PLoS ONE: skrandžio vėžys Exosomes Gaidukas diferencijavimas virkštelės Išvesta mezenchiminių kamienines ląsteles vėžys susijęs fibroblastų per TGF-beta /SMAD Pathway

Anotacija

Fonas

mezenchiminių kamieninės ląstelės (MSC) skatinti navikų augimą diferencijuojant į karcinomos susijęs fibroblastus (CAFS) ir komponavimo naviko mikroaplinka. Tačiau mechanizmai atsakingi už MSC perėjimo prie kovos su sukčiavimu strategijoje nėra gerai suprantama. Exosomes reguliuoti ląstelių veiklą tarpininkaujant ląstelių ląstelių komunikaciją. Šiame tyrime siekėme ištirti, ar vėžinių ląstelių pagamintų exosomes dalyvavo reguliuojant žmogaus virkštelės gautas MSC (hucMSCs) diferenciaciją į kovos su sukčiavimu strategijoje.

Metodologija /Pagrindinės išvados

pirmasis parodė, kad skrandžio vėžio ląstelių pagamintų exosomes sukeltas į CAF žymenų hucMSCs išraiška. Tada paaiškėjo, kad skrandžio vėžio ląstelių pagamintų exosomes skatino SMAD-2 fosforilinimo hucMSCs. Mes taip pat patvirtino, kad TGF-β receptorių 1 kinazės inhibitorius yra silpnos SMAD-2 fosforilinimas ir BVM žymeklis išraiška hucMSCs po kontakto su skrandžio vėžio ląstelių pagamintų exosomes.

Išvada /Reikšmė

Mūsų rezultatai rodo, kad skrandžio vėžio ląstelės sukėlė iš hucMSCs diferenciaciją į CAFS pagal exosomes tarpininkaujant TGF- perdavimo ir TGF-beta /SMAD rūšyse aktyvavimo, kuri gali tapti nauju mechanizmą MSC į CAFS pereinamojo laikotarpio vėžio

nurodomoji.: gu J, Qian yra H, Shen L, Zhang X, Zhu W, Huang L, ir kt., (2012) skrandžio vėžys Exosomes Gaidukas diferencijavimas virkštelės Išvesta mezenchiminių kamienines ląsteles vėžys susijęs fibroblastų per TGF-beta /SMAD keliu. PLoS vieną iš 7 (12): e52465. Doi: 10,1371 /journal.pone.0052465

redaktorius: Rajeev Samant, Alabamos universitetas Birmingeme, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: birželio 30, 2012; Priėmė: Lapkričio 13, 2012 m Paskelbta: Lapkritis 20, 2012

Visos teisės saugomos: © 2012 Gu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė pagrindinių mokslinių tyrimų plano Nacionalinės Gamtos mokslo fondo Kinijos (neskiria. 91.129.718), Nacionalinis gamtos mokslų fondas Kinijoje (dotacijos Nr. 81.071.421, 31.140.063), Jiangsu Province Mokslo ir technologijų Pagalbinė programa (dotacijos Nr. BE2010703 ), 333 projektas Dziangsi provincijos (dotacijos Nr. 2009055) ir "Sci-Tech inovacijų Team ir talentų Jiangsu universiteto (Grant nėra. 2008-018-02). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

naviko ląstelės pradeda formuoti savo mikroaplinka ankstyvuoju etapu piktybinės ligos progresavimo [1]. Platus ataskaitos parodė plačiai paplitusius sąveiką naviko mikroaplinkos ir vėžinių ląstelių, kurios yra labai svarbios Tumorigenesis ir naviko progresavimas [2], [3]. Naviko mikroaplinka gali sukelti grįžtamą pokyčius vėžinių ląstelių fenotipo ir palengvinti jo metastazuojantys [4], ir pokyčiai naviko mikroaplinkos net dramatiškai paveikti vėžio gydymo veiksmingumą. Naviko mikroaplinka yra sudarytas iš įvairių tipų ląstelių, įskaitant karcinomos susijęs fibroblastus (CAFS), patekę imuninių ląstelių, kraujo ir limfos kraujagyslių tinklų ir mezenchiminių kamieninių ląstelių (MSC) [4], [5].

