Plos ONE: želodca Rak eksozomov, prostazomov Trigger Diferenciacija popkovnične izpeljanega mezenhimskih matičnih celic za karcinom, pridruženih fibroblastov skozi TGF-ß /Smad Pathway

Povzetek

Ozadje

mezenhimske matične celice (MSC) spodbuja rast tumorja z razlikovanjem v-karcinoma povezana fibroblaste (KGZS) in sestavljanju mikrookolje tumorja. Vendar pa mehanizmi, ki so odgovorni za prehod MSC na KGZS niso dobro razumeli. Eksozomov, prostazomov uravnavajo celične dejavnosti s posredovanjem komunikacijo celica-celica. V tej študiji smo želeli raziskati, ali so bile z rakom eksozomov, prostazomov, pridobljenimi iz celic sodeluje pri urejanju diferenciacijo človeških centralnih-vrvjo derived MSCs (hucMSCs) na KGZS.

metodologija /Glavne ugotovitve

prvi je pokazala, da je rak želodca eksozomov, prostazomov celice pridobljene inducirane ekspresije CAF označevalcev v hucMSCs. Nato smo pokazali, da je rak želodca eksozomov, prostazomov celice pridobljene spodbudila fosforilacijo SMAD-2 v hucMSCs. nadalje smo potrdili, da TGF-β receptorjev 1 inhibitor kinaze oslabljene Smad-2 fosforilacija in CAF dvojno podajo izraz v hucMSCs po izpostavljenosti eksozomov, prostazomov raka želodca celice izvora.

Zaključek /Pomen

Naši rezultati kažejo, da želodčne rakave celice sproži diferenciacijo hucMSCs na KGZS s prenosom eksozomov, prostazomov posredovano TGF-beta in TGF-ß /SMAD pot aktivacije, ki lahko predstavlja mehanizem novo za MSC za KGZS prehodu pri raku

Navedba.: gu J Qian H Shen L Zhang X Zhu W Huang L, et al. (2012) želodca Rak eksozomov, prostazomov Trigger Diferenciacija popkovnične izpeljanega mezenhimskih matičnih celic v karcinom, pridruženih fibroblastov skozi TGF-ß /SMAD Pathway. PLoS ONE 7 (12): e52465. doi: 10,1371 /journal.pone.0052465

Urednik: Rajeev Samant, University of Alabama v Birminghamu, Združene države Amerike

Prejeto: 30. junij 2012; Sprejeto: 13. november 2012; Objavljeno: 20. december 2012

Copyright: © 2012 Gu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprl raziskovalni načrt Major državnega Natural Science Foundation Kitajske (Grant št. 91129718), National Natural Science Foundation of China (Grant, št. 81071421, 31140063), provinci Jiangsu je znanstveno in tehnološko podporni program (Grant št. BE2010703 ), 333 Projekt provinci Jiangsu (Grant, št. 2009055) in Sci-Tech ekipe inovacije in talente Univerze Jiangsu (Grant, št. 2008-018-02). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Tumorske celice začnejo oblikovati njihovo mikrookolje v zgodnji fazi malignega napredovanja [1]. Obsežna poročila so pokazala, razširjene interakcije med tumorja mikrookolja in rakave celice, ki so ključnega pomena za tumorigeneze in napredovanje tumorjev [2], [3]. Tumor mikrookolje lahko izzove reverzibilne spremembe v fenotip rakavih celic in olajša metastaze [4], in spremembe tumorja mikrookolja tudi močno vpliva na učinkovitost zdravljenja raka s. Tumor mikrookolje je sestavljena iz različnih vrst celic, vključno z rakom povezana fibroblaste (KGZS), ki infiltrirajo imunskih celic, krvi in ​​limfnih žil omrežij in mezenhimskih matičnih celic (MSC) [4], [5].

