PLoS ONE: Twist1 Skatina skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją per Up-reglamento FoxM1

Anotacija

Tvist susijusių baltymų 1 (Twist1), taip pat žinomas kaip A klasės pagrindinė Helix-kilpa-Helix baltymų 38 (bHLHa38) buvo susijęs ląstelių linijos nustatymo ir diferencijavimo. Ankstesni tyrimai rodo, kad Twist1 išraiška iki reguliuojama skrandžio vėžio prasta klinikinių rezultatų. Be to, Twist1 siūloma dalyvauti progresavimo žmogaus skrandžio vėžio. Tačiau jos biologinės funkcijos daugiausia lieka neištirta. Šioje studijoje, mes parodome, kad Tvist 1 raišką veda prie didelių iki reguliavimui FoxM1, kuri vaidina pagrindinį vaidmenį ląstelių ciklo progresavimo skrandžio vėžio ląsteles. Priešingai, nokdaunas iš Twist 1 sumažina FoxM1 išraiška, o tai rodo, kad FoxM1 gali būti tiesioginis transkripcijos tikslas Twist 1. Tuo molekuliniame lygmenyje, mes ir toliau atskleidžia, kad Tvist 1 gali surišti į promotoriaus regione FoxM1, o vėliau įdarbinti P300 sukelti FoxM1 iRNR transkripcija. Todėl, mūsų rezultatai atskleisti ankstesnis Unknown Tvist 1 /FoxM1 reguliavimo būdas, kuris gali padėti suprasti skrandžio vėžio platinimo mechanizmus

nurodomoji dalis:. Qian J Lo Y Gu X Žano W Wang X "( 2013) Twist1 Skatina skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją per Up-reglamento FoxM1. PLoS ONE 8 (10): e77625. Doi: 10,1371 /journal.pone.0077625

redaktorius: Devanand Sarkar, Virdžinija Sandraugos universitetas, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Gegužės 31, 2013; Priimtas rugsėjo 3 d 2013 m Paskelbta: Vasaris 24, 2013

Visos teisės saugomos: © 2013 Qian et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Autoriai neturi paramą ar finansavimą pranešti

konkuruojančių interesų.. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

epitelio-mezenchiminių-perėjimas (EMT) yra procesas, kurio metu epitelinės ląstelės praranda poliškumą ir ląstelių-to-ląstelių sukibimą ir atlikti dramatišką rekonstruoti citoskeleto [1,2]. Kartu su nuostolių epitelinių ląstelių sukibimą ir Citoskeletas komponentų, ląstelės išgyvena EMT įsigyti išraišką mezenchiminių komponentų ir migruojančių fenotipą [2,3].

Keletas svarbiausių induktoriai EMT yra transkripcijos veiksniai, įskaitant Twist 1, sraigė, o slunkius, kuris nuslopinti El cad išraišką [4,5]. Twist1 priklauso pagrindinio Helix-kilpa-spiralės transkripcijos faktorius šeimos [6]. Iš pradžių Twist1 buvo pasiūlyta labai svarbu į mesodermally gautų audinių, įskaitant raumenų ir osteogeninių ląstelių linijų [7,8] plėtrai. Vėlesni tyrimai parodė, kad Tvist 1 skatina EMT ir vaidina svarbų vaidmenį metastazių keliose auglio modelių [9,10]. Išraiška Twist 1 taip pat buvo susijęs skatinimo metastazių ir invazinių patologinių potipių kelių tipų vėžio [11]. Todėl Tvist 1 buvo pasiūlyta turėti onkogeninių savybes. Pavyzdžiui, padidėjusią Twist rabdomiosarkoma slopina Myc-sukeltas apoptozę ir trukdo p53 naviko slopinimą [12]. Up-reguliavimas Tvist yra susijęs su piktybinę transformaciją į T-ląstelių limfoma [13]. Priverstinis išraiška Twist sukelia pasipriešinimą žmogaus vėžio ląstelių vaistų, kurie slopina mikrotubulės susidarymą [14].

Tačiau poveikis ir mechanizmas Twist geno dėl gausėjančių skrandžio karcinoma lieka paslaptinga. Naujausi tyrimai parodė, kad Twist1 yra iki reguliuojama skrandžio vėžiu susijęs fibroblastų su prastos klinikinių rezultatų [15]. Be to, žemyn reguliavimas Tvist 1 geno slopino skrandžio vėžio ląstelių platinimu neigiamai reguliavimo AP-1 aktyvumą į cikloniniai D1 raiškos mažėja [16]. Šioje darbo, du skrandžio vėžio ląstelių linijos dirbo ištirti poveikį ir mechanizmą Tvist 1 geno apie ląstelių proliferaciją.

