PLOS ONE: Impacto de los niveles de expresión intratumoral de fluoropirimidinas enzimas metabolizadoras sobre los resultados del tratamiento adyuvante del S-1 en Terapia gástrico Cancer

Extracto

Se analizaron los niveles de expresión de las enzimas que metabolizan fluoropirimidina (timidilato sintasa [TS ], dihidropirimidina deshidrogenasa [DPD], la timidina fosforilasa [TP] y orotato fosforribosiltransferasa [OPRT]) para identificar potenciales biomarcadores relacionados con los resultados del tratamiento en el cáncer gástrico (CG) de los pacientes que recibieron quimioterapia adyuvante S-1 quimioterapia. En este estudio, se incluyeron 184 pacientes que recibieron la gastrectomía curativa (D2 disección de ganglios linfáticos) y adyuvante S-1. La inmunohistoquímica y la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa cuantitativa se realizaron para medir la proteína y los niveles de mRNA del TS, DPD, TP, y OPRT en el tejido tumoral. En el análisis univariante, la expresión de proteínas DPD intratumoral baja estaba relacionada con la supervivencia libre de enfermedad a los 5 años más pobre (DFS; 78% vs. 88%, p = 0,068). Bajo la expresión intratumoral DPD ARNm (1ª [más bajo] cuartil) también se relacionó con una menor DFS (69% vs. 90%, p < 0,001) en comparación con la expresión intratumoral DPD alta (del 2 al 4 cuartiles). En el análisis multivariado, la proteína o ARNm baja expresión intratumoral DPD se relacionó con peor DFS (P < 0,05), independientemente de otras variables clínicas. TS, TP, y la expresión OPRT niveles no estaban relacionados con los resultados del tratamiento. Las toxicidades no hematológicas graves (grado ≥ 3) tenían una tendencia hacia un desarrollo más frecuente en pacientes con baja expresión intratumoral DPD ARNm (29% vs. 16%, p = 0,068). En conclusión, los pacientes con alta expresión de GC DPD intratumoral no tuvieron un resultado inferior tras la terapia adyuvante S-1 en comparación con aquellos con baja expresión de DPD. En lugar de ello, una baja expresión de DPD intratumoral fue relacionada con la mala DFS

Visto:. Kim J-Y, Shin E, Kim JW, Lee SA, Lee D-W, Kim S-H, et al. (2015) Impacto de niveles de expresión intratumoral de fluoropirimidinas enzimas metabolizadoras sobre los resultados del tratamiento adyuvante del S-1 terapia en el cáncer gástrico. PLoS ONE 10 (3): e0120324. doi: 10.1371 /journal.pone.0120324

Editor Académico: Qing Yi-Wei, el Instituto del Cáncer de Duke, Estados Unidos |

Recibido: 13 Noviembre 2014; Aceptado: 20 de enero de 2015; Publicado: 20 Marzo 2015

Derechos de Autor © 2015 Kim et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos de la licencia Creative Commons Attribution License, que permite el uso ilimitado, distribución y reproducción en cualquier medio, siempre que el autor original y la fuente se acreditan

Disponibilidad de datos: Todos los datos relevantes están dentro del papel

Financiación:. Este estudio fue parcialmente apoyado por becas de investigación de la Universidad Nacional de Seúl Bundang Fondo de investigación del hospital (02-2014-019) y Jeil Pharmaceutical Company (Seúl, Corea). Los donantes no tenía papel en el diseño del estudio, la recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito

Conflicto de intereses:. Este estudio fue financiado en parte por Jeil Pharmaceutical Company bajo la forma de financiación de la investigación a Keun -Wook Lee. Los otros autores no han reportado ningún conflicto de intereses. No hay patentes, productos en desarrollo, o los productos comercializados que declarar. Esto no altera la adhesión de los autores a todas las políticas de PLoS ONE sobre los datos y compartir materiales, como se detalla en línea en la guía para los autores.

Introducción

El cáncer gástrico (CG) es el quinto cáncer común más y la tercera causa principal de muerte por cáncer en todo el mundo. Aproximadamente la mitad de los casos se producen en Asia Oriental [1]. La cirugía es el tratamiento de elección en GC localizada, y la disección D2 se considera el enfoque estándar. A pesar de la disección D2, la recidiva se observa en más de 40% de los pacientes con GC etapa avanzada después de cirugía sola [2, 3]. Recientemente, dos estudios prospectivos mostraron que la quimioterapia adyuvante para GC resecado es eficaz en la reducción de la tasa de recurrencia [2, 3].

