PLOS ONE: Identification et caractérisation des CDH1 germinale Des variantes dans Sporadic gastriques patients atteints de cancer et chez les personnes à risque de Gastric Cancer

Résumé

Objectif

À l'écran et de caractériser les variantes germinales E-cadhérine (CDH1)
dans le cancer gastrique non héréditaire (GC) patients et chez les sujets à risque de GC.

Méthodes

59 glucocorticoïdes, 59 parents au premier degré (FDR) de GC, 20 auto-immunes gastrite atrophique métaplasique (AMAGs) et 52 donneurs de sang (BDS) ont été analysés pour CDH1
par séquençage direct, modélisation structurale et bioinformatique. impact fonctionnel sur l'épissage a été évaluée pour les mutations introniques. E-cadhérine /coloration immunohistochimique β-caténine et E-cadhérine quantification de l'ARNm par RT-PCR ont été réalisées

Résultats

Dans GCS, 4 variantes de faux-sens (p.G274S;. P.A298T; p.T470I; p.A592T), 1 mutation dans le 5'UTR (-71C > G) et 1 mutation dans le IVS12 intronique (c.1937-13T > C) région ont été trouvés. Premier effet pathogène de p.A298T mutation a été prédite par la modélisation des protéines 3D. La mutation des nouveaux p.G274S a montré un pas de signification fonctionnelle claire. En outre, d'abord, IVS12 intronique (c.1937-13T > C) mutation a été démontrée à conduire à une aberrante CDH1
transcription avec exon 11 suppression. Cette mutation a été trouvée dans 2 GCS et 1 BD. Dans FDRs, nous avons identifié 4 variantes: le polymorphes (p.A592T) et 3 mutations dans les régions non traduites avec le rôle fonctionnel non identifié à l'exception du 5'UTR (-54G > C) qui avait été trouvé pour diminuer CDH1
transcription. Dans AMAGs, nous avons détecté 2 modifications: 1 missense (p.A592T) et 1 nouveau variant (IVS1 (c.48 + 7C > T)) sans effet sur l'épissage
CDH1. Plusieurs substitutions silencieuses et polymorphes ont été trouvés dans tous les groupes étudiés.

Conclusions

Dans l'ensemble notre étude améliore la caractérisation actuelle de CDH1 de les mutations et leur rôle fonctionnel dans GC et chez les personnes à risque de GC. Les mutations trouvées dans les régions et les données sur les effets d'épissage non traduites méritent une attention particulière, comme associée à une quantité E-cadhérine réduite. L'utilité de la projection CDH1 de, en plus de l'identification d'autres facteurs de risque, pourrait être utile pour la détection précoce du GC chez les sujets à risque (c.-à-FDRs et AMAGs), et garantit une étude plus approfondie.

Citation: Garziera M, Canzonieri V, Cannizzaro R, Geremia S, Caggiari L, De Zorzi M, et al. (2013) Identification et caractérisation des germinale Variantes
CDH1 dans Sporadic gastriques patients atteints de cancer et chez les personnes à risque de cancer gastrique. PLoS ONE 8 (10): e77035. doi: 10.1371 /journal.pone.0077035

Editeur: Amanda Ewart Toland, Medical Center Ohio State University, États-Unis d'Amérique

Reçu: 29 Avril 2013; Accepté 5 Septembre 2013; Publié le 29 Octobre, 2013 |

Droit d'auteur: © 2013 Garziera et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC De Re N. 10266 et AIRC Cannizzaro spécial moléculaire Programme d'oncologie clinique 5x1000 N. 12214), et Direzione Centrale del Lavoro, Formazione, Università e Ricerca Della Regione Autonoma Friuli Venezia Giulia, Codice Progetto 200502027001. Les bailleurs de fonds n'a joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

intérêts concurrents:. Dr. Valli de Re déclare qu'il est un co-auteur et membre du PLOS Editorial Board UN. Cela ne modifie pas l'adhésion des auteurs à tous les PLOS ONE politiques sur les données et les matériaux de partage.

