PLOS ONE: Regulatory Fonction B Cell est supprimée par le tabagisme et l'obésité Sujets chez H. pylori-Infected et est corrélée avec un risque élevé de gastrique Cancer

Résumé

Helicobacter pylori
infection se produit dans plus de la moitié de la population du monde et est la principale cause de cancer de l'estomac. Une série de style de vie et facteurs nutritionnels, tels que le tabagisme et l'obésité, ont été trouvés pour élever le risque de développement du cancer. Dans cette étude, nous avons cherché à déterminer les aspects immunologiques pendant H
. pylori
l'infection et le développement du cancer gastrique. Nous avons constaté que les cellules B de H
. pylori
patients infectés par présenté la composition et la fonction altérée par rapport aux patients non infectés. cellules CD38 + ^{+ B IL-10 exprimant CD24 ont été surexprimés dans H
. pylori
patients infectés par, contenaient une activité réglementaire puissante dans l'inhibition de cellules T pro-inflammatoire sécrétion de cytokines, et ont répondu directement à H
. pylori
stimulation antigénique. Fait intéressant, dans H
. pylori
sujets fumeurs infectés et les sujets obèses, le nombre d'IL-10 + B et cellules CD24 + CD38 + cellules B ont été réduites par rapport à H
. pylori
infectés par les sujets asymptomatiques. Les fonctions de réglementation médiées par CD24 + CD38 + cellules B ont également été altérées. En outre, le cancer gastrique des patients positifs ont réduit l'IL-10 produisant des fréquences des cellules B après H
. pylori
-Stimulation. Au total, ces données suggèrent que dans H
. pylori
-infection, CD24 + CD38 + cellule B est régulée positivement et joue un rôle dans la suppression des réponses pro-inflammatoires, éventuellement par le biais d'IL-10, une caractéristique qui n'a pas été observé dans le tabagisme et les patients obèses}

Citation:. Li G, Wulan H, Song Z, Paik PA, Tsao ML, Goodman GM, et al. (2015) Regulatory Fonction B Cell est supprimée par le tabagisme et l'obésité au H
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sujets infectés par et est corrélée avec un risque élevé de cancer gastrique. PLoS ONE 10 (7): e0134591. doi: 10.1371 /journal.pone.0134591

Editeur: Masaru Katoh, National Cancer Center, JAPON

Reçu 3 Février, 2015; Accepté le 13 Juillet 2015; Paru le 30 Juillet, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Li et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le papier

financement:.. les auteurs ont pas de soutien ou de financement pour signaler

intérêts concurrents:. les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

introduction

Helicobacter pylori (H
. pylori)
est une sorte de bactéries Gram-négatives pathogènes trouvés dans plus de la moitié de la population mondiale et inhibe le tractus gastro-intestinal supérieur préférentiellement, y compris l'épithélium de l'estomac et le tractus duodénum [1,2]. Bien que la grande majorité (> 80%) des infections sont asymptomatiques, 10-20% des sujets infectés vont développer des ulcères peptiques alors 1-2% fera l'acquisition de cancer gastrique [3]. Le mécanisme précis du développement du cancer à la suite de H
. infection pylori
est pas bien définie, mais l'inflammation chronique non traitée dans le tractus gastro-intestinal supérieur est pensé pour contribuer à la poursuite de dommages de l'épithélium de l'estomac [4,5]. Plus précisément, l'inflammation associée à des molécules telles que le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-A) de signalisation, se sont révélés favoriser la tumorigenèse gastrique et est régulée à la hausse dans H
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infection [6]. D'autres cytokines pro-inflammatoires sécrétées par les cellules T, y compris l'IL-2, IL-17, et l'interféron gamma (IFN-g), sont également surexprimés dans H
. pylori
infection et sont associés à un risque accru de tumorigenèse gastrique [7-10]. Une série d'autres facteurs, tels que l'exposition continue à fumer du tabac et l'obésité, sont positivement corrélés à un risque accru de cancer de l'estomac, bien que le mécanisme sous-jacent ne sait pas [3,11].

