PLoS One: gyomorkarcinóma exoszómák Trigger differenciálása köldökzsinór eredetű mesenchymalis őssejtek Carcinoma-Associated fibroblasztok keresztül TGF-β /Smad útvonal

absztrakt katalógusa

Háttér katalógusa

mesenchymalis őssejtek (MSC) elősegíti a tumor növekedését differenciálódni carcinoma-asszociált fibroblasztok (CAF), valamint alkotó tumor mikrokörnyezetében. Azonban azok a mechanizmusok felelősek az átmenet MSC hogy CAF nem ismertek. Exoszómák szabályozzák a sejtek tevékenységét sejt-sejt kommunikáció. Ebben a tanulmányban azt kívánta vizsgálni, hogy a rákos sejt-eredetű exoszómák arra szabályozásában részt vesz a differenciálás humán köldökzsinór eredetű MSC (hucMSCs) a CAF. Katalógusa

Módszertan /fő eredményei katalógusa

először azt mutatták, hogy a gyomorrák sejt-eredetű exoszómák indukált expressziója CAF markerek hucMSCs. Ezután kimutattuk, hogy a gyomorrák sejt-eredetű exoszómák stimulált foszforilációját Smad-2 hucMSCs. Azt is megerősítette, hogy a TGF-β receptor 1 kináz inhibitor legyengített Smad-2 foszforiláció és CAF marker expressziója hucMSCs expozíció után gyomorrák sejt eredetű exoszómák. Katalógusa

Következtetés /Jelentés katalógusa

Eredményeink azt sugallják, hogy a gyomorsav a rákos sejtek kiváltott differenciálódását hucMSCs a CAF-ek által exoszómák közvetített TGF-β transzfer és TGF-β /Smad útvonal aktiválás, amely alkalmazásával egy új mechanizmust MSC a CAF-ek átmenet a rák.

bevezető hivatkozás: Gu J, Qian H, Shen L, Zhang X, Zhu W, Huang L, et al. (2012) gyomorkarcinóma exoszómák Trigger differenciálása köldökzsinór eredetű mesenchymalis őssejtek Carcinoma-Associated fibroblasztok keresztül TGF-β /Smad útvonal. PLoS ONE 7 (12): e52465. doi: 10,1371 /journal.pone.0052465 katalógusa

Szerkesztő: Rajeev Samant, University of Alabama at Birmingham, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: június 30, 2012; Elfogadva: november 13, 2012; Megjelent: december 20, 2012 katalógusa

Copyright: © 2012 Gu és mtsai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatta a fő kutatási terv a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (Grant nincs. 91129718), a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (Grant nem. 81071421, 31140063), Jiangsu tartomány Tudományos és technológiai Támogató Program (Grant nincs. BE2010703 ), 333 Project Jiangsu tartomány (Grant nincs. 2009055), és a Sci-Tech Innovation Team és Talents Jiangsu Egyetem (Grant nincs. 2008-018-02). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a tumor sejtek kezdenek formálhatja mikrokörnyezet korai szakaszában a malignus progresszió [1]. Kiterjedt beszámoló demonstrálta a széles körben elterjedt közötti kölcsönhatások tumor mikrokörnyezetében és a rákos sejtek, amelyek kritikus tumorigenezis és a tumor progresszióját [2], [3]. Tumor mikrokörnyezetében lehetett kiváltani reverzibilis változásokat a fenotípusa rákos sejteket, és elősegíti annak metasztázisképzôdést [4], és a változások a tumor mikrokörnyezetében még drámaian befolyásolhatja a hatékonyságát rákterápiában. Tumor mikrokörnyezetében áll különböző típusú sejtek, beleértve a karcinóma-asszociált fibroblasztok (CAF-eket), infiltráló immunsejtek, vér és nyirok érrendszeri hálózatok, valamint mezenchimális őssejtek (MSC) [4], [5].

