PLoS ONE: Identificatie en karakterisering van CDH1 Kiembaan Varianten in Sporadische maagkankerpatiënten en personen met een risico op maagkanker

De abstracte

Doelstelling

Om te screenen en te karakteriseren kiembaan varianten voor E-cadherine (CDH1)
in niet-erfelijke maagkanker (GC) patiënten en bij patiënten bij risico van GC.

Methods

59 GC, 59 eerstegraads familieleden (FDRs) van GC, 20 auto-immuun metaplastische atrofische gastritis (AMAGs) en 52 bloeddonoren (BDS) werden geanalyseerd op CDH1
door direct sequencing, structureel modelleren en bioinformatica. Functionele gevolgen splicing werd beoordeeld op intronic mutaties. E-cadherine /β-catenine immunohistochemische kleuring en E-cadherine mRNA kwantificering met behulp van RT-PCR werden uitgevoerd

Resultaten

In GC, 4 missense varianten (p.G274S;. P.A298T; p.T470I; p.A592T), 1 mutatie in de 5 'UTR (-71C > G) en 1 mutatie in het intronic IVS12 (c.1937-13T > C) regio werden gevonden. Eerste pathogene effect van p.A298T mutatie werd voorspeld door proteïne 3D-modellering. De roman p.G274S mutatie toonde een geen duidelijke functionele betekenis. Bovendien eerste intron IVS12 (c.1937-13T > C) mutatie werd aangetoond dat leiden tot een afwijkende CDH1
transcript met exon 11 deletie. Deze mutatie werd gevonden in 2 GC en in 1 BD. In FDRs identificeerden we 4 varianten: de polymorfe (p.A592T) en 3 mutaties in onvertaalde regio's met een niet-geïdentificeerde functionele rol met uitzondering van de 5 'UTR (-54G > C), die is gevonden had af te nemen CDH1
transcriptie. In AMAGs, ontdekt we 2 veranderingen: 1 missense (p.A592T) en 1 nieuwe variant (IVS1 (c.48 + 7C > T)), zonder effect op de CDH1
splicing. Verschillende stil en polymorfe substituties werden gevonden in alle groepen onderzocht.

Conclusies

Over het algemeen verbetert onze studie op de huidige karakterisering van CDH1
mutaties en hun functionele rol in GC en bij personen met een risico van GC. Mutaties in ongetranslateerde regio's en gegevens over splicing effecten verdienen bijzondere aandacht als geassocieerd met een verminderde E-cadherine bedrag. Het nut van de CDH1
screening, in aanvulling op de identificatie van andere risicofactoren, nuttig zou kunnen zijn voor de vroege opsporing van GC bij patiënten met een risico (dwz FDRs en AMAGs), en warrants verdere studie.

Visum: Garziera M, Canzonieri V, Cannizzaro R, Geremia S, Caggiari L, De Zorzi M, et al. (2013) Identificatie en karakterisering van CDH1
Kiembaan Varianten in Sporadische maagkankerpatiënten en personen met een risico op maagkanker. PLoS ONE 8 (10): e77035. doi: 10.1371 /journal.pone.0077035

Editor: Amanda Ewart Toland, Ohio State University Medical Center, de Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen: 29 april 2013; Aanvaard: 5 september 2013; Gepubliceerd: 29 oktober 2013

Copyright: © 2013 Garziera et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC De Re N. 10.266 en AIRC Cannizzaro Speciale Programma Moleculaire Clinical Oncology 5x1000 N. 12214), en Direzione Centrale del Lavoro, Formazione, Università e Ricerca Della Regione Autonoma Friuli Venezia Giulia, Codice Progetto 200502027001. De financiers had geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen: dr. Valli de Re verklaart dat hij een co-auteur en Editorial bestuurslid van PLOS EEN. Dit betekent niet naleving van de auteurs te veranderen om alle PLoS ONE beleid op het delen van gegevens en materialen.