Récemment, le rôle de Tolérance- induire des cellules B a été caractérisée par une série de maladies infectieuses et les maladies auto-immunes [12]. Chez la souris, CD1d ^{hiCD5 + cellules B ont été trouvés pour aider à établir l'environnement tolérogène dans les tissus et ont un rôle dans la prévention de l'induction auto-immune [13]. Chez les humains, CD19 + CD24 hiCD38 salut les lymphocytes B ont une tolérance induisant rôle dans la santé ainsi que des individus infectés par le VHB [14] similaire; l'apparition de la maladie auto-immune est corrélée avec la perte de la fonction de régulation dans ce sous-ensemble des cellules B [15]. IL-10 est une cytokine immunorégulatrice pléiotropique qui est capable d'inhiber une série de cytokines pro-inflammatoires, y compris IL-2, IL-17, IFN-y et TNF-a, et est représenté à supprimer puissamment la capacité de présentation de l'antigène les cellules présentatrices d'antigène [16]. Au centre de tous les sous-ensembles de cellules B induisant une tolérance, d'IL-10 est essentielle à la régulation B à médiation cellulaire T à supprimer l'inflammation à médiation cellulaire [12,17]. Le rôle de la régulation à médiation cellulaire B dans H
. infection pylori
et l'induction subséquente du cancer gastrique, cependant, n'a pas été précédemment étudiés.}

Dans cette étude, nous avons analysé le profil de composition de cellules B et de l'expression des cytokines dans H
. pylori
sujets infectés par. Accroissement des pourcentages de CD24 ^{+ CD38 + cellules B et les pourcentages réduits de cellules B naïves et de repos des cellules de mémoire B ont été trouvés dans H
. pylor
sujets i-infectés. Le CD24 + CD38 + B cellules dans H
. sujets pylori infectés avaient augmenté
pourcentage d'IL-10, et a supprimé l'expression des cytokines pro-inflammatoires en cas de co-cultivées avec des cellules T autologues. H
. pylori-s
timulated CD24 + CD38 + B cellules de H
. pylori
sujets infectés sécrétées puissamment IL-10. Fait intéressant, H
. fumer pylori infectés
sujets et subects obèses avaient réduit les niveaux de CD24 + CD38 cellules + B. En outre, le CD24 + CD38 + cellules B réglementaires dans le tabagisme et les sujets obèses ont été trouvés pour présenter une perte de fonction suppressive en cas de co-cultivées avec des cellules T autologues et stimulé les niveaux d'IL-10 réduit après directe H
. pylori
stimulation. En outre, le tabagisme chez les patients obèses qui ont développé ultérieurement un cancer gastrique, les fréquences des cellules IL-10 B sécrétant ont encore été réduits, par rapport aux sujets qui ne développent pas un cancer gastrique. Au total, ces données ont démontré que les cellules CD38 + + B CD24 ont été surexprimés dans H
. pylori
infecté par et avait fonctionnellement supprimé des cellules T la production de cytokines inflammatoires. Le CD24 + CD38 + cellules B chez des sujets fumeurs et les sujets obèses, cependant, étaient réfractaires à H
. pylori
-Stimulation, produit moins d'IL-10, et manquaient de capacité suppressive.}

Matériaux et

Sujets de l'étude de méthodes

échantillons périphériques primaires de sang ont été obtenus à partir de 55 H
. pylori
patients libres de l'ulcère-infectés par, dont 15 sont des consommateurs primaires de la fumée de tabac et 15 sont de classe I obèses (30 kg /m ^{2 < IMC < 35 kg /m 2 ) des sujets, ainsi que 15 sain H
. pylori
individus libres de l'ulcère--uninfected. Les personnes ayant une exposition chronique à la fumée secondaire ont été exclus de l'étude. Aucune différence significative concernant l'âge, le sexe, et l'histoire de l'infection précédente entre les groupes d'étude ont été trouvés. Tous les sujets ont été suivis pendant 5 ans pour l'état de développement du cancer. Tous les sujets étaient des individus non apparentés de la province du Henan et de sa région. Les patients ont été recrutés entre janvier 2008 et décembre 2013 de l'Hôpital Central 155e de PLA en Chine. Les témoins étaient des personnes sans cancer choisis au hasard à partir d'un programme de dépistage du cancer communautaire pour la détection précoce du cancer effectué dans les mêmes régions au cours de la même période, les patients ont été recrutés. Le taux pour les deux contrôles et les cas de réponse était de 95%. Les critères de sélection pour les contrôles sains comprenaient des personnes sans cancer et la fréquence correspondant à des cas par sexe et âge (± 5 ans). Au moment du recrutement, le consentement éclairé a été obtenu à partir de chacune des données soumises et personnelles telles que le sexe, l'âge, le poids, la hauteur et le tabagisme ont été recueillies au moyen d'un questionnaire. Les échantillons de tous les sujets non ont été utilisés dans toutes les expériences en raison de l'observance du patient incomplètes et insuffisantes cellules chez certains patients. Cette étude a été approuvée par le Conseil d'examen institutionnel de l'Hôpital Central 155e de PLA.}

