ricerca della Regione Autonoma Friuli Venezia Giulia, Códice Progetto 200502027001. Los proveedores de fondos tenido ningún papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito Conflicto de intereses:. Dr. Valli de Re declara que es un co-autor y miembro del Consejo Editorial de la revista PLoS UNO. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales. El cáncer gástrico (CG) sigue siendo el cuarto cáncer más común en todo el mundo, a pesar de que su incidencia y las tasas de mortalidad asociadas han disminuido en las últimas décadas. pronóstico GC está estrechamente relacionada con la etapa de la enfermedad en el diagnóstico [1]. cáncer gástrico de aparición temprana (EOGC) se define como la presentación de GC a la edad de 45 años o menos [2] y tiene una pobre supervivencia global [3], [4]. La mayoría de los GC son esporádicos y con frecuencia se desarrollan después de Helicobacter pylori gratis (HP) -asociado gastritis [5], [6]. Sin embargo, los estudios de agregación familiar también hacen hincapié en la importancia de una predisposición genética en el desarrollo esporádico de GC. Frecuencia de la agregación familiar gástrica es de aproximadamente 10% La clasificación histopatológica GC más ampliamente aceptada (clasificación de Lauren) [7] distingue dos tipos de GC:. De tipo intestinal y el tipo difuso. Difusa GC muestra una mayor base hereditaria y un peor pronóstico en general, en comparación con el subtipo intestinal [8]. CDH1 en este estudio, se analizaron CDH1 Caracterización del paciente y CDH1 las características clínicas e histopatológicas de los sujetos GC, FDR y AMAG se resumen en las Tablas 1 y 2. Entre los 59 pacientes con cáncer gástrico, 2 (3,4%) tienen una historia familiar de GC (S15 es el hermano del S16) sin cumplir los criterios para la CG difuso hereditario, tal como se define por el Consorcio Internacional de Enlace en el cáncer gástrico (IGCLC) en el momento de la recogida de muestras. En nuestra serie GC, GC 5 pacientes esporádicos temprana (≤ 45 años) estaban presentes, pero sin CDH1 CDH1 Otras alteraciones como resultado polimorfismos comunes (frecuencia de al menos el 1% de la población) o mutaciones silenciosas que codifican Ninguno se observó el mismo aminoácido que la cadena original. asociación estadística entre los cuatro grupos de pacientes a prueba de ID 4, 6 o ID ID 19 variantes. RefSNP (RS) números para identificar variantes genéticas publicadas anteriormente como así como sus frecuencias correspondientes (NIEHS Proyecto Genoma Ambiental, Seattle, WA (URL: http://evs.gs.washington.edu/niehsExome/visitado en agosto de 2013); Consultado el ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/phase1/analysis_results/paper/diciembre de 2012) se presentan en la Tabla 3. Todos los CDH1 la frecuencia de mutaciones y variantes se calcularon en sujetos sin enfermedad GC o AMAG (52BDs + 59FDRs, n = 111). Los FDR de dieciséis eran parientes de primer grado de nuestra serie GC; cuando estaba presente en GC y su caso FDR relacionada uno de la variante, se excluyeron del individuo FDR del cálculo de la frecuencia. ID4 por ejemplo, estaba presente en 5 FDR relacionados con nuestra GC de nuestra serie; Por lo tanto, la frecuencia de control de la población cambió de total de 111 a 106 individuos (+ 7FDRs 8BDs /106; 14,5%). La Figura 1 ilustra cromatogramas de secuenciación de las nuevas mutaciones que hemos encontrado. Hemos informado anteriormente el cromatograma ID 10 en otro documento [26]. Los residuos de sentido erróneo mutado que encontramos están todos localizados al E -cadherin dominio extracelular. La posición del codón en el inmaduros y maduros (después de los N-terminales de escisión), las proteínas y los datos de la PolyPhen-2 y cribar in silico A medida que respecta a las dos mutaciones sin sentido restantes, que tienen un efecto menos claro funcional como también se indica en la Tabla 4. p. T470I (ID 12) de sustitución [28], cambia la