PLoS ONE: Identifikacija serum mikroRNA kao novi neinvazivni Biomarkeri za rano otkrivanje raka želuca

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Kako bi istražili potencijal miRNAs seruma kao biomarkera za rano otkrivanje raka želuca (GC), radna populacija bazi je provedeno u Linqu, visokim rizikom područje GC u Kini. pregled

Metodologija /glavne nalaze

Svi ispitanici su odabrani od dvije velike kohorti studija. Diferencijalni miRNAs identificirani su u serumu bazenima GC i kontrole pomoću TaqMan niske niz gustoće i potvrdili u pojedinačnoj od 82 parova GC i kontrole, te 46 parova displazije i kontrolu u realnom vremenu kvantitativni reverzne transkripcije-lančane reakcije polimeraze. Sljepoočnog trendovi identificirani u serumu Mirna izražavanja dodatno su istražene u retrospektivnoj studiji na 58 GC bolesnika koji su imali barem jednu pre-GC uzorak dijagnoza serumu na temelju dugoročnog praćenja populacije. Mirne profiliranje Rezultati su pokazali da 16 miRNAs su izrazito reguliran u GC bolesnika u usporedbi s kontrolnom skupinom. Nadalje valjanosti identificirati panel tri seruma miRNAs (Mir-221, Mir-744 i Mir-376c) kao potencijalnih biomarkera za detekciju GC i prijemnik karakteristika (ROC) krivulja Analiza na temelju procjene rizika pokazala da je ova ploča mogla razlikovati GCS od kontrola sa 82,4% osjetljivost i 58,8% specifičnosti. Mir-221 i Mir-376c pokazali značajno pozitivnu korelaciju sa slabom diferencijacijom GC i Mir-221 prikazuje višu razinu u displazija nego u kontrolnoj skupini. Nadalje, retrospektivna studija otkrila je trend rasta tih triju razina Mirna tijekom razvoja GC ( P pregled za trendom < 0,05), a ova ploča mogla klasificirati uzorke seruma prikupljeni do 5 godina prije dijagnozu GC sa 79,3 % ukupni točnost. pregled

Zaključci /Značaj pregled

Ovi podaci ukazuju na to da serum Mir-221, Mir-376c i Mir-744 imaju jak potencijal kao nove neinvazivne biomarkera za rano otkrivanje GC. pregled

Izvor: Pjesma Moj, Pan Kf, Su Hj, Zhang L, Ma Jl, Li Jy, et al. (2012) Identifikacija serum mikroRNA kao novi neinvazivni Biomarkeri za rano otkrivanje raka želuca. PLoS ONE 7 (3): e33608. doi: 10,1371 /journal.pone.0033608 pregled

urednik: Josip Califano, John Hopkins Medical School, United States of America pregled

Primljeno: 15. studenog 2011; Prihvaćeno: 13. veljača 2012; Objavljeno: 14. ožujka 2012 pregled

Copyright: © 2012 Tekstovi i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane potpore iz Nacionalnog Basic Research programa Kine (973 programa: 2010CB529303), A3 Predviđanja program iz Natural Science Foundation of China (30921140311) i Nacionalna zaklada prirodoslovni Kine (81.041.012 i 81.171.989). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca (GC) je drugi vodeći uzrok smrti od raka u svijetu, s gotovo pola događa u Kini [1], [2]. Prognoza GC razlikuje značajno od stadij raka s 5-godišnje relativne stope preživljavanja dosežu 90% U fazi sam, ali manje od 5% u stadiju [3] IV. Dakle, rano otkrivanje GC je ključna mjera za smanjenje smrtnosti i poboljšati prognozu GC. Pregled