Préparation d'échantillons

cellules mononucléées du sang (PBMC) ont été isolées à partir d'échantillons de sang périphérique avec procédure Ficoll-Hypaque standard et congelés immédiatement à -150 ° C jusqu'à utilisation, ou utilisés dans des expériences immédiatement si noté. un milieu de culture ordinaire est un milieu RPMI-1640 supplémenté avec 10% de sérum bovin fœtal, 5 ml de pénicilline 100U /0,1 mg /ml de streptomycine, et 5 ml de 2 mM de L-glutamine. Les cellules ont été cultivées dans 5% de CO _{2 à 37 ° C pour la période de temps définie.}

cellules d'isolement cellulaire

T et B ont été isolés en utilisant T Cellule humaine ou une cellule B négative Kit de sélection (Stemcell, Vancouver, Canada), en suivant les protocoles fournis par le fabricant. Les puretés des isolements de cellules T et B ont été supérieures à 94% par cytométrie en flux. L'épuisement de CD24 ^{+ CD38 + B cellules dans certaines expériences, les cellules B purifiées ont été colorées avec du PE CD24 anti-humain et de CD38 APC anti-humain pendant 30 min. Les cellules ont ensuite été envoyés vivre tri cellulaire et les cellules CD24 + CD38 + ont été épuisées. Dans l'ensemble de la création de cellules B, cellules totales B ont été envoyés vivre tri cellulaire sans les anticorps}

cytométrie de flux

Les anticorps monoclonaux anti-humains suivants ont été utilisés:. IL-10, TNF- un (eBioscience, San Diego, CA, USA); CD3, CD4, CD19, CD20, CD21, CD24, CD27, CD38 (BioLegend, San Diego, CA, USA); IFN-g (BD Biosciences, San Jose, CA, USA); CD8 (Invitrogen, Grand Island, NY, USA). Purifié IgG humaine (BioLegend, San Diego, CA, USA) a été utilisé pour bloquer les récepteurs Fc lorsque la coloration des populations contenant des cellules B. Pour certaines expériences, phorbol-12-myristate-13-acétate (PMA, Sigma), ionomycine (Sigma, Munich, Allemagne), ou tués par la chaleur H
. pylori
(Sigma, Munich, Allemagne) ont été utilisées pour stimuler les cellules. GolgiStop et GolgiPlug ont été ajoutés à la cellule avant 6 h récolte pour la coloration intracellulaire de l'IL-2, IL-17, l'IFN-g, du TNF-a et IL-10. FlowJo a été utilisé pour l'analyse de cytométrie en flux.

Luminex test

IL-2, IL-17, IFN-g, le TNF-a et l'IL-10 à partir de cellules T et les cellules B ont été mesurées quantitativement par multiplex dosage Luminex suivant les protocoles fournis par le fabricant avec des modifications (EMD Millipore, Etobicoke, Canada). Un total de 2x10 ^{5 cellules T et /ou les cellules B ont été étalées dans chaque puits de la plaque de 96 puits (Corning, Tewksbury, MA, USA). Pour la stimulation des cellules B, tué par la chaleur H
.
pylori ont été ajoutés aux cellules B qui ont été étalés au fond d'un puits 96 Transwell plaque (Corning, Tewksbury, MA). Pour la stimulation des lymphocytes T, la partie inférieure de la plaque Transwell a été pré-incubées avec CD3 (clone OKT3), anti-humaine pendant une nuit et on l'a lavé, après quoi les lymphocytes T purifiés ont été transférés dans la plaque. perles d'anticorps cytokine de capture humains ont été ajoutés à la chambre supérieure du puits 96 Transwell plaque. Douze heures plus tard, les billes ont été récoltées, lavées et lues selon le protocole du fabricant.}

