PLoS ONE reglamentavimą B ląstelių funkcija yra užslopinta rūkymas ir nutukimas H. pylori infekuotų dalykų ir yra susijęs su padidinta rizika Skrandžio Cancer

Anotacija

Helicobacter pylori
infekcija pasitaiko daugiau nei pusė pasaulio gyventojų ir yra pagrindinė priežastis, dėl skrandžio vėžio. Gyvenimo būdo ir mitybos veiksnių, tokių kaip tabako rūkymas ir nutukimas serija, buvo nustatyta, kad pakelti už vėžio išsivystymo riziką. Šiame tyrime siekėme nustatyti metu H Viesbutis The imunologiniai aspektai. pylori
infekcija ir skrandžio vėžio vystymąsi. Mes nustatėme, kad B ląsteles nuo H
. pylori
-infected pacientai pristatyta pakitusi sudėtis ir funkcijos, palyginti su sveikų pacientų. IL-10-išreikšti CD24 ^{+ CD38 + B ląstelės buvo aktyvinama į H
. pylori
-infected pacientai, esančius stiprus reguliavimo veiklą, slopina T ląstelių PRO-uždegiminių citokinų sekreciją, ir atsakė tiesiai į H
. pylori
antigenas stimuliacija. Įdomu tai, kad O
. pylori-
užsikrėtę rūkymo dalykai ir nutukusius, IL-10 numeris + B ląstelių ir CD24 + CD38 + B ląstelės buvo sumažintas, palyginti su O
. pylori
-infected besimptomis dalykų. tarpininkaujant CD24 + CD38 reguliavimo funkcijos + B ląstelių, taip pat buvo sumažėjusi. Be to, skrandžio vėžio teigiami pacientai sumažino IL-10-gaminti B ląstelių dažnius po H
. pylori
-stimulation. Iš viso, šie duomenys rodo, kad H
. pylori
-infection, CD24 + CD38 + B ląstelių yra aktyvinama ir vaidina svarbų vaidmenį slopinant Pro-uždegiminių atsakymus, galbūt IL-10 gamybos, funkcija, kuri nebuvo pastebėta rūkymo ir nutukusių pacientų}

nurodomoji dalis:. Li G Wulan H Lyrinės Z Paik PA, Tsao ML Goodmanas GM ir kt. (2015) Reguliavimo B ląstelių funkcija yra užslopinta rūkymas ir nutukimas H
. pylori
-Infected Dalykai ir koreliuoja su padidėjusiu rizikos skrandžio vėžio. PLoS ONE 10 (7): e0134591. Doi: 10,1371 /journal.pone.0134591

redaktorius: Masaru Katoh, Nacionalinis vėžio centras, Japonija

Įstojo: vasario 3 2015; Priėmė: Lie 13, 2015 m Paskelbta 30 Liepos 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Li et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus

finansavimas:.. autoriai neturi paramą ar finansavimą pranešti

konkuruojančių interesų. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Helicobacter pylori (o
. pylori)
yra gramneigiamų patogeninių bakterijų rūšies rasta daugiau nei pusė pasaulio gyventojų ir pirmenybė slopina viršutinę virškinimo trakto, įskaitant skrandžio epitelio ir dvylikapirštės žarnos trakto [1,2]. Nors didžioji dauguma (> 80%) infekcijos simptomų, 10-20% infekuotiems asmenims plėtos pepsinės opos, o 1-2% įgis skrandžio vėžiu [3]. Tikslus mechanizmas vėžio vystymąsi kaip H
rezultatas. pylori
infekcija nėra aiškiai apibrėžta, tačiau lėtinis neapdorotas uždegimas viršutinėje virškinimo trakto Manoma prisidėti prie tolesnio žalos skrandžio epitelio [4,5]. Konkrečiau kalbant, uždegimas-susijęs signalinės molekulės, pavyzdžiui, auglio nekrozės faktoriaus alfa (TNF-a), buvo nustatyta, kad skatinti skrandžio tumorigenezei ir yra aktyvinama į H
. pylori
infekcija [6]. Kitų Pro-uždegiminių citokinų išskiriami T ląstelių, įskaitant IL-2, IL-17, ir interferono gama (IFN-g), yra taip pat aktyvinama į H
. pylori
infekcija ir yra susijęs su padidėjusia rizika susirgti skrandžio Tumorigenesis [7-10]. Kitų veiksnių, pavyzdžiui, nuolatinio sąlyčio su tabako rūkymu ir nutukimu serija, teigiamai koreliuoja su padidėjusia skrandžio vėžio rizika, tačiau pagrindinis mechanizmas neaiškus [3,11].

