Plos ONE: Vpliv NPM, TFF3 in TACC1 na prognozo bolnikov z Primarni Rak želodca

Povzetek

Ozadje

NPM, TFF3 in TACC1 so molekularni markerji, ki igrajo pomembno vlogo pri diferenciaciji celic. Tukaj, smo raziskovali njihovo napovedno vpliv pri bolnikih s primarnim rakom želodca (GC) in ugotovi, ali bi jih lahko uporabili kot označevalce bolj agresivnih želodčnega karcinoma z odkrivanjem obseg izražanja v človeškem želodcu vzorcih karcinoma.

Metodologija /glavne ugotovitve

Tumor vzorci tkiva od 142 bolnikov GC so bile naknadno najdena in imunohistokemicno oceniti. Korelacije med NPM, TFF3 in TACC1 nad-izražanja in clincopathologic parametrov in njihovih napovednih vrednosti, so bile preiskane z modeli χ ^{2, metoda Kaplan-Meier, in Cox uni- in multivariatne preživetje. NPM je TFF3 in TACC1 izraz bistveno višja pri bolnikih GC s slabo diferencirano histološki tip, kot je pri bolnikih z dobro diferenciranim histološki tip. NPM izraz je bila bistveno višja pri bolnikih z okvaro metastaze ali ponovitev, kot je pri bolnikih brez metastaz. TFF3 izraz je bila bistveno višja pri bolnikih s pozitivnim bezgavkah metastaze, kot je pri bolnikih z negativno bezgavkah metastaze. Starost, bezgavkah metastaze in TFF3 in TACC1 prekomerno ekspresijo smo močno povezana z majhnim preživetjem (P < 0,05, P < 0,05, P = 0,005 in P = 0,009, v tem zaporedju). Multivariatna analiza je pokazala, da bezgavko metastaze in TFF3 in TACC1 prekomerno ekspresijo so neodvisni napovedni dejavniki.}

Sklepi

TFF3 in TACC1 prekomerno izražanje v epitelnih celicah kirurško odstranjenimi GC tkiv bil neodvisen napovedovalec kratkoročnih preživetje pri bolnikih GC. Prognoza je bila slabša pri bolnikih s pozitivnim izražanja tako TFF3 in TACC1, kot je pri bolnikih s pozitivnim izražanje TFF3 ali TACC1 sam, ali z negativnim izražanjem TFF3 in TACC1

Navedba. Ding A, Zhao W, shi X, Yao R, Zhou F, jue L, et al. (2013) Vpliv NPM, TFF3 in TACC1 na prognozo bolnikov z Primarni želodca raka. PLoS ONE 8 (12): e82136. doi: 10,1371 /journal.pone.0082136

Urednik: Yves St-Pierre, INRS, Kanada

Prejeto: 16. avgust 2013; Sprejeto: 21. oktober 2013; Objavljeno: 16. december 2013

Copyright: © 2013 Ding et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija podpira Shandong Natural Science Foundation (2009HW024); Shandong Odlično Young Scientist projekta Raziskave nagrada sklada (2006BSB14114; BS2010YY013). Shandong pribor Ključne težave v znanost in tehnologijo (2010GSF10245; Y2006C23). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca (GC) je 4 ^{th najpogostejši rak po celem svetu (7,8% vseh rakov) in 2 nd vodilni vzrok smrti zaradi raka (9,7% vseh smrti zaradi raka) po vsem svetu [1]. Čeprav je kirurška resekcija je izvedljiva možnost za bolnike GC na začetku poklicne poti, kontrola napredovanja GC vedno težko [2], [3]. Patogeneza GC je povezana s številnimi faktorji. V zadnjem času so bili ugotovljeni različni biološki dejavniki, vpleteni v patogenezo GC, vendar je njihov klinični pomen ni bila potrjena. Boljše razumevanje biološke podlagi GC bi bilo koristno.}