S-1 es un agente oral que contiene tegafur (un profármaco de fluorouracilo), gimeracilo (una inhibidor de dihidropirimidina deshidrogenasa [DPD]), y oxonato de potasio (un inhibidor de la 5-fluorouracilo [5-FU] en el tracto gastrointestinal) [4]. La quimioterapia adyuvante de prueba de TS-1 para el cáncer gástrico (ACTS-GC) reveló que el adyuvante S-1 por 1 año la quimioterapia reduce la recurrencia del tumor en pacientes con resección curativa GC [3]; la tasa de supervivencia libre de enfermedad a los 5 años fue del 65,4% en el adyuvante grupo S-1 y 53,1% en el grupo de cirugía sola (hazard ratio [HR], 0,653; 95% intervalo de confianza [IC], 0,537-0,793). Sobre la base de esos resultados, adyuvante S-1 de la quimioterapia está actualmente ampliamente utilizado para la prevención de la recaída de GC en los países de Asia oriental [5-7].

La timidilato sintasa (TS), la timidina fosforilasa (TP), orotato fosforribosiltransferasa (OPRT ), y la DPD están relacionados con el metabolismo fluoropirimidina. Varios estudios sugieren que los niveles de expresión de estas enzimas metabolizadoras de fluoropirimidina tienen asociaciones con los resultados de supervivencia en pacientes que reciben GC metastásicos paliativos quimioterapia basada en S-1 [8-10]. Sin embargo, estos estudios mostraron resultados inconsistentes sobre el valor predictivo de estas enzimas en la quimioterapia paliativa basada en la S-1, que puede ser debido al pequeño número de pacientes y las diferencias en la S-1 que contiene los regímenes usados ​​entre los estudios. Hasta el momento, los estudios sobre la relación entre los niveles de expresión de las enzimas que metabolizan fluoropirimidina y los resultados del tratamiento adyuvante S-1 en GC han sido escasos. Por lo tanto, se analizaron los perfiles de proteínas y de expresión de ARNm de las enzimas que metabolizan fluoropirimidina (TS, DPD, TP y OPRT) para identificar marcadores relacionados con los resultados del tratamiento adyuvante de S-1 quimioterapia en pacientes con GC.

Materiales y Métodos

población de pacientes

el uso de un cáncer de GC cohorte de pacientes que se mantuvo de forma prospectiva en el hospital de la Universidad Nacional de Seúl Bundang [5, 6], este estudio fue diseñado de forma retrospectiva. En la cohorte prospectiva, todos los pacientes fueron sometidos a una gastrectomía curativa con la disección D2 y fueron tratados con adyuvante S-1 quimioterapia. Los pacientes cumplieron los siguientes criterios: elegibles histológicamente confirmado unión gastroesofágica o adenocarcinoma gástrico; estadio patológico II-III usando el Comité Conjunto sobre el Cáncer (AJCC, 7 ^{ª edición); Cooperative Oncology Group Este (ECOG) estado funcional (PS) 0-2; y hueso adecuado ósea, renal, y de la función hepática. Dos pacientes con estadio IB y los factores de riesgo adicionales (es decir, N2 metástasis de ganglios linfáticos por clasificación por estadios japonesa [11]) también fueron incluidos.}

Los pacientes que se sometieron a gastrectomía entre noviembre de 2006 y septiembre de 2010 se inscribieron (N = 184 ). Para este estudio, se han recibido los consentimientos informados por escrito de los pacientes para el uso de tejidos tumorales archivados y los datos clínicos. La Junta Institucional del Hospital Bundang Universidad Nacional de Seúl Revisión aprobó el estudio. (IRB número: B-1205 /154-006)

El tratamiento y la toxicidad evaluación

S-1 se administra por vía oral durante 4 semanas, seguido por 2 semanas de descanso. La duración del tratamiento S-1 fue planeado para ser 1 año si no había evidencia de recurrencia del tumor, los eventos adversos inaceptables, o rechazo del paciente. La dosis inicial y la modificación de S-1 de dosis durante el tratamiento se determinaron como en los informes anteriores [5, 6]. La toxicidad fue clasificado de acuerdo a los criterios del National Cancer Institute de toxicidad común (versión 3.0).

La intensidad de la dosis (DI) se define como la relación del total de la dosis S-1 por metro cuadrado del paciente, dividido por el S-1 duración total del tratamiento. La intensidad de la dosis relativa (RDI) se calcula dividiendo el DI recibida por el DI planeado.