Neseniai tolerance- vaidmenį skatinančius B ląstelių buvo besiskiriantis tuo, infekcinių ligų ir autoimuninių ligų [12] serijos. Pelėms, CD1d ^{hiCD5 buvo nustatyta + B ląstelės padėti sukurti imuninę toleranciją provokuojanęių aplinką audiniuose ir turi vaidmenį užkertant kelią autoimuninė indukcijos [13]. Žmonėms, CD19 + CD24 hiCD38 Hi B ląstelės turi panašios tolerancija skatinančius vaidmenį sveikas, taip pat HBV infekuotų asmenų [14]; autoimuninės ligos pradžia yra susijęs su praradimo reguliavimo funkcija šioje B ląstelių pogrupyje [15]. IL-10 yra pleiotropic imunoreguliavimo citokinų, kad yra galintys slopinti apie Pro-uždegiminių citokinų, įskaitant IL-2, IL-17, IFN-g ir TNF-a serija, ir yra įrodyta, kad stipriai slopinti antigeną pateikiančių pajėgumą antigeną pateikiančių ląstelių kiekis [16]. Centrinė visiems tolerancijos skatinančius B ląstelių pogrupiuose, IL-10 gamyba yra lemiamas B ląstelinis reguliavimas slopina T ląstelinis uždegimą [12,17]. B ląstelių tarpininkaujant reguliavimo vaidmuo H
. pylori
infekcija ir po indukcijos skrandžio vėžio, tačiau anksčiau nebuvo tirta.}

Šiame tyrime mes išanalizavo B ląstelių sudėtis ir citokinų išraiška profilio H
, pylori
-infected dalykų. Padidėjęs procentai CD24 ^{+ CD38 + B ląstelių ir sumažinti procentinius dydžius negydytiems B ląstelių ir poilsio atminties B ląstelės buvo rasti H
. pylor
i-infekuotų asmenų. CD24 + CD38 + B ląstelių H
. pylori infekuotiems asmenims buvo
padidėjo procentas IL-10 gamybą ir buvo nuslopintas PRO-uždegiminių citokinų išraiška, kai bendrai kultūringas su autologinio T ląsteles. O
. pylori -ai
timulated CD24 + CD38 + B ląstelės H
. pylori-
infekuotų asmenų stipriai išskiriami IL-10. Įdomu tai, kad O
. pylori infekuotų rūkyti
dalykai ir nutukusių subects buvo sumažėjęs CD24 + CD38 + B ląstelių. buvo rasta Be to, CD24 + CD38 + reguliavimo B ląstelių rūkymo ir nutukusius eksponuoti praradimą slopinančio funkcija, kai bendrai kultūringas su autologinio T ląstelių ir skatino sumažintos lygius IL-10 po tiesioginio O
. pylori
stimuliacija. Be to, rūkymas ir nutukusiems pacientams, kurie vėliau išsivysčiusių skrandžio vėžiu, IL-10 išskiriančių B ląstelių dažniai buvo dar labiau sumažintos, lyginant su tiriamųjų, kurie nebuvo plėtoti skrandžio vėžiu. Iš viso, šie duomenys rodo, kad CD24 + CD38 + B ląstelės buvo aktyvinama į H
. pylori
-infected ir buvo funkciškai slopino T ląstelių uždegiminių citokinų gamybą. CD24 + CD38 + B ląstelės Rūkančių pacientų ir nutukusius, tačiau buvo neveiksmingi H
. pylori
-stimulation, pagaminta mažiau IL-10 ir trūko slopinančią pajėgumus.}

Medžiagos ir metodai

Studijų dalykai

buvo gautas Pirminiai periferinio kraujo mėginiai nuo 55 H
. pylori
-infected opa be pacientai, iš kurių 15 yra pirminiai vartotojai tabako dūmų ir 15 klasė I nutukę (30kg /m ^{2 "< KMI < 35 kg /m 2 ) subjektai, taip pat 15 sveiki, O
. pylori
-uninfected opa be asmenys. Asmenys, sergantys lėtiniu poveikio padėvėtų rūkymo buvo pašalinti iš tyrimo. Nerastas nei didelių skirtumų dėl amžiaus, lyties, o ankstesnė infekciją tarp tyrimo grupių. Visi tiriamieji buvo stebimi 5 metus dėl vėžio išsivystymo būseną. Visi dalykai buvo nesusiję asmenys iš Henan provincijoje ir aplinkinių rajonų. Pacientai buvo įdarbinti tarp Sau 2008 Dec 2013 iš 155-ajame centrinėje ligoninėje PLA Kinijoje. Kontrolė buvo vėžio nemokamai asmenys atsitiktinai atrinktų iš Bendrijos vėžio atrankinės patikros programos, ankstyvam atliekamas tuose pačiuose regionuose tuo pačiu laikotarpiu pacientai buvo įdarbinti vėžio. Atsako dažnis abiejose kontrolės ir atvejų buvo 95%. Atrankos kriterijai sveikų įtraukti vėžio nemokamai asmenis ir dažnio suderinimą tik tais atvejais, pagal lytį ir amžių (± 5 metų). Tuo įdarbinimo, parašyta informuotas sutikimas buvo gautas iš kiekvieno dalyko ir asmens duomenų, pavyzdžiui, lytį, amžių, svorį, ūgį ir tabako rūkymo buvo surinkti per klausimyną. Ne visi subjektų mėginiai buvo naudojami visų eksperimentų dėl nepilno pacientų laikymosi ir nepakankamo ląstelių kai kuriems pacientams. Šis tyrimas buvo patvirtintas pagal institucinius peržiūros valdybos 155. Centrinės ligoninės PLA.}