CAF fontos meghatározói a malignus progresszió a rák növekedését, vascularizatio és metasztázis. CAF hogy kifejezze fibroblaszt aktiváló protein (FAP) és α-simaizom aktin (α-SMA) lehet létrehozni egy hiánypótló a rákos sejteket, és elősegítik azok mozgékonyságát [6], [7]. Valóban, CAF-ek alávetni differenciálódási folyamat a tumorsejtek által kiváltott és fejleszteni invazív és a vándorló képességek [8], [9].

mezenchymális őssejtek vannak multipotens sejtek izolálható sokféle szövetben, köztük a csont csontvelő, zsírszövet, ízületi hártya, vázizomban, a májban, a köldökzsinórvérből, placenta, és a köldökzsinór [10] - [13]. MSC lehetne indukált különbséget oszteocitákká, zsírsejteket, kondrociták és miociták, mert a regeneratív képesség és multipotens kapacitás [14]. MSC haza, és túlélni a gyulladás és sérülés, valamint a tumorok, ami hozzájárult az a tumor-asszociált váz [15]. Vizsgálatok megerősítették, hogy az MSC-k is differenciálódni miofibrobiastok, karcinóma-asszociált fibroblasztok, fibrocytes vagy periciták alatt a tumor mikrokörnyezetében tapadás [6], [16], [17]. A mi korábbi vizsgálatok azt igazolták, hogy a csontvelő MSC-k, valamint az azokból származó exoszómák elősegítheti a tumor növekedését [18], [19]. Azonban a mechanizmus felelős ez a hatás nagymértékben ismeretlen maradt.

A tumorsejteket kölcsönhatásba tumor mikrokörnyezetében a sejt-sejt kölcsönhatás és parakrin mechanizmusok, mint a termelő a különböző növekedési faktorok, kemokinek, és a mátrix-lebontó enzimek, amelyek fokozzák a proliferáció és invázió a tumor [20]. Amellett, hogy az ismert mechanizmusok, egy új mechanizmus, amely a tumor sejtek aktívan engedje exoszómák van kialakulóban. Exoszómák egy adott készítmény tükröznek azok eredetét és átadhatja nemcsak membránkomponensek hanem nukleinsav különböző sejtek [21], [22], kiemelve szerepüket a sejtközi kommunikáció [23]. Egyre több bizonyíték azt mutatja, a hozzájárulás exoszómák a celluláris kommunikációs módot, ami a sejtközötti átadása molekulák [24]. Bár a szabályozó szerepét exoszómák az immunrendszerben és azok alkalmazása vakcinaként rák immunterápia ígéretes [25] - [28], az eredmény a következő közötti kölcsönhatás rák exoszómák és stromális sejtek nem tisztázott.

Malignus sejtek visszatér MSC hogy CAF, amelyek hozzájárulnak elősegítik a tumor progresszióját ösztönözte vizsgálatot a lehetséges mechanizmusok való áttérés. Vizsgálatok kimutatták, hogy legalább 20% A CAF-ek származnak csontvelőben és származnak mesenchymális őssejtek egér modellek az FL ammation indukált gyomorrák [16]. Feltételeztük, hogy a rákos sejtek kommunikált MSC keresztül megjelenése exoszómák és átadása fehérjéket, ezért indukáló differenciálódását MSC a CAF. A jelenlegi vizsgálat során kimutattuk, hogy az MSC-k szerzett CAF fenotípus expozíciót követő rákos eredetű exoszómák és differenciálódását MSC a CAF járt az aktiváló TGF-β /Smad jelátviteli útvonal. Katalógusa

Anyagok és módszerek

Cell Culture

Humán köldökzsinór MSC-k voltak előzőekben leírtak szerint előállított [12], [29]. Friss köldökzsinórból gyűjtöttünk tájékoztatták, beleegyező anyák és feldolgozott 6 órán belül. A zsinórok öblítettük kétszer foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) penicillin és sztreptomicin és ezután eltávolítottuk zsinór hajó. A mosott zsinórok vágtuk darab 1-3 mm ^{2 méretű és lebegett DMEM, amely 10% FBS-t (Invitrogen, USA), 1% penicillint és sztreptomicint. A darabokat a zsinór ezt követően 37 ° C-on nedves levegőn, 5% CO _{2, és a tápközeget 3 naponként cseréljük a kezdeti szélesztés után. Ha jól kifejlődött telepeket fibroblast-szerű sejtek elérték a 80% összefolyás, kultúrák tripszinizáltuk és passaged új üvegedényben a további terjeszkedésre. A jellemzői izolált hucMSCs beleértve morfológiai megjelenés, felszíni antigéneket, differenciálódás potenciális és génexpressziós vizsgáljuk, a korábban leírt [12]. Minden kísérlet engedélyezett terv szerint az etikai bizottság a Jiangsu Egyetemen. A hucMSCs passzázs 2 választottak ki a kísérletek. Az emberi gyomor rákos sejtek (SGC7901 és HGC27) szereztünk Cell Bank, Type Culture Collection bizottság (a Kínai Tudományos Akadémia). Gyomornyálkahártya sejtek (GES-1) vásároltunk a Cwbiotech Társaság és DMEM, kiegészítve 10% FBS-sel.}}