Medžiagos ir metodai

Mobilusis Kultūra

Keturi epitelio ląstelių linijas (NVI-N87, AGS, HGC-27 ir MGC80-3), gautos iš skrandžio karcinoma buvo gauti iš Amerikos tipas kultūros kolekcijos (JAV). Ląstelės buvo auginamos DMEM /F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA) papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (Gibco, Pekinas). Kultūros buvo palaikoma 37 ° C temperatūroje drėgnoje atmosferoje 5% CO _2.

sirnr, RNR gavybos ir Realaus laiko analizė

Ląstelės buvo pasėjamos į 6- gerai plokštės tada perkeltų su 50nm siRNA oligos skirtomis žmogaus Twist 1 (Dharmacon, JAV). SiRNR molekulė konkrečia žaliosios fluorescuojančio baltymo (GFP) buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Iš viso RNR buvo paimti iš ląstelių TRIzol reagento, o atvirkštinės transkripcijos vykdė Takara RNR PGR rinkinys (Takara, Kinija) pagal gamintojo protokolą. Siekiant kiekybiškai įvertinti palūkanų genų nuorašai, realaus laiko PGR buvo atliekama naudojant SYBR Green Pašaro Ex Taq (TAKARA, Japonija) nuo šviesos Jutiklis ciklų 480 (Roche ", Šveicarija).

laikini transfekcija ir liuciferazės Bandymai

Žmogaus FOXM1 rengėjas buvo papildytas iš žmogaus genomo DNR šabloną ir įterpiamas į pGL4.15 pagrindinė vektoriaus (PROMEGA). Mutantas Twist1 privalomas motyvas buvo sukurtas naudojant PGR mutagenezės rinkinį (Toyobo) su gruntu (mutacijų svetainės pabrauktas): 5'-CGCATTACGAATCAGGTTAAGCCAGTT-3 "ir atvirkštinis papildo gruntas. Visi laikinas transfekcija vykdė Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Shanghai), pagal gamintojo instrukcijas. Už liuciferazės reporteris tyrimų, ląstelės buvo pasėjamos į 24-duobučių lėkštelėse ir transfekuota su nurodytomis plazmidėmis. 48 valandas po transfekciją, liuciferazės veikla buvo matuojamas naudojant Dual liuciferazės reporterio testą sistema (PROMEGA, JAV).

Bendras imunoprecipitacijos

Ląstelės buvo nuimta, resuspenduota lizės buferiniame tirpale, kurio sudėtyje yra 50 mm tris- HCl (pH 7,3-7,5), 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0,5% TRITON X-100) ir proteazės inhibitorių. Lizatai inkubuojamos su 2,5 mikrogramų P300 arba IgG per naktį 4 ° C temperatūroje. A baltymą granulės buvo pridėta papildomų 4 valandas. Granulės, kurių sudėtyje yra imuninės kompleksų buvo plaunamas 1 ml ledinio lizės buferyje keturis kartus. Nuosėdos denatūruotas Laemmli (gelis pakrovimo) buferio, esant 95 ° C temperatūroje 10 min.

Western Blot

Ląstelės buvo nuimamas trypsinization, lizuojamos į Laeminli buferio, denatūruotas 10 min 80 ° C ir išspręstas TVS /PUSLAPIS gelius. Po to, kai munoblotingu, membranos buvo blokuotos PBS /0,1% Tween-20 su 7,5% Nonfat sauso pieno, taip pat pirminiai antikūnai buvo inkubuojamos PBS /0,1% Tween-20 su 0,1% -5% Nonfat sauso pieno. Antikūnai prieš Twist 1 FoxM1 buvo įsigytas iš Santa Cruz Biotechnology (JAV). Anti-P300 ir GAPDH antikūnai buvo gauti iš Abcam Company "(JAV). Anti-P21, P27, cikloniniai B1, cikloniniai D1, cikloniniai D2, cikloniniai E ir E-cad antikūnai buvo iš Cellsignaling (JAV).