Mėginio paruošimas

periferinio kraujo vienbranduolių ląstelių (PKVL) buvo atskirta nuo periferinio kraujo mėginiuose su standartine Ficoll-Hypaque tvarka ir užšaldyti karto -150 ° C iki naudojimo, arba naudojami eksperimentams nedelsiant pažymėti. Reguliariai kultūros terpė yra RPMI-1640 papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo, 5 ml 100 × penicilino /0,1 mg /ml streptomicino, ir 5 ml 2mM L-glutamino. Ląstelės buvo auginamos 5% CO _{2 37 ° C temperatūroje nurodytam laikotarpiui.}

Mobilusis izoliacija

T ir B ląstelės buvo izoliuoti naudojant žmogaus T ląstelių arba B ląstelių Neigiama Atrankos komplektas (Stemcell, Vankuveris, Kanada), po numatytus gamintojo protokolus. Ir T ir B ląstelių išskyrimas narkotiko grynumas tėkmės buvo didesnis nei 94% citometrijos. Dėl išnaudosime CD24 ^{+ CD38 + B ląstelių kai kurių eksperimentų, išgrynintas B ląstelės buvo tamsintas su PE anti-human CD24 ir APC anti-human CD38 30 min. Ląstelės tada buvo išsiųsti gyventi ląstelių rūšiavimo ir CD24 + CD38 + ląstelių buvo išeikvoti. Visame B ląstelių aplinkoje, viso B ląstelės buvo nusiųstas gyventi ląstelių rūšiavimo be antikūnų}

tėkmės citometrijos

buvo naudojami šie anti-human monokloniniai antikūnai. IL-10, TNF dalis (eBioscience, San Diegas, CA, JAV); CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD24, CD27, CD38 (Biolegend, San Diegas, CA, JAV); IFN-g (BD biomokslai, San Chosė, CA, JAV); CD8 (Invitrogen, Grand Island, NY, JAV). Išgrynintas žmogaus IgG (Biolegend, San Diego, CA, USA) buvo naudojamas siekiant užkirsti kelią Fc receptorius, kai dažymo populiacijas, kurių sudėtyje yra B ląstelių. Kai eksperimentų, phorbol-12-miristatas-13-acetato (PMA, Sigma), ionomycin (Sigma, Miunchenas, Vokietija), arba termiškai žuvo H
. pylori
( "Sigma, Miunchenas, Vokietija), buvo naudojamos siekiant skatinti ląstelių. GolgiStop ir GolgiPlug buvo pridėta 6H išankstinį į mobiliuosius derliaus ląstelėje dažymo IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a, ir IL-10. FlowJo buvo naudojamas tėkmės citometrijos analize.

Luminex tyrimas

IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a ir IL-10 iš T ląstelių ir B ląstelių buvo kiekybiškai matuojamas iki Multiplex Luminex tyrimą nenustatyta gamintojo su pakeitimais (EPD MILLIPORE, Etobicoke, Kanada) protokolus. A 2x10 ^{5 T ląstelių ir /arba B ląstelių, kad bendras buvo padengtą kiekvienoje 96 šulinėlių plokštelės duobutę (Corning, Tuksberio, MA, JAV). B ląstelių stimuliacija, termiškai žuvo H
. pylori
buvo įtraukta į B ląsteles, kurios buvo pasėja į 96 šulinėlių transwell plokštės (Corning ", Tuksberio MA) apačioje. "T ląstelių stimuliacija, iš apačios į dalis transwell plokštės, iš anksto buvo inkubuojami su anti-žmogaus CD3 (klonas OKT3) per naktį ir išplauti, po kurio gryninamas T ląstelės buvo perkelti į plokštelės. Žmogaus citokinų imobilizuotą antikūną granulės buvo pridėta prie viršutinės kameroje 96-ių šulinėlių transwell plokštės. vėliau dvylika valandų, karoliukai buvo nuimta, išplauti ir skaityti pagal gamintojo protokolą.}