La inmunohistoquímica (IHC)

Se han revisado previamente teñidos hematoxilina y eosina diapositivas, y un representante fijado en formol embebido en parafina fue seleccionado (FFPE) de bloque de archivo. bloques de la matriz de tejido se prepararon como se describe en nuestro estudio anterior (SuperBiochips laboratorios, Seúl, Corea) [8]. Se utilizaron los siguientes anticuerpos primarios: TS anti-humanos (clon TS106; monoclonal de ratón; Thermo científica; 1:70 dilución), OPRT anti-humano (clon 2F5; monoclonal de ratón; Abnova; dilución 1: 1000), TP anti-humana (. clon P-GF 44C; monoclonal de ratón; Thermo científica; 1: 500 dilución), y DPD anti-humano (clon ERP8811; monoclonal de conejo; Abcam; 1: 500 dilución). la unión del anticuerpo se detectó utilizando la avidina-biotina-peroxidasa (Universal Elite ABC kit PK-6200; Vectastain, Burlingame, CA, EE.UU.) durante 10 minutos y la solución de diaminobenzidina tetrahidrocloruro (Kit de HK 153-5K; BioGenex, San Ramon, CA, ESTADOS UNIDOS). Las secciones se contratiñeron con 0,1% hematoxilina, se deshidrataron y se montaron. La tinción fue examinado por dos investigadores independientes que desconocían el resultado clínico. intensidad de la tinción se midieron semi-cuantitativamente a una magnificación de 200 × y se clasifican como negativos (puntuación = 0), débil (puntuación = 1), moderada (puntuación = 2), o fuerte (puntuación = 3). También se evaluó el porcentaje de células inmunorreactivas. La puntuación de IHC se calculó como sigue:. La puntuación de la intensidad de la tinción se multiplica por el porcentaje de la superficie manchada de la muestra de tumor

RT-PCR cuantitativa (QRT-PCR)

La los niveles de expresión de mRNA de los genes se cuantificaron mediante qRT-PCR. ARN (500 ng) a partir de tejidos FFPE se sometió a síntesis de ADNc usando el amfiRivert Platinum cDNA Synthesis Master Mix (GenDEPOT). Siete genes (cuatro genes de la ruta de fluoropirimidina y tres genes de referencia) fueron pre-amplificada a una dilución final de 0,05 × concentración de ensayo Taqman originales (Applied Biosystems por Life Technologies). Las condiciones termo-ciclación fueron como sigue: 1 ciclo de 95 ° C (10 min), seguido por 14 ciclos de 95 ° C (15 s) y 60 ° C (4 min). Después de la amplificación diana, las muestras se diluyeron 1: 5 con tampón de suspensión de ADN y, a continuación qPCR se llevó a cabo en Fluidigm 48,48 matrices dinámicas utilizando el sistema de BioMark HD de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las muestras se realizaron por triplicado. Tres genes de referencia (ACTB, GAPDH, y FTL) se utilizaron para la normalización de los datos de expresión génica. Se seleccionaron los genes de referencia dada por la baja variabilidad de expresión en nuestros datos de microarrays anteriores (datos no mostrados). Para la normalización de los datos de QRT-PCR, la media de los valores de ciclo umbral (Ct) se convirtieron en valores relativos de expresión (-ΔCt) restando la media de los genes de referencia, donde cada unidad refleja un aumento de 2 veces en la expresión. Las sondas utilizadas fueron las siguientes: TS (Hs00426586_m1), OPRT (Hs00923517_m1), TP (Hs01034319_g1), DPD (Hs00559279_m1), ACTB (Hs01060665_g1), GAPDH (Hs02758991_g1) y FTL (Hs00830226_gH); Información más detallada se encuentra disponible en http://www.appliedbiosystems.com (Applied Biosystems por Life Technologies).

El análisis estadístico

Las diferencias en las características clínicas se compararon mediante X2-pruebas, t
-pruebas, o la u de Mann-Whitney T
prueba. X2-tests fueron utilizados en la comparación de las distribuciones de frecuencia de toxicidades relacionadas con el S-1 entre los diferentes grupos. supervivencia libre de enfermedad (DFS) se calculó a partir de la fecha de la cirugía para el momento de la primera recurrencia o muerte por cualquier causa. La supervivencia global (OS) se define como el intervalo de la cirugía a la muerte por cualquier causa. El método de Kaplan-Meier se utilizó para analizar la SSE ni en la SG. Univariante y multivariante sobre la SSE o la SG se realizaron utilizando el log-rank pruebas y pruebas de regresión de riesgos proporcionales de Cox, respectivamente. Los valores de p de dos caras de < 0,05 se consideraron significativos. Todos los análisis se realizaron utilizando datos de IBM SPSS Statistics 21 para Windows (IBM Corp., Armonk, Nueva York, EE.UU.).