Iako gastroscopic screening za GC je vrlo pouzdan, to je invazivna i skupa, posebno u zemljama u razvoju. Dakle, mnogo truda je napravljen da razvije jeftiniji preliminarne testove probira u lako dostupnim primjercima. Međutim, mnogi prethodno istraživani analiti, kao što pepsinogen (PG) I /omjer II, karcinoembrijski antigen (CEA) i ugljikohidratni antigen 19-9 (CA 19-9), nisu bili osjetljivi i dovoljno specifična za GC screening [3], [ ,,,0],4]. Prema tome, postoji hitna potreba za novim neinvazivnim biomarkera za poboljšanje rano otkrivanje GC. Pregled

mikroRNA (miRNAs) su u izobilju klasa malih nekodirajuće RNA koji negativno reguliraju gensku ekspresiju sparivanja baza s 3'-netranslatiranu regiju mRNA ciljnih, što rezultira mRNA cijepanjem i translacije potiskivanja [5], [6]. Povećanje dokazi pokazuju da su miRNAs uključeni u raznim biološkim procesima, uključujući razvoj, diferencijaciju stanica, proliferaciju i apoptozu [7], te sudjelovati u ljudskoj karcinogeneze kao onkogena ili tumorske smetnji [8]. Istraživanja su pokazala da je Mirna izraz profila varira među vrstama tumora, a mogu razlikovati rak i normalna tkiva [9], [10]. Nedavno, kruži miRNAs predloženi su veliki potencijal kao biomarkera za mnoge vrste raka, uključujući GC [11] - [16]. Međutim, vrijednost kruži miRNAs u ranom otkrivanju GC još nije prijavljen. Pregled

Od 1989. godine, proveli smo niz studija u Linqu županije, visoko rizičnom području GC u provinciji Shandong, China , uključujući populacije na bazi kohortnog istraživanja prekanceroznih lezija želuca [17], [18], te metodom slučajnog da inhibiraju napredovanje oštećenja probavnog sustava [19]. Ova kohorta nam omogućuje da istraži dinamičkih promjena u cirkulaciji razine Mirna tijekom razvoja GC, i pruža nam jedinstvenu priliku da istražite potencijal kruži miRNAs u ranom otkrivanju GC. Pregled

Ovdje smo izvijestiti o rezultatima diferencijalom miRNAs u serumu od GC i displazija (DYS), a retrospektivna studija dizajnirana za procjenu dinamičkih promjena tijekom razvoja GC. pregled

materijali i postupci

dizajn studija i stanovništvo pregled

pojedinosti o ispitivanoj populaciji, postupcima endoskopskog pregleda, kriterijima želučane histopatologijom i follow-up su opisani na drugom mjestu [17] - [19]. Ukratko, istraživanje endoskopska screening pokrenuta je 1989. godine među 3399 stanovnika u dobi od 35-64 godina u Linqu županije, visoko rizičnom području GC, a ispitanici bez GC dijagnoza potom su praćeni s ponovljenom endoskopskog pregleda provedenog u 1994. [17 ], [18]. U 1995. godini, randomizirano, placebo-kontrolirana intervencija suđenje je pokrenut u ovoj populaciji do 2003. godine, kada je ponovio pregled endoskopska je izvedena [19]. Svi ispitanici su podvrgnuti izvlačenja krvi u obje osnovne i završna točka istraživanja o svakom ispitivanju, a neke s naprednim oštećenja probavnog sustava, kao što su intestinalne metaplazije (IM) ili DYS, također pod uvjetom da krv i dobio endoskopskog pregleda u 1992. i 1999. Netlogu

u trenutnoj studiji, multi-stage, smješteno case-control studija iz dvije velike kohorte je osmišljen kako bi identificirati i provjeriti miRNAs diferencijal serumu u GC i DYS i retrospektivna studija je provedena kako bi se istražili potencijal kandidata seruma miRNAs u ranom otkrivanju GC (slika 1). pregled

Ova studija je podijeljen u četiri stupnjevito faze. U fazi sam, serum bazeni iz 14 GC bolesnika i 14 dobnih i spolnih podudarnih kontrola s dijagnozom površne gastritis (SG) ili blagi kronični atrofični gastritis (CAG) korišteni su za generiranje Mirna profile array analizu. Diferencijalni miRNAs su identificirani, a iznimno regulira prema gore miRNAs ili umjereno regulira prema gore miRNAs imaju funkcionalne ili biomarkera povezanih izvješća su odabrani za daljnju analizu. U fazi II, identificirana miRNAs su potvrđene pomoću kvantitativne lančane reakcije reverzne transkripcije-polimeraze (QRT-PCR) na pojedinačnim uzorcima seruma 14 GCS i kontrole koje su korištene za test polja u fazi I. U fazi III, znatnije mijenjati miRNAs naknadno potvrđen u 68 GC i 46 DYS pacijenata, kao i njihovih dobnih i spolnih podudarnih kontrola. Prijemnik karakteristika (ROC) krivulja Analiza na temelju procjene rizika je nakon toga provedena među 68 GC-kontrole parovima ocijeniti diskriminirati učinak miRNAs seruma na GC. Svaki predmet je dodijeljen u bilo visokim ili niskim rizične skupine usporedbom razine ekspresije Mirna biomarkera s odgovarajućim cut-off vrijednosti izvedenih iz ROC krivulje. U fazi IV, retrospektivna studija provedena je u 58 GC pacijenata koji su dali barem jedan prihvatljivog uzorak seruma prije dijagnoze u dugoročnom follow-up studija, kako je gore opisano, istražiti vremenski trend potencijalnih Mirna biomarkera i odrediti njihov vrijednost u ranom otkrivanju GC. Cijela studija je odobren od strane Institutional Review Board of Peking University Cancer Hospital & Institut, te su svi sudionici dala pismeni informirani pristanak. Pregled