Nucleophosmin (NMP), znan tudi kot numatrin ali NO38, je član nucleoplasmin (NPM) družine. To je nucleolar fosfoprotein nenehno shuttling med jedrce in citoplazmo [4]. NPM izvaja številne funkcije, vključno z generacijo ribosome, vzdrževanje genomske celovitosti in transport proteinov v jedru [5]. Zato se zdi, da nucleophosmin /B23 gen (B23), ki bo vključena v kontrolo celične rasti, diferenciacije in programirana celična smrt [6], [7]. NMP je prekomerno ali mutirani v človeških rakavih celic, zato je kandidat prognostični dvojno podajo v debelo črevo, jajčnikih in prostati [8], [9]. Vendar, ker je bila večina teh sklepov pretežno na podlagi posrednih dokazov in vitro modelih, natančen prispevek NPM do tumorigeneze še zdaleč ni jasno, predvsem zaradi pomanjkanja ustreznih kliničnih študij.

Trefoil faktor 3 (TFF3 ) je član TFF družini genov, ki kodira niz majhnih mucin povezana polipeptidov [10]. TFF3 je prisotna predvsem v prebavnem traktu in drugih epitelijskih celic, je znano, da igrajo pomembno vlogo pri ohranjanju sluznice integritete [11]. TFF3 naj bi povečanje migracije celic s prilagoditvijo funkcij E-kadherina /catenin kompleksov [12]. V zadnjem času, so poročali TFFs kot močno izraženi na obeh genov in beljakovin ravneh človekovih novotvorb, vključno črevesnih, trebušne slinavke in prostati

preoblikovanje kislo navito -.
Tuljava 1 (TACC1) je bil prvotno opredeljena kot edini kodirni sekvenci vedno najdemo v pomnožkov raka 8p11 človek dojke [13]. Izražena je na visoki ravni med embriogeneze in nato navzdol urejeno v diferenciranih tkiva [13] - [15]. TACC1 sodeluje v več vrst raka, vključno z rakom dojke in raka jajčnikov in levkemijo. V nedavni študiji [16], je bilo TACC1 ugotovljeno, da je up-urejena in deluje kot onkogen na dojki in raka jajčnikov. Vendar pa nedavna serijsko analizo genske ekspresije (SAGE) kažejo, da so TACC1 navzdol urejeno tumorjev ovarija in jajčnikov rak celičnih linij [17]. Zato, če je TCAA1 deluje kot onkogen [16] ali tumorja supresorski [18] močno tipa odvisnega raka [13].

V tej študiji smo raziskovali ravni izražanja NPM, TFF3 in TACC1 pri bolnikih, GC in analizirali tudi njihove morebitne korelacije s kliničnimi znaki in celokupno preživetje (OS) bolnikov GC.

materiali in metode

Bolniki in kliničnih vzorcev

v ta študija je bilo 142 bolnikov (93 moških in 49 žensk), ki so prejeli kirurško resekcijo primarnega GC na oddelku splošne kirurgije v naši bolnišnici, od julija 2007 do septembra 2009. protokol študije je odobril Odbor za etiko bolnišnice odvisnimi Qingdao University School of Medicine (Qingdao, Kitajska). Bolniki, ki so podpisali soglasje, na podlagi informacij. Srednja starost je bila 59 let (27 do 89 let). Tumorske osebki so bile določene v 10% raztopine formaldehida in vdelali v parafin. Nihče od bolnikov so dobivali kemoterapijo ali radioterapijo pred operacijo. Za patološki diagnoze in klasifikacije so bile izvedene v skladu z japonsko klasifikaciji želodca karcinomom. Popolne demografski in klinični podatki so bili naknadno zbrani. "Zgodnje rak" je bil opredeljen kot vdor raka omejeno na submucosa in "napredovalega raka" je bil opredeljen kot vdor raka v muscularis proprie ali korena. Datum konca spremljanja je bilo julija 2012, in mediana nadaljnje obdobje za OS je bil 47 mesecev (od 3-59 mesecev) s 3-letno postkirurško stopnja preživetja pa je 64,2%.