Resultados

características y entrega de S-1 de la quimioterapia de los pacientes

las características basales de los 184 pacientes se muestran en la Tabla 1. La mediana de edad fue de 57 años (rango, 30-79 años). gastrectomía laparoscópica se realizó en 50% de los pacientes, y la proporción de pacientes con enfermedad en estadio III fue del 55%. La duración mediana de seguimiento fue de 47,0 meses (rango, 3.5-81.8 meses). Durante el seguimiento, la recurrencia del tumor y la muerte fueron confirmados en 29 (16%) y 22 (12%) casos, respectivamente. Cinco años DFS y OS bajas en todos los pacientes fueron del 83% (Fig. 1 (A)) y el 87%, respectivamente. Como la duración del seguimiento no fue suficiente para un análisis más detallado del sistema operativo, se realizó un análisis de supervivencia sólo para DFS. resultados DFS de acuerdo con variables clínicas se presentan en la Tabla 1, Fig. 1 (B), y S1 Fig.

planea el tratamiento de 1 año con S-1 se completó en 139 pacientes (76%), y el número medio de ciclos de quimioterapia S-1 entregados fue de 7,4 (95% CI, 7,0 a 7,8). La media y la mediana de los IID durante todos los ciclos de terapia S-1 fueron de 77% (IC del 95%, 73-81) y 88% (rango, 4-100), respectivamente. S-1 de tratamiento fue en general aceptable, y perfiles de toxicidad se presentan en la Tabla S1

Impacto de los niveles de expresión de las enzimas que metabolizan fluoropirimidina en el resultado del tratamiento:. Univariante

De los 184 pacientes, los análisis IHC tuvo éxito en 183 pacientes. Hemos establecido el valor de la mediana de los resultados de IHC para cada proteína (TS, OPRT, TP, y DPD) como el valor de corte para dividir a los pacientes en dos grupos. Mientras que los niveles de expresión de cuatro proteínas no se relacionaron significativamente con DFS (Tabla 2), bajo nivel de expresión de DPD (puntuación de IHC < 10 [valor de corte; mediana]) mostraron una tendencia a empeorar SSE a 5 años (78% vs. . 88%; P = 0,068; Fig. 2 (A)). Además, los pacientes con mayor expresión TP (puntuación de IHC > 0 [valor de corte; mediana]) tenían una tendencia a tener una duración más corta DFS que aquellos con ninguna expresión TP (78% vs. 87%, p = 0,094). Los niveles de expresión de TS y OPRT tenían ninguna asociación con los resultados DFS (P = 0,914 y 0,109, respectivamente).

pruebas de QRT-PCR se llevaron a cabo con éxito en 179 pacientes. Al igual que en las pruebas de IHC, un valor de la mediana de los niveles de expresión de mRNA de los genes individuales se fijó como valor de corte para grupos. Entre los cuatro genes, solamente el nivel de expresión mRNA DPD mostró una tendencia de tener una relación con los resultados DFS; los pacientes con expresión de ARNm inferior de DPD tenían DFS más pobres que aquellos con una mayor expresión DPD (P = 0,067; Fig. 2 (B)). los niveles de expresión de mRNA del TS, OPRT, y los genes de TP no se relacionaron con DFS (Tabla 2). A continuación, se clasificaron los niveles de mRNA expresión de DPD en cuartiles para investigar si existía una relación dosis-respuesta entre los niveles de expresión del gen DPD y los resultados de supervivencia. Curiosamente, sólo el grupo de pacientes en el cuartil más bajo de la expresión génica DPD mostró inferior DFS para otros cuartiles, pero no se observó ninguna diferencia en las tasas de SSE de entre el 2 ^{ª, 3 er y 4 º cuartiles ( Fig. 2 (C)). Por lo tanto, se clasificaron los pacientes en dos grupos que utilizan este valor de corte (1 er cuartil [más baja expresión del ARNm DPD] frente a otros cuartiles [DPD mayor expresión de ARNm incluyendo el, 3 er 2 ª, y 4 º cuartiles]) en los siguientes análisis (figura 2 (D.); Tabla 2)}