Obrada uzoraka i RNA ekstrakciju pregled

Do 5 ml pune krvi od svakog sudionika posta je sakupljen sa predmetima i kontrola obavlja na istoj godini. Uzorci krvi su ostavljeni da stoji 30-40 minuta i serumske separacije postiže se centrifugiranjem na 965 g tijekom 15 minuta. Supernatant seruma je skupljen i pohranjen pri -80 ° C do analize. RNA je izolirana iz 100 ul seruma pomoću miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Njemačka) prema naputku proizvođača uz male modifikacije [20]. Za Mirna profiliranje, dva bazena nastali su kombiniranjem smjese gornjeg vodene faze, nakon razdvajanja faza i etanola od 14 GC bolesnika (12 muških, 2 ženske, starosti, 62 (SD 6.4) godina) i 14 spolnih i kontrole iste dobi (dob, 61 (SD 5.9) godina), respektivno. Nakon vezivanja za membranu RNeasy Mini spinske kolone, a zatim ispiranjem, RNA se ispere s 40 ul RNaza-slobodne vode. Sve QRT-PCR pokusima RNA ekstrahirana iz 100 ul seruma se ispere s 100 uL RNaza-slobodne vode. Normalizirati varijaciju uzorka na-uzorak u koraku izolacije RNA, sintetski ath-miR-159a je bio dodan svakom uzorku seruma za Mirni profiliranje a cel-miR-39 je dodan za QRT-PCR analize kao što je opisano od Mitchell et al pregled [11]. pregled

Mirna profiliranje pregled

Mirna profiliranje provedena je pomoću TaqMan niske gustoće array a (v2.0) u skladu s preporučenim uputama proizvođača (tnom City, CA, USA). Ovaj QRT-PCR profiliranje platforma se sastoji od jedne 384-te mikrofluidnu karticu u kojoj 377 miRNAs mogu analizirati zajedno s tri endogene kontrole (U6, RNU44 i RNU48) i jedan negativne kontrole koje nisu povezane s ljudskom (ATH-Mir-159a). Ukratko, RNA spoje odvojeno od 14 GC pacijenata i uskladiti kontrole, kao što je gore opisano je obratnoj transkripciji pomoću TaqMan Mirna reverzne transkripcije, kit i TaqMan Mirna multipleks RT eseji (ljudski bazen, Applied Biosystems). Svakog RNA bazena 3 ul ukupne RNA dodano je u svaku od multipleks reakcije reverzne transkripcije, pregled

povećati količinu dostupnog cDNA za analizu, obogaćivanje ciljnih gena provedena je sa stupnjem Preamplification. 25-ul reakcijska smjesa koja se sastoji od 2,5 ul nerazrijeđenog cDNA kombinaciji s 12,5 ul TaqMan pretpojačalo master smjese (2 ×), 2.5 ul megapleks pretpojačalo primera (10 ×), i 7.5 ul nuclease-free water. Korak Preamplification je provedeno na GeneAmp PCR sustav 9700 (Applied Biosystems) slijedeći protokol proizvođača. Pregled

realnom vremenu PCR analizu, produkt se razrijedi dodatkom 75 ul nuclease-free water i 9 ul razrijeđene smjese zatim se pomiješa s 450 ul TaqMan 2 × Universal PCR glavne smjese bez uracil-N-glikosilaze i 441 ul nuclease-free water. Nakon umetanja 100 ul svakog multipleks bazen smjesu, polje se centrifugira i zapečaćena. Povećavanje se provodi na Applied Biosystems 7900 HT termalnog brojača (Applied Biosystems) pomoću preporučenih uvjeta biciklističke proizvođača. Podaci su analizirani pomoću RQ Manager Software verzija 1.2 i DataAssist ™ softver verzije 2.0 (Applied Biosystems). Nakon normalizacije se upotrebi šiljcima-u ATH-Mir-159a, mnogostrukost promjene razine miRNAs u GC u usporedbi s kontrolom je izračunata metodom. Pregled