kovos su sukčiavimu strategijoje yra pagrindiniai veiksniai, į piktybinės ligos progresavimo vėžio augimą, vaskuliarizacijos ir metastazių. CAFS kad išreikšti fibroblastų aktyvavimo baltymų (FAP) ir alfa-lygiųjų raumenų aktino (α-SMA) gali sukurti nišą vėžinių ląstelių ir skatinti jų judrumą [6], [7]. Iš tiesų, CAFS pasitikrinti diferenciacijos procesas, kurį sukelia vėžinių ląstelių ir plėtoti invazinės ir migracijos gebėjimai [8], [9].

mezenchiminių kamieninės ląstelės yra multipotent ląstelės, kurios gali būti išskirtos iš įvairių audinių, įskaitant kaulų čiulpų, riebalinis audinys, sinovijoje, skeleto raumenų, kepenų, virkštelės kraujo, placentos ir virkštelės [10] - [13]. MSC gali būti sukeltas diferencijuojasi į osteocytes, adipocitų, chondrocitų ir ląstelėse, nes jų regeneracinės galimybes ir multipotent pajėgumų [14]. MSC namo ir išgyventi uždegimas ir žalos, taip pat auglių svetainių, prisidedant prie naviko susijusių stromos [15] formavimui. Tyrimai patvirtino, kad MSC gali diferencijuoti į miofibroblastus karcinomos susijęs fibroblastų, fibrocitas ar pericytes pagal naviko mikroaplinka sąlygų [6], [16], [17]. Mūsų ankstesnių tyrimų, mes parodėme, kad kaulų čiulpų MSC ir iš jų gautų exosomes gali skatinti navikų augimą [18], [19]. Tačiau, atsakinga už šio poveikio mechanizmas dar nėra plačiai žinomas.

vėžinių ląstelių bendrauti su naviko mikroaplinkos Mobilusis ląstelių sąveiką ir paracrine mechanizmų, tokių kaip gaminti augimo veiksnių, chemokinus ir adatinių žeminančio fermentų, kad padidinti įvairovę platinimas ir invazija į naviko [20]. Be to, kuris yra žinomas mechanizmų, yra naujas mechanizmas, kad auglio ląstelės gali aktyviai išleisti exosomes iškyla. Exosomes turėti ypač sudėtis, atspindintis jų kilmę ir gali perduoti ne tik membrana komponentus, bet ir nukleino rūgšties tarp skirtingų ląstelių [21], [22], pabrėžiant savo vaidmenį tarpląstelinės komunikacijos [23]. Daugėja įrodymų, parodė, kad exosomes prisideda prie korinio būdas ryšio, todėl tarpląstelinės perdavimo molekulių [24]. Nors reguliavimo vaidmuo exosomes imuninės sistemos ir jų taikymas, kaip vakcinos nuo vėžio imunoterapija žada [25] -. [28], rezultatas po sąveiką vėžio exosomes ir stromos ląstelėse nėra gerai suprantama

Piktybinis ląstelės vėl MSC į kovos su sukčiavimu strategijoje, kurios prisideda prie skatinti naviko progresavimas buvo skatinami tyrimą dėl galimo mechanizmų perėjimą. kurie tyrimai parodė, kad ne mažiau kaip 20% CAFS kilę iš kaulų čiulpų ir yra kilęs iš mezenchiminių kamieninių ląstelių pelių modelių į fl ammation sukeltai skrandžio vėžio [16]. Mes iškėlė hipotezę, kad vėžinių ląstelių bendravo su MSC per išleidimo exosomes ir perdavimo baltymų, todėl paskatinti iš MSC diferenciaciją į kovos su sukčiavimu strategijoje. Atsižvelgiant į dabartinę tyrime mes parodė, kad MSC įsigijo CAF fenotipą šią buvo susijęs su TGF-beta /SMAD signalinio kelio aktyvavimo poveikio vėžio kilmės exosomes ir MSC diferenciaciją į kovos su sukčiavimu strategijoje.