superficie de AA EC3 extradomain en la proteína madura (Figura 2C). Tanto en el murino E-cadherina y la secuencia N-cadherina (código PDB: 3Q2W) treonina se encuentra generalmente O Para explorar si las mutaciones intrónicas detectado en nuestra serie GC (Tabla 3) podrían potencialmente inducir un efecto sobre el empalme, se realizó un CDH1 para los ID 5 y 7 Identificación de mutaciones intrónicas, se amplificó la región que cubre parte del exón 1 a parte del exón 5, para ID 17 mutación, el exón 10 a 13 (Figura 3). El exón RT-PCR 1 a 5 fragmentos no mostró diferencias cuando se ejecuta en 4% de gel de agarosa (Figura 3A), ni después de la secuenciación bidireccional (datos no demostrados); Converse ID 17 variante intrónica podría afectar empalme que lleva a un menor CDH1 Versión taquigráfica anormal (Figura 3B). Tras el aislamiento y la secuenciación, se encontró que la banda más pequeña resultó en una transcripción omitido que carece del exón 11, con el exón 10 se unió directamente al exón 12. Esta transcripción aberrante también se detectó en el BD S190 que lleva la misma sustitución de la línea germinal (Figura 3B). Análisis de CDH1 Una comparación del nivel de expresión del ARNm de la e-cadherina se llevó a cabo a partir linfocitos EBV inmortalizadas obtenidas de la sangre periférica de S10 y S190 (ID mutación 17), S97 (ID 9) y S189 (sin CDH1 Las técnicas de inmunohistoquímica en el tejido gástrico tumor de intrónica caso de la identificación 17 (código del paciente S10, la figura 5E) mostraron una expresión reducida de unida a la membrana e-cadherina en las células tumorales en anillo de sello (flechas negras), mientras que tanto la membrana y la tinción citoplásmica estaban presentes en el epitelio normal. El mismo paciente demostraron una reducción de la tinción de β-catenina en las células en anillo de sello en comparación con la fuerte expresión de esta proteína en las células adyacentes normales (Figura 5H). La pérdida tanto de E-cadherina y β-catenina tinción también fue notable para la segunda pacientes (S46) que tiene la misma intrónica ID 17 mutación y afectada por GC también (Figura 5F y 5I, respectivamente, para E-cadherina y β-catenina) . Discusión GC pacientes suelen tener un mal pronóstico [29]. La identificación de los pacientes con un mayor riesgo de desarrollar cáncer gástrico y la detección precoz de la GC son enfoques prometedores para reducir la morbilidad y la mortalidad de GC. FDR de los pacientes GC se sabe que tienen un mayor riesgo de 2-3 veces de GC, probablemente debido a la exposición a los mismos factores de riesgo ambiental y /o con la susceptibilidad hereditaria al cáncer [30]. La destrucción células parietales que se encuentra en AMAG combinado con la importante función de e-cadherina en la polaridad epitelial y la arquitectura glandular gástrica, sugiere que las alteraciones de la línea germinal de CDH1 En 1998, Guilford y sus colegas describen por primera vez mutaciones en la línea germinal del CDH1 La fuerza de nuestro estudio es la colección de 59 pacientes caucásicos con GC esporádica, 59 y 20 FDRs AMAGs que asistido a nuestro servicio de gastroenterología en los últimos años para los síntomas gástricos y un diagnóstico o exclusión de un GC después endoscópica y la evaluación histológica del tejido. Como se resume en la Tabla 3, vario de la línea germinal distinta CDH1 El ID 10 (p.G274S) es una novela mutación sin sentido que nos encontramos en un viejo masculina con una histotype mixta GC. Esta variante no se detectó en 187 individuos sin cáncer (108BDs + + 59FDRs 20AMAGs) excluyendo así un polimorfismo. Un efecto patogénico de ID 10 mutación no se admitirá después funcional (la agregación y la invasión) in vitro El ID 11 (p.A298T) la sustitución en el exón 7 de CDH1 El ID 12 (p.T470I) se encontró en un 57 años de edad, de sexo masculino (S39) con un diagnóstico de GC . Este cambio fue descrita por primera vez en una familia de etnia maorí con