Mirna kvantifikacija u realnom vremenu QRT-PCR pregled

Reverse transkripcija provedena je pomoću TaqMan Mirna reverzne transkripcije, kit i Mirna-specifičnih matičnih petlje primera (Applied Biosystems). 7,5-ul Reakcijska smjesa se sastojala od 0,75 ul 10 × reverznom transkripcijom tampon, 0.095 ul inhibitora RNA-ze (20 jedinica /ul), 0,075 ul 100 mM dNTP s dTTP, 0.5 ul MultiScribe reverzno-transkriptaze (50 jedinica /ul), 1,5 ul primera, 2,5 ul RNA i 2.08 ul RNaza-slobodne vode. Reverzna transkripcija je provedena na T profesionalne PCR System (Biometra, Njemačka) slijedeći protokol proizvođača. Pregled

Real-time PCR je provedena u dva primjerka i uključuju NO-predložak negativne kontrole. Za 20 ml reakcijske smjese, cDNA (3 ul) se pomiješa s 10 ul TaqMan 2 × Universal PCR glavne smjese bez uracil-N-glikosilaze, 1 jal smjese za analizu TaqMan Mirni, i 6 ul vode. Pojačanje je provedeno na 7500 PCR sustava u stvarnom vremenu (Applied Biosystems) slijedećem protokolu proizvođača. Razina ekspresije miRNAs su normalizirani na šiljcima-u CEL-Mir-39, te su izračunate primjenom metode. Pregled

Statistička analiza pregled

Parni t pregled test koristiti za ispitivanje razlika u prosječnom dobi između grupa. Wilcoxon testom ili Mann-Whitney U test je korišten za usporedbu razinu serumskog Mirna različitih skupina po potrebi. ROC krivulje su uspostavljeni za procjenu dijagnostičke učinke miRNAs i generalizirani linearni model s ponovljenim mjerenjima koriste za analizu vremenske trendove serumu Mirna tijekom razvoja GC nakon logaritamske transformacije. Svi P
vrijednosti su obostrani i manje od 0,05 smatrala se statistički značajnom. Sve statističke analize provedene su pomoću statističkog paketa za društvene znanosti (SPSS 13.0, Chicago, IL). Pregled

Rezultati

Subject karakteristike

Ukupno 82 pacijenata GC, 46 ispitanika s DYS i 128 kontrole sa SG ili blagom CAG bili uključeni u ovu studiju. Kao što je prikazano u tablici 1, nije bilo značajne razlike u dobi između bolesnika s GC ili DYS i njihovih odgovarajućih kontrola ( P pregled = 0,329 i 0,214, respektivno). Pregled

Mirna profiliranje

različito izraženi miRNAs identificirani su u serumu bazenima 14 GCS i 14 kontrola pomoću TaqMan niske gustoće polje. Među 377 miRNAs analiziranih, 99 je pokazao > 2 puta regulira prema gore i 40 su pokazali < 0,5 puta regulirani promjene u GC seruma bazen (tablica S1). Šesnaest regulira prema gore miRNAs (Mir-221, Mir-744, Mir-376c, Mir-191, Mir-27a, neka-7e, Mir-27b, Mir-222, Mir-21, Mir-18a, Mir-19a, miR- 17. mir-106b, mir-106a, mir-20a i mir-155) pokazuje znatan izraz promjene u GC serumu i imaju funkcionalne ili diferencijalni izraz izvješća u GC tkiva su odabrani kao kandidata za šaku-stage valjanosti [21] - [28] pregled