Le cancer gastrique Introduction (GC) reste le quatrième cancer le plus fréquent dans le monde entier, même si son incidence et les taux de mortalité associés ont diminué au cours des dernières décennies. pronostic GC est étroitement lié au stade de la maladie au moment du diagnostic [1]. cancer gastrique apparition précoce (EOGC) est défini comme GC présentant à l'âge de 45 ans ou moins [2] et a une survie globale pauvres [3], [4]. La plupart des glucocorticoïdes sont sporadiques et développent souvent après Helicobacter pylori
(HP) -Associated gastrite [5], [6]. Cependant, des études d'agrégation familiale soulignent également l'importance d'une prédisposition génétique dans le développement sporadique de GC. Fréquence d'agrégation gastrique familial est d'environ 10%

La classification histopathologique GC la plus largement acceptée (la classification de Lauren) [7] distingue deux types de GC:. Type intestinal et de type diffus. Diffuse GC montre une plus grande base héréditaire et un pronostic généralement moins par rapport au sous-type intestinal [8].

le gène codant de CDH1 pour la E-cadhérine a été identifié pour avoir un rôle causal dans environ 30% -50% de diffus héréditaire GC (HDGC), un syndrome de GC et lobulaire susceptibilité au cancer du sein autosomique dominante constituant 1-3% du regroupement familial des glucocorticoïdes [9], [10] et dans le sous-type de GC diffuse [11] . Les mutations germinales de CDH1 (une telle mutation est transmise chaque cellule dans le corps de la descendance) sont spécifiquement associés à HDGC (environ 30% -40% des cas); grande CDH1 de les suppressions ont été trouvés dans environ 6,5% des cas [12]. cancer gastrique familial intestinal (FIGC) avec une histoire familiale positive ont également été décrits, mais jusqu'à présent, aucun germinale CDH1 de défauts ont été associés à FIGC ou GCS intestinales. Cette absence de preuve de CDH1 de les mutations dans le sous-type intestinal a conduit à l'hypothèse que le regroupement familial dans ces cas est déterminée par des facteurs environnementaux partagés, par opposition à une prédisposition génétique héréditaire. Cependant, les données récentes montrent que altérations somatiques de CDH1 (telles modifications accumulent dans les cellules cancéreuses de l'organisme sur la durée de vie d'une personne) sont aussi fréquents dans l'intestin comme dans GC diffuse [13], ce qui suggère un rôle important de CDH1
dans les deux histotypes. Néanmoins, la prévalence exacte de Les altérations de la lignée germinale de CDH1 dans l'intestin GCS est encore inconnue. promoteur de hypermethylation de CDH1 est le deuxième hit génétique la plus répandue dans le processus cancérigène de GC [14], [15]. CDH1 de les mutations sont également associés à une susceptibilité accrue aux invasive et métastatique [16], [17] colon, de la vessie, de la prostate, du sein et les cancers gynécologiques [18] - [20]. E-cadhérine est une glycoprotéine transmembranaire qui joue un rôle dans le maintien de l'architecture du tissu épithélial en impliquant Ca ^{2+ interactions entre les cellules dépendantes [21], [22]. E-cadhérine comprend un domaine cytoplasmique, un domaine transmembranaire court et cinq domaines extracellulaires de répétition de cadhérine-like (EC1-5) qui couvrent exons 4-13 et contiennent des régions de liaison du calcium hautement conservées [23], [24] et cysteines conservées probables pour former des ponts disulfure [25]}

dans cette étude, nous avons analysé CDH1
les mutations germinales dans une série de cas et les personnes à risque de GC GC aléatoire consécutifs. principalement au premier degré GC-parents (FDR) et gastrite atrophique (AMAG) patients métaplasiques auto-immunes dirigées vers notre institut pour les symptômes gastro-intestinaux et l'évaluation endoscopique. Pour explorer le rôle de l'expression E-cadhérine, analyses structurales, fonctionnelles et immunohistochimiques ont été réalisées dans des échantillons avec une mutation germinale
CDH1. Le but de la présente étude était d'évaluer la prévalence et caractériser Les mutations germinales de CDH1 dans une série de patients atteints de GC sporadiques consécutifs ne possèdent pas les critères de classification HDGC, et dans une population sélectionnée au risque de développement de GC, pour tester son utilité en tant que marqueur pour améliorer la détection précoce des tumeurs. Les données obtenues peuvent être utilisées pour développer un outil qui détecte rapidement et à moindre coût CDH1 de les mutations principalement présent dans notre population.

