PLoS ONE: Impact of NPM, TFF3 ja TACC1 ennusteeseen primaarisessa Mahalaukun Cancer

tiivistelmä

Background

NPM, TFF3 ja TACC1 ovat molekyylimarkkereina että tärkeä rooli solun erilaistumista. Tässä tutkimme niiden ennustetekijöiden vaikutus primaarista mahalaukun syöpä (GC) ja määrätietoinen ne voitaisiin käyttää merkkiaineina aggressiivisempia mahakarsinoomat havaitsemalla laajuudesta ilmaisun ihmisen mahasyöpä näytteitä.

Menetelmät /Keskeiset havainnot

Kasvain kudosnäytteiden 142 GC potilasta takautuvasti haettuja ja immunohistokemiallisesti arvioitiin. Korrelaatiot NPM, TFF3 ja TACC1 yli-ilmentyminen ja clincopathologic parametrit, ja niiden ennustetekijöiden arvot tutkittu χ ^{2, Kaplan-Meier menetelmällä, ja Cox yksi- ja monimuuttuja selviytymistä malleja. NPM, TFF3 ja TACC1 ilme oli merkitsevästi suurempi GC potilaalla on huonosti eriytetty histologinen tyyppi kuin potilailla, joilla on hyvin eriytetty histologinen tyyppi. NPM ilmentyminen oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on maksan etäpesäke tai toistumisen kuin potilailla, joilla ei etäpesäkkeitä. TFF3 ilmentyminen oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla positiivinen imusolmuke etäpesäke kuin potilailla, joiden negatiivinen imusolmuke etäpesäke. Ikä, imusolmuke etäpesäke, ja TFF3 sekä TACC1 over-ilmentyminen korreloi merkittävästi alhainen eloonjäämisen (P < 0,05, P < 0,05, P = 0,005 ja P = 0,009, vastaavasti). Monimuuttuja-analyysi osoitti, että imusolmuke etäpesäke ja TFF3 ja TACC1 yli-ilmentyminen oli riippumattomia ennustavia tekijöitä.}

Päätelmät

TFF3 ja TACC1 yli-ilmentyminen epiteelisoluissa kirurgisesti resektoitiin GC kudoksissa oli itsenäinen ennustaja lyhyiden selviytymisen GC potilailla. Ennuste oli huonompi potilailla, joilla on positiivinen ilme sekä TFF3 ja TACC1 kuin potilailla, joilla on positiivinen ilmaus TFF3 tai TACC1 yksin tai negatiivinen ilmaus TFF3 ja TACC1.

Citation: Ding A, Zhao W, Shi X, Yao R, Zhou F, Yue L, et al. (2013) vaikutus NPM, TFF3 ja TACC1 ennusteeseen primaarisessa syöpään. PLoS ONE 8 (12): e82136. doi: 10,1371 /journal.pone.0082136

Editor: Yves St-Pierre, INRS, Kanada

vastaanotettu: 16 elokuu 2013; Hyväksytty: 21 lokakuu 2013; Julkaistu: 16 joulukuu 2013

Copyright: © 2013 Ding et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukee Shandong Natural Science Foundation (2009HW024); Shandong Erinomainen Nuoren tutkijan Research Award Fund Project (2006BSB14114, BS2010YY013). Shandong Tackle Keskeiset ongelmat Science and Technology (2010GSF10245; Y2006C23). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) on 4 ^{th yleisin syöpä maailmassa (7,8% kaikista syövistä) ja 2 toinen johtava syy syövän kuolema (9,7% kaikista syöpäkuolemista) maailmassa [1]. Vaikka kirurginen resektio on varteenotettava vaihtoehto alkuvaiheen GC potilailla, valvonta GC etenemisen edelleen vaikea [2], [3]. Patogeneesissä GC liittyy useita tekijöitä. Viime aikoina erilaisia ​​biologisia tekijöitä patogeneesiin GC on tunnistettu, mutta niiden kliininen merkitys ei ole vahvistettu. Parempi käsitys biologisen perusteella GC olisi hyödyllistä.}