Statistinė analizė

D'Agostino ir "Pearson visų normalumas testas buvo naudojamas patikrinti, ar duomenys buvo paprastai platinamas. Vienpusis dispersinė analizė (ANOVA) buvo naudojamas palyginimams tarp kelių grupių, po kurių Dunn testo. Studento t testas buvo naudojamas palyginimus tarp dviejų grupių. Jei duomenų rinkiniai ženkliai nukrypo nuo normaliojo pasiskirstymo, buvo naudojami Nenparametrinai testai. Visi statistinės analizės buvo atlikta naudojant Prism (GraphPad Software). P < 0,05 buvo laikomas reikšmingu. Rezultatai buvo parodyta, kaip vidurkis ± S.E.M.

Rezultatai

O
. pylori
-infected dalykai buvo keičiami cirkuliuojančių B ląstelių sudėtis

Jei išanalizuoti galimus pokyčius B ląstelių atsakymų vaidmenį H
. pylori
infekcija ir kaip ji gali turėti įtakos rūkymas ir nutukimas, 15 sveikų H
. pylori
-uninfected ( O
. pylori
-uninfected) savanoriai, 20, O
. pylori
-infected besimptomis ne rūkymas nutukusiems (besimptomis) dalykų, 15 H
. pylori
-infected rūkymas nutukę (rūkymas) dalykų ir 15 H
. pylori
-infected nerūkančiųjų nutukę (nutukusiems) tiriamieji buvo įdarbintas šiame tyrime. Demografiniai ir klinikiniai duomenys buvo apibendrinti 1 lentelėje

Cirkuliacinis B ląstelių periferiniame kraujyje sveikų sudaro daugiausia IgD ^{+ CD27 - negydyti B ląstelių ir CD21 + CD27 + ilsisi atminties B ląsteles, o lėtinių infekcijų, yra Dažnai negydytiems B ląstelių mažėjimas ir poilsio atminties B ląsteles, ir į CD21 padidėjimas štai aktyvuota B ląsteles ir CD24 + CD38 + B ląstelės [15,18]. Mes iš pradžių išnagrinėjo cirkuliuojančių B ląstelių H
sudėtį. pylori
-infected dalykų. Periferinio kraujo vieno branduolio ląstelių (PKVL) buvo tamsintas paviršinio žymeklio išraiška tiesiogiai ex vivo
(pav 1A). Mes nustatėme, kad lyginant su H
. pylori
-uninfected sveiki, visi O
. pylori
-infected grupės esančius mažesnius procentinius dydžius IgD + CD27 - negydyti B ląstelių (p < 0,001 visi, pav 1B ir 1C). Į CD21 procentai + CD27 + poilsio atminties B ląstelės buvo sumažintas H
. pylori
-infected rūkymo dalykai ir nutukusius palyginti su sveikų asmenų (p < 0,001 abu), o CD21 procentais + CD27 + B ląstelių nutukusius buvo sumažintas, palyginti su O
. pylori
-infected besimptomis dalykus (P < 0,01). Įdomu tai, kad CD24 procentai + CD38 + B ląstelės buvo svyravo tarp skirtingų grupių H
. pylori
-infected dalykų. O
. pylori
-infected besimptomis dalykai pateikta daug didesnės procentinės CD24 + CD38 + B ląstelių negu sveikų (p < 0,001). Iš CD24 + CD38 + B ląstelių procentas buvo sumažintas rūkymo dalykų, palyginti su besimptomiams dalykų (p < 0,05), bet vis tiek didesnis nei sveikų (p < 0,001). Nutukusių asmenų organizme CD24 + CD38 procentais + B ląstelės buvo reikšmingai nesiskyrė nuo sveikų, bet buvo sumažintas nuo besimptomiams dalykų (p < 0,001)}

O
. pylori
-infected dalykai buvo keičiami B ląstelių naviko išraiška aprašymą

Anksčiau buvo nustatyta, B ląstelės sustiprina ar slopina imuninį atsaką sukuriant citokinų su įvairių funkcijų, įskaitant pro- serijinė gamyba uždegiminių citokinų, tokių kaip IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-g, o TNF-a, taip pat IL-10 ir transformuojasi augimo faktoriaus beta (TGF-b), kaip reguliavimo citokinų [19] , Čia mes išnagrinėjo citokinų išraišką B ląstelių studijų dalykų. Mes nustatėme, kad ex vivo
išraiška IL-2, IFN-g, TNF-a B ląstelių buvo padidintas H
. pylori
-infected rūkymo dalykai ir nutukusius negu sveikų (pav 2a). Jokių reikšmingų skirtumų nebuvo rasta TGF-b išraiška.