Prvi stupanj valjanosti pregled

izrazi 16 miRNAs kandidata izmjerene su u pojedinačnim uzorcima seruma 14 GCS i kontrole koje su korištene za poljem test.. Dosljedno s profiliranje rezultatima, svih 16 miRNAs pokazala višu razinu u serumu u GC skupini nego u kontrolnoj skupini (Slika S1). Među njima, 9 seruma miRNAs (Mir-221, Mir-744, Mir-376c, Mir-191, Mir-27a, neka-7e, Mir-27b, Mir-222 i Mir-21) imala do 2 prosječnu puta promjena u GC skupini u odnosu na kontrolnu grupu ( p izvoznici < 0,05), i na taj način su odabrani za daljnju provjeru valjanosti pregled

Druga faza validacije pregled

ispitali smo 9 Mirne. izrazi na velikom skupu serumu 68 parova GC i kontrole. Kao što je prikazano na slici 2, 8 od 9 miRNAs (Mir-221, Mir-744, Mir-376c, Mir-191, Mir-27a, neka-7e, Mir-27b, a Mir-222) pokazali su značajno povišene razine u GC skupini s više od 2 puta promjene ( P izvoznici < 0,05)., a ti miRNAs odabrani su za sljedeće analize pregled

procjena rizika GC slučajeva koriste panel miRNAs

Da bi se procijenila diskriminirati učinak seruma miRNAs na GC, ROC krivulje utvrđene su za svaki od 8 miRNAs koriste 68 para GC i nadzora u drugom stupnju valjanosti (Slika 3). Rezultati su pokazali da je Mir-744, Mir-376c, Mir-221 i neka-7e dala najveće površine ispod krivulja ROC (AUC) i može imati potencijal kao biomarkera za detekciju GC. Pregled

Na temelju procjene rizika na četiri miRNAs se koristi za razlikovanje uzoraka seruma GC slučajevima iz kontrole. Za svaku Mirna, mi najprije izračunava optimalnu graničnu vrijednost razine relativne ekspresije (Mir-744: 5,49 × 10 ^{-4, Mir-376c: 6.05 × 10 -4, Mir-221: 1,47 × 10 -3, neka-7e: 1,61 × 10 -3), na kojoj je Youden indeks (osjetljivost + specifičnost-1) za GC dijagnoze bila je najveća kod ROC krivulje. Onda smo podijeljeni subjekt u rizičnoj skupini, koja predstavlja mogući slučaj GC, kada je razina u serumu od bilo kojeg od četiri miRNAs bio jednak ili veći od odgovarajućeg cut-off vrijednosti, a skupina niskog rizika, što predstavlja kontrolu , kada je razina u serumu sva četiri miRNAs bile manje od odrezanih vrijednosti. pregled}

Prema tom kriteriju ocjenjivanja, 56 GCS i 32 kontrola su ispravno predvidjeli kao GC i non-GC slučajevima, proizvodnju osjetljivost od 82,4% i specifičnost od 47,1%. Budući da je neka-7e pokazao najmanju vrijednost i najširi interval pouzdanosti od AUC između četiri miRNAs u analizi ROC krivulje (Slika 3), ponavlja se gore procjenu rizika nakon isključivanja neka-7e i dobiti višu specifičnost (40/68, 58,8 %), dok je osjetljivost ostala nepromijenjena, što znači da je doprinos neka-7e za razlikovanje GCS od kontrole bio je zanemariv, a tri Mirna ploča (mir-221, mir-376c i mir-744) bio je učinkovitiji kombinacija biomarkera za GC dijagnozu. pregled

kako bi se dodatno ispitati potencijal ovog panela za rano otkrivanje GC, procjenjuje podskupinu 30 GC pacijenata u ranoj fazi, a 22 su točno predvidio kao GC slučajevima s osjetljivošću 73,3% . pregled

pridruživanju između Mirne serum ekspresije i diferencijacije razreda GC pregled

Osim toga, tražili smo istražiti povezanost između razine ekspresije Mir-221, Mir-744 i Mir-376c i diferencijaciju ocjenama GC. Kao što je prikazano na slici 4a-c, sva tri miRNAs pokazala višu razinu u serumu u slabo diferenciranim GC skupine (43 GCS uključujući 29 muških i 14 ženskih: dob, 60 (SD 8.3) godina) nego u dobro ili umjereno diferencirani GC skupine (24 GCS uključujući 19 muških i 5 ženskih: dob, 60 (SD 6.2) godina). Među njima, serum Mir-221 i Mir-376c pokazali značajno pozitivnu korelaciju sa slabom diferencijacijom GC ( P
= 0.006 i 0.004, respektivno). Pregled