Medžiagos ir metodai
buvo gauti

Mobilaus ryšio kultūra

Žmogaus virkštelės MSC kaip aprašyta anksčiau [12], [29]. Šviežios Jungiamieji laidai buvo surinkti iš informuotas sutinkančių motinų ir apdoroti per 6 val. Virvės buvo nuplauti du kartus fosfato buferinis druskos tirpalu (PBS) į penicilino ir streptomicino ir tada buvo pašalinta smegenų kraujagysles. Nuplautas laidai buvo supjaustyti į gabalus 1-3 mm ^{2 dydžio ir plūduriavo DMEM, kurių sudėtyje yra 10% FBS (INVITROGEN, JAV), 1% penicilino ir streptomicino. Virkštelės vienetų vėliau buvo inkubuojami 37 ° C temperatūroje drėgnoje oro su 5% CO _{2 ir vidutinės buvo keičiama kas 3 dienas po pradinio apkalos. Kai gerai išsivysčiusios kolonijos fibroblastus panašios ląstelių pasiekė 80% santaką, kultūros buvo tripsinizuojamos ir passaged į naujas kolbas toliau plėsti. Tirti izoliuotų hucMSCs įskaitant morfologinio išvaizda, paviršinių antigenų, diferenciacijos potencialą ir genų ekspresijos savybės kaip buvo aprašyta anksčiau [12]. Visi eksperimentas protokolai buvo patvirtintas etikos komiteto Dziangsi universitete. Į hucMSCs iš ištrauka 2 buvo atrinkti eksperimentų. Žmogaus skrandžio vėžio ląstelės (SGC7901 ir HGC27) buvo nupirkta iš ląstelių banką, įveskite Kultūrų rinkinys komiteto (Kinijos mokslų akademija). Skrandžio epitelio ląstelių (GES-1) buvo nupirkta iš Cwbiotech Company ir prižiūrimi DMEM papildyta su 10% FBS.}}

Egzosoma išskyrimas ir gryninimas

SGC7901, HGC27 ir skrandžio epitelio ląstelių (GES-1 ), gautos exosomes buvo izoliuoti ir išgrynintasis kaip aprašyta anksčiau [30], [31]. Trumpai, ląstelės buvo auginamos DMEM, papildytoje 10% Egzosoma-išeikvoti vaisiaus galvijų serumo. Vaisiaus galvijų exosomes buvo pašalintas nakties ultracentrifugavimo ne 100,000 g 16 h, naudojamas tipas 90 Ti fiksuoto Angel rotorių (Optima L 90k, Beckman Coulter "). Supernatantai iš susiliejantis kultūrų (per 3-5 dienas) buvo centrifuguojamas 2000 g 20 min pašalinti ląsteles ir nešvarumus. Ir paaiškino, paviršinis buvo koncentruojamas ultrafiltravimą per 100 kDa MWCO tuščiavidurio pluošto membranos (miliporų) 1000 g, 30 min. Koncentruotas supernatantas buvo pakrauta į centrifugavimo mėgintuvėlius (Beckman) ir underlayed su 30% sacharozės /D _{2O tankio pagalvėlę (5 ml), formuojantį matomą interfazės ir ultracentrifuguojami, esant 100000 g ir 4 ° C temperatūroje 1 val į SW-32Ti supasi-kibiras rotorius (Optima L 90k, Beckman Coulter "). Tada tiek exosomes sacharozės tankio pagalvėlės (frakcija 3) surinktos iš ultracentrifuge vamzdžių dugno ir nonbanded frakcijos (6 frakcija ir 7), kuriuose yra nonmembrane baltymų kompleksus surinktus naudoti kaip exosomes kontrolės (E-kontrolės) buvo sukauptos ir plauta tris kartus per 100-kDa miniatiūrinės tuščiaviduris pluošto kasetės (Millipore), esant 1000 g 30 min, kaip aprašyta aukščiau. Baltymų kiekis buvo matuojamas naudojant BCA Bandymo rinkinį (Pierce). Į exosomes buvo sterilizuota per 0,22 mkm kapsulės filtru (miliporų) ir saugomi -70 ° C iki naudojimo [30].}