Introductie

Maagkanker (GC) blijft de vierde meest voorkomende maligniteit in de wereld, hoewel de incidentie en bijbehorende sterftecijfers zijn gedaald in de afgelopen decennia. GC prognose is nauw gerelateerd aan de fase van de ziekte bij diagnose [1]. Early onset maagkanker (EOGC) gedefinieerd als GC presentatie op de leeftijd van 45 jaar of jonger [2] en een slechte overleving [3], [4]. De meeste GC zijn sporadisch en ontwikkelen zich vaak na Helicobacter pylori
(HP) geassocieerde gastritis [5], [6]. Echter, familiale aggregatie studies benadrukken ook het belang van een genetische aanleg in de sporadische ontwikkeling van GC. Frequentie van familiale maag aggregatie is ongeveer 10%

De meest geaccepteerde GC histopathologische classificatie (classificatie Lauren's) [7] onderscheidt twee soorten GC:. Intestinaal type en diffuus type. Diffuse GC toont meer erfelijke basis en een algemeen slechtere prognose ten opzichte van de intestinale subtype [8].

CDH1
gen dat codeert voor het E-cadherine is geïdentificeerd een oorzakelijke rol spelen in ongeveer 30% -50% van erfelijke diffuse GC (HDGC), een autosomaal dominante GC en lobulaire borstkanker vatbaarheid syndroom vormen 1-3% van familiaire clustering van GC [9], [10] en diffuse GC subtype [11] . CDH1
kiemlijn mutaties (bijvoorbeeld een mutatie doorgegeven elke cel in het lichaam van de nakomelingen) zijn specifiek aan HDGC (ongeveer 30% -40% van de gevallen); grote CDH1
schrappingen zijn gevonden in ongeveer 6,5% van de gevallen [12]. Familiaire intestinale maagkanker (FIGC) met een positieve familiegeschiedenis zijn ook beschreven maar tot nu toe, geen kiembaan CDH1
defecten zijn in verband gebracht met FIGC of intestinale GC. Dit gebrek aan bewijs van CDH1
mutaties in de intestinale subtype heeft geleid tot de hypothese dat familiaire clustering in deze gevallen wordt bepaald door gedeelde omgevingsfactoren, in tegenstelling tot een erfelijke genetische predispositie. Uit recente gegevens blijkt dat CDH1
somatische veranderingen (zoals veranderingen accumuleren in kankercellen van het lichaam over de levensduur van een persoon) zijn vaker voor in intestinale als diffuse GC [13], wat suggereert een belangrijke rol CDH1
in zowel de histotypes. Toch is de exacte prevalentie van CDH1
kiemlijn veranderingen in intestinale GC is nog onbekend. CDH1
promoter hypermethylatie is de meest voorkomende genetische tweede hit in het GC kankerverwekkende proces [14], [15]. CDH1
mutaties zijn ook geassocieerd met een verhoogde gevoeligheid voor invasieve en metastatische [16], [17] colon-, blaas-, prostaat-, borst- en gynaecologische kanker [18] - [20]. E-cadherine is een transmembraan glycoproteïne dat een rol in het handhaven epitheelweefsel architectuur door inschakeling speelt Ca ^{2 + afhankelijke cel-cel interacties [21], [22]. E-cadherine omvat een cytoplasmatisch domein, een korte transmembraandomein en vijf extracellulaire repeat cadherine-achtige domeinen (EC1-5) die exons 4-13 overspannen en bevatten sterk geconserveerd calcium-bindende regio's [23], [24] en geconserveerde cysteïnen waarschijnlijk om disulfidebruggen te vormen [25]}

in deze studie analyseerden we CDH1
kiemlijn mutaties in een reeks van opeenvolgende willekeurige GC gevallen en personen met een risico van GC.; vooral eerste graad GC-Verwanten (FDRs) en auto-metaplastische atrofische gastritis (AMAG) van de patiënten doorverwezen naar ons instituut voor gastro-intestinale symptomen en endoscopische evaluatie. Om de rol van E-cadherine, structurele, functionele en immunohistochemische analyses werden uitgevoerd in monsters met een CDH1
kiembaanmutatie verkennen. Het doel van deze studie was de prevalentie evalueren en karakteriseren CDH1
kiemlijn mutaties in een reeks opeenvolgende GC sporadische patiënten zonder de criteria van HDGC classificatie en in een geselecteerde populatie dreigen GC ontwikkeling te testen het nut ervan als een marker om het verbeteren van de vroege tumor detectie. Gegevens verkregen kunnen worden gebruikt om een ​​tool die snel en goedkoop detecteert CDH1
mutaties voornamelijk aanwezig in onze bevolking te ontwikkelen.