exozom izolálása és tisztítása

SGC7901, HGC27 és gyomorfekély hámsejtek (GES-1 ) származtatott exoszómák izoláltuk és tisztítottuk a korábban leírtak [30], [31]. Röviden, a sejteket DMEM-ben tenyésztjük, kiegészítve 10% exozom kimerített borjúembrió-szérumot. Magzati szarvasmarha exoszómák eltávolítjuk éjszakán ultracentrifugálással át 100.000 g-vel 16 órán alkalmazásával típusú 90 Ti fix-Angel rotor (Optima L-90K, Beckman Coulter). Felülúszóit konfluens tenyészeteket (3-5 nap) centrifugáltuk 2000 g-on 20 percig, hogy eltávolítsuk a sejteket és a törmeléket. És a tisztított felülúszót ultraszűréssel koncentráljuk keresztül egy 100 kDa MWCO üreges szálakból álló membrán (Millipore) 1000 g, 30 min. A koncentrált felülúszót betöltve centrifugacsőbe (Beckman), és underlayed 30% szacharóz /D _{2O sűrűség párna (5 ml), hogy látható interfázis és ultracentrifugáltuk 100000 G és 4 ° C-on 1 órán át SW-32Ti lengő rotorban (Optima L-90K, Beckman Coulter). Akkor mind az exoszómák szacharóz sűrűség párnák (3. frakció) összegyűjtjük a ultracentrifuga csövekbe alulról, és a nonbanded frakciókat (frakció a 6. és 7), amely tartalmaz nonmembrane protein komplexek összegyűjtött alkalmazásra az exoszómák kontroll (E-Control) összegyűjtöttük, és háromszor mostuk keresztül egy 100 kDa-os miniatűr üreges rost tölteten (Millipore) 1000 g-on 30 percig a fentiek szerint. A fehérjetartalom mértük BCA assay kit (Pierce). Az exoszómák sterilizáltuk 0,22 um kapszula szűrőn (Millipore), és -70 ° C-on, amíg a felhasználásra [30].}

Electron Microscopy

Egy csepp exoszómák (körülbelül 20 ul) kapott után differenciális ultracentrifugálással-t pipettázunk Formvar szénbevonatú rácsok és állni hagytuk 1 percig, szobahőmérsékleten. Eltávolítása után a felesleges folyadékot egy darab szűrő a mintát festettük 2% (w /v) foszfovolfrámsav (pH = 6,8) 5 percig, és levegőn szárítjuk villamos izzólámpa, és elemeztük a transzmissziós elektronmikroszkóp (FEI Tecnai 12, Philips). katalógusa

exoszómák címkézés és internalizáció katalógusa

SGC7901 származó sejtek exoszómák és a exoszómák kontrollt jelölt CM-Dil (piros) szerint a gyártó (Invitrogen). Exoszómák származó GES-1 sejteket alkalmaztunk sejt ellenőrzés. A jelzett exozom szuszpenziót szűrjük, a 100 kDa-os MWCO üreges szálakból álló membrán (Millipore), és az átfolyt használtunk a nem kötött festék ellenőrzés. HucMSCs (1 × 10 ^{4 /lyuk) oltottunk 12 lyukú lemezekre, amelyek lamella és inkubáljuk 37 ° C-on jelölt exoszómák (800 ng /ml) 4 órán betakarítás előtt.}

immunfluoreszcens festési

HucMSCs fixáltuk 4% paraformaldehiddel 10 percig. A jelölt sejteket készítünk, fluoreszcens mikroszkópos Per-mozgósítás 3 percig 0,1% Triton-X100, blokkoltuk 5% BSA-t és inkubáltuk nyúl monoklonális anti-β-aktin antitest egy éjszakán át, majd inkubáltuk Cy2-jelzett anti-nyúl IgG- másodlagos antitesttel 37 ° C-on 45 percig (Jackson Immuno). A sejtmagokat kontrasztfestést DAPI. Konfokális kép egymást követően szerzett TCS SP5 II rendszer (Leica) [32].