Imunohistokemija

Array bloki so narezani v 4-Lun sekcije, deparaffinized in hidrirani v stopenjski etanola. Antigen Preiskovalna smo izvedli s potopitvijo stekelc v citratnem pufru (pH 6,0) in microwaving 10 minut. Deparaffinized in hidratirani odseki tkiva smo obdelali z 0,3% vodikovega peroksidaze v metanolu za 15 minut, sprani s PBS in inkubiramo s primarnimi protitelesi proti NPM, TFF3 in TACC1 preko noči pri 4 ° C (tabela 1). Protitelesa obarvanje je bila odkrita z avidin-biotin-peroksidaze kompleksa (PV9005, preobčutljivosti miške, Beijing jelka Jinqiao, Kitajska). Diaminobenzidine bila uporabljena za vizualizacijo peroksidaze odlaganja na antigensko mesto, in ti odseki smo jih nasprotno s hematoksilinom.

Imunohistokemijsko bila ocenjena semi-kvantitativno merjenje tako intenzivnost obarvanja (0, 1, 2 ali 3 ) in obseg obarvanja (0, 0%; 1, 0-10%, 2, 10-50%, 3, 50-100%). Rezultati za intenzivnost in obseg obarvanjem se je povečal, da ponderiran rezultat za vsak primer (najvišja možna, 9). Za statistično analizo, so se tehtane rezultati razvrščeni v dve kategoriji, kjer je bilo mnogo od 0 do 3 šteje negativna, in od 4 do 9 pozitiven.

Statistična analiza

Vse statistične analize so bile izvedene z uporabo statistični paket SAS različica 9.2. Test X2 in Fisherjev test, so bili uporabljeni za preučitev povezave med izražanjem molekularnih markerjev in različnih clinicopathological parametrov. Univariatna analiza je bila izvedena po metodi Kaplan-Meier, in statistična značilnost med krivuljami preživetja je bil ocenjen s testom log ranga. OS je bil določen z datumom operacije v času smrti zaradi raka. Za oceno neodvisne vrednosti različnih spremenljivk za preživetje, se je multivariatna analiza opravljena v prisotnosti drugih spremenljivk z uporabo Cox sorazmernih tveganj modela. Samo spremenljivke pomembne vrednosti iz univariatno analizo so bili vpisani v Cox regresijsko analizo. p < 0.05 smo imeli statistično značilno

Rezultati

NPM, TFF3 and TACC1 vzorcev izražanja v tumorskih celicah

Izražanje NPM, TFF3 in TACC1 je bila merjena s semi-kvantitativno. IHC analize. NPM je bila lokalizirana v jedrce, jedrom in citoplazmo epitelnih celic tumorja (pozitivna 47% v primerjavi z 53% negativno) (Slika. 1). TFF3 bila izražena v citoplazmi tumor epitelnih celic (pozitivna 44% v primerjavi z 56% negativno), in nobena obarvanje opazili v jedru (slika. 1). TACC1 je bila izražena v citoplazmi epitelnih celic tumorja (pozitivna 49% v primerjavi z 51% negativno) (Slika. 1), in ne pušča madežev opazili v jedru.

bolnikov Clinicopathological spremenljivke

mediana starosti bolnikov v tej študiji je bila 59 let (27 do 89 let). Mediana spremljanja celotnega preživetja je bila 47 mesecev (razpon 3-59 mesecev), ter 3-letno postkirurško stopnja preživetja je bila 64,2%. Srednja velikost tumorja je bila 35 mm (razpon 15-130 mm). V zvezi s stopnjo tumorja, je bilo 14% (20/142) bolnikov, ki so v zgodnjem raku in 86% (122/142) je bilo v napredovalem raku. Limfnih metastaz smo opazili pri 55% (78/142) bolnikov. Oddaljenih metastaz, vključno z okvaro metastaz, vensko invaziji in peritonealno metastaz, se je pojavila pri 15 bolnikih.

korelacije med Clinicopathological podatkov in izrazov za NPM, TFF3 in TACC1

NPM, TFF3 in TACC1 izrazi so bili bistveno višja pri bolnikih s slabo diferenciranim tipa GC histološko kot pri bolnikih z dobro diferenciranim histološki tip GC (NPM, 0,88 v primerjavi z 0,12; TFF3, 0,90 v primerjavi z 0,10; TACC1, 0,90 v primerjavi z 0,10; P < 0,05). Samo NPM izraz je bila bistveno višja pri bolnikih z okvaro metastaze (0,88 v primerjavi z 0,12; P < 0,05), ali ponovitev (0,73 vs. 0,27; P < 0,05). TFF3 je bila bistveno višja pri bolnikih s pozitivnim bezgavkah metastaze, kot je pri bolnikih z negativno bezgavkah metastaze (TFF3, 0,61 v primerjavi z 0,39; p < 0,05). TACC1 izraz bistveno povezana z vensko invazijo (0,88 v primerjavi z 0,12; P &0.05) in ženskih bolnikov (0,69 v primerjavi z 0,31; P &0.05). Klinični in histopatoloških spremenljivke so prikazani v tabeli 2.