Nucleophosmin (NMP), joka tunnetaan myös nimellä numatrin tai NO38, on jäsen nucleoplasmin (NPM) perhe. Se on nucleolar fosfoproteiini jatkuvasti shuttling välillä nucleolus ja sytoplasmassa [4]. NPM kiinnostavuus monia toimintoja, kuten sukupolvi ribosomien, ylläpito genomista eheyden, ja kuljetus proteiinien tumaan [5]. Siksi nucleophosmin /B23-geeni (B23) näyttää olevan mukana valvontaan solujen kasvua, erilaistumista ja ohjelmoidun solukuoleman [6], [7]. NMP on yli-ilmentynyt tai mutatoitunut ihmisen syöpäsoluja, ja siksi se on ehdokas prognostinen markkeri paksusuoli, munasarja- ja eturauhas- syöpien [8], [9]. Koska suurin osa näistä päätelmät vallitsevasti perustuvat epäsuoria todisteita kanssa in vitro -malleja, tarkka osuus NPM kasvaimien syntyyn ei ole lainkaan selvää paljolti puutteen vuoksi kliinisten tutkimusten.

Trefoil tekijä 3 (TFF3 ) on jäsen TFF-geeniperheen, joka koodaa useita pieniä musiini liittyviä polypeptidejä [10]. TFF3 on pääasiassa läsnä ruoansulatuskanavassa ja muut epiteeli- kudoksissa, ja sen tiedetään tärkeä rooli ylläpitää limakalvon eheyden [11]. TFF3 on tarkoitus parantaa solujen vaeltamiseen moduloimalla toiminnot E-kadheriinin /kateniinin kompleksit [12]. Äskettäin TFFs on raportoitu olevan yli-ilmentyneen sekä geenin ja proteiinin tasot ihmisen kasvaimet, mukaan lukien suoliston, haiman ja eturauhasen syövät.

muuttamassa hapan coiled -
kelan 1 (TACC1) oli alun perin tunnistettu ainoana koodaavan sekvenssin johdonmukaisesti tavataan 8p11 ihmisen rintasyövän amplikonin [13]. Se ilmaistaan ​​korkeilla tasoilla alkionkehityksen aikana ja sitten alas-säädellä eriytetty kudoksissa [13] - [15]. TACC1 on mukana useissa syövissä kuten rinta- ja munasarjasyövän syövät ja leukemia. Tuoreessa tutkimuksessa [16], TACC1 todettiin olevan säädelty ja toimia onkogeenin rinta- ja munasarjasyövän hoitoon. Kuitenkin viime sarja analyysi geenien ilmentymistä (SAGE) ehdotti, että TACC1 oli alassäädetty ovarioiden ja munasarjasyövän solulinjoissa [17]. Se, onko TCAA1 toimii onkogeenin [16], tai kasvainsuppressorigeenin [18] on erittäin syöpätyypin-riippuvainen [13].

Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet ekspressiotasot NPM, TFF3 ja TACC1 GC potilailla, ja analysoitiin myös niiden mahdolliset korrelaatiot kliinisiä piirteitä ja yleistä (OS) GC potilaista.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat ja kliiniset näytteet

Mukana tässä tutkimuksessa oli 142 potilasta (93 mies- ja 49 naista), jotka saivat kirurginen resektio ensisijainen GC osastolla yleisen kirurgian meidän sairaalassa välillä heinäkuussa 2007 ja syyskuussa 2009. tutkimusprotokolla hyväksyi eettisen komitean Affiliated sairaala Qingdao University School of Medicine (Qingdao, Kiina). Potilaat allekirjoittivat tietoon perustuvan suostumuksen. Mediaani-ikä oli 59 vuotta (27-89 vuotta). Kasvaimen näytteet fiksoitiin 10% formaldehydiliuosta ja upotettiin parafiiniin. Yksikään potilaista ei ollut saanut kemoterapian tai sädehoidon ennen leikkausta. Patologisen diagnoosit ja luokitukset tehtiin mukaan Japani luokittelu mahakarsinooman. Täydellinen demografiset ja kliiniset tiedot kerättiin takautuvasti. "Varhainen syöpä" määriteltiin syövän invaasio rajoittuu submukoosa, ja "kehittynyt syöpä" määriteltiin syövän invaasio osaksi muscularis propria tai herakalvojen. Päättymispäivä seurannasta oli heinäkuuta 2012, ja mediaani seuranta-aika OS oli 47 kuukautta (vaihteluväli 3-59 kuukautta), jonka 3-vuoden postsurgical eloonjäämisaste 64,2%.