Caractérisation des patients
Résultats et CDH1
germinale dépistage génétique

les caractéristiques cliniques et histopathologiques de sujets GC, FDR et AMAG sont résumés dans les tableaux 1 et 2. Parmi les 59 patients du GC, 2 (3,4%) ont une histoire familiale de GC (S15 est le frère de S16) sans satisfaire aux critères pour héréditaire diffuse GC, telle que définie par l'international Cancer gastrique Linkage Consortium (IGCLC) au moment de la collecte de l'échantillon. Dans notre série de GC, 5 patients GC début sporadiques (anciens ≤45 ans) étaient présents, mais pas CDH1 de les altérations ont été trouvés chez ces patients. L'âge médian des FDRs était de 49 ans (extrêmes, 28-78 ans) et pour AMAGs 56 ans (gamme, 31-72 ans). Parmi les 59 patients du GC, 16 sujets ont eu un premier rapport de degré inclus dans l'étude (16/59 FDRs). FDRs et AMAGs sont venus à notre institution pour une visite de la gastro-entérologie et examen gastroscopie, ils manifestent divers symptômes, mais ni le cancer ni intestinale métaplasie /dysplasie était présent chez ces sujets.

Résultats de dépistage génétique CDH1
sont énumérés dans le tableau 3 avec nouvelles
mutations: 1 intronique (ID 5), 1 faux-sens (ID 10), et 2 silencieux (ID 13 et ID18). Dans l'ensemble nous avons trouvé 4 variantes, qui code pour un acide aminé (AA) de substitution (1 roman (ID10) et 3 précédemment dans d'autres populations (ID 11, ID 12, ID 15), 1 dans la région du gène 5'near et 2 des mutations dans l'élément de régulation non traduite (UTR) (ID 1, ID 3, déjà signalé) et 6 substitutions dans les régions introniques (trois mutations: ID 5, ID 9, ID 17, trois variantes polymorphes introniques: ID 4, ID 6, ID 8, probablement sans effet sur GC cancérogenèse). pas de suppressions ou insertions ont été trouvés dans les limites d'exons.

d'autres modifications ont entraîné des polymorphismes communs (fréquence d'au moins 1% dans la population) ou des mutations silencieuses qui code pour le même acide aminé que le brin d'origine. Aucune association statistique n'a été observée entre les quatre groupes de patients testés pour ID 4, 6 ou ID ID 19 variantes.

RefSNP (rs) numéros pour identifier les variants génétiques déjà publiés comme ainsi que leurs fréquences rapportées (NIEHS Environmental Genome Project, Seattle, WA (URL: http://evs.gs.washington.edu/niehsExome/Consulté Août 2013); ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/phase1/analysis_results/paper/Accessed Décembre 2012) sont indiqués dans le tableau 3.

Toutes les variantes CDH1
étaient à l'état hétérozygote, sauf pour l'ID 19 dans lequel un état homozygote a également été détecté ID 4 et.

Fréquence des mutations et des variantes ont été calculées chez les sujets sans GC ou d'une maladie AMAG (52BDs + de 59FDRs, n = 111). FDRs Seize étaient parents au premier degré de notre série GC; lorsque l'un de la variante était présent dans GC et son cas FDR connexe, nous avons exclu l'individu FDR du calcul de la fréquence. ID4 par exemple, était présent dans 5 FDRs liés à notre GC de notre série; donc la fréquence de la population de contrôle a changé de totale 111 à 106 personnes (7FDRs + 8BDs /106; 14,5%). La figure 1 illustre les chromatogrammes de séquençage des nouvelles mutations que nous avons trouvé. Nous avons précédemment rapporté l'ID 10 chromatogramme dans un autre document [26].

rôle prédictif bioinformatique et modélisation structurale résultats des variants faux-sens trouvé

Les résidus de missense muté nous avons trouvé sont tous localisés à l'E -cadherin domaine extracellulaire. La position de codon dans le immatures et matures (après le clivage N-terminal) des protéines et des données de la PolyPhen-2 et EIPD in silico
analyses sont présentés dans le Tableau 4. Les quatre variantes de faux-sens sont potentiellement dangereux par PolyPhen -2, mais seul le p.A298T (ID 11) et p.A592T (ID 15), les substitutions peuvent affecter la fonction des protéines par analyse SIFT (tableau 4). Les p.G274S (ID 10) que nous avons décrit récemment [26], cependant, ne perturbe pas l'environnement local, mais introduit un résidu potentiel de phosphorylation et de glycosylation qui peuvent avoir des effets possibles sur la stabilité et l'intégrité de la E-cadhérine comme nous émis l'hypothèse [26]. L'effet pathogénique de ID 11 substitution a été établie précédemment [27], mais il a été ici d'abord démontré par l'analyse structurale. Comme cela est illustré sur la figure 2A, le changement de l'AA dans l'exon 7 du p.A298T (ID 11) est positionné à proximité de la zone d'interaction entre les protomères CE1 et CE2. Ainsi, la polaire substitution de résidus d'alanine-thréonine peut conduire la formation de liaisons H par son groupe oxydrilic et cela peut interférer avec la structure locale de la protéine dans une région qui est fondamentale pour Ca ^{2 + interactions. Thréonine en position 144 est stériquement démontré importune, car il interagit avec deux résidus d'acide aspartique (Asp136 et Asp 138) qui sont directement impliqués dans Ca 2 + liaison. En outre, les longueurs de liaison sont particulièrement souligné, étant inférieur à 3 Å (figure 2B).}