Razina ekspresije serumu Mirna biomarkera u predmetima s DYS pregled

Kako bi se dodatno razjasniti važnost tih triju miRNAs s premalignog želuca lezije, ispitali smo svoj iskaz u 46 parova DYS i kontrole. Kao što je prikazano na slici 4D-F, što je značajno povišena razina Mir-221 pronađen je u DYS skupini u usporedbi s kontrolnom skupinom ( P pregled = 0.027), dok je značajna razlika utvrđena je za Mir-376c ili miR- 744. Daljnja analiza procjene rizika prema prethodno utvrđenim postupcima pokazala da ova tri Mirna panel mogao razlikovati DYS od kontrole s osjetljivošću 56,5% i specifičnost od 47,8%. Pregled

dinamike promjena serumskih Mirna biomarkera za vrijeme razvoja GC

u retrospektivnoj studiji, dinamičke promjene triju serumu Mirna biomarkera su otkrivena na 58 GC pacijenata koji su bili podijeljeni u četiri skupine prema vremenskom intervalu od krvi privući na GC dijagnoza: prije dijagnoze 2-5 godine , 6-9 godina, 10-14 godina, te ≥15-godišnje skupine (Tablica 2). Neki subjekti mogu istodobno postojati u dva ili više od dvije skupine, jer su dali uzorke seruma u različitim vremenskim točkama razdoblja praćenja. Pregled

Kao što je prikazano na slici 5A, sve tri u serumu miRNAs prikazani izrazito povećava ekspresiju tijekom GC razvoj, osim blagog porasta serumskog MIR-744 u prethodno dijagnoze ≥15 godina grupe. Daljnje ispitivanje trend pokazao je statistički značajan linearni trend u tri razine Mirna među 20 GC pacijenata koji su doprinijeli tri uzorka seruma u različitim vremenskim točkama tijekom razdoblja praćenja (Slika 5b). Pregled

Na kraju, istražili smo potencijal Mirne biomarkera za rano predviđanje GC u 29 bolesnika, koji su pod uvjetom uzorci seruma po 2-5 godina prije GC dijagnoze. Prema kriteriju procjene rizika osnovan prije 23 pacijenata 29 GC (79,3%) ispravno klasificirano kao zastupljenih slučajevima GC po tom tri seruma Mirna ploči. Pregled

Rasprava pregled

Cilj ovog istraživanja bio je utvrditi diferencijalne miRNAs u serumu GC i DYS, i istražiti potencijal miRNAs seruma kao biomarkera za rano otkrivanje GC. Pronašli smo značajno povećane razine seruma Mir-221, Mir-376c i Mir-744 u GC pacijenata putem sustavnog ispitivanja microarray-based i dvostupanjski validacije. To Mirna ploča tri serum mogao razlikovati GCS od kontrola i imaju trend porasta tijekom razvoja GC. Koliko je nama poznato, ovo je prva studija populacija temeljeno na istraživanju dinamičkih promjena serumskih miRNAs povezanih sa GC i njegovih prethodnika u rizičnoj području GC. Pregled

Učestalost GC varira u cijelom svijetu s najviše stope događa u istočnoj Aziji, uključujući Japan, Koreja i Kina [1], [2]. U Kini, većina GCS se dijagnosticira u naprednim fazama rezultira lošom prognozom uz prosječnu stopu preživljavanja od 5 godina < 30%, dok je u Japanu i Koreji više od 60% GCS se dijagnosticira u ranoj fazi tako endoskopskog pregleda u zajednici s 5 godina stopa preživljavanja > 80% [29], [30]. Iako utjecaj ranog otkrivanja GC strane endoskopskog pregleda je značajna u Linqu, došlo je samo nekoliko stanovnika bazi screening za GC u Kini zbog visokih troškova i nedostatka kvalificiranih endoscopists. Pregled