Chromatino Imunoprecipitacijos (ChIP) Analizės

Chromatino imunoprecipitacijos ( Chip) Analizės komplektai buvo naudojami (Šiaurinė, JAV). Trumpai tariant, Ląstelės buvo nustatyta su 1% formaldehido ir toliau tvarkomi naudojant Šiaurinė lustas testą rinkiniai. Tirpus chromatino buvo immunoprecipitated su anti-Twist 1 IgG antikūnų. Po valymo, DNR mėginiai buvo kiekybiškai kiekybinė realaus laiko PGR naudojant pradmenis, apimančius proksimalinės regioną žmogaus FoxM1 rengėjas.

Statistinė analizė

Visi duomenys yra pateikiami kaip vidurkis ± SEM. Nustatyta statistinių skirtumų buvo nustatomas pagal dvipusiu t testas. Statistinis reikšmė nurodyti kaip * (P < 0,05), ** (P < 0,01) arba *** (P < 0,001).

rezultatai

poveikis Twist1 skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją

Tuo pirma, ištirti funkcinį vaidmenį Twist 1 ląstelių proliferacijos, mes transdukuojamos NVI-N87 ar AGS ląstelių adenovirusų sudėtyje yra Tvist 1 arba tuščias vektorių (1a ir 1b pav.) Suderinamas su ankstesniais tyrimais, e-cad išraiška, iš EMT procese [4,5] biologinis buvo žemyn reguliuoja Tvist 1 raiškos (pav S1A-1B). Be to, "Twist 1 raišką lėmė gerokai padidinti ląstelių skaičiaus visų tirtų ląstelių (1c ir 1D pav). Nuosekliai, bromodeoxyuridine (BrdU) analizė taip pat patvirtino, kad "Twist 1 raišką skatinamas ląstelių proliferaciją (1E ir 1F pav). Be to, "Twist 1 ekspresija ląstelės turėjo žymiai mažesnį procentą ląstelių G1 /G0 fazę ir padidėjęs procentas ląstelių S fazėje, palyginti su tuščiais užkrato perkeltų ląstelių (pav 1G-1H).

Kitas , NVI-N87 ar AGS ląstelės buvo pernešta su sirnr (siRNA) orientacija Twist 1. siRNR oligo parodė efektyvus Tvist 1 triuškinantis šiose dviejose ląstelėse, lyginant su GFP siRNR-transdukuotų ląstelių (pav 2A-2d). Kaip rezultatas, žemyn-reguliavimas Twist 1 Dėl to labai sumažėja ląstelių skaičių ir proliferacijos šių ląstelių (pav 2E-2H). Be to, triukšmo slopinimo ir Tvist 1 ženkliai padidino ląstelių procentą į G0 /G1 fazėje sumažėjo ląstelių procentą S fazėje (pav 2I-2J). Pažymėtina, kad mes palyginti platinimo veiklą pagal NVI-N87 ir AGS ląstelių su arba be transfekciją tuščias vektoriumi ar GFP siRNA. Mūsų rezultatai rodo, kad nei tuščias vektorius arba GFP siRNR įtakos ląstelių proliferaciją veiklą (S2A pav.) Be to, augimo gebėjimas ląstelių išreiškė didesnį Twist 1 lygius (NVI-N87 ir AGS ląstelių) yra santykinai daugiau nei kiti (HGC-27 ir MGC80-3 ląstelių) (S2C pav). Kartu paėmus, mūsų rezultatai rodo, kad Tvist 1 gali būti svarbus teigiamas reguliavimas skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją.

Twist1 įtakos išraiška ląstelių ciklo reguliavimo

Kaip Tvist 1 skatinamas ląstelių proliferaciją, mes išanalizavome savo funkcijas išraiškos genų, reguliuojančių G1 /S perėjimą, įskaitant CDK inhibitorių p21 ^{CIP1, P27 Kip1, The CDK reguliatorius cikloniniai B1, cikloniniai D1 cikloniniai D2 ir cikloniniai E. rezultatai nuo Real- laiko PGR ir imunoblotingu analizė NVI-N87 ląstelių pasiūlė, kad išraiška p21 CIP1, P27 Kip1 buvo downregulated o cikloniniai B1, cikloniniai D1, cikloniniai D2 ir cikloniniai E koncentracija buvo aktyvinama į Tvist 1-perkeltų ląstelių, palyginti su tuščiais užkrato perkeltų ląstelių (pav 3A-3b). Panašūs rezultatai taip pat buvo pastebėtas AGS ląstelių (pav 3C-3D), toliau, patvirtinantis, kad Tvist 1 gali turėti įtakos skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją. Nuosekliai, nokdaunas iš Twist 1 padidėjo P21 CIP1 ir P27 Kip1 išraiška, o sumažintas cikloniniai B1, cikloniniai D1, cikloniniai D2 ir cikloniniai E išraišką NVI-N87 ir AGS ląstelių (pav 4A-4d).}