CAF Differentiation

HucMSCs oltottunk 6 mérőhelyes lemezekre (5 × 10 ^{3 /lyuk) . Tizenkét órával a beoltás után hucMSCs kezeltük exoszómák (800 ng /ml), amely kiváltja a CAF differenciálódást jelenlétében vagy hiányában a TGF-β-receptor-1-kináz inhibitor SD208 (Sigma) vagy rekombináns humán TGF-β (5 ng /ml; Sigma). A táptalajt 3 naponként cseréljük 14 napig. A sejteket ezután összegyűjtjük és felkészült Western blot és kvantitatív PCR-analízis.}

Western-blot

sejteket összegyűjtöttük, és lizáltuk RIPA-pufferben (10 mM Tris, pH = 7,4, 150 mM NaCI, 1 mM EGTA, 0,1% SDS, 1 mM NaF, 1 mM Na _{3VO 4, 1 mM PMSF, 1 mg /ml aprotinin, 1 mg /ml leupeptin). Aliquotjait tartalmazó azonos mennyiségű fehérjét frakcionáltuk, és azután átvisszük metanol előaktivált PVDF membránokra (Millipore, USA). Miután szekvenciális inkubálás a primer és szekunder antitesttel, a jel láthatóvá tettük az HRP szubsztrátot (Millipore, USA), és elemezzük MD képet Mennyiség szoftver. Forrásai és hígítási tényezőket az elsődleges antitestek a következők voltak: nyúl poliklonális anti-CD9 (1:1000; Bioworld), anti-CD81 (1:1000; Epitomics), anti-TGF-β (1:1000; Bioworld), anti-FAP ( 1:1000, ABCAM), egér monoklonális anti-α-SMA (1:1000; santa Cruz), anti-VEGF (1:1000; santa Cruz) és anti-vimentin (1:2000; santa Cruz), anti-N -cadherin (1:1,000; Bioworld), anti-E-kadherin (1:500; SAB), és az egér monoklonális anti-GAPDH (1:5000; Kangcheng).}

kvantitatív RT-PCR katalógusa

Teljes RNS-t extraháltuk a Trizol reagens (Invitrogen), és a cDNS-t szintetizáltunk egy reverz transzkripciós készlet (Toyobo, Japán) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Láncindítókat elő Invitrogen Company (Sanghaj, Kína). Real-time RT-PCR-t végeztünk, hogy észleli a változás a FAP, alfa-SMA, N-kadherin és az IL-6 génexpressziót (rotor-Gene 6000, Ausztrália). Ahhoz kiegyenlíteni a bemenő RNS és a hatékonysága a reverz transzkripció, endogén "takarítás" gén (β-aktin) is számszerűsített normalizálni az eredményeket. Minden mintát három párhuzamosban, és minden reakciót megismételjük 3-szor függetlenül, hogy biztosítsák a reprodukálhatóság. Katalógusa

migrációs assay katalógusa

HucMSCs (8 × 10 ^{4 200 pl) felfüggesztett szérum -mentes közeg betöltésre került a felső rekeszbe, és 500 ul szérummentes tápközeg (SFM), amely 800 ng /ml exoszómák jelenlétében vagy távollétében a TGF-β-receptor-1 kináz inhibitor SD208 (2 uM) adtunk az alján a transzwell (Corning). Miután a tenyészetet 37 ° C-on 6 órán át, majd a sejteket felső membrán letöröljük egy vattacsomóval. A felére vándorolt ​​sejtek a membránon keresztül fixáltuk 4% paraformaldehiddel, és megfestettük kristályibolyával. A sejteket megfigyelt alatt mikroszkópia és legalább 10 területeken sejteket megvizsgáljuk az egyes csoportokhoz.}

TGF-β Semlegesítés

HucMSCs kezeltük tumor exoszómák (800 ng /ml), amely kiváltja a CAF differenciálódás jelenlétében vagy hiányában a TGF-β antitestet (R &D). A kísérleteket megelőző, anti-TGF-β antitestet (20 ng /ml) inkubálunk exoszómák 37 ° C-on 2 órán át keverjük.