Resultaten

Patient karakterisering en CDH1
kiemlijn genetische screening

Klinische en histopathologische kenmerken van GC, FDR en AMAG onderwerpen worden samengevat in de tabellen 1 en 2. Onder de 59 GC-patiënten, 2 (3,4%) hebben een familiegeschiedenis van GC (S15 is de broer van S16) zonder aan de criteria voor erfelijke diffuse GC, zoals gedefinieerd door de International Gastric Cancer Linkage Consortium (IGCLC) op het moment van monstername. In onze GC serie, 5 sporadische vroege GC patiënten (≤45 jaar oud) waren aanwezig, maar geen CDH1
veranderingen werden gevonden in deze patiënten. De mediane leeftijd van de FDRs was 49 jaar (range, 28-78 jaar) en voor AMAGs 56 jaar (range, 31-72 jaar). Van de 59 GC patiënten, 16 patiënten hadden een eerstegraads familielid in de studie (16/59 FDRs). FDRs en AMAGs kwam naar onze instelling voor een gastro-enterologie bezoek en gastroscopie examen, manifesteerde ze verschillende symptomen, maar geen kanker of intestinale metaplasie /dysplasie aanwezig in deze vakken was.

CDH1
genetische screening resultaten staan ​​in tabel 3 met nieuwe en mutaties: 1 intronic (ID 5), 1 missense (ID 10) en 2 stille (ID 13 en ID18). Over het algemeen vonden we 4 varianten, die coderen voor een aminozuur (AA) substitutie (1 novel (ID10) en 3 eerder gemeld in andere populaties (ID 11, ID 12, ID 15), 1 in de 5'near gen regio en 2 mutaties in de onvertaalde (UTR) regulerende element (ID 1, ID 3, al gerapporteerd) en 6 substituties in intronic regio's (drie mutaties: ID 5, ID 9, ID 17; drie intronic polymorfe varianten: ID 4, ID 6, ID 8, waarschijnlijk zonder effect op GC cancerogenesis). geen deleties of inserties werden gevonden in het exon grenzen.

Andere wijzigingen resulteerden voorkomende polymorfismen (frequentie van ten minste 1% van de populatie) of stille mutaties die coderen voor hetzelfde aminozuur dan de oorspronkelijke streng. Geen statistisch verband werd waargenomen tussen de vier groepen patiënten getest ID 4, 6-ID of ID 19 varianten.

RefSNP (rs) nummers genetische varianten eerder gepubliceerd als identificeren evenals hun gerapporteerde frequenties (NIEHS Environmental Genome Project, Seattle, WA (URL: http://evs.gs.washington.edu/niehsExome/Betreden augustus 2013); ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/phase1/analysis_results/paper/Betreden december 2012) worden gerapporteerd in Tabel 3.

Alle CDH1
varianten waren in heterozygote toestand, met uitzondering van de ID-4 en ID-19, waarbij een homozygote toestand ook is geconstateerd.

de frequentie van mutaties en varianten werden berekend bij patiënten zonder GC of de ziekte van AMAG (52BDs + 59FDRs, n = 111). Zestien FDRs waren eerstegraads familieleden van onze GC-serie; wanneer een van de variant die in GC en de bijbehorende geval FDR was uitgesloten we de FDR individu van de frequentie berekenen. ID4 bijvoorbeeld, was aanwezig in 5 FDRs betrekking tot onze GC van de serie; dus de controle bevolking frequentie gewijzigd van in totaal 111-106 personen (7FDRs + 8BDs /106; 14,5%). Figuur 1 illustreert sequentie chromatogrammen van de nieuwe mutaties die we hebben gevonden. We hebben eerder gemeld de ID 10 chromatogram in een ander document [26].

Bioinformatic voorspellende rol en structurele modellering resultaten van missense varianten gevonden

De missense gemuteerde resten vonden we allemaal gelokaliseerd in de E -cadherin extracellulaire domein. De codon positie in de onrijpe en rijpe (na het N-eindstandige splitsing) eiwitten en gegevens van de PolyPhen-2 en SIFT in silico
analyses zijn weergegeven in tabel 4. Alle vier missense varianten zijn mogelijk schadelijk door PolyPhen -2, maar alleen de p.A298T (ID 11) en p.A592T (ID 15) substituties eiwitfunctie door SIFT analyse (Tabel 4) beïnvloeden. De p.G274S (ID 10) die wij onlangs beschreven [26], echter niet verstoren de lokale omgeving, maar introduceert een potentieel residu voor fosforylering en glycosylering die mogelijke effecten op de stabiliteit en integriteit van E-cadherine als we vermoedelijk hypothese [26]. De pathogene effect van ID 11 substitutie werd eerder opgericht [27], maar werd hier voor het eerst aangetoond door structurele analyse. Zoals geïllustreerd in figuur 2A, wordt het AA verandering in exon 7 van het p.A298T (ID 11) nabij het interactieve gebied tussen protomeren EC1 en EC2. Aldus kan de alanine threonine-polaire rest substitutie vorming H-binding schijf via de oxydrilic groep en kan interfereren met de plaatselijke structuur van het eiwit in een gebied dat fundamenteel is voor Ca ^{2+ interacties. Threonine op positie 144 sterisch aangetoond opvallend omdat het een wisselwerking met twee asparaginezuurresten (Asp136 en Asp 138) die rechtstreeks betrokken zijn bij Ca 2+ binding. Bovendien worden de bindingslengten bijzonder gewezen, minder dan 3 A (figuur 2B).}