la EOGC, pero el tema que muestra esta mutación no se vio afectada por GC en el momento del estudio [28]. Aquí, encontramos que el cambio p.T470I AA es tolerado por SIFT y también por análisis de modelos. Desafortunadamente, la muestra de tejido biópticos tumor fue insuficiente para realizar la E-cadherina IHC tinción. Se detectó la sustitución ID 15 (p.A592T) en cada grupo clínico probado, lo que sugiere una difusión polimórfica probable. No obstante, esta variante ha informado anteriormente asociado con tumores de tiroides y cáncer de mama lobular [41] - [43]. Nuestro análisis estructural y in vitro según lo recomendado por las directrices de manejo clínico reciente [44], la vigilancia endoscópica se debe realizar anualmente en aquellos individuos con mutaciones de significado indeterminado (por ejemplo, cambio de sentido). En nuestra opinión, los sujetos que albergan ID 15 y ID 10, deben ser seguidos por hasta 10 años antes de excluir un papel aunque débil de esta alteración en la patogénesis de la GC. En el ID 2 identificamos una C cambio -to-G antes del codón de inicio (-71C > G, CDH1 Intronic ID 17 variantes (IVS12 c.1937-13T > C). 2 se encontró en las mujeres con GC (2/59 GC = 3,4%) tanto positivo para la infección por HP, y se encontró también en 1 BD (1/52 = 1,9%, Tabla 3). La misma alteración se había informado anteriormente en el cáncer de mama lobular con alta frecuencia (12/53 = 23%) [47], en las familias CGDH (2/27 = 7,4%) [48] y en pacientes EOGC (7/79 = 8,9% ) [46], sino también en una población de control relativo [46]. Es de destacar que hemos demostrado por primera vez que esta sustitución conduce a un aberrante CDH1 Versión taquigráfica que alberga una deleción del CDH1 en el grupo de sujetos FDR, con la exclusión de los CDH1 la ID 1 (5'near gen-176C > T) se detectó la variante en una mujer de 32 años de edad, con un estado de infección por HP desconocido. Esta variante ya se había presentado en bases de datos populares, pero su significado es desconocido El ID 3 (5'UTR-54G > C). Variante se encontró en un hombre de 72 años de edad, positivo para la infección por HP. De interés, esta mutación ya se detectó en un saludable 41 años de edad, sujeto japonés, sin tumor clínicamente detectable en el momento de la inscripción, y se describe como una variante rara capaz de disminuir la actividad transcripcional de CDH1 El ID 9 (intrónica IVS4 c.532-18C > T). se encontró en un sujeto masculino de 41 años de edad, negativo para la infección por HP. ID9 se informó por primera vez en dos pacientes EOGC de Inglaterra y Portugal, respectivamente [56], en dos pacientes alemanes CGDH y en 1 sujeto de control inscrito en el mismo estudio [35]. Recientemente, se propuso un papel no patógena para esta variante [2]. No notamos ninguna influencia en CDH1 AMAG pacientes tienen un 3 veces mayor riesgo relativo de desarrollar GC y han sido pasados por alto por CDH1 En conclusión, nuestros resultados muestran que el pozo conocido patógena ID 11 mutación (p.A298T) también se puede detectar en los pacientes GC esporádicos sin cumplir con los estrictos criterios de CGDH. Por otra parte, hemos demostrado un efecto deletéreo de Identificación variante 17 (IVS12 c.1937-13T > C) en CDH1 por último, en un individuo FDR en riesgo de GC, encontramos la variante ID 3 (5'UTR-54G > C). con un efecto potencial de aumentar el estado de hipermetilación CDH1 Nordeste de Italia presenta las tasas de incidencia y mortalidad alta GC aunque menor respecto a las regiones centrales, como la Toscana y Las Marcas [57] . Nuestros hallazgos muestran prevalencia en sentido erróneo CDH1
en el cáncer gástrico no hereditaria (GC) pacientes y en sujetos con riesgo de GC.
transcripción. En AMAGs, se han detectado alteraciones 2: 1 de sentido erróneo (p.A592T) y 1 nueva variante (IVS1 (C.48 + 7C > T)) sin efecto en CDH1
empalme. Varias sustituciones silenciosas y polimórficas se encontraron en todos los grupos estudiados.