GC je kraj rezultat multi-stage želučanih lezija s različitim biološkim značajkama, što pruža mogućnost za otkrivanje GC u ranoj fazi pomoću biomarkera. U našem prethodnom istraživanju pronašli smo omjer serumu PG I /II monotono odbijeni s težinom oštećenja probavnog sustava, međutim, osjetljivost i specifičnost za predviđanje napredne oštećenja probavnog sustava i GC bili siromašni [31]. Nedavno, gomilaju dokazi pokazuju da miRNAs igraju važne uloge u onkogenezom i tumor-derivirani miRNAs može ući u cirkulaciju u izuzetno stabilan oblik [11], [32], [33], što ukazuje da miRNAs može upotrijebiti kao novi neinvazivna biomarkera za rano otkrivanje GC. pregled

u novije vrijeme, studija identificirati četiri regulira prema gore GC-povezana miRNAs (Mir-17-5p, Mir-21, Mir-106A i Mir-106b) [34], koji je također prikazuje višu razinu izražavanja u GC serumu na našem polju, dok je upečatljiv podreguliranje neka-7a u njihovoj studiji nije uočeno kod nas. Druga studija je pokazala pet povišene miRNAs serum (Mir-1, Mir-20A, Mir-27a, Mir-34 i Mir-423-5p) na GC bolesnika [13], dok je samo Mir-20a i Mir-27a su reguliran na našem polje, a mir-27a potvrđen je izuzetno izraženo u GC pacijenata. Djelomično nedosljedne rezultate odražavaju razlike u vrstama uzoraka, testiranje alata ili metoda kvantifikacije [35]. Pregled

Među tri seruma miRNAs identificiranih u našoj studiji, Mir-221 utvrđeno je nenormalno reguliran u tkivima mnogih karcinoma vrste, kao što su želučani [24], debelom crijevu [21], prostate [36] i raka dojke [37]. Mir-221 bi mogao post-transkripcijski potiskivanje p27 i p57, čime se olakšava G1 /S faze tranzicije i povećanje broja stanica i rast tumora [24], [36], [38], [39]. Istraživanja su pokazala da je razina ekspresije Mir-221 u plazmi je bio povezan s ukupno preživljavanje raka debelog crijeva [40] i progresiju raka prostate, [41]. Samo je nekoliko studija su istraživali funkcionalnu važnost Mir-376c, kao što je Mir-376c mogao povećati proliferaciju, preživljenje i kemijska otpornost jajnika stanice raka ciljajući ALK7 [42]. Za MIR-744, njegove ekspresije, fiziološke funkcije i odnosa s karcinogeneze su nepoznati u sadašnjosti. Pregled

U našem istraživanju, otkrili smo to tri Mirna panel mogao razlikovati uzoraka seruma GC s kontrolama s osjetljivošću 82,4% i specifičnost 58,8%. Osim toga, naša studija pokazala je da je među 30 bolesnika GC ranoj fazi, 22 (73,3%) ispravno su klasificirani, što upućuje na ovu ploču mogu poslužiti kao biomarkera za rano otkrivanje GC. Također se otvara mogućnost da je ovaj panel miRNAs može biti korisna kao način preliminarnog screeninga za GC u općoj populaciji i visokim rizikom za GC. Pregled

Također smo zainteresirani za upoznavanje povezanost između ta tri serumu miRNAs i diferencijaciju razreda GC. Usporedbom razina Mirne u serumu GC bolesnika s različitim stupnjevima, pronašli smo veći izraz serum Mirne na slabo diferencirani GC. Ovaj rezultat je otkrio da visoka razina ekspresije ovih seruma miRNAs u GC pacijenata bila povezana s uznapredovalom stadiju GC. Iako je mehanizam ove pojave je nejasno, visoka razina tih miRNAs u serumu može imati neku vrijednost koja pokazuje napredovanje i liječenje izbor GC. Pregled

Mi i dalje procjenjuju je li ovo tri Mirna ploča mogla predvidjeti napredno želuca lezije, kao što je DYS. Pronašli smo samo Mir-221 prikazuje povećanu razinu ekspresije u DYS, što sugerira ta ploča je više specifično za GC. Unatoč ograničenim učinkom ove ploče na otkrivanje DYS, Mir-221, jedan od tri seruma miRNAs, mogu biti korisni za identifikaciju tih DYS predmete na izuzetno visoki rizik od razvoja GC. Zanimljivo, po prospektivno praćenje evoluciju tih DYS subjekata, pronašli smo manju stopu regresije do manje teških ozljeda i jedan incident GC u predviđenom rizičnoj skupini koja je imala višu razinu serumskog Mir-221 (podaci nisu prikazani). pregled