KGZS sta ključna dejavnika pri maligni napredovanja rasti raka, prekrvavitve in metastaz. KGZS, ki izražajo fibroblastov aktivira protein (FAP) in alfa-gladke mišične aktin (α-SMA), bi lahko ustvarili nišo za rakave celice in spodbujajo njihovo gibljivost [6], [7]. Dejansko KGZS skozi proces diferenciacije v tumorskih celicah pogojeno in razvoj invazivne in selitveni sposobnosti [8], [9].

mezenhimske matične celice so multipotentne celice, ki se lahko izolirane iz različnih tkiv, vključno s kostmi mozga, maščobno tkivo, sinovije, skeletne mišice, jetra, krvi popkovnice, posteljice in popkovine [10] - [13]. MSC bi lahko povzročil, da se diferencirajo v osteocit, adipocitov, hondrocitov in mišičnih celic zaradi svoje regenerativne sposobnosti in multipotentne zmogljivosti [14]. MSC dom in preživetje na mestih vnetja in poškodbe, kot tudi tumorji, ki prispevajo k nastajanju tumorjev, povezanih strome [15]. Študije so potrdili, da bi jem diferencirajo v myofibroblasts,-karcinomom povezan fibroblastov, fibrocytes ali pericytes pod pogoji tumorskega mikrookolja [6], [16], [17]. V naših predhodnih študijah smo pokazali, da lahko jem kostnega mozga in njihovi izpeljani eksozomov, prostazomov spodbujanje rasti tumorja [18], [19]. Vendar pa mehanizem odgovorni za ta namen ostaja večinoma neznane.

Tumorske celice interakcijo z tumorja mikrookolja z interakcijo celica-celica in parakrin mehanizmov, kot so izdelavo različnih rastnih faktorjev, kemokinov in-matrične razgradnjo encimov, ki izboljšujejo širjenje in vdor tumorja [20]. Poleg znanih mehanizmov, nov mehanizem, da tumorske celice aktivno sprostiti eksozomov, prostazomov se pojavljajo. Eksozomov, prostazomov imajo posebno sestavo re fl ecting svoje poreklo in ne more prenašati le komponente membran, ampak tudi nukleinske kisline med različnimi celicami [21], [22], ki poudarja svojo vlogo pri medcelični komunikaciji [23]. Kopičijo dokazi kažejo prispevek eksozomov, prostazomov do mobilnega način komunikacije, ki vodi do medcelični prenos molekul [24]. Čeprav je regulatorno vlogo eksozomov, prostazomov v imunskem sistemu in njihova uporaba, kot je cepivo v imunoterapijo raka se obeta [25] -. [28], je rezultat naslednji interakcijo med rakom eksozomov, prostazomov in stromalnih celicah ni dobro razume

Maligni celice vrnejo MSC na KGZS, ki prispevajo k spodbujanju napredovanje tumorja je spodbudila preiskavo možnih mehanizmov za prehodu. Študije so pokazale, da je vsaj 20% od KGZS izvirajo iz kostnega mozga in so pridobljeni iz mezenhimskih matičnih celic v modelih miši iz leta fl ammation inducirane raka želodca [16]. Domnevali smo, da rakave celice, sporočene z MSC s sprostitvijo eksozomov, prostazomov in prenos proteinov, zato inducira diferenciacijo MSC na KGZS. V sedanji raziskavi smo dokazali, da jem pridobil CAF fenotip naslednje izpostavljenosti eksozomov, prostazomov raku izvira in diferenciacijo MSC za KGZS je bila povezana z aktivacijo TGF-beta /SMAD signalnih poti.