elektronų mikroskopija

A exosomes sumažėjimas (apie 20 pl) gauti po to, kai diferencinės ultracentrifugavimo buvo pipete ant formvar anglies dengtos tinklų ir leidžiama nusistovėti 1 min kambario temperatūroje. Nuėmus skysčio perteklių su filtru gabalas, mėginys buvo nudažomi su 2% (w /v) phosphotungstic rūgšties (pH 6,8) 5 min ir buvo oro-džiovinami elektros kaitinimo lempa, ir analizuojami su perdavimo elektroniniu mikroskopu (FEI Tecnai 12 Philips).

Exosomes Žymėjimas ir Internalizacijos

SGC7901 ląstelės gautų exosomes ir exosomes kontrolė buvo paženklinti CM-dil (raudona) pagal gamintojo protokolą (Invitrogen). Exosomes iš GES-1 ląstelės buvo naudojamas kaip ląstelių kontrolės. Žymėtas Egzosoma suspensija filtruojama, su 100-kDa MWCO tuščiavidurio pluošto membranos (Millipore) ir pratekėjimo buvo naudojamas kaip laisvoji dažų kontrolės. HucMSCs (1 × 10 ^{4 /duobutėje) buvo pasėjamos į 12 duobučių lėkštelėse, turinčiose plokšteles ir inkubuojami 37 ° C temperatūroje su žymėtųjų exosomes (800 mikrogramų /ml) 4 h iki derliaus nuėmimo.}

imunofluorescencines Dažymo

HucMSCs buvo nustatytas 4% paraformaldehido 10 min. Paženklinti ląstelės buvo parengta fluorescencijos mikroskopijos Per-mobilizacijos 3 min su 0,1% Triton-X100, blokavo 5% BSA ir inkubuojami su triušio monokloninis anti-β-aktino antikūnų nakties, po inkubacijos su Cy2 žymėto kovos su triušio IgG antrinis antikūnas 37 ° C temperatūroje 45 min (Jackson ImmunoResearch). Branduolys buvo counterstained su DAPI. Confocal vaizdai buvo nuosekliai įsigijo su TKS SP5 II sistemos (Leica) [32].

BVM diferencijavimas

HucMSCs buvo pasėjamos į 6-duobučių lėkštelėse (5 × 10 ^{3 /gerai) , Dvylika valandų po to, kai pasėjimo metu, hucMSCs buvo gydomi exosomes (800 mikrogramų /ml), kad sukeltų CAF diferencijavimas buvimo ar nebuvimo TGF-β receptorių 1 kinazės inhibitorius SD208 (Sigma), arba rekombinantinio žmogaus TGF-beta (5 ng /ml; sigma). Vidutinės buvo keičiama kas 3 dienas 14 dienų. tada ląstelės buvo surinkti ir paruošti Vakarų blotingo metodu ir kiekybine PGR analizei.}

Imunoblotingo

ląstelės buvo surinkti ir lizuojamos Ripa buferiniu tirpalu (10 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM EGTA, 0,1% SDS, 1 mM NaF, 1 mM Na _{3VO 4, 1 mM PMSF 1 mg /ml aprotinino, 1 mg /ml leupeptiną). Mėginiai, kuriuose yra po vienodą kiekį baltymų buvo frakcionuotas ir tada perkelti į metanolį anksto aktyvuota PVDF membranos (MILLIPORE, JAV). Po eilės inkubacijos su pirminės ir antrinės antikūnų, signalas buvo ryškinamos naudojant HRP substrato (MILLIPORE, JAV) ir analizuojami MD vaizdo Quant įranga. Šaltiniai ir skiedimo koeficientus pirminių antikūnų buvo: triušis polikloninis Anti-CD9 (1:1000; Bioworld), anti-CD81 (1:1000; Epitomics), anti-TGF-β (1:1000; Bioworld), anti-FAP ( 1:1000, Abcam), pelės monokloninis anti-α-SMA (1:1000; Santa Cruz), anti-VEGF (1:1000; Santa Cruz) ir anti-Vimentin (1:2000; Santa Cruz), anti-N -cadherin (1:1,000; Bioworld), anti-E-cad (1:500; SAB), ir pelės monokloninis anti-GAPDH. (1:5000; KangCheng)}