Impacto de los niveles de expresión de las enzimas que metabolizan fluoropirimidina en el resultado del tratamiento:. los análisis multivariados

Entre las variables clínicas, factores que mostraron P < 0,10 en el análisis con una variable de DFS (edad [< 60 años frente a 60-69 años frente a ≥ 70 años; p = 0,003], método quirúrgico [laparoscópica versus abierta; P = 0,082], invasión linfática [sin vs. sí; P = 0,068], invasión venosa [sin vs. sí, se incluyeron Tabla 1) en el análisis multivariado, p = 0,045], y la etapa [IB /II frente a III, p = 0,012]. Entre las proteínas o los genes relacionados con el metabolismo fluoropirimidina, aquellos con P < 0,10 en el análisis univariado para DFS también se incorporaron en el análisis multivariado (Tabla 2). Como se muestra en la Tabla 3, bajo nivel de expresión de la proteína DPD (puntuación de IHC < 10; HR, 2,32; IC del 95%, 1,08-4,96; p = 0,030) y la baja expresión del gen DPD (1 ^{er cuartil [cuartil más bajo]; HR, 3,67; IC del 95%, 1,67-8,03; p = 0,001) se relacionaron con peor DFS, independientemente de otras variables clínicas. La edad avanzada (≥ 70 años) y la etapa superior también se asociaron de forma independiente con un mal DFS.}

Relación entre el nivel de expresión de DPD y la tolerancia a la terapia S-1

Una correlación positiva entre las puntuaciones de DPD y IHC los niveles de expresión de mRNA se observó (p = 0,022), aunque los rangos de resultados de IHC en los dos grupos (1 ^{er cuartil de expresión de ARNm DPD [DPD IHC puntuación: mediana, 0; rango, 0-200] frente a otra cuartiles [DPD IHC puntuación: mediana, 10; rango, 0-300]) se superponen en una proporción considerable de casos (Fig S2) guía}

No hay diferencias en la S-1 RDI o la frecuencia de toxicidad (hematológica o no. se observaron hematológica) de tratamiento S-1 entre los pacientes con baja (< 10) y alta (≥ 10) anota DPD IHC [Tabla a en la Tabla S2]. Sin embargo, en comparación con los pacientes con niveles de DPD ARNm intratumorales superiores (2 ^{ª a 4 º cuartiles), los pacientes con los niveles de DPD de ARNm más bajos (1 cuartil st) mostró una tendencia de desarrollar severa no hematológica Las toxicidades de grado 3 (≥) con mayor frecuencia, aunque estadísticamente no significativo (29% vs. 16%, p = 0,068); Sin embargo, la incidencia de ≥ 3 toxicidades hematológicas de grado no fue diferente entre los dos grupos. Además, aunque estadísticamente insignificante, la proporción de pacientes que mantuvieron S-1 RDI ≥ valor de la mediana (87,8%) durante la quimioterapia adyuvante fue menor en los pacientes en el cuartil más bajo de la expresión de mRNA DPD que en los pacientes dentro de otros cuartiles (40% vs. 54%, p = 0,111;. Tabla B en la Tabla S2)}

Discusión

en este estudio, hemos explorado la relación entre los niveles de expresión intratumoral de enzimas que metabolizan fluoropirimidina y los resultados de supervivencia de adyuvante S quimioterapia -1. La expresión de alto DPD intratumoral no estaba relacionado con los resultados de supervivencia inferiores; en cambio, la baja expresión de DPD se asoció con DFS desfavorable en pacientes tratados con adyuvante GC-S 1therapy. Los niveles de expresión de otras enzimas no se correlacionaron con la SSE. En nuestro estudio, los niveles de expresión de las enzimas que metabolizan fluoropirimidina fueron evaluados por dos métodos, a saber, IHC y QRT-PCR.

DPD es la enzima inicial y limitante de la velocidad en el catabolismo de 5-FU. Varios estudios preclínicos han demostrado que reducen el nivel de expresión del ARNm intratumoral de DPD o actividad se asocia con una mejor respuesta a 5-FU y que un mayor nivel de DPD en las células tumorales está relacionada con la resistencia a 5-FU [12-14]. Resultados similares se han observado también en pacientes con diversos tumores sólidos, incluyendo GC [14-22]. La eficacia de la quimioterapia en pacientes fluoropirimidina GC ha demostrado ser dependiente de los niveles de expresión DPD intratumorales, ya sea en [22] configuración adyuvantes [19-21], o neoadyuvante [16-18] paliativos,.