Statisztikai elemzés

Az összes adatot átlag ± SD. SPSS szoftvert használtunk az adatok elemzésére. Az eszközök különböző kezelési csoportok összehasonlították a két-utas ANOVA-teszt vagy Student-féle t-próba. P < 0,05 értéket tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

exoszómák jellemzése és internalizáció katalógusa

izolálták és azonosították az exoszómák alapuló egyedi mérete és sűrűsége. Ábrán látható. 1A-a, a exoszómák volt egy jellegzetes csészealj-szerű alak korlátozza egy lipid kettősréteg átmérőjű mozgott 40-100 nm. Igazoltuk a bőséges expresszióját exosomal markerek CD9 és CD81 a mi izolált exoszómák Western blottal (ábra. Az 1A-B). Miután a mi korábbi tanulmányok, az emberi köldökzsinór eredetű MSC állítjuk elő és jellemezzük (az adatokat nem mutatjuk). Hogy vizsgálja meg a internalizációjában exoszómák által hucMSCs azt jelölt a exoszómák CM-Dil. Amint az 1B ábra, SGC7901 származó sejtek exoszómák arra internalizált és felhalmozódott hucMSCs inkubáció után 4 órán át, miközben exoszómák ellenőrzés azt mutatta, minimális hatást. Összehasonlítva SGC7901 csoport, kevésbé GES-1 eredetű exoszómák vettünk fel hucMSCs. Katalógusa

tumor eredetű exoszómák elősegítése hucMSCs differenciálása a CAF katalógusa

Azt feltételeztük, hogy tumor eredetű exoszómák okozhat, a differenciálás hucMSCs a CAF in vitro katalógusa. CAF-ek kerültek meghatározásra, mint a fokozott expressziója FAP és α-SMA-fehérjéket. HucMSCs monoréteg tenyésztettünk tartalmazó tápközegben 800 ng /ml SGC7901 exoszómák és GES-1 exoszómák. Kvantitatív RT-PCR analízisek azt mutatták, hogy SGC7901 exoszómák de nem GES-1-exoszómák elősegítette expresszióját CAF markerek MSC 36 h (2A.) És az 14 D (ábra. 2B) az indukció után, ill. Összehasonlítva a kezeletlen csoportban, a tumor exoszómák kezelés hatására emelkedik a FAP, α-SMA, N-kadherin, és Vimentin fehérje szinten (ábra. 2C). Együttesen ezek az eredmények azt mutatják, hogy hucMSCs mennek CAF differenciálódás válaszul tumor exoszómák expozíciót. Katalógusa

tumor eredetű exoszómák elősegítése hucMSCs Migration katalógusa

Annak vizsgálatára, hogy a migrációs képességét hucMSCs befolyásolta tumor exoszómák, hucMSCs tenyésztettük a transwell és indukált áttérni a tumor exoszómák. Amint az a 3A és 3B ábrák, 6 órával az inkubálás után, tumor exoszómák elősegítette a migrációját hucMSCs hatékonyabban, mint a normál sejt eredetű exoszómák. Azt is kimutatta, hogy a megnövekedett migrációja hucMSCs által tumor exoszómák által blokkolt szimultán kezelés TGF-β R1 inhibitor, SD208. Emellett megvizsgáltuk a hatását SGC7901 exoszómák kioldódási hucMSCs segítségével semmiből vizsgálattal. Az eredmények összhangban voltak, hogy a Transwell migrációs assay, bemutatva egy csökkentett rés távolsága a tumor exozom kezelt csoportban (ábra. S1). Együttesen ezek az eredmények azt mutatják, hogy a tumor exoszómák elősegítheti a migráció hucMSCs in vitro katalógusa.