Univariatna analiza

Univariatne Analize so pokazale, da starost, bezgavko metastaze, TFF3 prekomerno ekspresijo in TACC1 prekomerno ekspresijo smo močno povezana s kratko preživetje čas (tabela 3, slika 2). Za statistično analizo, imenovani "skupino z visokim tveganjem" Imeli spremenjeno izražanje 2 ali 3 proteinov. imenovani "skupina z nizkim tveganjem" Imeli spremenjeno izražanje 0 ali 1 proteinov. Prognoza je bila slabša pri bolnikih s pozitivnim sodelovanja izražanja NPM /TFF3, TFF3 /TACC1, NPM /TACC1 in NPM /TFF3 /TACC1, kot je pri bolnikih s pozitivnim izražanja NPM, TFF3 ali TACC1 sam ali z negativnim sodelovanju izražanja teh označevalcev (tabela 3).

analize z

Multivariantna analiza je pokazala, da so bezgavke metastaze in izražanje TFF3 in TACC1 v epitelijskih celic tumorjev neodvisni napovedni dejavniki za celotno preživetje (Tabela 4 ), in da je razmerje ogroženosti (HR), povezanih s tumorjem omogočil povečala za 3.409 krat v skupini FF3 (P < 0,001; 95% CI 2,387-8,143). Povečanje 3,311-krat v HR smrti, povezanih s tumorjem v bezgavkah metastaziranje skupini je bil obviouslyly pomembno (P < 0,001; 95% IZ 2,148-8,651) (tabela 4). 2,278-kratno povečanje v HR, povezanih s tumorjem smrti v skupini TACC1 je tudi očitno pomembna (P < 0,001; 95% IZ 1,803-5,959).

Pogovor

Zato, pregled izražanja specifičnih genov v želodčnih celic karcinoma lahko pomagajo razumeti histopatološke značilnosti GC.Consequently, je nujno, da preuči različne molekularne označevalce, da bi lahko razumeli mehanizem tumorigeneze in metastaz. Zato smo iskali, da bi preizkusili ploščo treh molekularnih markerjev, povezanih z tumorigeneze.

Nucleophosmin /B23 izraz je nucleolar fosfoprotein nenehno shuttling med jedrce in citoplazmo [4], in na ravni RNA in beljakovin lahko prispevajo k nastanku raka [19], [20], je NPM prej predlagal kot prognostični dejavnik za slabo preživetje in se nanaša na napredovanje tumorja in odpornosti [21], [22]. Vendar, pridobljeni v tej študiji rezultati razlikovali v nekaterih pomembnih pogledih iz teh prejšnjih študijah. Našli smo slabše rezultate pri bolnikih z NPM preveč izražanja, vendar ni neodvisna prognozo marker, verjetno zaradi biološke razlike izražanja proteinov na različnih področjih tumorja tkiva. V naši raziskavi, NPM prekomerno ekspresijo so opazili pri 73% bolnikov s ponovitvijo, kar kaže, da NPM prekomerno izražanje je bistveno povezan s ponovitvijo. Študija Tsui et al [23], je tudi pokazala, da je bila visoka NPM stopnja /B23 povezana z ponovitev raka mehurja. Poleg tega se zdi vznemirljiv, da špekulirajo, da NPM bi lahko bila povezana s promocijo jetrih metastaze tega raka. Rezultati te študije kažejo, da NPM prekomerno ekspresijo se lahko izkaže, da je napovednik za slabo prognozo GC, čeprav natančen osnovni mehanizem ostaja nejasna.