Entre los tres componentes que comprenden S-1, gimeracilo se utiliza como un inhibidor de DPD para mantener prolongados concentraciones 5-FU en tejidos tumorales [23]. Aunque algunos estudios han informado de que la eficacia de la S-1 también se ve afectada por intratumorales niveles de expresión DPD como otras fluoropirimidinas [24, 25], la mayoría de los estudios han demostrado que el efecto de la terapia de S-1 no está influenciada por intratumoral DPD los niveles de expresión, especialmente en GC [8-10, 19, 26-29]. Los estudios previos sugirieron que S-1 es más eficaz que 5-FU o otras fluoropirimidinas en tumores con expresión de alto DPD [19, 25, 28, 29]. La relación entre la eficacia de la quimioterapia con S-1 y los niveles de expresión de las enzimas metabolizadoras de fluoropirimidina se ha investigado en GC [8-10]; Sin embargo, la mayoría de estos estudios incluyeron un pequeño número de pacientes y se llevaron a cabo en pacientes con cáncer gástrico metastásico que recibieron varios regímenes que contienen S-1-como tratamiento paliativo. Por lo tanto, los resultados anteriores no se pueden generalizar a pacientes con cáncer gástrico que se someten a cirugía curativa y adyuvante S-1 quimioterapia

En nuestro estudio, los resultados del tratamiento general de la gastrectomía D2 seguido de adyuvante S-1 de la quimioterapia fue excelente.; 5 años DFS tasas de pacientes con estadio IB /II y III fueron 91% y 77%, respectivamente (Tabla 1). Entre las cuatro enzimas analizadas (TS, DPD, OPRT, y TP), sólo el nivel de expresión de DPD se relacionó con el resultado del tratamiento de S-1. DPD proteína o sobreexpresión de ARNm no se correlacionó con DFS inferiores en los pacientes que recibieron quimioterapia adyuvante terapia GC S-1; Esta observación es consistente con los informes anteriores que S-1 es eficaz en tumores con alta DPD intratumoral [19, 25, 29, 30].

Curiosamente, en nuestra cohorte de pacientes, la expresión bajo DPD intratumoral se relacionó con peor DFS, en comparación con la expresión de alto DPD. Esta observación fue inesperado y confuso porque, hasta que finalizamos el análisis de datos de este estudio, no se había realizado ningún estudio sobre la asociación entre las enzimas y los resultados de adyuvante S-1 quimioterapia en pacientes con GC-fluoropirimidina metabolizar. Sin embargo, casi al mismo tiempo en que se informó de los resultados de este estudio en una reunión académica [31], un estudio con el mismo diseño casi con la nuestra fue reportado por los investigadores ACTOS-GC [32]. En ese estudio, los investigadores analizaron ACTOS-GC la expresión intratumoral de 4 genes (TS, DPD, OPRT y TP) en los pacientes que participaron en los actos investigados-GC y su posible papel como biomarcadores para los resultados del tratamiento. Al igual que nosotros, los investigadores ACTOS-GC también sugirieron que la baja expresión de mRNA en tumores DPD está relacionada con DFS desfavorable; entre los pacientes que habían recibido GC-1 S quimioterapia adyuvante (N = 401), los pacientes con baja expresión de ARNm DPD intratumoral tenían inferior a 5 años DFS (60,8% vs. 70,8%, p = 0,039) y OS (66,8% vs. 78,0 %; p = 0,015) que aquellos con alto nivel de expresión de DPD [32]. Por lo tanto, los estudios, tanto del grupo ACTOS-GC y nuestros investigadores llegaron a la inesperada mismo resultado de cohortes de pacientes independientes.