L'analyse statistique

D'Agostino et Pearson test de normalité omnibus a été utilisé pour examiner si les données ont été distribuées normalement. Une analyse de variance (ANOVA) a été utilisé pour les comparaisons entre plusieurs groupes suivis par le test de Dunn. test t de Student a été utilisé pour les comparaisons entre les deux groupes. Si les ensembles de données nettement écartés de la distribution normale, tests non paramétriques ont été utilisés. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant Prism (GraphPad Software). P < 0,05 a été considérée comme significative. Les résultats ont été présentés sous forme de moyenne ± S.E.M..

Résultats

H
. pylori
sujets infectés par avaient modifié la composition de circulation des cellules B

Pour analyser les changements potentiels dans le rôle des réponses des lymphocytes B dans H
. pylori
infection et comment elle pourrait être affectée par le tabagisme et l'obésité, 15 sain H
. pylori
-uninfected ( H
. pylori
-uninfected) bénévoles, 20 H
. pylori
infectés par le non-obèses sujets (asymptomatiques) non-fumeurs asymptomatiques, 15 H
. pylori
infectés par le tabagisme non-obèses (fumeurs) sujets, et 15 H
. pylori
infecté par non-fumeurs sujets (obèses) obèses ont été recrutés pour cette étude. Les données démographiques et cliniques ont été résumées dans le tableau 1.

Circulating cellules B dans le sang périphérique de sujets sains sont composés principalement de IgD ^{+ CD27 - cellules B naïves et CD21 + CD27 + cellules au repos B mémoire, tandis que dans les infections chroniques, il existe souvent une diminution des cellules B naïves et de repos des cellules de mémoire B, et une augmentation de CD21 lo activé les cellules B et CD24 + CD38 + cellules B [15,18]. Nous avons examiné d'abord la composition des cellules B circulantes dans H
. pylori
sujets infectés par. Des cellules mononucléaires du sang périphérique (CMSP) ont été colorées pour l'expression des marqueurs de surface directement
ex vivo (figure 1A). Nous avons constaté que l'on compare à H
. pylori
-uninfected sujets sains, tous les H
. pylori
groupes infectés par contenaient des pourcentages inférieurs de IgD + CD27 - cellules naïves B (P < 0,001 pour tous, la figure 1B et 1C). Les pourcentages de CD21 + CD27 + de repos des cellules de mémoire B ont été réduits dans H
. pylori
sujets infectés par le fumeur et les sujets obèses par rapport à des sujets sains (P < 0,001 pour les deux), et le pourcentage de CD21 + CD27 + cellules B chez les sujets obèses a été réduite par rapport à H
. pylori
sujets asymptomatiques infectés par le (P < 0,01). Fait intéressant, les pourcentages de CD24 cellules CD38 + + B ont été modifiées entre les différents groupes de H
. pylori
sujets infectés par. H
. pylori
sujets asymptomatiques infectés par contenaient des pourcentages beaucoup plus élevés de CD24 + CD38 + B cellules que les témoins en bonne santé (P < 0,001). Le pourcentage de CD24 cellules + CD38 + B a été réduite chez les sujets fumeurs par rapport à celle des sujets asymptomatiques (P < 0,05), mais toujours supérieure à celle des sujets sains (P < 0,001). Chez les sujets obèses, le pourcentage de CD24 + CD38 + cellules B n'a pas été significativement différente de celle des sujets sains, mais a été réduit de celle des sujets asymptomatiques (P < 0,001)}

em <.> H
. pylori
sujets infectés par avaient modifié B cytokine cellulaire profil d'expression

Auparavant, les cellules B ont été trouvées pour amplifier ou supprimer les réponses immunitaires à travers la production d'une série de cytokines avec des fonctions différentes, y compris les pro- cytokines inflammatoires telles que l'IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IFN-y et TNF-a, ainsi que l'IL-10 et le facteur bêta de croissance transformant (TGF-b) en tant que cytokines régulatrices [19] . Ici, nous avons examiné l'expression des cytokines des cellules B chez des sujets de l'étude. Nous avons constaté que
ex vivo l'expression de l'IL-2, IFN-y et TNF-a par les cellules B ont été augmentées en H
. pylori
infecté par les sujets fumeurs et les sujets obèses que chez les sujets sains (figure 2A). Aucune différence significative n'a été trouvée dans le TGF-b expression. Cellules