Conclusiones
mutaciones y su papel funcional en GC y en individuos con riesgo de GC. Las mutaciones se encuentran en las regiones no traducidas y datos sobre los efectos de empalme merecen una particular atención como asociado con una cantidad reducida de E-cadherina. La utilidad de los CDH1
detección, además de la identificación de otros factores de riesgo, podría ser útil para la detección precoz de la GC en sujetos en riesgo (es decir, los FDR y AMAGs), y garantiza estudio adicional.
línea germinal variantes en esporádicos pacientes de cáncer gástrico y en individuos con riesgo de cáncer gástrico. PLoS ONE 8 (10): e77035. doi: 10.1371 /journal.pone.0077035
Introducción
gen que codifica la E-cadherina se ha identificado a tener un papel causal en alrededor del 30% -50% de difuso hereditario GC (CGDH), un GC y la susceptibilidad al cáncer de mama lobular síndrome autosómico dominante que constituye el 1-3% de la agrupación familiar de GC [9], [10] y en el subtipo CG difuso [11] . CDH1
mutaciones de la línea germinal (tal mutación se transmite a cada célula en el cuerpo de la descendencia) están asociados específicamente con CGDH (alrededor del 30% -40% de los casos); grande CDH1
supresiones se han encontrado en aproximadamente el 6,5% de los casos [12]. cáncer familiar intestinal gástrica (FIGC) con una historia familiar positiva también se han descrito, pero hasta el momento, ninguna línea germinal CDH1
defectos se han asociado con la FIGC o GC intestinales. Esta falta de evidencia de CDH1
mutaciones en el subtipo intestinal ha llevado a la hipótesis de que la agrupación familiar en estos casos está determinada por factores ambientales compartidos, en oposición a una predisposición genética heredada. Sin embargo, datos recientes demuestran que CDH1
alteraciones somáticas (tales alteraciones se acumulan en las células cancerosas del cuerpo durante la vida de una persona) son tan frecuentes en intestinal como en CG difuso [13], lo que sugiere un papel importante de CDH1
tanto en el histotypes. Sin embargo, la prevalencia exacta de CDH1
germinal alteraciones en los GC intestinal es aún desconocido. CDH1
la hipermetilación del promotor es el segundo golpe genética más común en el proceso carcinogénico GC [14], [15]. CDH1
mutaciones también se asocian con una mayor susceptibilidad a invasivo y metastásico [16], [17] de colon, vejiga, próstata, mama y cánceres ginecológicos [18] - [20]. E-cadherina es una glicoproteína transmembrana que juega un papel en el mantenimiento de la arquitectura tejido epitelial mediante la participación de Ca 2 + interacciones célula-célula dependientes [21], [22]. E-cadherina comprende un dominio citoplásmico, un dominio transmembrana corto y cinco dominios extracelulares de repetición de cadherina-como (EC1-5) que abarcan los exones 4-13 y contener regiones de unión a calcio altamente conservadas [23], [24] y cisteínas conservadas probables para formar puentes disulfuro [25]
mutaciones germinales en una serie de casos y personas con riesgo de GC GC aleatoria consecutivos.; principalmente GC-familiares de primer grado (FDR) y gastritis atrófica (AMAG) pacientes autoinmunes metaplasia dirigirse a nuestro instituto para los síntomas gastrointestinales y la evaluación endoscópica. Para explorar el papel de la expresión de E-cadherina, análisis estructurales, funcionales e inmunohistoquímicos se realizaron en muestras con un CDH1
mutación germinal. El objetivo del presente estudio fue evaluar la prevalencia y caracterización de CDH1
mutaciones germinales en una serie de pacientes consecutivos GC esporádicos que carecen de los criterios de clasificación CGDH, y en una población seleccionada en riesgo de desarrollo de GC, para poner a prueba su utilidad como marcador para mejorar la detección de tumores temprano. Los datos obtenidos se podrían utilizar para desarrollar una herramienta que detecta rápidamente y de forma económica CDH1
mutaciones presentes principalmente en nuestra población.