Como sólo los pacientes que habían recibido tratamiento S-1 fueron incluidos en este estudio, sigue siendo incierto si DPD nivel de expresión intratumoral es un marcador predictivo o pronóstico en pacientes que reciben terapia adyuvante GC S-1. Sin embargo, como el ACTOS-GC tenía el grupo control de pacientes que habían recibido cirugía sola sin quimioterapia adyuvante, los investigadores ACTOS-GC mostró que el beneficio de la terapia adyuvante S-1 se limita principalmente a pacientes con cáncer gástrico con alta expresión DPD ARNm intratumoral [ ,,,0],cirugía seguida de adyuvante S-1 la terapia contra la cirugía sola; HR en OS, (IC del 95%; ,38-,72) 0,52]; Por el contrario, en pacientes con baja expresión de DPD intratumoral, adyuvante terapia S-1 parecía tener menos beneficios [cirugía seguida de adyuvante S-1 vs. terapia cirugía sola; HR en OS, (IC del 95%, 0,56-1,28) 0,85] [32]. Por lo tanto, teniendo en cuenta los resultados del estudio de ambos investigadores ACTOS-GC y nosotros, con cautela sugieren que la expresión de ARNm DPD intratumoral podría ser un biomarcador predictivo de la eficacia del adyuvante S-1 de la quimioterapia en pacientes GC después de la gastrectomía D2. Sin embargo, nuestra sugerencia tiene que investigarse más a fondo en los futuros ensayos prospectivos.

Si el nivel de expresión intratumoral DPD es un biomarcador predictivo de adyuvante S-1 quimioterapia en pacientes con GC, las razones subyacentes por una baja expresión de DPD intratumoral confiere inferiores resultado DFS en pacientes que reciben terapia adyuvante GC S-1 requerirá una mayor investigación. En primer lugar, aunque los autores del grupo ACTOS-GC no investigaron la asociación entre los perfiles de toxicidad o IDR de S-1 y el nivel de expresión de DPD intratumoral [32], se analizaron las diferencias en las frecuencias de toxicidad y la RDI de S-1 según los niveles de expresión intratumoral DPD. No hemos podido encontrar diferencias en la toxicidad y RDI entre pacientes DPD-altos y bajos-DPD por puntuación de la IHC. Sin embargo, aunque estadísticamente no significativos, los pacientes con los niveles más bajos de ARNm intratumorales DPD (1 ^{er cuartil) mostró una tendencia a la toxicidad no hematológica más de ≥ grado 3 (29% vs. 16%, p = 0,068) y parecía tienen una menor tolerancia a la S-1 que los pacientes con niveles más altos de ARNm (DPD S2 Tabla). En un estudio anterior [5], se informó de que RDI de S-1 está relacionada con la DFS de pacientes GC que recibieron adyuvante terapia S-1 y que la causa más frecuente de reducción de la dosis de S-1 fue enterocolitis, uno de los más comunes Las toxicidades no hematológicas desarrollados durante la terapia adyuvante S-1. Aunque si los niveles de expresión de DPD se correlacionan entre las células tumorales y las células normales del huésped sigue siendo desconocido, Bertino et al. [15] informó de que la baja expresión de DPD intratumoral puede estar asociada con un aumento de la toxicidad de capecitabina en pacientes con cáncer de pulmón. Cui et al. [33] informaron de que el nivel de expresión DPD suero se asocia con el desarrollo de la toxicidad de la quimioterapia basada en S-1 en pacientes GC metastásicos. En su conjunto, la hipótesis de que los niveles de expresión intratumoral DPD siempre son representativas de los niveles generales de DPD en los tejidos normales del huésped, lo que indica que la baja expresión de DPD intratumoral puede estar relacionado con un desarrollo más frecuente de S-1 toxicidades y puede disminuir la tolerancia del paciente a S-1. Esta hipótesis podría explicar la DFS inferior en pacientes con baja expresión de DPD intratumoral, en comparación con los pacientes con alta expresión de DPD, cuando recibieron quimioterapia adyuvante S-1 quimioterapia. En segundo lugar, la alta intratumoral DPD per se
puede conferir una mayor sensibilidad a la S-1 de baja DPD intratumoral en pacientes con cáncer gástrico. Shimizu et al. informó que la tasa de respuesta fue significativamente mayor en pacientes con carcinoma gástrico metastásico escirrosos con tumores DPD-positivo que en aquellos con tumores DPD-negativos cuando son tratados con quimioterapia basada en S-1 [29]. Todas las sugerencias anteriores son generadores de hipótesis, y se requieren más estudios.}