tumor eredetű exoszómák Aktiválás Smad2 /3 és p38 hucMSCs katalógusa

TGF β kimutatták, hogy jelen legyen a felületen a exoszómák [33] és a kritikus a CAF differenciálás. Mi akkor megvizsgálta a TGF-β útvonal volt a felelős az indukció MSC átmenet CAF által tumor exoszómák. Először kimutattuk a TGF-β tumor exoszómák (ábra. 4A). Összehasonlítva a tumor exoszómák, normális sejtből származó exoszómák kimutatta alacsonyabb szintje a TGF-β expressziót. Annak megállapítására, hogy a differenciálás hucMSCs a CAF társul TGF-β útvonal aktiválása megvizsgáltuk állapotát foszforilált Smad 2/3 után tumor exoszómák kezelést. Az eredmények azt mutatták, hogy Smad 2/3 foszforiláció növelte a tumor exoszómák át 15 percig a kezelés után, és elérte a legmagasabb szinten 60 perc kezelés utáni, miközben a teljes Smad 2/3 fehérje szintjét nem befolyásolta. Azt is megállapítottuk, a szint foszforilált p38, és megállapította, hogy a p38 foszforilációja is nőtt a daganat exoszómák (ábra. 4B). Ezzel szemben a GES-1 eredetű exoszómák Nem sikerült aktiválni Smad2 /3 és a p38 (ábra. 4C). Összefoglalva, ezek az eredmények azt jelzik, hogy a tumor exoszómák specifikusan aktiválni Smad2 /3 és a p38 in hucMSCs.

TGF-β útvonal gátlása gátolja a daganatos exoszómák indukált Smad2 /3 és a p38 aktiválása

bizonyítani, hogy aktiválásával Smad2 /3 és a p38 specifikus TGF-β jelátvitel által kiváltott tumor exoszómák, mi blokkolt TGF-β jelátviteli útvonal a TGF-β R1inhibitor és észlelt szintje foszforilált Smad2 /3 és a p38. Ábrán látható. 5A, a megnövekedett foszforilációját Smad2 /3 és a p38 alábbi tumor exoszómák kezelés megfordult a TGF-β R1 inhibitor, SD208, dózis-függő módon. Annak további igazolására TGF-β-re tumor exoszómák, amely aktiválja a hucMSCs, mi semlegesített TGF-β tumor exoszómák alkalmazásával anti-TGF-β antitest. Összhangban az eredmények a TGF-β R1 inhibitor, a megnövekedett foszforilációját Smad2 /3 és a p38 in hucMSCs is visszafordítható a TGF-β antitest (ábra. 5B). Összefoglalva, ezek az adatok arra utalnak, hogy a TGF-β-re tumor exoszómák kölcsönhatásba lép a TGF-β-receptor hucMSCs, ami a szekvenciális aktiválását Smad2 /3 és p38 hucMSCs.

TGF-β útvonal gátlása az ellenkező Tumor exoszómák -indukált hucMSCs differenciálódás CAF-ek

Annak igazolására, TGF-β /TGF-β R1 kölcsönhatás felelős a differenciálódását hucMSCs a CAF-ek által indukált tumor exoszómák, mi blokkolt TGF-β jelátvitelt SD208 és TGF-β semlegesítés antitesttel, majd a tumor exoszómák kezelést. Amint az a 6A-a, kezelés SD208 (2 uM) 14 napig erősen megfordította a tumor exoszómák-indukált expressziója CAF markerek, beleértve a FAP, α-SMA, N-kadherin és Vimentin a hucMSCs. Azt is megerősítette ezt a hatást exoszómák származó HGC-27 gyomorrák sejtek (6A.-B). Ezen túlmenően, a kezelés az anti-TGF-β antitest vezetett a hasonló hatást, hogy a megfigyelt TGF-β R1 inhibitor (6B.). Összefoglalva, ezek az adatok azt bizonyítják, hogy a tumor exoszómák közvetítik differenciálódását hucMSCs hogy CAF-ek aktiválása útján TGF-β /Smad jelátviteli útvonal.

Discussion

Ebben a vizsgálatban, már azonosítottunk egy új mechanizmus, amely által a tumorsejtek indukálják differenciálódását MSC a CAF-ek. Adataink azt mutatják, hogy: (1) gyomorrák sejt eredetű exoszómák internalizálódnak hucMSCs; (2) gyomorrák sejt eredetű exoszómák kiváltó hucMSCs differenciálódás CAF-ek és (3) a TGF-β /Smad útvonal közvetíti az átmenet a hucMSCs a CAF-ek. Eredményeink azt sugallják, hogy a TGF-β tumor exoszómák kölcsönhatásba léphet a TGF-β R1 on hucMSCs, ami a aktiválását Smad útvonal hucMSCs és az azt követő differenciálódását hucMSCs a CAF-ek.