Wat betreft de overige twee missense mutaties hebben ze een minder duidelijke functionele effect als ook in tabel 4 p. T470I (ID 12) substitutie [28] verandert de AA oppervlak van extradomain EC3 in het rijpe eiwit (figuur 2C). Zowel de murine E-cadherine en N-cadherine sequentie (PDB code: 3Q2W) threonine is meestal O
-glycosylated suggereert een belangrijke rol voor dit residu in de structuur van het eiwit. Echter, zoals getoond in figuur 2D, de wijziging isoleucine, een niet-polair AA met een hydrofobe zijketen die niet post-translationele modificatie kunnen ondergaan, stelt geen bijzondere intermoleculaire spanning. We veronderstellen dat in het extracellulaire medium, de aanwezigheid van een isoleucinerest op dezelfde positie kan dan threonine proteïne-proteïne interacties bevorderen en deze mutatie kan dus aannemen beschermende betekenis. Laatst gerapporteerde mutatie p.A592T (ID 15), werd in alle groepen getest (zie tabel 3), hetgeen een onwaarschijnlijke effect van GC pathogenese. In dit geval, Alanine op extradomain EC4 van het rijpe E-cadherine (Figuur 2E) verschaft conformationele vrijheid, zelfs wanneer in de nabijheid van de Ca ^{2+ bindingsplaatsen. Een threonine substitutie hier een beperkt effect op de lokale structuur en torsiebelasting hoeken van het eiwit. Maar we kunnen niet uitsluiten dat de oxydrilic laterale keten post-translationeel kunnen worden bewerkt in specifieke situatie en dus van invloed op de structuur en functie van de CDH1
(figuur 2F).}

Transcript analyse van intronic kiemlijnmutaties

Om staand intron of mutaties gedetecteerd in onze GC serie (Tabel 3) potentieel de splicing kunnen teweegbrengen, voerden we CDH1
transcriptie analyse. Polymorfe en stille varianten werden uitgesloten van deze analyse, omdat zij hebben waarschijnlijk geen pathogene rol. cDNA verkregen uit perifeer bloed van de geselecteerde GC personen herbergen intronic ID 5, ID 9 of ID 17 mutaties (Tabel 3) werden vergeleken met die van twee gezonde bloeddonoren, slechts met hetzelfde ID 17 mutatie GC patiënten (BD code S190 ), en een andere (BD-code S189) zonder CDH1
mutatie.

voor de ID 5 en ID-7 intronic mutaties, we versterkt de regio die een deel van exon 1 om een ​​deel van exon 5, IO 17 mutatie, exon 10 tot 13 (figuur 3). De RT-PCR exon 1-5 fragmenten verschilden niet indien uitgevoerd op 4% agarosegel (Figuur 3A) of na bidirectionele sequentiebepaling (gegevens niet zien); van Converse ID 17 intronic variant van invloed kunnen zijn splicing leidt tot een abnormale kleinere CDH1
transcript (Figuur 3B). Na isolatie en sequencing, vonden we dat de kleinere band tot een overgeslagen transcript ontbreekt exon 11, met exon 10 direct verbonden met exon 12. Deze afwijkende transcript werd ook gedetecteerd in de BD S190 waaraan dezelfde kiemlijn substitutie (Figuur 3B).