retrospektivno ispitivanje ekspresije tri seruma miRNAs u uzorcima prije dijagnoza GC pacijenata, otkrili smo trend rasta tijekom razvoja GC i dalje analiza je pokazala da je ova ploča mogla predvidjeti GC do 5 godina ispred kliničkog GC dijagnoza. Ovi rezultati snažno podupire vrijednost tih triju miRNAs za predviđanje GC pojavu. Kombinirajući ove tri serumu Mirna potpis patološku dijagnozu može poboljšati rano otkrivanje GC u ispitanika s naprednim oštećenja probavnog sustava, kao što su IM i DYS. Pregled

Da bi se isključila mogućnost da je povećana dob i kraće razdoblje pohrane uzoraka seruma pridonijela višoj razini miRNAs tijekom vremena, analizirali smo ekspresiju Mirna u 82 kontrola koji su bili podvrgnuti izvlačenja krvi u istim vremenskim točkama GC pacijenata. Ne postoji značajna razlika zabilježena je tijekom razdoblja praćenja (podaci nisu prikazani), što ukazuje da se diže razina u serumu Mirna tijekom razvoja GC ne može se pripisati povećanom dobi i prateće da miRNAs bili prisutni u serumu u stabilnom obliku. U skladu s tim, kruži miRNAs može se koristiti kao biomarker za razvoj neinvazivnog testa za otkrivanje GC u budućnosti zbog laka dostupnost, visoka stabilnost i nisku cijenu za testiranje. Pregled

Naša studija ima nekoliko prednosti. Prvo, svi subjekti došao iz populacije visokog rizika GC i prošao strogu patološku dijagnozu, koja opravdava hipotezu da je opažena razlika u serumskim razinama Mirne između GCS i kontrola može se pripisati uglavnom, ako ne i sve, na neoplastične transformacije. Drugo, naša studija populacija bazi s visokom skladu i više od 20 godina praćenja poboljšana pouzdanost studije, i pod uvjetom da je prvi dokaz o dinamičnim promjenama miRNAs serumu tijekom razvoja GC, kao i njihov potencijal kao biomarkera za identifikaciju visokog rizika pojedinci GC. pregled

Ova studija također ima neka ograničenja. Budući da je vrlo malo su ispitanici s normalnim želučane sluznice dijagnosticiran u ovoj populaciji [17], koristili smo subjekata sa SG /blagim CAG kao kontrola. Međutim, u odnosu na studije koje koriste uglavnom normalne teme kao kontrola, naša patološka dijagnoza-based strategija za kontrolu odabira razrijeđena razliku između predmeta i kontrole, i na taj način može samo izazvati podcjenjivanje rezultata. Osim toga, rezultati ovog preliminarnog istraživanja s malim uzorkom zahtijevaju daljnju potvrdu u velikim budućih studija i funkcionalni značaj nedavno identificiran miRNAs treba dodatno pojasniti. Pregled

Na kraju, kroz ovaj studij stanovništva bazi smo identificirali skup diferencijalnih miRNAs serumu (Mir-221, Mir-376c i Mir-744) u GC i predložio njihov potencijal kao nove neinvazivne biomarkera za rano otkrivanje GC. pregled

popratne podatke pregled slika S1. pregled u serumu razine tih 16 miRNAs u 14 parova GC i kontrolnih ispitanika u prvom stupnju valjanosti. Medijan fold promjene razine Mirna usporedbi GC s kontrolom su dobili i Wilcoxon ispitivanja provedena su ispitati razlike između dvije skupine. Relativna razina miRNAs (log10 skala na y-osi) normalizirane su na unesen-u CEL-Mir-39 pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0033608.s001 pregled (JPG) pregled Tablica S1. pregled doi: 10,1371 /journal.pone.0033608.s002 pregled (XLS) pregled

• PLoS ONE: fermentacijom pomoću Propionibacterium freudenreichii inducira apoptozu od HGT-1 Ljudski rak želuca Cells
• PLoS ONE: suscebtibilnosti na CagA molekula koje međusobno djeluju i Gene-okoliša Interakcija s fitoestrogenima: Faktor potencijalnog rizika za želučani Cancer