En ce qui concerne les deux mutations faux-sens restants, ils ont un effet moins claire fonctionnelle également signalé dans le tableau 4. p. T470I (ID 12) la substitution [28], modifie la surface d'AA de CE3 extradomain dans la protéine mature (figure 2C). Dans les deux cas la E-cadhérine murine et de la séquence N-cadhérine (code PDB: 3Q2W) se trouve généralement thréonine O
-glycosylated suggère un rôle important pour ce résidu dans la structure de la protéine. Cependant, comme montré sur la figure 2D, la modification de l'isoleucine, un AA non polaire avec une chaîne latérale hydrophobe qui ne peut pas subir une modification post-traductionnelle, suggère aucune tension intermoléculaire spécifique. Nous supposons que dans le milieu extracellulaire, la présence d'un résidu isoleucine à la même position que la thréonine peut favoriser les interactions protéine-protéine, et cette mutation pourrait donc assumer une signification protectrice. La dernière mutation signalé, p.A592T (ID 15), a été trouvé dans tous les groupes testés (voir le tableau 3), ce qui suggère un effet improbable sur GC pathogenèse. Dans ce cas, Alanine sur le EC4 extradomain de l'E-cadhérine mature (Figure 2F) offre une liberté conformationnelle, même à proximité des Ca ^{2 + sites de liaison. Une substitution thréonine ici a un effet limité sur la structure et de torsion angles locaux de la protéine. Cependant, nous ne pouvons pas exclure que la chaîne latérale oxydrilic pourrait être post-traductionnelle modifiée dans une situation particulière et donc influer sur la structure et la fonction du (Figure 2F)
CDH1.}

Analyse de la transcription de mutations germinales introniques

Pour explorer si des mutations introniques détectées dans notre série GC (tableau 3) pourraient induire un effet sur l'épissage, nous avons effectué une analyse de la transcription
CDH1. variantes polymorphes et silencieux ont été exclus de cette analyse, car ils ont probablement aucun rôle pathogène. l'ADNc produit à partir de sang périphérique d'individus GC choisis hébergeant intronique ID 5, ID 9 ou ID de 17 mutations (tableau 3) ont été comparées à celle de deux donneurs de sang sains, l'un ayant seulement la même identification 17 mutation en tant que patients GC (code de BD S190 ), et un autre (le code BD S189) sans CDH1 de la mutation.

pour les ID 5 et ID 7 mutations introniques, nous avons amplifié la région couvrant une partie de l'exon 1 à partie de l'exon 5, ID 17 mutation, exon 10 à 13 (Figure 3). L'exon RT-PCR 1 à 5 fragments n'a montré aucune différence lorsqu'il est exécuté sur un gel d'agarose à 4% (figure 3A), ni après le séquençage bidirectionnel (données non montré); par converse ID 17 variante intronique pourrait affecter l'épissage conduisant à une plus petite transcription
CDH1 anormale (figure 3B). Lors de l'isolement et le séquençage, on a trouvé que la bande inférieure a donné lieu à une transcription sautée manquant l'exon 11, l'exon 10 avec reliée directement à l'exon 12. Cette transcription aberrante a été également détectée dans le BD S190 portant la même substitution germinale (figure 3B).