CD24 ^{+ CD38 + B ont des fonctions de réglementation dans d'autres études et avaient des niveaux d'expression intéressants dans différents H
. pylori
groupes infectés par le (Fig 1C). Nous avons examiné l'expression de cytokine intracellulaire par CD24 + CD38 + B cellules. Comme le montre la figure 2B, l'expression des cytokines de CD24 + CD38 + cellules B étaient différentes de non-CD24 + CD38 + B (cellules au total B moins CD24 + CD38 + b) dans les cellules qu'ils ne produisent pas de niveaux élevés d'IFN-y et TNF-a lorsqu'elles sont stimulées par le PMA /ionomycine, mais ont exprimé des niveaux très élevés d'IL-10, à la fois dans des conditions non stimulées et stimulées. Nous avons comparé la production d'IL-10 à partir de différents sous-ensembles de cellules B et a constaté que CD24 + CD38 + cellules B dans tous les groupes d'étude sécrétées beaucoup plus élevé d'IL-10 que les non-CD24 + CD38 + des cellules B, à la fois dans des conditions non stimulées ainsi que PMA /ionomycine conditions stimulées (figure 2C). Nous considérons donc le CD24 + CD38 + en fraction principale de l'IL-10 produisant sous-ensemble de cellules B. Dans le H
. pylori
groupe infecté par, les sujets asymptomatiques avaient pourcentage plus élevé d'IL-10 des cellules exprimant CD24 en + CD38 + B cellules que des sujets sains tout en H
. pylori
infectés par les patients obèses avaient des cellules IL-10 exprimant inférieurs à CD24 + CD38 + B cellules de patients asymptomatiques (figure 2C). Nous avons ensuite multiplié la fréquence de l'IL-10 + cellules dans le CD24 + CD38 + cellules B avec le pourcentage de CD24 + CD38 + cellules dans la cellule totale de B pour obtenir le "nombre" de cellules IL-10 exprimant dans les cellules B, et a constaté que les deux H
. pylori
sujets asymptomatiques infectés par le et les sujets fumeurs avaient des niveaux plus élevés d'IL-10 + B cellules que des sujets sains (P < 0,001 et P < 0,01, respectivement). Dans le H
. pylori
infectés par le groupe, le tabagisme et l'obésité abaissent considérablement les fréquences de l'IL-10 + cellules B (P < 0,001 pour les deux). provenant de sujets asymptomatiques}

Tous ensemble, ces données a démontré que cytokine régulatrice IL-10 est principalement produite par CD24 ^{+ CD38 + cellules B et est augmentée dans H
. pylori
infectés par les sujets asymptomatiques. Le tabagisme et l'obésité réduit l'IL-10 expression dans CD24 cellules CD38 + + B.}

H
. pylori
sujets asymptomatiques infectés par avaient plus d'activité tolérogène médiée par CD24 + CD38 + B cellules que le tabagisme et les sujets obèses

cellules réglementaires B ont été connus pour inhiber les réponses des lymphocytes T dans les infections chroniques telles que l'infection par l'hépatite B et l'infection par le virus de l'immunodéficience humaine [14,20], en établissant l'environnement tolérogène par l'IL-10 avant l'induction de l'inflammation [15,21]. Nous avons examiné si les cellules + CD38 ^{+ B l'IL-10 produisant CD24 ont eu des effets réglementaires similaires dans H
. pylori
-infection. CD4 + T cellules co-cultivées avec autologues CD24 + CD38 + - cellules B appauvri avaient significativement élevé la production d'IL-2, IL-17, IFN-g et le TNF-a, de CD4 + cellules T coculture avec des cellules entières B, dans H
. pylori
infectés par les patients asymptomatiques (figure 3A). Chez les sujets fumeurs et les sujets obèses, cet effet n'a pas été observé. De même, CD8 + Les cellules de H
T. pylori
sujets asymptomatiques infectés par le co-cultivées avec autologues CD24 + CD38 + - cellules B appauvri considérablement amélioré IFN-g et le TNF-a sécrétion que celles co-cultivées avec des cellules entières B ( La figure 3B). Encore une fois, cet effet n'a pas été observé chez les sujets fumeurs et les sujets obèses. La suppression de l'expression T de cytokines de cellules semble être médiée par le CD24 + CD38 + cellules B, étant donné que la plus faible production de cytokines a été observée dans les cellules CD4 + et CD8 + T cellules de co-cultivées avec CD24 + CD38 + B seules cellules. Au total, ces données ont démontré que le CD24 + CD38 + cellules B dans H
. pylori
sujets infectés par le supprimé CD4 + et CD8 + T cellules pro-inflammatoires production de cytokines dans H
. pylori
infectés par les sujets asymptomatiques. Le tabagisme et l'obésité ont inhibé les mesures réglementaires de CD24 cellules CD38 + + B.}