Además, más aspectos tienen que ser estudiada posteriormente. La estandarización de los métodos de QRT-PCR y la optimización de un punto de corte para los niveles de mRNA de la DPD en las muestras tumorales FFPE deben llevarse a cabo. Los investigadores del grupo ACTOS-GC utilizan el tercil más bajo de los niveles intratumorales DPD ARNm como punto de corte [32]. En nuestro estudio, el cuartil más bajo fue utilizado como un punto de corte. Cuando llevamos a cabo otros análisis utilizando el tercil más bajo de los niveles intratumorales DPD como una línea de corte, el impacto de los niveles de expresión de DPD en la predicción de DFS seguía siendo válida en el univariante (Fig S3) y los análisis multivariantes (S3 Tabla). El punto de corte más adecuado de intratumoral niveles de expresión de mRNA de la DPD para predecir los resultados del tratamiento de la terapia adyuvante S-1 necesita ser validado en estudios futuros. Además, intratumoral DPD niveles de expresión de proteínas medidos por resultados de IHC (intensidad de la tinción multiplicado por el porcentaje de la superficie manchada) también estaban relacionadas con diferentes resultados del tratamiento en nuestro estudio. Sin embargo, en el estudio realizado por el grupo ACTOS-GC, en el que los niveles de expresión de proteínas se midieron mediante tinción única intensidad, los autores no pudieron encontrar ninguna asociación entre los resultados de IHC y los resultados del tratamiento [32]. Además, los investigadores ACTS-GC informaron que intratumorales los niveles de expresión de ARNm de TS también fueron predictivos de la eficacia del adyuvante S-1 de la quimioterapia. Sin embargo, en nuestro estudio, los niveles de expresión de TS, ya sea que se midió por IHC o QRT-PCR no estaban relacionados con los resultados de supervivencia de la terapia adyuvante S-1. Por lo tanto, estas diferentes observaciones entre los investigadores ACTOS-GC y nosotros (la utilidad de intratumorales DPD niveles de expresión de proteínas medidas por IHC y ARNm TS niveles de expresión en la predicción de los resultados del tratamiento) deben investigarse más a fondo en el futuro.

en conclusión, al recibir la terapia adyuvante S-1, los pacientes con alta expresión de GC DPD intratumoral no tuvieron resultados inferiores a aquellos con baja expresión de DPD. En lugar de ello, una baja expresión de proteína o mRNA de la DPD se relaciona con mala DFS. La administración de dosis más bajas de S-1 debido a la toxicidad podría haber conducido a este resultado inesperado trato inferior en los pacientes con bajos niveles de DPD. Los niveles de expresión de otras enzimas que metabolizan fluoropirimidina (TS, OPRT, y TP) no se relacionaron con los resultados de supervivencia del tratamiento adyuvante S-1. se justifican grandes estudios prospectivos futuros sobre biomarcadores predictivos de la eficacia del tratamiento adyuvante S-1.

Apoyo a la Información
S1 Fig. Los resultados de supervivencia de acuerdo con las etapas: (a) La supervivencia libre de enfermedad y (B) la supervivencia global
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S2 Fig. Distribución de (A) IHC resultados de DPD y niveles (B) de expresión de mRNA de la DPD gratis (C) La correlación entre los resultados de IHC y niveles de mRNA expresión de DPD
doi:.. 10.1371 /journal.pone.0120324. S002 gratis (DOCX)
S3 Fig. curvas de supervivencia libre de enfermedad de acuerdo con intratumorales niveles de expresión de mRNA de la DPD (cuando los pacientes se clasifican en terciles) guía doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s003 gratis (DOCX)
S1 tabla. Toxicidades desarrollados durante la quimioterapia S-1 (por paciente) guía doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s004 gratis (DOCX)
S2 tabla. La comparación de la entrega de S-1 y toxicidades desarrollados entre los grupos intratumoral DPD-baja y DPD-alta expresión [(A) por resultados de IHC y (B) por los niveles de expresión de ARNm]
doi:. 10.1371 /journal.pone .0120324.s005 gratis (DOCX)
S3 Tabla. . Impacto de los niveles de expresión intratumoral DPD mRNA en la supervivencia libre de enfermedad Empresas El niveles de expresión de mRNA de la DPD se dividieron en 3 grupos (terciles) guía doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s006 gratis (DOCX )

Reconocimientos

se presentó este artículo, en parte, como una presentación de póster en el 2014 ESMO (Sociedad Europea de Oncología médica) Congreso, Madrid, España (26-30 de de septiembre de 2014).

• PLOS ONE: LAPTM4B-35, un gen relacionado con el cáncer, se asocia con un mal pronóstico en estadios TNM I a III gástricos pacientes de cáncer
• PLOS ONE: La sobreexpresión de la traducción eucariótica factor de iniciación 5A2 (EIF5A2) se correlaciona con la agresividad y la célula pobre supervivencia en el cáncer gástrico