Analyse van de CDH1
eiwit overvloed en mRNA expressie niveau bij proefpersonen tonen CDH1
intronic mutaties

Een vergelijking van E-cadherine mRNA expressie niveau werd uitgevoerd vanaf EBV geïmmortaliseerde lymfocyten van het perifere bloed van S10 en S190 (mutatie ID 17), S97 (ID 9) en S189 (zonder CDH1
mutaties) onderwerpen. Betreft S10 werd beïnvloed door maagkanker, onderworpen S97 is eerstegraads familielid van een patiënt met maagkanker (FDR), terwijl S189 en S190 beiden bloeddonoren. We waargenomen tussen de controle bloeddonor (S189) zonder CDH1
mutatie en patiënten een relatief sterke vermindering van E-cadherine (ongeveer 60%, figuur 4) in patiënten met beide S10 ID 17 mutatie en een GC, terwijl slechts ongeveer 2% vermindering van de bloeddonor S190 met dezelfde ID 17 mutatie ( p
< 0,05, ten opzichte van GC S10). Voor S97 (mutatie ID 9, FDR subject), namen wij een soortgelijke E-cadherine als die van de controlegroep S189.

Immunohistochemische analyse van de tumor maagweefsel van intron ID 17 case (patiëntcode S10 figuur 5E) vertoonde een verminderde expressie van membraangebonden E-cadherine in de zegelring tumorcellen (zwarte pijlen), terwijl zowel membraan en cytoplasmatische kleuring aanwezig in de normale epitheel waren. Dezelfde patiënt vertoonden verminderde β-catenine kleuring in de zegelring cellen in vergelijking met de sterke expressie van dit eiwit in de normale aangrenzende cellen (figuur 5H). Het verlies van zowel E-cadherine en β-catenine kleuring was ook merkbaar voor de tweede patiënt (S46) met dezelfde intronic ID 17 mutatie en die door GC ook (Figuur 5F en 5I, respectievelijk E-cadherine en β-catenine) .

Discussie

GC patiënten hebben meestal een slechte prognose [29]. Identificatie van patiënten met een verhoogd risico GC en de vroegtijdige detectie van GC zijn veelbelovende benaderingen van de morbiditeit en mortaliteit van GC verminderen. FDR GC patiënten is bekend dat ze een 2-3 maal verhoogd risico GC hebben, waarschijnlijk als gevolg van blootstelling aan hetzelfde omgevingsrisicofactoren en /of erfelijke vatbaarheid voor kanker [30].

De pariëtale cellen vernietigen AMAG in combinatie met de belangrijke rol van E-cadherine in epitheliale polariteit en glandulaire maag architectuur, stelt kiemlijn veranderingen van CDH1
een extra risicofactor voor GC ontwikkeling AMAG patiënten [31] kan zijn.

In 1998, Guilford en collega's beschreven voor de eerste keer kiembaanmutaties van de CDH1
gen [28]. Vervolgens zijn verschillende soorten mutaties gerapporteerd in families van verschillende etnische groepen met diffuse GC [32], [33]. De eerste CDH1
kiembaanmutatie werd in een Italiaanse familie beschreven in 2006, bij een patiënt die IGCLC criteria voldaan voor HDGC [34]. Echter zeer weinig studies rapporteren CDH1
kiemlijn mutaties in sporadische GC gevallen zonder familiale aggregatie of bij patiënten met een risico op het ontwikkelen van GC [35], [36]. Bovendien is in deze studies de functionele gevolgen van de CDH1
vaak niet varianten onderzocht.

De kracht van onze studie is de verzameling van 59 blanke patiënten met sporadische GC, 59 FDRs en 20 AMAGs die bijgewoond onze gastro-enterologie service in de afgelopen jaren voor de maag symptomen en een diagnose of uitsluiting van een GC na endoscopische en histologische evaluatie weefsel.

Zoals samengevat in Tabel 3, verschillende kiembaan CDH1
varianten waargenomen. In de 59 GC-serie, met uitzondering van de polymorfe en stil veranderingen die waarschijnlijk geen pathogene rol, vonden we 6 verschillende substituties in 9 patiënten (9/59 GC = 15,2%): 4 van het type missense (ID 10, ID 11, ID 12, ID 15) in 4 verschillende patiënten (6,8%) en 2 van niet-missense type (ID 2 en ID-17) in 5 verschillende GC (3,4%).