CD24 ^{+ CD38 + B ląstelės turi reguliavimo funkcijas kitų tyrimų ir turėjo įdomių išraiškos lygį skirtingose ​​ H
. pylori
-infected grupės (pav 1C). Mes išnagrinėjo ląstelėje citokinų ekspresiją CD24 + CD38 + B ląstelių. Kaip parodyta pav 2B, citokinų išraiška CD24 + CD38 + B ląstelių skyrėsi nuo ne CD24 + CD38 + B ląstelių (iš viso B ląstelių atėmus CD24 + CD38 + B ląstelių) tuo, kad jie nebuvo pagaminti aukšto lygio IFN-g ir TNF-a, kai stimuliuojama su PMA /ionomycin, tačiau išreiškė labai aukšto lygio IL-10, tiek pagal nestimuliuotų ir skatino sąlygomis. Mes palyginti IL-10 gamybą iš įvairių B ląstelių pogrupiuose ir nustatė, kad CD24 + CD38 + B ląstelės visose tiriamųjų grupėse išsiskiria daug didesnis IL-10, nei ne CD24 + CD38 + B ląsteles, tiek pagal nestimuliuotų sąlygomis, taip pat PMA /ionomycin skatino sąlygomis (pav 2C). Taigi mes manome, CD24 + CD38 + frakcija kaip pagrindinį IL-10-gamybos B ląstelių pogrupyje. Per H
. pylori
-infected grupė, besimptomis dalykai turėjo didesnę procentinę IL-10-išreikšti ląstelių CD24 + CD38 + B ląstelių negu sveikų žmonių, o O
. pylori
-infected nutukusių pacientų mažesnes IL-10 ekspresija ląstelių CD24 + CD38 + B ląstelės nei besimptomis pacientų (pav 2C). Mes tada dauginama IL-10 + ląstelių dažnį CD24 + CD38 + B ląstelės su CD24 + CD38 + ląstelių Iš viso B ląstelių gauti procentais "numeris" IL-10-išreikšti ląsteles į B ląsteles, ir nustatė, kad tiek H
. pylori
-infected besimptomiu ir rūkymo dalykai turėjo didesnį IL-10 + B ląstelių negu sveikų asmenų (p < 0,001 ir P < 0,01, atitinkamai). Per H
. pylori
-infected grupė, rūkymas ir nutukimas ženkliai sumažino IL-10 + B ląstelių dažnius (P < 0,001 abu). iš besimptomis dalykų}

Visi kartu, šie duomenys parodė, kad reguliavimo citokinų IL-10 yra daugiausia gaminamas CD24 ^{+ CD38 + B ląstelių ir yra didesnė H
. pylori
-infected besimptomis dalykų. Rūkymas ir nutukimas sumažėjo IL-10 raišką CD24 + CD38 + B ląsteles.}

O
. pylori
-infected besimptomis dalykai turėjo daugiau imuninę toleranciją provokuojanęių veiklą procesų, kuriuose CD24 + CD38 + B ląstelių nei rūkymas ir nutukusius

Reguliavimo B ląstelės buvo slopina T ląstelių atsakus lėtinių virusinių infekcijų, tokių kaip hepatito B infekcijos ir žmogaus imunodeficito viruso infekcijos [14,20], nustatant imuninę toleranciją provokuojanęių aplinką per IL-10 iki uždegimas [15,21] indukcijos. Mes išnagrinėti, ar IL-10 gamybos CD24 ^{+ CD38 + B ląstelės turėjo panašias reguliavimo poveikį H
. pylori
-infection. CD4 + T ląstelės bendrai išauginti su autologinio CD24 + CD38 + - išeikvoti B ląstelių gerokai padidėjusi gamyba IL-2, IL-17, IFN-g, TNF-a, nei CD4 + T ląstelės cocultured su visa B ląstelių, į H
. pylori
-infected besimptomiams ligoniams (pav 3a). Rūkančių pacientų ir nutukusius, toks poveikis nebuvo stebėta. Be to, CD8 + T ląstelės H
. pylori
-infected besimptomiu bendrai kultūringas su autologinio CD24 + CD38 + - išeikvoti B ląstelių gerokai sustiprinti IFN-g, TNF-a sekrecijos nei toms bendrojo kultūringas su visa B ląstelių ( pav 3B). Vėlgi, toks poveikis nebuvo pastebėtas rūkymo dalykų ir nutukusius. Atrodo, kad T ląstelių citokinų raiškos slopinimo būti tarpininkaujant CD24 + CD38 + B ląstelių, nes žemiausia citokinų gamybą buvo pastebėtas CD4 + ir CD8 + T ląstelės bendrai išauginti su CD24 vien + CD38 + B ląstelių. Iš viso, šie duomenys parodė, kad CD24 + CD38 + B ląstelių H
. pylori
-infected dalykai slopino CD4 + ir CD8 + T ląstelių PRO-uždegiminių citokinų gamybą H
. pylori
-infected besimptomis dalykų. Rūkymas ir nutukimas slopinamas reguliavimo veiksmus CD24 + CD38 + B ląstelės.}