Analyse des l'abondance de protéines et d'expression de l'ARNm du niveau de CDH1 chez des sujets montrant mutations introniques de CDH1

Une comparaison des E-cadhérine niveau d'expression de l'ARNm a été réalisée à partir EBV immortalisés lymphocytes obtenus à partir du sang périphérique de S10 et S190 (mutation ID 17), S97 (ID 9) et S189 (mutations de pas CDH1) sujets. Sujet S10 a été affectée par un cancer de l'estomac, sous réserve S97 est le premier degré relatif d'un patient avec un cancer de l'estomac (FDR), tandis que S189 et S190 étaient tous les deux donneurs de sang. Nous avons observé entre le donneur de sang de commande (S189) ayant la mutation et les patients de ne CDH1, une forte diminution relative de l'expression E-cadhérine (environ 60%, Figure 4) chez les patients S10 ayant à la fois ID 17 mutation et un GC, tandis que la réduction seulement environ 2% du donneur de sang S190 ayant le même ID 17 mutation ( p
< 0,05, par rapport à GC S10). Pour S97 (mutation ID 9, FDR sujet), nous avons observé une expression E-cadhérine similaire à celle dans le contrôle S189.

L'analyse immunohistochimique sur le tissu gastrique de la tumeur de intronique ID 17 cas (code de patient S10, figure 5E) ont montré une expression réduite de la membrane liée à la E-cadhérine dans les cellules tumorales en anneau sigillaire (flèches noires), tandis que les deux membranes et coloration cytoplasmique étaient présents dans l'épithélium normal. Le même patient a montré une diminution β-caténine dans la coloration des cellules annulaires chevalière par rapport à la forte expression de cette protéine dans les cellules adjacentes normales (figure 5H). La perte à la fois de la E-cadhérine et de β-caténine coloration était également visible pour le second cas (S46) ayant le même ID intronique 17 mutation et affectée par GC aussi (figure 5F et 5I, respectivement pour la E-cadhérine et de β-caténine) .

Discussion

patients du GC ont généralement un mauvais pronostic [29]. Identification des patients présentant un risque accru de développer GC et la détection précoce du GC sont des approches prometteuses pour réduire la morbidité et la mortalité du GC. FDR des patients du GC sont connus pour avoir un 2-3 fois un risque accru de GC, probablement en raison de l'exposition aux mêmes facteurs de risque environnementaux et /ou prédisposition héréditaire au cancer [30]
.

La destruction des cellules pariétales trouvé dans AMAG combinée avec le rôle important de la E-cadhérine dans la polarité épithéliale et de l'architecture glandulaire gastrique, suggère que les altérations de la lignée germinale de CDH1
pourrait être un facteur de risque supplémentaire pour le développement de GC dans AMAG patients [31].

En 1998, Guilford et ses collègues ont décrit pour la première fois des mutations germinales de temps du gène
em> CDH1 <[28]. Par la suite, les différents types de mutations ont été rapportées dans des familles d'ethnies variant avec GC diffuse [32], [33]. Le premier mutation germinale de CDH1 a été décrite dans une famille italienne en 2006, chez un patient qui répondait aux critères de IGCLC pour HDGC [34]. Cependant, très peu d'études rapportent Les mutations germinales de CDH1 dans des cas sporadiques de GC sans agrégation familiale ou chez les sujets à risque de développer GC [35], [36]. En outre, dans ces études, les effets fonctionnels de CDH1
variantes ne sont souvent pas étudié.

La force de notre étude est la collection de 59 patients de race blanche avec GC sporadiques, 59 et 20 FDRs AMAGs qui assisté à notre service de gastro-entérologie au cours des dernières années pour les symptômes gastriques et un diagnostic ou l'exclusion d'un GC après endoscopique et de l'évaluation des tissus histologiques.

Comme résumé dans le tableau 3, différentes germinale différentes variantes
CDH1 ont été détectée. Dans la série 59 de GC, à l'exception des changements polymorphes et silencieux qui ont probablement aucun rôle pathogène, nous avons trouvé 6 substitutions différentes chez 9 patients (9/59 GCS = 15,2%): 4 du type faux-sens (ID 10, ID 11, ID 12, ID 15) chez 4 patients distincts (6,8%) et 2 de type non-sens (ID 2 et ID 17) dans 5 GCS distincts (3,4%).