Tvist 1 tiesiogiai nukreipta į transkripcijos faktorius FoxM1 skrandžio vėžio ląstelių

Ankstesni tyrimai parodė, kad keli transkripcijos veiksniai gali reguliuoti genų, susijusių su ląstelės ciklo, įskaitant p21 ^{CIP1, p27 serija Kip1 ir cikloniniai B1. Taigi, mes išanalizavo galimas transkripcijos faktorius, kurie dalyvauja reguliuojant ląstelių proliferaciją. Iš penkių tirtų transkripcijos faktorių, tik buvo rasta FoxM1 būti žymiai padidėjo NVI-N87 ląstelių ekspresija Twist 1 (pav 5A-5b). Iš FoxM1 indukcija taip pat buvo pastebėtas AGS ląstelių (pav 5C-5d). Be to, FoxM1 išraiška buvo sumažintas šių ląstelių išeikvoti Twist 1 (pav 6A-6d), o tai rodo, kad FoxM1 gali būti Tvist tikslas 1.}

Tvist 1 upregulates FoxM1 išraišką per įdarbinimo P300

Be to, mes sutelktas į molekulinio mechanizmo Tvist 1 reglamentavimo FoxM1 transkripcijos. Sekos analizė parodė, kad rengėjas regionas žmogaus FoxM1 geno esančius galimą Tvist 1 prijungimo vietą (tarp -357 ir -352 bp) (7a pav). Liuciferazė ataskaita analizė parodė, kad transkripcijos veikla laukinio tipo FoxM1 rengėjas buvo dramatiškai aktyvinama iki Twist 1, o transkripcijos veikla buvo panaikinta promotoriaus guolis mutaciją Twist 1-jungimosi vietų (7b pav.) Be to, Chip tyrimai parodė, kad Tvist 1 gali unikaliai jungiasi prie FoxM1 promotoriaus (7c pav.) Norėdami nustatyti, ar indukcija FoxM1 iki Twist 1 yra reikalinga jo proliferacijos sakant, mes atlikome eksperimentus su FoxM1 triuškinantis per siRNA oligos į NVI-N87 ląstelių (pav S3A-S3B). Kaip rezultatas, siRNR gelbėjo į ląsteles iš proliferacinio poveikio Gręžimo 1 raiškos (S3C pav). Nuosekliai, iš Twist 1 funkcijos dėl išraiškos lygių ląstelių ciklo reguliavimo, taip pat buvo atstatomi FoxM1 siRNA oligos (S3D paveikslas), o tai rodo, kad FoxM1 reikia už Twist 1 vaidmenis skrandžio vėžio ląsteles.

Kaip transkripcijos faktorius, Tvist 1 gali įdarbinti coactivators į taikinio geno ekspresijos reguliavimas. Ankstesni tyrimai parodė, kad P300 gali veikti kaip daugelį transkripcijos veiksnių coactivator. Mes taip išnagrinėta, ar P300 gali būti coactivator už Tvist 1 reglamentavimo FoxM1 išraiška. Kaip parodyta 7D paveiksle, Tvist 1 gali sąveikauti su P300 pagal coimmunoprecipitation. Transkripcijos veikla FoxM1 rengėjas buvo toliau aktyvinama pagal bendro transfekciją P300 ir pasukti 1 (7E pav). Be to, mes taip pat panaikino P300 išraišką naudojant siRNA oligos į NVI-N87 ląstelių (7F pav). Kaip ir buvo tikėtasi, "Twist 1 sukeltos FoxM1 išraiška buvo žymiai užapvalintos tyla ir P300 (pav 7G-7H). Minėti duomenys parodė, kad Twist 1 aktyvinama FoxM1 išraišką per transkripcijos coactivator kompleksų įdarbinimo, įskaitant P300.