Prejšnje študije [24], [25] je pokazala, da TFF3 je pogosto prekomerno izražen pri raku dojk in drugih primarnih tumorjev. Naši rezultati so pokazali, da 44% želodca karcinomov izražena TFF3, in še pomembneje, da TFF3 prekomerno ekspresijo v PK je neodvisna negativen prognostični kazalec za OS. Tveganje za smrt je bila pri bolnikih znatno povečala z TFF3 preveč izražanja. Poleg tega TFF3 prekomerno ekspresijo je drugo največje tveganje poleg bezgavk metastaze za pooperativno preživetje. Pomembne korelacije med TFF3 preveč izražanja in slabo prognozo so že poročali v holangiokarcinom [26] in endometrioid karcinoma endometrija [27], ki je v skladu z našim rezultatom. Naši podatki kažejo tudi, da je bila TFF3 prekomerno ekspresijo povezana z bolj agresivnimi clinicopathological parametrov. Na primer, TFF3 prekomerno ekspresijo je bila odkrita pri približno 50% bolnikov s pozitivno bezgavkah metastaze vs.
Eno tretjino pri bolnikih z negativno bezgavkah metastaze, kar kaže, da prekomerno ekspresijo igra TFF3 pomembno vlogo v bezgavk metastaz pri bolnikih z GC. Nadaljnje študije o molekularni mehanizem so potrebni za bolj natančno opredeliti vlogo triperesne deteljice peptidov izražanja v napredovanja tumorja in metastaz.

Prejšnje študije [28], [29] so predlagali možnega vpliva TACC1 na celično proliferacijo in njenih carcinogenetic lastnosti. Kljub temu, da nam je znano, ni druge študije poročanje korelacijo med TACC1 preveč izražanja in klinično pomembna pri bolnikih GC. Ena od pomembnih ugotovitev te študije je velik vpliv povezan s spolom na TACC1 prekomerno ekspresijo, ki kaže, da je 69% bolnikov ženskih GC razstavljene pozitivno TACC1 izraz. Poleg tega se je število bolnic z TACC1 prekomerno ekspresijo je bil dvakrat, da pri moških bolnikih z negativno izražanja TACC1. Vendar TACC1 prekomerno izražanje ni pomembno vplivala na preživetje glede na spol, v nasprotju z pomembnega vpliva na preživetje različnih starostnih skupin, kar pomeni, da lahko obstajajo tudi drugi mehanizmi, ki vplivajo na preživetje bolnikov GC. Rezultat naše analize multivariatne je pokazala, da prekomerno ekspresijo je TACC1 neodvisen napovedni dejavnik GC, ki je v skladu s prejšnjo ugotovitvijo o prognostično pomenu TACC1 opazili tumorjev ovarija [30]. Poleg tega so naši podatki zagotavljajo dokaz, da TACC1 prekomerno ekspresijo je povezan z vensko invazijo, kar pomeni njeno morebitno vlogo v tumorske metastaze.

Približno polovica vzorcev raka je bilo ugotovljeno, z co-izražanje teh dveh označevalcev. Univariatna analiza kaže, da je bila skupina z visokim tveganjem značilno povezana s krajšim bolnikov celokupno preživetje, in da je skupina z visokim tveganjem kaže slabšo prognozo kot skupino z majhnim tveganjem. Ali skupen izraz NPM, TFF3 in TACC1 prispeva prednost rasti tumorja, je treba dodatno določi in vitro in kliničnih študij.

Na koncu TFF3 in TACC1 preveč izraz v tumorju epitelijskih celic kirurško odstranjenimi gastic adenokarcinom lahko neodvisno napovedujejo krajše preživetje. NPM pretirano izražanje je bistveno povezana s kliničnimi znaki patologije GC. Te ugotovitve kažejo, da je prekomerno ekspresijo ključnega pomena za patogenezo in razvoj GC. Dodatne preiskave so potrebne za zagotavljanje boljše temelje za razvoj učinkovitejših terapevtskih strategij za GC in drugih človekovih malignih bolezni.

• Plos ONE: Vloga Non-zdravilni kirurgijo v neozdravljivo, Nesimptomatično Napredno želodca Cancer
• Plos ONE: Robotski v primerjavi z odprto želodca za želodca raka: a. Meta-Analysis