Immunohistokemia

Array kapulat viipaloitu 4-um: n leikkeitä, parafiini ja hydratoidaan arvostellaan etanolia. Antigeeni haku suoritettiin upottamalla objektilasit sitraattipuskurissa (pH 6,0) ja mikroaaltouunissa 10 minuutin ajan. Parafiini ja sammutettua kudosleikkeiden käsiteltiin 0,3% vetyperoksidaasin metanolissa 15 min, pestiin PBS: ssä ja inkuboitiin ensisijaisen vasta-aineita NPM, TFF3 ja TACC1 yön yli 4 ° C: ssa (taulukko 1). Vasta-aine värjäys havaittiin avidiini-biotiini-peroksidaasi-kompleksin (PV9005, hiiren yliherkkyys, Peking fir Jinqiao, Kiina). Diaminobenzidine käytettiin visualisoimaan peroksidaasi laskeuman antigeenisen, ja nämä kohdat vastavärjättiin hematoksyliinillä.

immunohistokemiallinen värjäys arvioitiin semi-kvantitatiivisesti mittaamalla sekä Värjäytymisen intensiteetti (0, 1, 2 tai 3 ) ja laajuus värjäytymistä (0, 0%, 1, 0-10%, 2, 10-50%, 3, 50-100%). Tulokset intensiteetin ja laajuuden värjäystä kerrottiin antaa painotetun pistemäärän kussakin tapauksessa (mahdollisimman, 9). Jotta tilastollinen analyysi, painotettu pistemäärät jakaa kahteen ryhmään, joissa tulokset 0-3 pidettiin negatiivinen, ja 4-9 positiivista.

Tilastollinen analyysi

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttämällä tilastopaketista SAS version 9.2. X2 testi ja Fisherin tarkkaa testiä käytettiin tutkimaan korrelaatioita ilmentymisen molekyylitason merkkejä ja eri kliinis parametrit. Univariate analyysi suoritettiin käyttäen Kaplan-Meier menetelmällä, ja välillä tilastollista merkitystä eloonjäämiskäyrien arvioitiin log rank-testi. OS määritettiin alkaen leikkauksen aikaan syövän kuolemaan. Arvioimaan riippumaton arvot eri muuttujien eloonjäämiseen monimuuttujatestaus analyysi suoritettiin, kun läsnä on muiden muuttujien Coxin suhteellisten riskien mallia. Vain muuttujat merkittävää arvon yhden muuttujan analyysin merkittiin Coxin regressioanalyysiä. p < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

NPM, TFF3 ja TACC1 Ekspressiokuvioiden Kasvainsoluissa

Expression of NPM, TFF3 ja TACC1 mitattiin semikvantitatiivinen IHC analyysit. NPM paikallistettiin nucleolus, tumaan ja sytoplasmaan kasvaimen epiteelisolujen (positiivinen 47% vs. 53% negatiivinen) (Kuva. 1). TFF3 ilmentyi sytoplasmassa kasvaimen epiteelisolujen (positiivinen 44% vs. 56% negatiivisia), ja mitään värjäytymistä havaittiin tumassa (kuvio. 1). TACC1 ilmaistiin sytoplasmassa kasvaimen epiteelisolujen (positiivinen 49% vs. 51% negatiivinen) (Kuva. 1), ja ei värjäytymistä havaittiin tumassa.

Patient kliinis muuttujat

mediaani-ikä tutkimuspotilaat oli 59 vuotta (27-89 vuotta). Mediaani seuranta kokonaiselossaoloaika oli 47 kuukautta (vaihteluväli 3-59 kuukautta), ja 3 vuoden postsurgical eloonjäämisaste oli 64,2%. Mediaani kasvain koko oli 35 mm (vaihteluväli 15-130 mm). Mitä kasvaimen vaiheesta, 14% (20/142) potilaista oli alussa syöpä ja 86% (122/142) oli kehittynyt syöpä. Imusolmuke etäpesäke havaittiin 55% (78/142) potilaista. Etäispesäkkeitä, kuten maksan etäpesäkkeiden laskimoiden invaasio ja vatsakalvon etäpesäke, esiintyi 15 potilaalla.

väliset korrelaatiot kliinis Data ja ilmaisujen NPM, TFF3 ja TACC1

NPM, TFF3 ja TACC1 ilmaisut olivat merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on huono eriytetty histologinen tyyppi GC kuin potilailla, joilla on hyvin eriytetty histologinen tyyppi GC (NPM, 0,88 vs. 0,12, TFF3 0,90 vs. 0,10, TACC1 0,90 vs. 0,10; P < 0,05). Vain NPM ilmentyminen oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla on maksan etäpesäkkeiden (0,88 vs. 0,12; P < 0,05) tai toistumisen (0,73 vs. 0,27; P < 0,05). TFF3 oli merkitsevästi suurempi potilailla, joilla positiivinen imusolmuke etäpesäke kuin potilailla, joiden negatiivinen imusolmuke etäpesäke (TFF3, 0,61 vs. 0,39; p < 0,05). TACC1 ilme korreloi merkitsevästi laskimoiden invaasiota (0,88 vs. 0,12; P < 0,05) ja naispotilailla (0,69 vs. 0,31; P < 0,05). Kliinisten ja histopatologisten muuttujat on esitetty taulukossa 2.