Resultados
línea germinal cribado genético
se encontraron alteraciones en estos pacientes. La edad media de los FDR fue de 49 años (rango, 28-78 años) y para AMAGs 56 años (rango, 31-72 años). Entre los 59 pacientes con cáncer gástrico, 16 sujetos tenían un pariente en primer grado incluidos en el estudio (16/59 FDR). FDR y AMAGs llegaron a nuestra institución para una visita de gastroenterología y examen de gastroscopia, que manifiestan diversos síntomas, pero ni el cáncer ni metaplasia intestinal /displasia estaba presente en estos temas.
genéticos resultados del cribado se enumeran en la Tabla 3 con
nuevas mutaciones: 1 intrónica (ID 5), 1 missense (ID 10), y 2 silenciosa (ID 13 y ID18). En general hemos encontrado 4 variantes, que codifican para un aminoácido (AA) sustitución (1 novela (ID10) y 3 informado anteriormente en otras poblaciones (ID 11, ID 12, ID 15), 1 en la región del gen 5'near y 2 mutaciones en el (UTR) elemento regulador no traducida (ID 1, ID 3, han sido reportados) y 6 sustituciones en regiones intrónicas (tres mutaciones: ID 5, ID 9, ID 17; tres variantes polimórficas intrónicas: ID 4, ID 6, ID 8, probablemente, sin efecto sobre la carcinogénesis GC). no hay deleciones o inserciones se encontraron en las fronteras exón.
variantes eran en el estado heterocigoto, excepto para el identificador ID 4 y 19 en el que también se ha detectado un estado homocigótico.
bioinformático papel predictivo y modelado estructural resultados de variantes missense encontraron
análisis se presentan en la Tabla 4. Las cuatro variantes de cambio de sentido son potencialmente perjudiciales por PolyPhen -2, pero sólo el p.A298T (ID 11) y p.A592T (ID 15) sustituciones pueden afectar a la función de proteínas por análisis de SIFT (Tabla 4). Los p.G274S (ID 10) que hemos descrito recientemente [26], sin embargo, no perturba el medio ambiente local, sino que introduce un residuo potencial de fosforilación y glicosilación que puede tener posibles efectos sobre la estabilidad y la integridad de la E-cadherina, ya que la hipótesis de [26]. El efecto patogénico de Identificación sustitución 11 se estableció anteriormente [27], pero se demostró por primera vez aquí por el análisis estructural. Como se ilustra en la Figura 2A, el cambio de AA en el exón 7 de la p.A298T (ID 11) se coloca cerca de la región de interacción entre protómeros EC1 y EC2. Por lo tanto, la sustitución residuo polar alanina-treonina puede conducir la formación de enlace de H a través de su grupo oxydrilic y esto puede interferir con la estructura local de la proteína en una región que es fundamental para el Ca 2 + interacciones. Treonina en la posición 144 está estéricamente demostró molesta porque interactúa con dos residuos de ácido aspártico (Asp Asp136 y 138) que están directamente involucrados en Ca 2 + vinculante. Por otra parte, se hizo hincapié en las longitudes de enlace en particular, siendo menos de 3 Å (Figura 2B).