Kiekybinė PGR

bendra RNR buvo išskirta su Trizol reagento (Invitrogen) ir kDNR buvo susintetintas naudojant atvirkštinę transkripciją rinkinį (Toyobo, Japonija) pagal gamintojo instrukcijas. Gruntai buvo gaminamas Invitrogen Company (Šanchajus, Kinija). Realaus laiko AT-PGR buvo atliekama siekiant aptikti FAP kaita, alfa-SMA, N-cad ir IL-6 genų ekspresijos, (Rotorius Gene 6000, Australija). Siekiant kompensuoti svyravimų įvesties RNR ir atvirkštinės transkripcijos efektyvumo, endogeninė "Namų ūkis" genas (β-aktino) taip pat buvo įvertintas normalizuoti rezultatus. Visi mėginiai buvo paleisti tris kartus, ir visus reakcijos buvo kartojama 3 kartus nepriklausomai užtikrinti, pasikartojimu.

Migracija Analizės

HucMSCs (8 × 10 ^{4 200 pl) sustabdytas kraujo serume -nemokama vidutinės buvo sutalpinama į viršutiniame skyriuje ir 500 pL serumo neturinčioje terpėje (SFM), kuriame yra 800 g /ml exosomes į buvimo ar nebuvimo TGF-β receptorių 1 kinazės inhibitorių SD208 (2 pM) buvo įtraukta į iš apačios transwell (Corning "). Po to, kai kultūros esant 37 ° C temperatūroje 6 valandas, ląstelės viršutinė membrana nušluosčius medvilnės tamponu. Ląstelės migravo per membraną buvo nustatytos su 4% paraformaldehido ir tamsintas su violetinei. Ląstelės buvo stebima mikroskopu, o ne mažiau kaip 10 sritys ląstelių buvo tiriami kiekvienai grupei.}

TGF-β neutralizavimas

HucMSCs buvo gydomi naviko exosomes (800 mikrogramų /ml), kad sukeltų BVM diferenciacija buvimo ar nebuvimo TGF-β antikūno (R & d). Prieš Bandymai rodo, kad anti-TGF-β antikūnas (20 mikrogramų /ml) buvo inkubuojami su exosomes 37 ° C temperatūroje 2 valandas.

Statistinė analizė

Visi duomenys buvo išreikštos kaip reiškia ą SD. SPSS programinė įranga buvo naudojama analizuoti duomenis. Skirtingų gydymo grupių priemonė buvo lyginamos pagal dvipusio ANOVA testą arba Stjudento t-testą. "P < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas

Rezultatai

Exosomes apibūdinimas ir Internalizacijos

izoliuotas ir nustatė exosomes remiantis jų unikalaus dydžio ir tankio.. Kaip parodyta Fig. 1A-a, kad exosomes buvo būdingas lėkšte-kaip forma riboja lipidų bisluoksnio, kurių skersmuo svyruoja nuo 40 iki 100 nm bangos ilgiui. Mes patvirtino gausiai išraišką exosomal žymenų CD9 ir CD81 mūsų izoliuotų exosomes pagal Imunoblotingo (pav. 1a-b). Po mūsų ankstesnius tyrimus, žmogaus virkštelės gautų MSC buvo parengta ir pasižymi (duomenys neparodyti). Ištirti exosomes internalizavimo pagal hucMSCs, mes paženklinti su exosomes su CM-Dil. Kaip parodyta 1B pav, SGC7901 ląstelės gautų exosomes buvo įskaičiuotos ir sukaupta hucMSCs po inkubacijos 4 valandas, o exosomes kontrolė parodė minimalų poveikį. Palyginti su SGC7901 grupės, mažiau GES-1 gautus exosomes buvo paimta hucMSCs.