Diskusijos

dabartinės studijų, mūsų rezultatai rodo, Twist 1 kaip kritinės reguliatorius skrandžio vėžio progresavimą. Tai pasiūlė keletą eilučių įrodymais. Pirma, Tvist 1 raiška skatina, o jos trūkumas slopina ląstelių proliferaciją kaip parodyta BrdU ir ląstelių ciklo analizę. Antra, "Twist 1 paveikia genų ekspresiją ląstelių ciklo moduliatoriai, įskaitant CDK inhibitoriais p21Cip1, p27Kip1, The CDK reguliatorius cikloniniai B1, cikloniniai D1 cikloniniai D2 ir cikloniniai E. Trečia, Tvist 1 tiesiogiai upregulates FoxM1 išraišką tuo transkripcijos lygio, per įdarbinimas P300. Be to, nokdaunas endogeninio FoxM1 išraiškos slopina dauginimosi efektą Twist 1, tai rodo, kad FoxM1 svarbu už Twist 1 vaidmenis skrandžio vėžio ląsteles.

Suaugusiems Tvist 1 daugiausiai išreikštas blastas įskaitant osteoblastinėmis, myogenic, odontoblastic ir mielomonocitine linijų, išlaikyti savo neišrūšiuotos būklę [17]. Be to, Twist1 taip pat yra svarbus reguliatorius daugelio kitų biologinių procesų, įskaitant mezenchimos plėtros ir rudos riebalų metabolizme. Pavyzdžiui, Twist1 Manoma, kad slopinti osteoblastų diferenciaciją neigiamai reguliavimo Runx2 [17]. Be to, "Twist-1 selektyviai išreiškė riebaliniame audinyje, sąveikauja su PGC-1α, slopinti mitochondrijų apykaitą ir atkabinimą. Kaip rezultatas, transgeninių pelių ekspresija Tvist-1 riebalinio audinio yra linkę į didelės riebalų dietos sukeltas nutukimas, o jos Heterozigotinių pelç yra atsparūs nutukimui [18]. Be to, "Twist 1 atominės išraiška buvo taip pat pastebėjo ne noncancerous epitelio, o tai rodo, kad Tvist 1 gali turėti fiziologinį vaidmenį normalios ląstelės [19]. Vėlesni tyrimai parodė, kad Tvist 1 išraiška koreliuoja su stipriu invazijos, taip pat blogos prognozės epitelį vėžio. Skrandžio vėžiu, neseniai ataskaita parodė, raiška į Tvist 1 geno dažniau randama difuzinis tipo karcinoma audinių su aukštos N-cad genų ekspresiją [20]. Tačiau nėra galutiniai rezultatai parodė Tvist skatina skrandžio vėžio plitimą. Mūsų išvados rasti Twist tikriausiai skatino skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją, naudojant BrdU Įsteigimo tyrimų. Be to, FoxM1 pradžių buvo identifikuojami kaip naują transkripcijos tikslo Twist 1.

FoxM1 jungiasi promotorių regionus su pasiūlymo dėl sutarimo [TAAACA] atpažinimo seka pageidavimus, nors su mažesne afiniteto nei kitų forkhead baltymų [21]. Jo išraiška tik proliferuojančias ląstelių, ir pašalinti iš nesidalinančius ir mirtinai diferencijuotų ląstelių. Ji kontroliuoja genų, reikalingų tiek G1 /S ir G2 /M perėjimo išraišką ir yra būtinas mitoziniam atvykimo ir progresavimo, užtikrinant chromosomų stabilumo [22,23] priežiūra. Amplifikaoija FoxM1 geno buvo pastebėta daugelio navikų, tokių kaip kasos karcinomos, krūties vėžio ir kepenų ląstelių karcinoma [24-27]. Skrandžio vėžio, FoxM1 išraiška yra taip pat iki reguliuojama ir jo aktyvumo slopinimas veda prie ląstelių senėjimo, kuris yra bent jau iš dalies, priklauso nuo p27 kip1 [28,29]. Be to, jos teigiamą vaidmenį ląstelių proliferaciją, FoxM1 buvo įrodyta, kad žaisti vaidmenų kitų vėžio susijusių procesų, pavyzdžiui, invazija ir metastazių [30]. Jo išraiška lygiai koreliuoja su prastos prognozės ir metastazių įvairių navikų, įskaitant skrandžio karcinoma [31], o tai rodo, kad naudojant FoxM1 kaip prognozės ir /ar diagnozės persekiotoją galimybę. Kartu paėmus, FoxM1 yra perspektyvus ir patrauklus taikinys vėžio gydymo. Todėl yra labai svarbu suprasti, kaip FoxM1 reglamentuoja siekiant projektuoti geresnių gydymo metodai.