IL-10 la sécrétion par les cellules CD24 + CD38 + B sur H
. pylori
stimulation dans différents sujets:

Nous avons ensuite cherché à examiner le mécanisme de l'IL-10 surexpression dans les cellules B de H
. pylori
sujets infectés par. la production d'IL-10 est essentielle à la fonction des cellules B de régulation [12,13]. la signalisation du récepteur de type Toll est un mécanisme majeur de la régulation positive de l'IL-10 dans les cellules B, et a été montré pour moduler l'expression des cytokines dans les H
. pylori
infection [22,23]. Nous avons vérifié si la présence de H
. pylori
peut directement upregulate IL-10 dans la sécrétion CD24 ^{+ CD38 + B cellules. Les cellules B purifiées à partir de PBMC ont été cultivées en l'absence ou en présence de chaleur tués H
. pylori
bactérie. Après 72 heures d'incubation, la sécrétion d'IL-10 dans le surnageant a été mesurée par Luminex. Les cellules B ont également été récoltées pour l'IL-10 intracellulaire coloration. Comme cela est représenté sur la figure 4A, la sécrétion d'IL-10 dans le surnageant est augmenté en H
. pylori
-uninfected sujets sains et H
. pylori
infecté par les sujets asymptomatiques non obèses non-fumeurs après H
. pylori
-Stimulation (P < 0,01 et P < 0,05, respectivement). La figure 4B montre que le pourcentage de cellules IL-10 sécrétant B a été régulée à la hausse dans CD24 + CD38 + cellules B après H
. pylori
stimulation chez des sujets sains et asymptomatiques (P < 0,001 et P < 0,05, respectivement). En revanche, la concentration d'IL-10 dans le surnageant et le pourcentage d'IL-10 produisant CD24 + CD38 + B provenant de cellules H
. pylori
sujets fumeurs et infectés par des sujets obèses ont pas augmenté de manière significative après H
. pylori
-infection. Ces données ont démontré que le tabagisme et l'obésité avaient nui à l'induction de l'IL-10 à partir de cellules B après H
. stimulation pylori
, et a suggéré que, en partie, la perte de fonction régulatrice de CD24 + CD38 + B cellules de sujets fumeurs et les sujets obèses était peut-être due à une incapacité à upregulate IL-10 la sécrétion en réponse à la stimulation antigénique bactérienne (Voir la discussion).}

patients atteints de cancer gastrique positif dans le H
. pylori
fumer et infecté par H
. pylori
infectés par des groupes obèses avaient des fréquences plus basses de l'IL-10 ^{+ B cellules}

Le tabagisme et l'obésité ont été connus pour augmenter le risque de développement de cancer gastrique dans H
. pylori
sujets infectés par. Comme le tabagisme et l'obésité a également supprimé les fonctions des lymphocytes B normaux de régulation, nous avons examiné si associés à ces deux phénomènes. Nous avons constaté que dans les sujets fumeurs et les sujets obèses, ceux qui sont devenus positifs pour le statut de cancer gastrique avaient des fréquences significativement plus faibles de l'IL-10 ^{+ cellules CD24 + CD38 + cellules B après H
. pylori
stimulation que ceux qui sont restés négatifs pour le développement du cancer gastrique (Fig 5A P <. 0,05 pour les deux). D'autre part, nous ne trouvons que le cancer patients positifs et négatifs cancer étaient significativement différentes en fonction de leurs fréquences de CD24 + CD38 + cellules B dans les cellules totales B (figure 5B). Non H
. pylori
patients asymptomatiques infectés dans cette étude est devenue un cancer gastrique positif.}