De ID-10 (p.G274S) is een roman missense mutatie die we gevonden in een oude man met een GC gemengde histotype. Deze variant is niet in 187 vrije-kanker individuen gedetecteerd (108BDs + 59FDRs + 20AMAGs) dus exclusief een polymorfisme. Een pathogene effect van ID 10 mutatie werd niet ondersteund na functioneel (aggregatie en invasie) in vitro
testen zoals we onlangs gemeld [26], toch gegevens van in silico
karakterisering van de mutatie en vermindering van β-catenine expressie in het tumorweefsel kan niet volledig de betekenis van deze mutatie in GC ontwikkeling sluiten. Zo op vandaag ID 10 blijft een roman CDH1
mutatie met een pathogenese van onbepaalde betekenis.

De ID-11 (p.A298T) substitutie in exon 7 van CDH1
heeft al in een 36-jarige jonge blanke man is beschreven in een gezin HDGC [27]. In onze reeks, werd deze variant alleen gedetecteerd in 1 mannelijke (S47) van 74 jaar oud met een gemengde histotype. Het potentieel pathogene effect van deze mutatie is bevestigd door middel van In vitro
functionele studies in verschillende laboratoria [27], [37], [38]. Hier eerste modelresultaten (figuur 2A-B) door het analyseren 3D eiwit-ligand binding interacties sterk ondersteunen het potentieel voor veranderde eiwitfunctie en leiden tot de mogelijke moleculaire mechanisme dat dit proces ondersteunen. Het potentieel veranderde eiwit functie werd ook ondersteund SIFT analyse (Tabel 4) met een goede score. Bovendien heeft een recente studie, met behulp van de in silico
eiwit ontwerp FoldX algoritmische aanpak [39], bevestigt de pathogene rol van de ID-11 (p.A298T) substitutie, gebaseerd op een berekening van native-state stabiliteit veranderingen (AAG > 0,08 kcal /mol) [40]. Auteurs gekenmerkt patiënten herbergen deze missense mutatie als het hebben van een jongere leeftijd bij diagnose en een diffuse histotype. Ons geval benadrukt dat ID 11 ook kan worden gedetecteerd in een oude patiënt met gemengde GC.

De ID-12 (p.T470I) werd gevonden in een 57-jarige man (S39) met een diagnose van GC . Deze verandering werd voor het eerst beschreven in een familie van Maori afkomst met EOGC, maar het onderwerp waarop deze mutatie werd niet beïnvloed door GC op het moment van de studie [28]. Hier, vonden we dat de p.T470I AA verandering wordt getolereerd door SIFT en ook door het modelleren analyse. Helaas, de tumor bioptische weefselmonster was onvoldoende om E-cadherine IHC kleuring uit te voeren.

De ID-15 substitutie (p.A592T) werd gedetecteerd in elk klinisch geteste groep, wat wijst op een waarschijnlijke polymorfe diffusie. Niettemin, deze variant is eerder beschreven in verband met schildkliertumoren en lobulaire borstkankers [41] - [43]. Onze structurele analyse en in vitro
[35] en in silico
studies [38], [40] geen ondersteuning voor een pathogene rol voor deze variant in GC.

zoals aanbevolen door de recente klinische richtlijnen beheer [44], endoscopie toezicht moet worden uitgevoerd jaarlijks in die individuen met mutaties van onbepaalde betekenis (bijv missense). Naar onze mening, onderwerpen herbergen ID 15 en ook ID 10, moeten worden gevolgd voor maximaal 10 jaar voor het uitsluiten van een rol, hoewel zwak voor deze verandering in de pathogenese van GC.

In de ID 2 identificeerden we een C -to-G verandering voor de start codon (-71C > G, CDH1
5'UTR regio), dat de meest voorkomende variant geassocieerd met GC in onze serie vertegenwoordigd, die zich in drie van de 59 GC patiënten ( 5,1%). Deze variant is ook gemeld in een Finse studie [45] in 1 of 13 (7,7%) GC patiënten en 2 van 51 controles (3,9%), en ook twee EOGC patiënten van Noord-Amerikaanse oorsprong (3,4%) [46] . Over het algemeen gegevens uit deze studies suggereren dat ID 2 is een vrij algemeen mutatie, maar de auteurs hebben geen gegevens over de ID 2 variant rapporteren ten opzichte van de E-cadherine-expressie status. ID 2 werd gevonden in onze reeks in een darm, een gemengd en een diffuse GC histotypes. Al deze patiënten hadden meer dan 50 jaar bij diagnose en waren negatief voor HP-infectie. Geen van de controlegroep (n = 111) getest zonder GC toonde deze mutatie (Tabel 3). Een in situ
evaluatie of een correlatie tussen ID 2 en E-cadherine-expressie kon worden uitgevoerd vanwege een gebrek aan tumormateriaal. Het potentieel pathogene effect van deze promotor variant van E-cadherine niveau verdient verdere studies