Univariate Analyysi

univariate analyysit osoittivat, että iän, imusolmuke etäpesäke, TFF3 yli-ilmentyminen ja TACC1 yli-ilmentyminen korreloi merkitsevästi lyhyen selviytymisen aika (taulukko 3, kuvio 2). Tilastoanalyysiin nimetty "riskiryhmään" oli muuttunut ilmaus 2 tai 3 proteiineja. nimetty "matalan riskin ryhmä" oli muuttunut ilmaus 0 tai 1 proteiineja. Ennuste oli huonompi potilailla, joilla on positiivinen koekspressoimalla NPM /TFF3, TFF3 /TACC1, NPM /TACC1 ja NPM /TFF3 /TACC1 kuin potilailla, joilla on positiivinen ilmaus NPM, TFF3 tai TACC1 yksin tai negatiivinen koekspressoimalla näiden merkkiaineiden (taulukko 3).

monimuuttujamenetelmin

Monimuuttuja-analyysi osoitti, että imusolmuke etäpesäke ja ilmaus TFF3 ja TACC1 kasvaimen epiteelisolujen olivat riippumattomia ennustavat tekijät kokonaiselinaikaa (Taulukko 4 ), ja että riskisuhde (HR) kasvaimen liittyvä kuolema nousi 3,409 kertaiseksi FF3 ryhmässä (P < 0,001; 95% CI 2,387-8,143). 3,311-kertainen nousu HR kasvaimeen liittyvän kuoleman imusolmuke etäpesäke ryhmä oli obviouslyly merkitsevä (P < 0,001; 95% CI 2,148-8,651) (taulukko 4). 2,278-kertainen nousu HR kasvaimen liittyvän kuoleman TACC1 ryhmässä oli myös ilmeisesti merkittävä (P < 0,001; 95% CI 1,803-5,959).

Keskustelu

Näin tutkiminen ilmaisun spesifisten geenien mahakarsinoo- soluissa voisi auttaa ymmärtämään histopatologinen piirteitä GC.Consequently, on tärkeää tutkia eri molekyylimarkkereiden pystyä ymmärtämään mekanismia tumorigeneesin ja etäpesäkkeitä. Siksi pyrimme ulos testata paneeli kolme molekyylimarkkereiden liittyy kasvaimen kehittymisen.

Nucleophosmin /B23 ilme on nucleolar fosfoproteiini jatkuvasti shuttling välillä nucleolus ja solulimassa [4], ja RNA ja proteiini tasoilla voi edistää puhkeamista syöpä [19], [20], NPM on aiemmin ehdotettu ennustetekijä köyhien selviytymisen ja liittyy kasvaimen etenemiseen ja kestävyys [21], [22]. Kuitenkin saadut tulokset tässä tutkimuksessa erosivat monessa tärkeässä suhteessa näistä aiemmista tutkimuksista. Löysimme huonompi tulos, jos potilaalla on NPM yli-ilmentyminen, mutta se ei ole itsenäinen prognoosimarkkerina, mahdollisesti siksi, että biologinen vaihtelu proteiinin ilmentymistä eri alueilla kasvainkudoksen. Tutkimuksessamme NPM yli-ilmentyminen havaittiin 73%: lla potilaista, joiden tauti uusiutui, mikä osoittaa, että NPM yli-ilmentyminen oli merkitsevästi yhteydessä toistumisen. Tutkimus Tsui et al [23] osoittivat myös, että korkea NPM /B23 taso korreloi toistumisen virtsarakon syöpä. Lisäksi se on kiehtova spekuloida, että NPM saattaa korreloi edistää maksan etäpesäke tämän syövän. Tuloksena olevan tutkimuksen mukaan NPM yli-ilmentyminen voi osoittautua ennustaja huono ennuste GC, vaikka tarkkaa oleva mekanismi on edelleen epäselvä.