naviko kilmės Exosomes Skatinti hucMSCs diferencijavimas į CAFS

iškėlė hipotezę, kad naviko kilmės exosomes gali sukelti diferencijavimo hucMSCs į CAFS in vitro
. Kovos su sukčiavimu strategijoje buvo apibrėžta kaip padidėjusios raiškos FAP ir α-SMA baltymų. HucMSCs monosluoksniui buvo auginamos terpėje, turinčioje 800 mikrogramų /ml SGC7901 exosomes ir GES-1 exosomes. Kiekybinė PGR analizė parodė, kad SGC7901 exosomes bet ne GES-1-exosomes skatino CAF žymenų raišką MSC po 36 h (. 2A pav) ir 14 d (2b pav.), Po indukcijos, atitinkamai. Palyginti su negydyta grupės, naviko exosomes gydymas lėmė didėja FAP, alfa-SMA, N-cad ir Vimentin baltymų kiekis (2c pav.). Bendrai, šie rezultatai rodo, kad hucMSCs atlikti BVM diferenciaciją reaguojant į naviko exosomes ekspoziciją.

naviko kilmės Exosomes Skatinti hucMSCs Migracijos

Jei išanalizuoti, ar migruojantys gebėjimas hucMSCs turėjo įtakos naviko exosomes, hucMSCs buvo kultivuojamos transwell ir sukeliama migruoti auglio exosomes. , Kaip parodyta Fig 3A ir 3B, po 6 valandų po inkubacijos, naviko exosomes skatino hucMSCs migraciją efektyviau nei normalaus ląstelinio kilęs exosomes. Mes taip pat parodė, kad padidėjo migracija hucMSCs auglio exosomes buvo užblokuotas vienu metu gydant TGF-β R1 inhibitorius, SD208. Be to, mes išnagrinėjo SGC7901 exosomes dėl hucMSCs migracijos poveikį naudojant nulio tyrimą. Šie rezultatai buvo panašūs su kad iš transwell migracijos tyrimas, rodo sumažintą trūkstamo atstumą auglio Egzosoma-gydytoje grupėje (S1 pav.). Kartu paėmus, šie rezultatai rodo, kad auglio exosomes gali skatinti hucMSCs migraciją in vitro
.

Naviko gautas Exosomes Aktyvuoti Smad2 /3 ir p38 į hucMSCs

TGF- β buvo įrodyta, kad būti ant exosomes [33] ir svarbus CAF diferenciacijos paviršiaus. tada mes ištirti, ar TGF-β kelias buvo atsakingas už MSC perėjimo sukėlimu CAFS auglio exosomes. Mes pirmą kartą parodė, kad TGF-beta vėžinių exosomes (Pav. 4a) buvimą. Palyginti su naviko exosomes, normalaus ląstelinio kilęs exosomes parodė mažesnį TGF-β išraiška. Siekiant įvertinti, ar hucMSCs diferenciacija į kovos su sukčiavimu strategijoje yra susijęs su TGF-β rūšyse aktyvavimo, mes išnagrinėjo fosforilinto SMAD 2/3 statusą po naviko exosomes gydymą. Rezultatai parodė, kad SMAD 2/3 fosforilinimas buvo padidintas vėžinių exosomes ne 15 min po gydymo ir pasiekė aukščiausią lygį 60 min po gydymo, o visos SMAD 2/3 baltymų koncentracija nepakinta. Taip pat nustatėme, kad fosforilinto p38 lygį ir nustatė, kad p38 fosforilinimo taip pat buvo padidintas auglio exosomes (4b pav.). Priešingai, GES-1 gautus exosomes negalėjo aktyvuoti Smad2 /3 ir p38 (. 4C pav). Kartu paėmus, šie rezultatai rodo, kad auglio exosomes specialiai aktyvuoti Smad2 /3 ir p38 į hucMSCs.