-glycosylated que sugiere un papel importante para este residuo en la estructura de la proteína. Sin embargo, como se muestra en la Figura 2D, el cambio de isoleucina, una AA no polar con una cadena lateral hidrófoba que no puede someterse a modificación post-traduccional, sugiere que no hay tensión intermolecular particular. Nuestra hipótesis es que en el medio extracelular, la presencia de un residuo de isoleucina en la misma posición que la treonina pueden favorecer las interacciones proteína-proteína, y por lo tanto esta mutación podría suponer un significado protectora. La última mutación informó, p.A592T (ID 15), se encuentra en todos los grupos analizados (véase el cuadro 3), lo que sugiere un efecto sobre la patogénesis improbable GC. En este caso, la alanina en el EC4 extradomain madura de la E-cadherina (Figura 2E) proporciona la libertad conformacional, aun cuando en la proximidad de los Ca 2 + sitios de unión. Una sustitución de treonina aquí tiene un efecto limitado sobre la estructura y los ángulos de torsión locales de la proteína. Sin embargo, no podemos excluir que la cadena lateral oxydrilic podría ser modificado después de la traducción, en particular, la situación y por lo tanto influir en la estructura y función de la CDH1 gratis (Figura 2F).
Transcripción de análisis mutaciones en la línea germinal intrónicas
análisis de la transcripción. variantes polimórficas y silenciosas fueron excluidos de este análisis ya que probablemente no tienen un papel patogénico. cDNA producido a partir de sangre periférica de los individuos GC seleccionadas que albergaban intrónica ID 5, ID 9 o ID 17 mutaciones (Tabla 3) se comparó con la de dos donantes de sangre sanos, uno sólo tener el mismo ID de 17 mutación como pacientes GC (código BD S190 ), y otro (código BD S189) sin CDH1
mutación.
nivel de abundancia de proteínas y la expresión de ARNm en los sujetos que muestra CDH1
mutaciones intrónicas
mutaciones) sujetos. Asunto S10 se vio afectada por un cáncer gástrico, con sujeción S97 es pariente de primer grado de un paciente con un cáncer gástrico (FDR), mientras que S189 y S190 fueron ambos donantes de sangre. Hemos observado entre el donante de sangre de control (S189) que no tiene CDH1
mutación y pacientes, una fuerte disminución relativa de la expresión de E-cadherina (alrededor del 60%, la Figura 4) en S10 paciente que tiene tanto ID 17 y una mutación GC, mientras que la reducción de sólo alrededor de un 2% en el donante de sangre S190 con el mismo ID 17 mutación ( p
< 0,05, con respecto a GC S10). Por S97 (ID mutación 9, FDR sujeto), se observó una expresión de E-cadherina similar a la del control S189
.
podrían ser un factor de riesgo adicional para el desarrollo de GC en AMAG paciente [31].
de genes [28]. Posteriormente, se han descrito diferentes tipos de mutaciones en las familias de diferentes grupos étnicos con GC difusa [32], [33]. El primer CDH1
mutación germinal fue descrito en una familia italiana en 2006, en un paciente que cumplía los criterios para IGCLC CGDH [34]. Sin embargo, muy pocos estudios informan CDH1
mutaciones germinales en los casos esporádicos de GC sin agregación familiar o en sujetos con riesgo de desarrollar GC [35], [36]. Por otra parte, en estos estudios los efectos funcionales de CDH1
variantes que a menudo no se investigó.
variantes tienen sido detectada. En la serie 59 GC, excluyendo los cambios polimórficos y silenciosas que probablemente no tienen ningún papel patogénico, encontramos 6 sustituciones diferentes en 9 pacientes (9/59 GC = 15,2%): 4 del tipo de cambio de sentido (ID 10, 11 ID, ID 12, ID 15) en 4 pacientes distintos (6,8%) y 2 del tipo no-sentido erróneo (ID 2 e ID 17) en 5 GC distintos (3,4%).
ensayos como hemos informado recientemente [26], no obstante los datos de in silico
caracterización de la mutación y una reducción en la expresión de β-catenina que se encuentra en el tejido del tumor no se puede excluir completamente la importancia de esta mutación en el desarrollo de GC. Por lo tanto, en la actualidad ID 10 permanece una novela CDH1
mutación con una patogénesis de una importancia indeterminada.