Discussion

H
. infection pylori
est la principale cause de l'apparition d'un cancer gastrique. Bien que la majorité des infections étaient asymptomatiques et traitable, un sous-ensemble de sujets échoue traitement et des progrès au cancer gastrique. En outre, le tabagisme et l'obésité augmentent le risque de développement du cancer alors que les mécanismes ne sont pas tout à fait clair. Dans cette étude, nous avons d'abord observé une altération de la circulation composition de cellules B dans H
. pylori
sujets asymptomatiques infectés par rapport aux sujets sains non infectés, avec une réduction de IgD ^{+ CD27 - cellules B naïves et une régulation positive de CD24 + CD38 + cellules B . Le CD24 + CD38 + cellules B se sont également révélées être la cellule B sous-ensemble principal de l'IL-10 sécrétrices. Nous avons ensuite procédé à des cellules T-B, des expériences de co-culture de cellules et on a trouvé que les cellules T à CD24 + CD38 + B cocultures appauvrie en cellules sécrétées niveaux plus élevés de cytokines pro-inflammatoires que les lymphocytes T en co-culture avec des cellules entières B, tandis que les cellules T cocultivés avec CD24 + CD38 + B cellules seulement, la plus faible production de cytokines pro-inflammatoires. De plus, nous avons découvert que la présence de H
. pylori
pourrait directement améliorer l'IL-10-expression de CD24 + CD38 + B cellules. Ensemble, ces données ont démontré que H
. pylori
sujets infectés par avaient upregulated fréquences de circulation CD24 cellules + CD38 + B, qui a exprimé des niveaux élevés d'IL-10 et expose fonction régulatrice. Fait intéressant, dans H
. pylori
sujets fumeurs et infectés par les sujets obèses, le CD24 circulant cellules CD38 + + B ont été réduits en fréquence par rapport à H
. pylori
sujets asymptomatiques infectés par le, ont été incapables de supprimer des cellules T pro-inflammatoire production de cytokines dans des expériences de co-culture, et n'a pas upregulate significativement IL-10 après l'expression H
. pylori
stimulation. En outre, nous avons suivi les sujets pendant cinq ans et par la suite constaté que, comparativement aux patients atteints de cancer gastrique positif, les patients atteints de cancer gastrique négatif avaient plus d'IL-10 après H
. pylori
stimulation. destruction des cellules et des tissus de lésions chroniques au persistante H
. infection pylori
étaient les principaux facteurs qui contribuent au développement du cancer gastrique [24]. D'après les résultats présentés dans ce document, il est possible que l'augmentation de l'IL-10-expression par les cellules B peut protéger le H
. pylori
sujets infectés par en réduisant l'inflammation à médiation cellulaire T et la limitation des lésions tissulaires, mais dans les sujets fumeurs et les sujets obèses, la protection des tissus B à médiation cellulaire était pas présent. D'autres études sont nécessaires à l'avenir pour examiner si la présence d'IL-10 + cellules B est corrélée à des lésions tissulaires réduites dans H
. infection pylori
. Ceci, cependant, n'a pas été possible dans cette étude car elle nécessite des échantillons de tissus gastriques.}

Il a été rapporté que le tabagisme est associé à une augmentation du stress oxydatif et la libération de cytokines pro-inflammatoires, probablement en raison de tissus induite par l'usage du tabac dommages [25,26]. L'obésité est également associée à une augmentation de bas grade, l'inflammation chronique [27]. Dans cette étude, nous avons constaté que H
. pylori
sujets fumeurs et les sujets infectés par le obèses avaient moins IL-10 ^{+ cellules B que H
. pylori
infectés par les sujets asymptomatiques. Par la suite, à la différence que chez les sujets asymptomatiques, la présence de CD24 + CD38 + B cellules de sujets fumeurs et les sujets obèses dans la cellule T cellule-B co-culture n'a pas réduit de cellules T pro-inflammatoire production de cytokines. La réduction de l'IL-10 et l'absence de fonction de régulation dans les cellules B peuvent avoir résulté de l'état inflammatoire global accru dans le tabagisme et l'obésité. En effet, nos données ont montré que les cellules B de H
. pylori
fumer et infecté par des sujets obèses, mais pas ceux des sujets asymptomatiques, eu plus d'IL-2, IFN-g, et le TNF-a la production de cellules B de sujets sains non infectés, ce qui suggère une inclinaison vers une plus phénotype proinflammatoire. Dans le même temps, l'exposition au tabagisme chronique et l'obésité sont connus pour associer à un risque accru de cancer de l'estomac. Ensemble, ces données suggèrent que le profil immunitaire plus pro-inflammatoire dans le tabagisme et la population obèse peut contribuer au développement d'un cancer gastrique.}