IL-10 išsiskyrimą, CD24 + CD38 + B ląstelių upon H
. pylori
stimuliacija įvairių dalykų

Kitas siekiama išnagrinėti IL-10 ląstelę mechanizmą B ląstelių H
. pylori
-infected dalykų. IL-10 gamyba yra lemiamas reguliavimo B ląstelių funkcija [12,13]. Toll-kaip receptorių signalizacijos yra pagrindinis IL-10 ląstelę mechanizmas B ląstelių, ir buvo parodyta moduliuoti citokinų išraišką H
. pylori
infekcija [22,23]. Mes išbandėme, ar į H
buvimą. pylori
gali tiesiogiai upregulate IL-10 sekreciją CD24 ^{+ CD38 + B ląstelių. Išgrynintas B ląstelės PKVL buvo auginamos nesant ar esant termiškai žuvo H
. pylori
bakterija. Po to, kai 72H inkubatorių, IL-10 sekrecijos skystyje virš nuosėdų buvo matuojamas pagal Luminex. Į B ląstelės taip pat buvo paruošta ląstelėje IL-10 dažymą. Kaip parodyta Fig 4A, IL-10 sekrecijos supernatanto padidėjo ir H
. pylori
-uninfected sveikiems tiriamiesiems ir H
. pylori
-infected ne rūkymas nutukusių besimptomis dalykai po H
. pylori
-stimulation (P < 0,01 ir P < 0,05, atitinkamai). Pav 4B rodo, kad IL-10 išskiriančių B ląstelių procentas buvo aktyvinama į CD24 + CD38 + B ląstelių po H
. pylori
stimuliacija sveikų ir besimptomiu (P < 0,001 ir P < 0,05, atitinkamai). Priešingai, IL-10 virš nuosėdų koncentracija ir IL-10 gamybos CD24 + CD38 + B ląsteles nuo H
procentas. pylori
-infected rūkymo dalykai ir nutukusius reikšmingai padidėjo po H
. pylori
-infection. Šie duomenys rodo, kad rūkymas ir nutukimas buvo sutrikusi IL-10 indukcija nuo B ląstelių po H
. pylori
stimuliacija, ir pasiūlė, kad iš dalies reguliavimo funkcija CD24 nuostoliai + CD38 + B ląstelės nuo rūkymo dalykus ir nutukusius buvo galbūt dėl ​​nesugebėjimo upregulate IL-10 sekrecija, reaguojant į bakterijų antigenų stimuliacijos (žr diskusiją).}

skrandžio vėžio teigiamas pacientai H
. pylori
-infected rūkymas ir O
. pylori
-infected nutukusių grupės turėjo žemesnius dažnius IL-10 ^{+ B ląstelių}

Rūkymas ir nutukimas buvo žinoma, kad padidinti skrandžio vėžio išsivystymo riziką O
. pylori
-infected dalykų. Nuo rūkymas ir nutukimas taip pat slopinamas normalios reguliavimo B ląstelių funkcijas, mes patikrino, ar šie du reiškiniai yra susiję. Mes nustatėme, kad rūkymas dalykus ir nutukusius, tiems, kurie tapo teigiamas skrandžio vėžio statusą turėjo žymiai žemesnius dažnius IL-10 ^{+ ląstelių CD24 + CD38 + B ląstelių po O
. pylori
stimuliacija, nei tie, kurie išliko neigiamas skrandžio vėžio išsivystymo (pav 5A P. ≪ 0,05 abu). Kita vertus, neradome, kad vėžio teigiami ir neigiami vėžio pacientams buvo reikšmingai skiriasi pagal jų dažniai CD24 + CD38 + B ląstelių Iš viso B ląstelių (pav 5B). Ne, O
. pylori-
užsikrėtę besimptomis pacientų šio tyrimo tapo skrandžio vėžys teigiamas.}