ya se ha descrito en un 36 años de edad joven varón de raza blanca en una familia CGDH [27]. En nuestra serie, se detectó esta variante sólo en 1 macho (S47) de 74 años de edad, con un histotype mixta. El potencial efecto patogénico de esta mutación se ha confirmado a través de in vitro
estudios funcionales en diferentes laboratorios [27], [37], [38]. Aquí los resultados del modelado en primer lugar (Figura 2A-B) mediante el análisis de interacciones de unión proteína-ligando 3D, apoyan fuertemente el potencial para la función de la proteína alterada y conducen a la posible mecanismo molecular que sostienen este proceso. La función de la proteína alterada potencial fue apoyada también desde el análisis SIFT (Tabla 4) con una buena puntuación. Por otra parte, un estudio reciente, usando el in silico
diseño de proteínas FoldX enfoque algorítmico [39], reafirma el papel patogénico de la sustitución de ID 11 (p.A298T), basado en un cálculo de los cambios de estabilidad en estado nativo (ΔΔG > 0,08 kcal /mol) [40]. Los autores caracterizan pacientes portadores de esta mutación sin sentido como tener una edad más temprana en el diagnóstico y un histotype difusa. Nuestro caso pone de relieve que el DI 11 también se puede detectar en un antiguo paciente con GC mixto.
[35] y in silico
estudios [38], [40] no apoyan un papel patogénico de esta variante en la GC.
5'UTR región), que representa la variante más común asociado con GC en nuestra serie, que se producen en tres de los 59 pacientes GC ( 5,1%). Esta variante también se informó en un estudio realizado en Finlandia [45] en 1 de 13 (7,7%) pacientes con cáncer gástrico y en 2 de 51 controles (3,9%), y también en dos pacientes EOGC de origen americano del Norte (3,4%) [46] . Los datos globales de estos estudios sugieren que la ID 2 es una mutación bastante común, pero los autores no informaron datos sobre Identificación variante 2 en relación con el estado de la expresión de E-cadherina. ID 2 se encontró en nuestra serie en uno intestinal, uno mixto y uno histotypes CG difuso. Todos estos pacientes tenían más de 50 años al momento del diagnóstico y fueron negativos para la infección por HP. Ninguno de los sujetos control (n = 111) sometidos a ensayo sin GC, mostró esta mutación (Tabla 3). Un In situ
evaluación o una correlación entre la ID 2 y E-cadherina expresión no pudo llevarse a cabo debido a la falta de material tumoral. El potencial efecto patogénico de esta variante del promotor en el nivel de expresión de E-cadherina merece estudios adicionales
exón 11. El exón 11, junto con secuencias parciales de los exones que flanquean , codifica para el dominio CE4 de la proteína madura [25]; ID 17 es una deleción fuera de marco y conduce a la formación de un codón de parada prematuro en la posición 384 del promotor EC4. En consecuencia, la proteína traducida a partir CDH1
hebra ID 17 podría carecer del dominio transmembrana y la cola citoplásmica que está implicada en β-catenina vinculante. Ambos pacientes GC S10 y S46, que tiene la mutación ID 17, mostraron una reducción en la expresión de E-cadherina y β-catenina por IHC análisis (Figura 5); el paciente GC S10, con un carcinoma de células en anillo de sello, se le diagnosticó a la edad de 61 años, y el paciente GC S46, con un adenocarcinoma difuso, se le diagnosticó a la edad de 58 años. Además, la evaluación de la expresión de E-cadherina de la EBV inmortalizado linfocitos B mostraron una reducción fuerte (60%) en GC S10 albergar ID 17 mutación en comparación con el control de BD (S189) sin CDH1
alteraciones, pero también en comparación con un solo donante de sangre (S190) que lleva la misma variante ID 17. Dado que todos los sujetos que portaban la mutación ID 17 son heterocigóticos para el gen CDH1