En raison de l'absence spécifique de lymphocyte B de régulation des facteurs de transcription et des molécules de surface, différentes non ensembles spécifiques de marqueurs de surface, y compris CD1d ^{hiCD5 +, CD19 + CD24 hiCD38 salut, et CD19 + TIM-1 +, ont été utilisés dans études précédentes pour désigner les cellules B avec les activités de réglementation [15,22,28,29]. Dans cette étude, nous nous sommes concentrés sur CD24 + CD38 + - exprimant les cellules B parce que nous avons constaté que l'IL-10, une cytokine clé dans la fonction de régulation des cellules B, est enrichi en ce sous-ensemble, et la figure 3 a démontré que ce sous-ensemble a eu une activité réglementaire dans la production de suppression de T de cytokine cellulaire. Ce choix de marqueurs de surface, cependant, avait-il des mises en garde, depuis CD19 + CD24 hiCD38 salut ont été précédemment décrit comme immatures /transitoires cellules B [30,31]. Les cellules B peuvent agir les cellules présentatrices d'antigènes importants et ont été trouvés pour soutenir la différenciation des sous-populations de cellules T et de maintenance [32]. À ce stade, on ignore si CD24 + CD38 + B cellules dans notre étude étaient des cellules potentiellement immatures /transitoires B, qui peuvent être moins efficaces pour la présentation des antigènes. Pour éviter ce problème, nous avons comparé des cellules entières B avec CD24 + CD38 + - cellules appauvries B (les deux groupes avec des cellules B matures capables de "normal" présentation de l'antigène), et les cellules T par la suite re-stimulées avec anti- -CD3 pour le récepteur directe des cellules T (TCR) activation. Bien que nous avons également inclus un CD24 + CD38 + B cellulaire seul groupe dans l'expérience de co-culture, et on a trouvé que les cellules T dans ces co-cultures ont réduit de manière significative la production de cytokines pro-inflammatoires que les cellules T dans CD24 + CD38 + B cocultures appauvries en cellules, nous ne pouvons pas exclure la possibilité que cette réduction était due à potentiellement défectueuse présentation de l'antigène lors de la co-culture, avant de diriger l'activation du TCR.}

le rôle de réglementation les cellules du système immunitaire a été souvent vu comme une épée à double tranchant dans les infections chroniques. D'une part, la suppression de l'inflammation par les cellules T régulatrices et les cellules B peuvent prévenir les lésions tissulaires excessives médié par le système immunitaire. D'autre part, des lymphocytes T et B inhibition de régulation à médiation cellulaire d'activation immunitaire ont été pensé pour contribuer à la persistance des pathogènes, effecteur des cellules T épuisement et capacité réduite pour effacer les infections. Auparavant, l'IL-10, la sécrétion dans les cellules B a été trouvée pour contribuer à Salmonella typhimurium et
mammaire de souris virus de la tumeur chez les souris persistance et de la persistance du VIH chez l'homme [20,33,34]. Dans cette étude, nous avons constaté que plus de H
. pylori
pourrait activer directement la cellule B d'IL-10, mais on ne sait pas comment la régulation positive de CD24 ^{+ CD38 + cellules B et la sécrétion d'IL-10 peut affecter H
. infection pylori
. Que ce soit des cellules régulatrices B contribuent à la persistance bactérienne dans H
. infection pylori
nécessite plus d'études.}

• PLOS ONE: HIF-1α Induit Résistance multirésistante dans les cellules de cancer gastrique par Induire miR-27a
• PLOS ONE: ZIC1 promoteur hyperméthylation dans l'ADN Plasma est un biomarqueur potentiel pour le cancer gastrique et néoplasie intraépithéliale