Aikaisemmat tutkimukset [24], [25] osoitti, että TFF3 oli usein yli-ilmentynyt rintasyöpä ja muut ensisijainen kasvaimia. Tuloksemme osoittivat, että 44% mahakarsinoomat ilmaisi TFF3, ja mikä tärkeintä, että TFF3 yli-ilmentymisen GC oli itsenäinen negatiivinen prognostinen indikaattori OS. Kuolemanriski oli merkittävästi suurempi potilailla, joilla TFF3 yli-ilmentyminen. Lisäksi TFF3 yli-ilmentyminen oli toiseksi suurin riski vieressä imusolmuke etäpesäke postoperatiivisen selviytymisen. Merkittävät korrelaatiot TFF3 yli-ilmentyminen ja huono ennuste on aiemmin raportoitu kolangiokarsinooma [26] ja endomet- kohtukarsinooma [27], joka on johdonmukainen tulos. Tuloksemme osoittavat myös, että TFF3 yli-ilmentyminen korreloi aggressiivisemman kliinis parametrit. Esimerkiksi TFF3 yli-ilmentyminen havaittiin noin 50%: lla potilaista, joilla on positiivinen imusolmuke etäpesäke vs.
Kolmasosa potilailla, joilla on negatiivinen imusolmuke etäpesäke, mikä osoittaa, että TFF3 yli-ilmentyminen on tärkeä rooli imusolmuke etäpesäke GC potilailla. Lisätutkimukset molekyylitason mekanismi tarvitaan määritellä tarkemmin roolin apilapeptidiä ilmaisun kasvainprogression ja etäpesäkkeitä.

Aikaisemmat tutkimukset [28], [29] ovat ehdottaneet mahdollisesta vaikutuksesta TACC1 soluproliferaatioon ja sen karsinogeenisia ominaisuuksia. Kuitenkin parhaan tietomme mukaan ole olemassa muita tutkimuksia raportointi korrelaation TACC1 yli-ilmentyminen ja kliinistä merkitystä GC potilailla. Yksi merkittävistä havainnoista Tässä tutkimuksessa suuri sukupuoleen liittyviä vaikutuksia TACC1 yli-ilmentyminen, joka osoittaa, että 69%: n naisten GC potilaat osoittivat positiivista TACC1 ilme. Lisäksi, naisten määrä potilaita, joilla TACC1 yliekspressio oli kaksinkertainen, että miespotilailla, joilla negatiivinen TACC1 ilme. Kuitenkin TACC1 yli-ilmentyminen ei ollut merkittävää vaikutusta selviytymisen suhteen sukupuolten toisin kuin merkittävä vaikutus eloonjäämiseen eri ikäryhmien, mikä viittaa siihen, että voi olla muita mekanismeja, jotka vaikuttavat selviytymisen GC potilaista. Tulos meidän monimuuttuja-analyysi osoitti, että TACC1 yli-ilmentyminen oli itsenäinen ennustetekijä GC: tä, joka on sopusoinnussa aiemmin päätelmää ennustavia merkitystä TACC1 havaittiin munasarjan kasvaimissa [30]. Lisäksi, tietomme antavat näyttöä siitä, että TACC1 yli-ilmentyminen liittyy laskimoiden invaasio, mikä sen mahdollinen rooli tuumorimetastaasissa.

Noin puolet syövän yksilöitä löydettiin koekspressio näiden kahden merkin. Univariate analyysi osoittaa, että suuren riskin ryhmässä merkitsevästi liittyy lyhyempi potilaiden kokonaiselinaika, ja että riskiryhmään osoittaa huonompi ennuste kuin matalan riskin ryhmään. Onko yhdistetty ilmentymisen NPM, TFF3 ja TACC1 edistää kasvua etu tuumorin on edelleen määritettiin in vitro ja kliinisissä tutkimuksissa.

Lopuksi, TFF3 ja TACC1 yli-ilmentyminen kasvainsoluissa epiteelisoluissa kirurgisesti resekoitu gastic adenokarsinooma voisi itsenäisesti ennustaa lyhyemmän selviytymisen. NPM yli-ilmentyminen on korreloi merkitsevästi kliinisen patologian piirteitä GC. Nämä havainnot osoittavat, että yli-ilmentyminen on ratkaisevan tärkeää synnyssä ja kehittämisessä GC. Lisätutkimuksia tarvitaan, jotta saadaan entistä paremman perustan kehittämiselle tehokkaampia hoitostrategioita GC ja muita ihmisen syöpäsairauksia.

• PLoS One: The Role of Non-Parantava Surgery parantumaton, oireeton edennyt mahasyöpä
• PLoS ONE: Robotic vs. Open gastrectomy mahasyövän: Meta-analyysi