intronic ID 17 variant (IVS12 c.1937-13T > C). Werd gevonden in 2 vrouwen met GC (2/59 GC's = 3,4%) zowel positief voor HP-infectie, en het werd ook gevonden in 1 BD (1/52 = 1,9%, Tabel 3). Dezelfde wijziging werd eerder gemeld in lobulair borstkanker met een hoge frequentie (12/53 = 23%) [47], in HDGC gezinnen (2/27 = 7,4%) [48] en in EOGC patiënten (7/79 = 8,9% ) [46], maar ook in relatieve controlepopulatie [46]. Van de nota, tonen we voor de eerste keer dat deze substitutie leidt tot een afwijkende CDH1
transcript herbergen een deletie van de CDH1
exon 11. Exon 11, samen met de partiële sequenties van de flankerende exonen , coderend voor de EC4 domein van het rijpe eiwit [25]; ID 17 is een uit-raamwerk deletie en leidt tot de vorming van een stopcodon op positie 384 van de EC4 promoter. Bijgevolg het vertaalde eiwit van CDH1
ID 17 streng kan het transmembraandomein en het cytoplasmische staart die betrokken is bij β-catenine binding ontbreekt. Zowel S10 en S46 GC patiënten met de ID 17 mutatie, een daling in de expressie van E-cadherine en β-catenine door IHC analyse (figuur 5); de GC S10 patiënt, met een zegelring cell carcinoma, werd gediagnosticeerd op de leeftijd van 61 jaar, en de GC S46 patiënt, met een diffuse adenocarcinoom, werd gediagnosticeerd op de leeftijd van 58 jaar. Bovendien evaluatie van E-cadherine-expressie van EBV geïmmortaliseerde B-lymfocyten vertoonden een sterke reductie (60%) in GC S10 herbergen ID 17 mutaties vergeleken met de BD besturing (S189) zonder CDH1
veranderingen, maar ook in vergelijking met een bloeddonor (S190) waaraan dezelfde ID 17 variant. Aangezien alle onderwerpen die de ID 17 mutatie heterozygoot voor CDH1
gen, onze gegevens blijkt dat de individuele S190, maar niet tumorcellen van S10 en S46 patiënten, kunnen sommige compensatieregeling dat de E-cadherine tegengaat benutten down-regulatie. In tumoren wordt E-cadherine onderexpressie gekoppeld aan verbeterde β-catenine transcriptionele activiteit een belangrijke effector van de Wnt pathway [49]. De expressie van een groot aantal genen betrokken bij tumorprogressie, waaronder die voor cycline D1, c- myc
, vasculaire endotheliale groeifactor, en survivine wordt via de Wnt /β-catenine pathway [50]. E-cadherine binding aan P-catenine voorkomt zijn translocatie naar de kern; Zo kan een verlaging van E-cadherine GC pathogenese door meer nucleaire β-catenine accumulatie bevorderen. Aangezien patiënten S10 en S46 met ID17 variant worden zowel vrouwen met een helicobacter pylori (HP) infectie, nemen we aan dat ID 17 kan worden geassocieerd met een sex-specifieke prognostische factor (het is bekend dat de incidentie van GC is hoger voor mannen dan voor vrouwen) en /of een HP infectie. Een deletie van exon 11 in de CDH1
gen werd ook beschreven in een HDGC patiënt, maar in dit laatste geval afwijkende splitsing was geassocieerd met een ander intron mutatie (IVS11 c.1711 + 5G > A) [27] . Intrigerend een alternatief gesplitste en niet-functionele E-cadherine transcript dat exon 11 van het gen mist was ook gemeld in sommige hoofd en hals kanker cellen [51] en chronische lymfocytische leukemie gevallen (CLL) en hoewel op een lager niveau ten opzichte van CLL, ook in normale B-cellen [52]. In deze gevallen geen genetische veranderingen in exon 11 of in de flankerende intronic regio's werden waargenomen; de niet-functionele transcriptie een voortijdige terminatiecodon en wordt afgebroken door de nonsense-mediated RNA afbraak [52]. Splitsingsfactoren bindende regio van exon 11 CDH1
kan veranderd expressieniveaus of toestanden van activering in CLL-cellen in vergelijking met normale B-cellen zoals onlangs aangetoond hebben [53].