Bár leírták hogy a daganatos exoszómák javíthatja a metasztatikus aktivitásához tumorsejtek [34], a szerepe a tumor exoszómák az MSC nem hozták nyilvánosságra még. Eredményeink azt mutatják, hogy a daganatos sejtek szabályozzák a mobilitását MSC, ami arra utal, hogy a tumorsejtek toborozni MSC csontvelőből vagy más szövetekben, hogy a tumor mikrokörnyezetében által exozom-közvetített mechanizmus.

Expozíció tumor exoszómák növeli a kifejezése CAF markerek MSC, ami arra utal, hogy a tumor exoszómák indukálja a kapcsolót fenotípus MSC a CAF. Bár ez a könyv volt a felkészülés, Cho és mtsai. számolt be, hogy exoszómák származó emlő- és petefészekrák-sejtek képesek kiváltani a zsírszövet eredetű MSC megszerzésére élettani és funkcionális jellemzőit a tumor-támogató myofibroblastok [35], [36]. Munkánk az összhangban van az elért eredmények és a további bizonyítja, hogy ez a folyamat Smad-függő. Katalógusa

A jelenlegi tanulmányban bemutatjuk a bizonyíték arra, hogy a tumor exoszómák kínálnak hatékony platformot átadása konkrét üzeneteket MSC, elősegítve MSC-CAF átmenet. Számos korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a TGF-β expresszálódik a rákos sejt-eredetű exoszómák és ebben a formában a TGF-β biológiailag aktív vezetői Smad-függő jelátviteli [33], [37]. TGF-β kulcsfontosságú szabályozója őssejt megújulás és differenciálódását [38]. Igazoltuk jelenlétében TGF-β a gyomorrák sejt eredetű exoszómák és megerősítette a TGF-β /TGF-β R1 kölcsönhatás által közvetített a Smad2 /3 aktivációt és CAF differenciálódását hucMSCs.

Kimutatták, hogy MSC-k elősegítheti a rákos áttétek [4], [39]. Azt is jelentette, hogy a humán MSC leszármaztatott kondicionált tápközegben és exoszómák fokozza a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) expressziójának a tumorsejtekben és elősegíti a tumornövekedést in vivo katalógusa [18], [19]. Függetlenül attól, hogy a exoszómák származó őssejteket szerepet játszhat a rák áttétek nem foglalkoztak. Megfigyeltük, hogy az MSC-k exoszómák elősegítik a hámsejtek-to-mezenhimasejtek átmenet (EMT) a gyomor rákos sejtek, de a mögöttes mechanizmusok még meg kell vizsgálni a további vizsgálatok. Katalógusa

Végeredményben azt mutatjuk be, ebben a vizsgálatban hogy gyomorrák sejt eredetű exoszómák képesek indukálni a differenciálódását MSC a CAF-ek és az aktiválás a TGF-β /Smad útvonal által tumor exoszómák hozzájárul az átmenet a MSC a CAF-ek. Eredményeink olyan új mechanizmus, amellyel tumor indukáló MSC differenciálódnak tumor stroma sejtekre, és részt vesz a kialakulását tumor mikrokörnyezetében. Katalógusa

alátámasztó információk
ábra S1.
Gyomorrák sejt eredetű exoszómák elősegítése hucMSCs migráció. HucMSCs kezeltünk gyomorrák sejt (SGC7901) származtatott exoszómák (800 ng /ml). Scratch tömb végeztünk, hogy elemezze a migrációs képessége a sejtek. (A-C) Kezeletlen hucMSCs; (D-F) SGC7901-exoszómák kezelt hucMSCs. Skála = 50 nm. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0052465.s001 katalógusa (TIF) hotelben

• PLoS One: prospektív vizsgálatban az előfordulási posztoperatív vénás trombózis és embólia koreai gyomorrákos betegek: egy vizsgálatot az alkalmazása nyugati iránymutatások az ázsiai C…
• PLoS One: A prognosztikai aratott nyirokcsomókban és a metasztatikus nyirokcsomó arányával gyomorrákos betegek: egy tanulmány eredményeit a 1101 Patients