L'ID 10 (p.G274S) est une nouvelle mutation faux-sens que nous avons trouvé dans un vieux mâle avec un GC histotype mixte. Cette variante n'a pas été détecté dans 187 personnes sans cancer (108BDs + 59FDRs + 20AMAGs) excluant ainsi un polymorphisme. Un effet pathogène de ID 10 mutation n'a pas été pris en charge après fonctionnelle (agrégation et invasion) in vitro
essais que nous avons récemment rapporté [26], néanmoins les données de in silico de la caractérisation de la mutation et une réduction de l'expression de β-caténine trouvée dans le tissu de tumeur ne peut pas exclure totalement la signification de cette mutation dans le développement du GC. Ainsi, à aujourd'hui ID 10 reste un roman CDH1 de la mutation avec une pathogenèse d'une signification indéterminée.

L'ID 11 (p.A298T) substitution dans l'exon 7 de CDH1
a déjà été décrit dans un 36-year-old jeune homme de race blanche dans une famille HDGC [27]. Dans notre série, cette variante a été détectée seulement dans 1 mâle (S47) de 74 ans avec un histotype mixte. L'effet pathogène potentiel de cette mutation a été confirmée par in vitro
études fonctionnelles dans des laboratoires différents [27], [37], [38]. Ici, les premiers résultats de modélisation (figure 2A-B) en analysant les interactions de liaison protéine-ligand 3D, appuient fortement le potentiel de la fonction des protéines modifiées et conduisent au mécanisme moléculaire qui peut maintenir ce processus. La fonction potentielle de la protéine modifiée a également été soutenue par l'analyse EIPD (tableau 4) avec un bon score. En outre, une étude récente, en utilisant la in silico
la conception des protéines FoldX approche algorithmique [39], réaffirme le rôle pathogène de l'ID 11 (p.A298T) substitution, sur la base d'un calcul de l'évolution de la stabilité à l'état natif (ΔΔG > 0,08 kcal /mol) [40]. Les auteurs caractérisent les patients porteurs de cette mutation faux-sens comme ayant un plus jeune âge au moment du diagnostic et un histotype diffuse. Notre cas a souligné que ID 11 peut également être détectée dans un ancien patient avec GC mixte.

L'ID 12 (p.T470I) a été trouvé dans un homme de 57 ans (S39) avec un diagnostic de GC . Ce changement a été décrit pour la première dans une famille de l'ethnie Maori avec EOGC, mais le sujet montrant cette mutation n'a pas été affectée par GC au moment de l'étude [28]. Ici, nous avons constaté que le changement p.T470I AA est tolérée par SIFT et par analyse de modélisation. Malheureusement, l'échantillon de tissu bioptiques tumorales était insuffisante pour effectuer E-cadhérine coloration IHC.

L'ID 15 substitution (p.A592T) a été détectée dans chaque groupe clinique testé, ce qui suggère une diffusion polymorphes probable. Néanmoins, cette variante a été rapporté précédemment associée à des tumeurs de la thyroïde et les cancers du sein lobulaire [41] - [43]. Notre analyse structurelle et in vitro
[35] et in silico
études [38], [40] ne soutiennent pas un rôle pathogène pour cette variante dans GC.

Comme recommandé par les directives récentes de gestion clinique [44], la surveillance de l'endoscopie doit être effectuée chaque année chez les personnes présentant des mutations de signification indéterminée (par exemple, faux-sens). À notre avis, les sujets hébergeant ID 15 et également ID 10, doivent être suivis pendant 10 ans avant d'exclure un rôle bien faible pour cette altération dans la pathogenèse de GC.

Dans le ID 2 nous avons identifié un C -à-G changement avant le codon d'initiation (-71C > G, CDH1
5'UTR région), qui représente la variante la plus commune associée à GC dans notre série, se produisant dans trois des 59 patients du GC ( 5,1%). Cette variante a également été rapporté dans une étude finlandaise [45] dans 1 sur 13 (7,7%) patients du GC et 2 de 51 contrôles (3,9%), ainsi que chez deux patients EOGC d'origine américaine du Nord (3,4%) [46] . L'ensemble des données issues de ces études suggèrent que ID 2 est une mutation très commune, mais les auteurs n'a pas rapporté des données sur ID 2 variante par rapport à l'état de l'expression E-cadhérine. ID 2 a été trouvé dans notre série en un seul intestinal, mixte, et un histotypes GC diffus. Tous ces patients avaient plus de 50 ans au moment du diagnostic et ont été négatifs pour l'infection HP. Aucun des sujets témoins (n ​​= 111) testés sans GC, a montré que cette mutation (tableau 3). Une balise l'évaluation in situ ou d'une corrélation entre l'ID 2 et E-cadhérine expression dans n'a pas pu être exécutée en raison d'un manque de matériel tumoral. L'effet pathogène potentiel de cette variante de promoteur sur le niveau d'expression E-cadhérine mérite des études complémentaires