FoxM1 išraiška griežtai reguliuojamas tiek mRNR ir baltymų lygius. Gausa padidinimas nuo S fazėje, snapeliai įrašą G2 ir M metu ir yra nevisavertis per mitoziniam išėjimo. Panašiai, jos transkripcijos veikla yra griežtai reguliuojamas visoje ląstelių ciklo keliose vietose fosforilinimo skirtingų kinazės, ir jos priešpriešinių fosfatazes s, siekiančios savo didžiausią veiklą G2 etapo ląstelės ciklo [32]. Neseniai, ji buvo pranešė, kad FoxM1 sąvoka taip pat gali būti moduliuojama mikro RNR. FoxM1 buvo įvardytas kaip tiesioginė tikslinė PPN-134, kurio koncentracija yra atvirkščiai koreliuoja su invaziniu kai kurių NSLPV ląstelių [33] potencialą. Be to, FoxM1 taip pat represijų miR-370 skrandžio vėžio ląstelių [29], o tai rodo, kad tolesni tyrimai privalo ištirti, ar Tvist 1 galėtų bendradarbiauti šiuos reguliavimo būdus.

Taigi, mes čia rodo, kad Tvist 1 raišką veda prie didelių iki reguliavimui FoxM1, kuri vaidina pagrindinį vaidmenį ląstelių ciklo progresavimo skrandžio vėžio ląsteles. Priešingai, nokdaunas iš Twist 1 sumažina FoxM1 išraiška, o tai rodo, kad FoxM1 gali būti tiesioginis transkripcijos tikslas Twist 1. Mes taip pat atskleidžia, kad Tvist 1 gali jungiasi prie promotoriaus regione FoxM1, o vėliau įdarbinti P300 sukelti FoxM1 iRNR transkripcija. Todėl, mūsų rezultatai atskleisti ankstesnis Unknown Tvist 1 /FoxM1 reguliavimo būdas, kuris gali padėti suprasti skrandžio vėžio platinimo mechanizmus.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
(AB) iRNR ir baltymų koncentracija E-cad į NVI-N87 (A) ir AGS (B) ląstelės perkeltų su adenovirusų išreiškiantys tuščias vektorių (EV) arba Tvist 1.
doi: 10,1371 /journal.pone .0077625.s001
(TIF)
S2 pav.
(A-B) ląstelių proliferacinis potencialas (bromdeoksiuridino) buvo nustatytas NCI-N87 (A) arba AGS (B) ląstelių be arba su transfekciją tuščius vektoriaus (EV) arba GFP siRNA. (C) endogeniniai Tvist 1 išraiška lėmė Vakarų dėmė keturių skrandžio vėžio ląstelių (NVI-N87, AGS, HGC-27 ir MGC80-3). Augimo kreivė iš keturių ląstelių linijų buvo matuojamas
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0077625.s002
(TIF)
S3 pav.

(A-B) mRNR (A) ir baltymų (B) lygiai FoxM1, esantys NCI-N87 ląstelių, transfekuotų su siRNR oligos prieš NCI-N87 arba neigiamos kontrolės (Ctrl). (C), ląstelių proliferacija aktyvumas buvo matuojamas BrdU tyrimai su NVI-N87 ląsteles. Ląstelės iš anksto buvo transfekuotos su siRNR oligos 24 valandoms, o tada, transfekuota su tuščiu vektoriaus (EV) ar susuka 1 d dar 24 valandas.
(D) iRNR lygiui p21, p27, nuo ciklino B1, nuo ciklino D1, nuo ciklino D2 ir CIKLONAS El lėmė realaus laiko PGR NVI-N87 ląsteles. Ląstelės buvo iš anksto perkeltų su siRNA oligos 24 valandas, o po to perkeltų su tuščiu vektoriaus (EV) arba Tvist 1 dar 24 valandas
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0077625.s003
(TIF)

• PLoS ONE: C-Met kaip prognostinio Marker skrandžio vėžiu: sisteminė apžvalga ir metaanalizė
• PLoS ONE: Prastas prognozė fosfatazės regeneruoti Ilgaamžis 3 raišką skrandžio vėžys: metaanalizė