Diskusijos

O
. pylori
infekcija yra pagrindinė priežastis, dėl skrandžio vėžio vystymąsi. Nors infekcijų dauguma buvo besimptomė ir pagydomas, iš dalykų poaibis nepavyksta gydymo ir pažangą į skrandžio vėžį. Be to, rūkymas ir nutukimas padidinti vėžio išsivystymo riziką, o mechanizmai nėra visiškai aišku. Šiame tyrime mes pirmą kartą stebėjo pokyčiui cirkuliuojančių B ląstelių sudėtį H
. pylori
-infected besimptomiu palyginti su sveikų sveikų, su IgD ^{+ CD27 mažinimo - naivūs B ląstelių bei nuo CD24 ląstelę + CD38 + B ląstelių , CD24 + CD38 + B ląstelės taip pat buvo nustatyta, kad pagrindinis IL-10 išskiriančių B ląstelių poaibis. Tada atliekamas T ląstelių-B ląstelių coculture eksperimentus ir nustatė, kad T ląstelių CD24 + CD38 + B ląstelių-išeikvoti bendradarbiai kultūros išskiriami aukštesnio lygio prouždegiminių citokinų kaip T ląstelių bendrai išaugintų su visa B ląstelių, o T ląstelės cocultured su CD24 + CD38 tik + B ląstelių turėjo žemiausią PRO-uždegiminių citokinų gamybą. Be to, mes atradome, kad H
buvimą. pylori
galėjo tiesiogiai didinti IL-10-išraišką nuo CD24 + CD38 + B ląstelės. Kartu šie duomenys parodė, kad H
. pylori
-infected dalykai buvo aktyvinama dažnius cirkuliuojančių CD24 + CD38 + B ląstelių, kurios išreiškė aukštą IL-10 ir eksponavo reguliavimo funkciją. Įdomu tai, kad O
. pylori
-infected rūkymo dalykai ir nutukusius, cirkuliuojantys CD24 + CD38 + B ląstelės buvo sumažintas dažnis, palyginti su H
. pylori
-infected besimptomis dalykai, negalėjome slopinti T ląstelių PRO-uždegiminių citokinų gamybą bendrai kultūros eksperimentų, ir nebuvo žymiai upregulate IL-10 išraiška po H
. pylori
stimuliacija. Be to, mes stebėjo penkerius metus dalykus, o vėliau nustatyta, kad, palyginti su skrandžio vėžiu, užsikrėtusiems pacientams, skrandžio vėžio neigiami pacientai turėjo daugiau IL-10 gamybą po H
. pylori
stimuliacija. Lėtinis ląstelių naikinimo ir audinių pažeidimai nuolat H
. pylori
infekcija buvo labai prisidėti veiksniai skrandžio vėžio vystymosi [24]. Iš pateiktų šioje knygoje rezultatus, tai yra įmanoma, kad padidėjo IL-10-ekspresiją B ląstelių gali apsaugoti H
. pylori
-infected dalykus sumažinant T ląstelinis uždegimą ir apriboti audinių pakitimų, tačiau rūkyti dalykus ir nutukusius, B ląstelinis audinys apsaugos nedalyvavo. Daugiau tyrimai yra reikalingi ateityje išnagrinėti, ar IL-10 + B ląstelių buvimas koreliuoja su sumažėjusiu audinių pakitimai H
. pylori
infekcija. Tačiau tai buvo neįmanoma šiame tyrime, nes reikia skrandžio audinių mėginius.}

Buvo pranešta, kad rūkymas yra susijęs su padidėjusia oksidacinio streso ir pro-uždegiminių citokinų išsiskyrimo, galbūt dėl ​​rūkymo sukeltas audinių žala [25,26]. Nutukimas taip pat yra susijęs su padidėjusia žemo laipsnio, lėtinis uždegimas [27]. Šiame tyrime, mes nustatėme, kad H
. pylori
-infected rūkymo dalykai ir nutukusius turėjo mažiau IL-10 ^{+ B ląsteles nei H
. pylori
-infected besimptomis dalykų. Vėliau, priešingai nei asimptomines dalykai, buvimas CD24 + CD38 + B ląstelės nuo rūkymo dalykų ir nutukusius su T ląstelių B ląstelių bendradarbiavimo kultūros nesumažino T ląstelių PRO-uždegiminių citokinų gamybą. Į IL-10 gamybos mažinimas ir reguliavimo funkcija B ląstelių stoka galėjo būti iš viso padidėjo uždegiminės būklės rūkymas ir nutukimas. Iš tiesų, mūsų duomenys rodo, kad B ląsteles nuo H
. pylori
-infected rūkymas ir nutukusius, bet ne tas, iš besimptomis dalykų, turėjo didesnės IL-2, IFN-g ir TNF-a, nei B ląstelių iš sveikų sveikų gamyba, siūlydamas iškreipimo link labiau prouždegiminių fenotipas. Tuo pačiu metu, poveikis lėtinio rūkymo ir nutukimo yra žinoma, kad susieti su padidėjusiu skrandžio vėžio riziką. Kartu, šie duomenys rodo, kad daugiau iniciatyvos uždegimo imuninė aprašymą rūkymas ir nutukusiems žmonėms gali prisidėti prie skrandžio vėžio vystymąsi.}