, nuestros datos indican que el individuo S190, pero no las células tumorales de pacientes S10 y S46, pueden explotar algún mecanismo compensatorio que contrarresta la E-cadherina baja regulación. En los tumores, E-cadherina-bajo de expresión está unida a la actividad transcripcional mejorado β-catenina, un efector principal de la vía de Wnt [49]. La expresión de un gran número de genes relacionados con la progresión del tumor, incluyendo los de la ciclina D1, c- myc
, factor de crecimiento endotelial vascular, y la survivina se controla a través de la vía Wnt /β-catenina [50]. la unión a beta-catenina impide su translocación al núcleo E-cadherina; en consecuencia, una reducción de la expresión de E-cadherina puede favorecer la patogénesis de GC a través de una mayor acumulación de β-catenina nuclear. Dado que los pacientes S10 y S46 con la variante ID17 son tanto las mujeres muestran un helicobacter pylori (HP), la infección, se supone que ID 17 podría estar asociado con un factor pronóstico específico del sexo (que es bien sabido que la incidencia de CG es mayor para los hombres que para las mujeres) y una infección o /HP. Una deleción del exón 11 en el CDH1
gen también se describió en un paciente CGDH, pero en este último caso corte y empalme aberrante se asoció a una mutación intrónica diferente (IVS11 c.1711 + 5G > A) [27] . Curiosamente, un corte y empalme alternativo no funcional transcripción, E-cadherina que carece del exón 11 del gen también se ha informado en algunos de cabeza y cuello células del cáncer [51] y de los casos de leucemia linfocítica crónica (LLC) y, aunque en un nivel inferior en comparación con CLL, también en las células B normales [52]. En estos casos no se observaron alteraciones genéticas en el exón 11 o en sus regiones intrónicas flanqueantes; la transcripción no funcional tiene un codón de terminación prematura y se degrada por el absurdo mediada por la degradación de RNA [52]. factores de empalme, unión en la región del exón 11 del CDH1
, podría haber alterado los niveles de expresión o estados de activación de las células de LLC en comparación con las células B normales como se ha demostrado recientemente [53].
mutaciones polimórficas y silenciosos, se observó 3 sustituciones (ID 1, ID3 e ID 9) que no se encontraron en GC.
[54]. Nuestra hipótesis es que esta mutación mediante la introducción de una isla CpG en el CDH1
región promotora aumenta la probabilidad de CDH1 hipermetilación
, un evento bien conocido que favorece la inactivación transcripcional, un evento temprano en la gastritis HP [ ,,,0],55] y un factor de riesgo clave asociada al desarrollo GC
empalme.
mutaciones germinales hasta ahora. En la serie AMAG sólo se encontraron variantes polimórficas, con la excepción de ID 5, una nueva mutación intrónica cerca de exón 1 (IVS1 C.48 + 7C > T). ID 5 se encontró en una mujer de 51 años de edad, con hipergastrinemia. No hemos encontrado ningún truncamientos o desplazamientos del marco en la producción de la proteína asociada a esta mutación. Aunque nuestra serie se limita (n = 20), estos datos parecen no apoyar un papel relevante de CDH1
alteraciones genéticas asociadas con la enfermedad AMAG.
empalme y una consiguiente disminución de la expresión de E-cadherina y también para β-catenina. El mismo ID de 17 mutaciones y empalme efecto encuentra en 1 donante de sangre, pero con un efecto limitado sobre el nivel del mRNA E-cadherina, es intrigante y merece estudios adicionales. Teniendo en cuenta la correlación entre los CDH1
germinal alteraciones específicas y la histotype del tumor, se encontró que el 8,3% (1 de 12 GC) de mezclado (ID11) y 7,7% (2 de 26 GC) del difusa (ID17) subtipos , llevada a un potencial de mutación patogénica
, un evento de riesgo bien conocido asociado con el desarrollo y la progresión de GC.
sustituciones frente a alteraciones no sin sentido, según ha informado en un metaanálisis reciente para las zonas de riesgo GC-media alta como la Italia central [58].
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