TGF- kelią slopinimas blokai Naviko Exosomes sukeltos Smad2 /3 ir p38 aktyvinimas

Jei parodys, ar iš Smad2 /3 ir p38 aktyvinimas yra būdingi TGF- signalizacijos sukėlė naviko exosomes, mes užblokuotas TGF-beta signalizacijos kelią su TGF-beta R1inhibitor ir aptikta fosforilinto Smad2 /3 ir p38 lygį. Kaip parodyta Fig. 5A, padidėjęs fosforilinimas Smad2 /3 ir p38 po naviko exosomes gydymas buvo atstatomi TGF-β R1 inhibitorius, SD208, priklausomai nuo dozės priklausomu būdu. Siekiant dar labiau įrodo, TGF-beta nuo naviko exosomes, kuri aktyvina hucMSCs, mes neutralizuoti TGF- naviko exosomes naudojant anti-TGF-beta antikūnų. Atitikti rezultatus iš TGF-beta R1 inhibitoriaus, padidėjęs fosforilinimas Smad2 /3 ir p38 į hucMSCs taip pat buvo pakeista į TGF-beta antikūno (5B pav.). Apibendrinant, šie duomenys rodo, kad TGF-β nuo naviko exosomes sąveikauja su TGF-beta receptorių hucMSCs, todėl nuoseklaus aktyvavimo Smad2 /3 ir p38 į hucMSCs.

TGF-β Kelias slopinimas apsisuks Naviko Exosomes indukuotų hucMSCs diferencijavimas į CAFS

Jei įrodyti TGF-β /TGF-β R1 sąveika yra atsakingas už hucMSCs diferenciacijos į CAFS sukeltų vėžinių exosomes, mes užblokuotas TGF-beta signalizacijos su SD208 ir TGF-beta neutralizavimo antikūno po naviko exosomes gydymą. Kaip parodyta pav 6A-a, gydymas SD208 (2 mikromolių) 14 dienų stipriai pasikeitė navikas exosomes sukeltas išraišką CAF žymenų, įskaitant FAP, alfa-SMA, N-cad ir Vimentin į hucMSCs. Mes taip pat patvirtino šį efektą naudojant exosomes iš HGC-27 skrandžio vėžio ląstelių (pav. 6A-B). Be to, gydymas su anti-TGF- antikūno buvo panašus poveikis, koks pastebimas į TGF-β R1 inhibitoriaus (6B pav.). Apibendrinant, šie duomenys rodo, kad auglio exosomes tarpininkauti hucMSCs diferenciaciją į CAFS per TGF- /SMAD signalinio kelio aktyvacijos.

Diskusijos

Šiame tyrime mes nustatėme romanas mechanizmas, pagal kurį naviko ląstelės indukuoti MSC diferenciaciją į kovos su sukčiavimu strategijoje. Mūsų duomenys rodo, kad: (1) skrandžio vėžio ląstelės, gautos exosomes yra internalizuotas hucMSCs; (2) skrandžio vėžys ląstelių, gautų exosomes sukelti hucMSCs diferenciaciją į kovos su sukčiavimu strategijoje ir (3) TGF-β /SMAD kelias tarpininkauja dėl hucMSCs perėjimą prie kovos su sukčiavimu strategijoje. Mūsų rezultatai rodo, kad TGF-β naviko exosomes gali sąveikauti su TGF-beta R1 ant hucMSCs, todėl į SMAD keliu į hucMSCs ir vėliau diferenciacijos hucMSCs į CAFS aktyvacijos.