Dėl reguliavimo B ląstelių konkrečių transkripcijos veiksniai ir paviršiaus molekulių trūkumas, įvairių ne- specialūs rinkiniai paviršinių žymenų, įskaitant CD1d ^{hiCD5 + CD19 + CD24 hiCD38 Sveiki, ir CD19 + LTP-1 + buvo naudojamas ankstesni tyrimai žymėti B ląsteles reguliavimo veikla [15,22,28,29]. Šiame tyrime, mes sutelktas į CD24 + CD38 + - išreikšti B ląsteles, nes mes nustatėme, kad IL-10, lemiamas citokinų ir reguliavimo B ląstelių funkcija yra praturtintas šiame pogrupyje ir 3 pav parodė, kad tai poaibis turėjo reguliavimo veiklą slopinimas T ląstelių citokinų gamybą. Tai paviršinių žymenų pasirinkimas, tačiau, ar turite įspėjimų, nes CD19 + CD24 hiCD38 Hi, buvo aprašyta anksčiau kaip nesubrendusių /pereinamojo laikotarpio B ląstelių [30,31]. B ląstelės gali veikti kaip svarbius antigenų-pateikiančių ląstelių ir buvo nustatyta, kad remti T ląstelių subpopuliacija diferenciaciją ir techninės priežiūros [32]. Šiuo metu, kol kas nežinoma, ar CD24 + CD38 + B ląstelių mūsų tyrime buvo potencialiai nesubrendę /pereinamojo laikotarpio B ląstelių, kurios gali būti mažiau veiksmingi antigeno pateikimo. Norėdami išvengti šios problemos, mes palyginti ištisas B ląstelių CD24 + CD38 + - išeikvoti B ląstelių (tiek grupės, turinčios subrendusių B ląstelių, galinčių "normalus" antigeno pateikimo) ir vėliau iš naujo paskatino T ląstelių su anti -CD3 tiesioginio T ląstelių receptorių (TCR) aktyvacijos. Nors mes taip pat įtrauktas CD24 + CD38 + B ląstelių Tik grupę bendro kultūros eksperimentą ir nustatė, kad T ląstelių kartu su šiais kultūrų buvo gerokai sumažintas prouždegiminių citokinų gamybą, nei T ląstelių CD24 + CD38 + B ląstelių-išeikvoti cocultures, mes negalime atmesti galimybės, kad šis sumažėjimas buvo dėl galimo netinkamo antigeno pateikimo metu bendro kultūros, prieš tiesiogiai TCR aktyvacijos.}

reguliavimo vaidmenį ląstelės imuninės sistemos dažnai buvo vertinama kaip dviašmenis kardas lėtinių infekcijų. Viena vertus, uždegimo slopinimas reguliavimo T ląstelių ir B ląstelių gali išvengti pernelyg didelio audinių pažeidimo, procesų, kuriuose imuninei sistemai. Kita vertus, reguliavimo T ląstelių ir B ląstelių-slopinamos imuninės aktyvavimo buvo manoma, kad prisidėti prie patogeno patvarumą, efektoriaus T ląstelių išsekimo, ir nuleisti gebėjimą išvalyti infekcijos. Anksčiau buvo rastas IL-10-sekrecijos B ląstelių prisidėti prie , Salmonella typhimurium parsisiųsti ir pelės krūties naviko virusas atkaklumas pelėms ir ŽIV atkaklumas žmonėms [20,33,34]. Šiame tyrime, mes nustatėme, kad H
papildymas. pylori
galėjo tiesiogiai suaktyvinti B ląstelių IL-10 gamybą, tačiau neaišku, kaip iš CD24 ^{+ CD38 ląstelę + B ląstelės ir IL-10 sekrecija gali paveikti O
. pylori
infekcija. Ar reguliavimo B ląstelių prisidėti prie bakterijų atkaklumo į H
. pylori
infekcija, reikia daugiau tyrimų.}

• PLoS ONE: HIF-1α Skatina naviko atsparumą daugeliui skrandžio vėžio ląsteles, sukeldami MIR-27a
• PLoS ONE: Zic1 Rėmėjas Hypermethylation plazmoje DNR yra potencialus biologinis skrandžio vėžio ir intraepitelinei neoplazijai