in de FDR groep proefpersonen, met uitsluiting van polymorfe en stille CDH1
mutaties, zagen we 3 vervangingen (ID 1, ID3 en ID-9), die niet werden gevonden in GC.

de ID 1 (5'near gen-176C > T) variant werd ontdekt in een 32-jarige vrouw met een onbekende HP infectiestatus. Deze variant werd al in de populaire databases ingediend, maar de betekenis ervan is niet bekend

De ID-3 (5 'UTR-54G > C). Variant werd gevonden in een 72-jarige man positief voor HP-infectie. Van belang was deze mutatie reeds gedetecteerd in een gezonde 41-jaar-oude Japanse onderworpen, zonder klinisch waarneembare tumor ten tijde van de inschrijving, en beschreven als een zeldzame variant kan de transcriptionele activiteit van CDH1
[54]. We veronderstellen dat deze mutatie door introductie van een CpG eiland in de CDH1
promotorgebied verhoogt de kans CDH1
hypermethylatie, een bekende gebeurtenis bevorderen van de transcriptionele inactivatie, een vroege gebeurtenis in HP gastritis [ ,,,0],55] en een belangrijke risicofactor geassocieerd met GC ontwikkeling

De ID-9 (intronic IVS4 c.532-18C > T). werd gevonden in een 41-jarige man onderwerp negatief voor HP-infectie. ID9 werd voor het eerst in twee EOGC patiënten uit Engeland en Portugal respectievelijk [56], in twee HDGC Duitse patiënten en bij 1 controlesubject ingeschreven in dezelfde studie [35]. Onlangs, een niet pathogene rol voor deze variant is voorgesteld [2]. We hadden geen invloed op de CDH1
splicing opmerken.

AMAG patiënten hebben een 3-voudig verhoogd relatief risico op het ontwikkelen van GC en zijn nooit onderzocht voor CDH1
kiembaanmutaties tot nu. In AMAG series vonden we alleen polymorfe varianten uitgezonderd ID 5, een nieuwe intronische mutatie dichtbij 1 (, T IVS1 c.48 + 7C >) exon. ID 5 werd gevonden in een vrouwtje van 51 jaar oud met hypergastrinemia. Er werden geen afknottingen of leesraamverschuiving vinden in de productie van het eiwit geassocieerd met deze mutatie. Hoewel deze serie is beperkt (n = 20), deze gegevens lijkt niet een relevante rol CDH1
genetische veranderingen bij de ziekte AMAG ondersteunen.

Samenvattend tonen onze resultaten dat de put bekende pathogene ID 11 mutatie (p.A298T) kan ook worden gedetecteerd in sporadische GC patiënten zonder te voldoen aan de strikte criteria voor HDGC. Verder hebben we aangetoond dat een schadelijke werking van ID-17 variant (IVS12 c.1937-13T > C) op de CDH1
splicing en een daarmee samenhangende afname van de E-cadherine en ook voor β-catenine. Dezelfde ID 17 mutatie en splicing effect gevonden in 1 bloeddonor, maar met een beperkt effect op de E-cadherine mRNA-niveau, is intrigerend en verdient verdere studies. Aangezien de correlatie tussen specifieke CDH1
kiemlijn wijzigingen en tumor histotype, we vonden dat 8,3% (1 van 12 GC) of gemengde (ID11) en 7,7% (2 van 26 GC) diffuse (ID17) subtypen , droeg een potentieel pathogene mutatie

tot slot, in een FDR individuele risico voor GC, vonden we de ID-3-variant (5 'UTR-54G > C). met een potentiële effect van het verhogen van de status van hypermethylering CDH1
, een bekend risico gebeurtenis verbonden met GC ontwikkeling en progressie.

Noord-Oosten van Italië presenteert hoge GC incidentie en sterfte, hoewel lager ten opzichte van de centrale regio's, zoals Toscane en Marche [57] . Onze bevindingen tonen prevalentie in missense CDH1
vervangingen versus niet-missense veranderingen, zoals gerapporteerd in een recente metanalysis voor midden-hoog GC risico gebieden, zoals de Midden-Italië [58].

• PLoS ONE: kwantitatieve meting van organische zuren in weefsels van maagkankerpatiënten Geeft Verhoogd glucose metabolisme in Gastric Cancer
• PLoS ONE: beschermende rol van Helicobacter pylori infectie in Prognose van maagkanker: Bewijs uit 2454 Patiënten met een Gastric Cancer