Intronic ID 17 variantes (IVS12 c.1937-13T > C). A été trouvé dans 2 femelles avec GC (2/59 GCS = 3,4%) à la fois positifs pour l'infection HP, et il a été trouvé aussi dans 1 BD (1/52 = 1,9%, tableau 3). La même modification a été précédemment rapporté dans le cancer du sein lobulaire à haute fréquence (12/53 = 23%) [47], dans les familles HDGC (2/27 = 7,4%) [48] et chez les patients EOGC (7/79 = 8,9% ) [46], mais aussi dans une population témoin relative [46]. Il faut noter que nous démontrons pour la première fois que cette substitution entraîne une aberrante CDH1
transcription hébergeant une deletion de l'exon 11. CDH1 Exon 11, conjointement avec des séquences partielles des exons flanquantes , codifie pour le domaine CE4 de la protéine mature [25]; N ° 17 est une suppression hors du châssis et aboutit à la formation d'un codon d'arrêt prématuré à la position 384 du promoteur de EC4. Par conséquent, la protéine traduite à partir de ID 17 le brin de CDH1 pourrait manquer le domaine transmembranaire et la queue cytoplasmique qui est impliqué dans β-caténine liaison. Les deux patients GC S10 et S46, avec l'ID 17 mutation, a montré une réduction de l'expression de la E-cadhérine et la β-caténine par IHC analyse (figure 5); le patient GC S10, avec un carcinome chevalière, a été diagnostiqué à l'âge de 61 ans, et le patient GC S46, avec un adénocarcinome diffuse, a été diagnostiqué à l'âge de 58 ans. En outre, l'évaluation de l'expression E-cadhérine de l'EBV a immortalisé les lymphocytes B ont montré une forte réduction (60%) en GC S10 hébergeant ID 17 mutation par rapport à la commande BD (S189) sans CDH1
modifications, mais également par rapport à un donneur de sang (S190) portant le même ID 17 variante. Étant donné que tous les sujets portant l'ID de 17 mutation sont hétérozygotes pour le gène
CDH1, nos données indiquent que l'individu S190, mais pas des cellules tumorales de patients atteints S10 et S46 peuvent exploiter un mécanisme de compensation qui contrecarre la E-cadhérine régulation à la baisse. Dans les tumeurs, la E-cadhérine sous-expression est liée à l'amélioration de β-caténine activité transcriptionnelle, un effecteur principal de la voie Wnt [49]. L'expression d'un grand nombre de gènes associés à la progression des tumeurs, y compris ceux pour la cycline D1, c-
myc, facteur de croissance vasculaire endothéliale et la survivine est contrôlée par la voie de signalisation Wnt /β-caténine [50]. la liaison à ß-caténine empêche sa translocation vers le noyau E-cadhérine; en conséquence, une réduction de l'expression E-cadhérine peut favoriser la pathogenèse GC par une accumulation accrue nucléaire β-caténine. Puisque les patients S10 et S46 avec variante ID17 sont les femmes montrent un Helicobacter pylori (HP) infection, nous supposons que ID 17 pourrait être associée à un facteur pronostique spécifique du sexe (il est bien connu que l'incidence de GC est plus élevé pour les hommes que pour les femmes) et /ou une infection HP. Une délétion de l'exon 11 dans le gène CDH1 de a également été décrit chez un patient de HDGC, mais dans ce dernier cas, un épissage aberrant a été associé à une mutation intronique différente (IVS11 c.1711 + 5G > A) [27] . Curieusement, un épissage alternatif, non-fonctionnelle transcription E-cadhérine qui manque l'exon 11 du gène a également été rapporté dans certaines cellules de cancer tête et cou [51] et les cas de leucémie lymphoïde chronique (LLC) et bien à un niveau inférieur par rapport à CLL, également dans les cellules B normales [52]. Dans ces cas, aucune des altérations génétiques dans l'exon 11 ou dans ses régions introniques flanquantes ont été observés; la transcription non-fonctionnelle a un codon de terminaison prématurée et est dégradée par le nonsense-mediated RNA dégradation [52]. facteurs d'épissage, liaison dans la région de l'exon 11 de CDH1
, pourraient avoir des niveaux modifiés d'expression ou des états d'activation dans les cellules CLL par rapport aux cellules B normales comme l'a récemment démontré [53].