Nors buvo pranešta, kad auglio exosomes gali pagerinti metastazavusiu aktyvumą vėžinių ląstelių [34] naviko exosomes vaidmuo MSC nebuvo atskleista dar. Mūsų duomenys rodo, kad vėžinių ląstelių gali reguliuoti MSC mobilumą, o tai rodo, kad vėžinių ląstelių gali įdarbinti MSC iš kaulų čiulpuose arba kitų audinių navikų mikroaplinkos pagal Egzosoma tarpininkaujant mechanizmą.

poveikis naviko exosomes padidina raišką CAF žymenys MSC tai rodo, kad auglio exosomes indukuoja ląstelių fenotipo pereiti nuo MSC į kovos su sukčiavimu strategijoje. O šiame dokumente buvo preparato, CHO ir kt. Pranešama, kad exosomes iš krūties ir kiaušidžių vėžio ląsteles galėtų sukelti riebalinio audinio gautų MSC įsigyti fiziologinius ir funkcinius ypatumus naviko remti miofibroblastus [35], [36]. Mūsų darbas yra suderinamas su jų išvadomis ir toliau rodo, kad šis procesas yra SMAD priklausomas.

dabartinės tyrime mes pateikti įrodymai, kad auglio exosomes pasiūlyti veiksmingą platformą perkelti konkrečių pranešimų į MSC, skatinti MSC-BVM perėjimas. Keli ankstesni tyrimai parodė, kad TGF-β, yra išreiškiamas vėžinių ląstelių kilmės exosomes ir šis TGF-beta forma yra biologiškai aktyvus vairavimo SMAD-priklausomą signalizacijos [33], [37]. TGF-β yra pagrindinis reguliatorius kamieninių ląstelių atsinaujinimą ir diferenciacijos [38]. Mes patikrino TGF-beta buvimą skrandžio vėžio ląstelių, gautų exosomes ir patvirtino TGF-β /TGF-β R1 sąveiką tarpininkaujant su Smad2 /3 aktyvinimą ir CAF diferencijuoti hucMSCs.

Buvo įrodyta, kad MSC gali skatinti vėžio metastazių [4], [39]. Mes taip pat pranešė, kad žmogaus "MSC Išvestiniai kondicionieriai terpę ir exosomes sustiprinti kraujagyslių endotelio augimo faktoriaus (VEGF) išraišką vėžinių ląstelių ir skatinti navikų augimą vivo
[18], [19]. Ar exosomes iš MSC gali vaidinti svarbų vaidmenį vėžio metastazių nebuvo sprendžiami. Mes pastebėjome, kad MSC exosomes skatinti epitelio-į-mezenchima perėjimą (EMT) skrandžio vėžio ląsteles, tačiau pagrindiniai mechanizmai dar reikia tirti ateities studijoms.

Taigi, mes įrodyti šiame tyrime kad skrandžio vėžio ląstelės, gautos exosomes turėti galimybę indukuoti MSC diferenciaciją į kovos su sukčiavimu strategijoje ir TGF-beta /SMAD keliu aktyvacija naviko exosomes prisideda prie MSC perėjimo prie kovos su sukčiavimu strategijoje. Mūsų išvados pateikti naują mechanizmą, pagal kurį naviko ląstelės sukelti MSC diferencijuojasi į naviko stromos ląstelėse ir dalyvauti naviko mikroaplinkos formavimą.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
Skrandžio vėžio ląstelių, gautų exosomes skatinti hucMSCs migracija. HucMSCs buvo gydomi skrandžio vėžio ląstelių (SGC7901) gautų exosomes (800 mikrogramų /ml). Įbrėžimams matrica buvo atliktas analizuoti migracijos gebėjimą ląstelių. (A-C) Neapdorotos hucMSCs; (D-f) SGC7901-exosomes gydomi hucMSCs. Mastelio juosta = 50
Doi mkm. 10,1371 /journal.pone.0052465.s001
(TIF)

• PLoS ONE: būsimasis Tyrimas dėl pooperacinių Venų tromboembolijos dažnis Korėjos skrandžio vėžiu sergantiems pacientams: tyrimą Vakarų gairių taikymas Azijos vėžiu sergantiems pacientams
• PLoS ONE: prognostinę Vertė išaugintomis limfmazgiai ir metastazavęs limfmazgio Santykis skrandžio vėžiu sergantiems pacientams: rezultatai iš 1,101 sergančių pacientų tyrimas