dans le groupe FDR de sujets, à l'exclusion de CDH1
mutations polymorphes et silencieux, nous avons observé 3 substitutions (ID 1, ID3 et ID 9) qui ne sont pas trouvé dans GC.

le ID 1 (5'near gène-176C > T) variante a été détectée chez une femme de 32 ans avec un statut d'infection HP inconnue. Cette variante a déjà été soumis à des bases de données populaires, mais sa signification est inconnue

L'ID 3 (5'UTR-54G > C). Variante a été trouvée dans un homme de 72 ans positifs pour l'infection HP. Fait intéressant, cette mutation a déjà été détectée dans un 41-year-old sujet japonais en bonne santé, sans tumeur cliniquement décelable au moment de l'inscription, et décrit comme une variante rare capable de diminuer l'activité transcriptionnelle de CDH1
[54]. Nous émettons l'hypothèse que cette mutation en introduisant un îlot CpG dans le la région du promoteur de CDH1 augmente la probabilité de CDH1 de l'hyperméthylation, un événement bien connu favorisant l'inactivation de la transcription, un événement précoce dans HP gastrite [ ,,,0],55] et un facteur de risque important associé au développement du GC

L'ID 9 (intronique IVS4 c.532-18C > T). a été trouvé dans un 41-year-old sujet mâle négatifs pour l'infection HP. ID9 a été signalée pour la première chez deux patients EOGC de l'Angleterre et le Portugal, respectivement [56], chez deux patients allemands HDGC et 1 contrôle sujet inscrit dans la même étude [35]. Récemment, un rôle non pathogène pour cette variante a été proposée [2]. On n'a pas remarqué aucune influence sur l'épissage
CDH1.

patients AMAG une 3 fois le risque relatif accru de développer GC et ont été jamais enquêté sur des mutations germinales
CDH1 jusqu'à maintenant. Dans la série AMAG nous avons trouvé que des variantes polymorphes à l'exception de ID 5, une nouvelle mutation intronique proche de l'exon 1 (IVS1 c.48 + 7C > T). ID 5 a été trouvé dans une femelle de 51 ans avec hypergastrinémie. On n'a pas trouvé d'troncatures ou des déphasages dans la production de la protéine associée à cette mutation. Bien que notre série est limitée (n = 20), ces données ne semble pas à soutenir un rôle pertinent des altérations génétiques
CDH1 associés à la maladie AMAG.

En conclusion, nos résultats montrent que le bien connu pathogène ID 11 mutation (p.A298T) peut également être détectée chez les patients du GC sporadiques sans remplir les critères stricts pour HDGC. De plus, nous avons démontré un effet délétère de l'ID 17 variante (IVS12 c.1937-13T > C) sur CDH1 de l'épissage et une diminution connexe de l'expression E-cadhérine et aussi pour β-caténine. Le même ID 17 mutation et l'épissage effet trouvé dans 1 sang donneur, mais avec un effet limité sur le niveau d'ARNm E-cadhérine, est intrigante et mérite d'autres études. Compte tenu de la corrélation entre les modifications de la lignée germinale
CDH1 spécifiques et la histotype de la tumeur, nous avons constaté que 8,3% (1 sur 12 GCS) de mélange (ID11) et 7,7% (2 sur 26 GCS) diffus (ID17) sous-types , porté une mutation pathogène potentiel

Enfin, chez un individu FDR à risque pour GC, nous avons trouvé l'ID 3 variante (5'UTR-54G > C). avec un effet potentiel d'accroître l'état de hypermethylation de CDH1
, un événement de risque bien connu associé au développement de GC et de la progression.

Nord Est de l'Italie présente haute GC incidence et de mortalité si le respect inférieur aux régions centrales, comme la Toscane et des Marches [57] . Nos résultats montrent la prévalence dans missense CDH1 de les substitutions par rapport à des modifications non-sens, tel que rapporté dans une méta-analyse récente des zones à risque GC moyen élevé comme l'Italie centrale [58].

• PLOS ONE: Mesure quantitative des acides organiques dans les tissus de patients atteints de cancer gastrique indique une augmentation de métabolisme du glucose dans le cancer gastrique
• PLOS ONE: rôle protecteur de Helicobacter pylori infection dans le pronostic du cancer gastrique: résultats de 2454 patients atteints de cancer gastrique