Materiali in metode
so bili pridobljeni

celični kulturi

človekove popkovnične jem kot je opisano prej [12], [29]. Sveže popkovine Zbrali smo obveščeni, da pristaja matere in predelane v 6 urah. Vrvice smo dvakrat speremo s fosfatnim pufrom (PBS), na penicilin in streptomicin in jih nato odstranimo kabel plovil. V sprani kabli so narežemo na koščke 1-3 mm ^{2 velika in v zraku v DMEM, ki vsebuje 10% FBS (Invitrogen, ZDA), 1% penicilin in streptomicin. Kosi vrvice so se nato inkubirali pri 37 ° C v vlažnem zraku s 5% CO _{2 in medij se je spremenila vsake 3 dni po začetnem oplato. Ko dobro razvite kolonije fibroblastom kot celic doseže 80% sotočje, so kulture tripsinizirali in vnesejo v nove bučk za nadaljnjo širitev. Značilnosti izoliranih hucMSCs tudi morfološke videz, površinskih antigenov, diferenciacije potencial in izražanje genov so raziskovali kot je opisano prej [12]. Vse eksperiment protokoli so bili potrjeni Odbor za etiko Univerze Jiangsu. V hucMSCs iz odlomka 2 so bili izbrani za poskuse. Človeški želodca rakave celice (SGC7901 in HGC27) so bile kupljene od Cell banke, odbor Type Culture Collection (Chinese Academy of Sciences). Želodčne epitelijskih celic (GES-1) so bile kupljene od Cwbiotech družbe in vzdržuje v DMEM z dodatkom 10% FBS.}}

Eksosom Izolacija in čiščenje

SGC7901, HGC27 in epitelijskih celic želodca (GES-1 ) izpeljani eksozomov, prostazomov bili izolirani in očiščeni, kot je prej opisano [30], [31]. Na kratko, so bile celice gojimo v DMEM z dodatkom 10% Eksosom-osiromašenega govejega seruma fetusa. Fetalni goveji eksozomov, prostazomov smo odstranili z čez noč ultracentrifugiranjem 100.000 g 16 ur z uporabo tipa 90 Ti fiksni Angel rotor (Optima L-90k, Beckman Coulter). Supernatante iz konfluentnih kultur (3-5 dni) smo centrifugirali pri 2000 g 20 minut, da se odstranijo celice in umazanijo. In Očiščen supernatant smo koncentrirali z ultrafiltracijo s 100 kDa MWCO votlimi vlakni membrano (Millipore) pri 1000 g 30 minut. Koncentrirana Supernatant smo napolnili v epruvete (Beckman) in underlayed s 30% saharoze /D _{2o gostoto blazine (5 ml), ki tvori vidno medfaznih in ultracentrifugiranih pri 100.000 g in 4 ° C za 1 uro pri SW-32Ti nihanje-vedro rotor (Optima L-90k, Beckman Coulter). Nato obe eksozomov, prostazomov blazine saharoza gostote (frakcija 3), zbrane od Ultracentrifuga cevi dno in nonbanded frakcije (frakcija 6 in 7), ki vsebuje nonmembrane proteinskih kompleksov zbrane za uporabo kot kontrolo eksozomov, prostazomov (E-kontrolno) zberemo in izperemo trikrat preko 100-kDa miniaturni votlih vlaken vložku (Millipore) pri 1000 g 30 minut, kot je opisano zgoraj. Vsebnost beljakovin je bila izmerjena z BCA analiznega kompleta (Pierce) v. Je eksozomov, prostazomov smo sterilizirali skozi filter 0,22 um kapsule (Millipore) in shranili pri -70 ° C, dokler uporaba [30].}

elektronska mikroskopija

kapljica eksozomov, prostazomov (okoli 20 ul) pridobljeni po diferencialno ultracentrifugiranjem pipetiramo na formvar ogljika obložene omrežja in pustimo stati 1 minuto pri sobni temperaturi. Po odstranitvi odvečno tekočino s kosom filtra, je bil vzorec obarvali z 2% (m /v) fosfovolframove kisline (pH 6,8), 5 minut in je zračno sušili pod električnim žarnica, in analizirali s presevnim elektronskim mikroskopom (FEI Tecnai 12, Philips).

eksozomov, prostazomov Označevanje in Internalizacija

SGC7901 celic, pridobljenih eksozomov, prostazomov in eksozomov, prostazomov nadzorom, so označeni s CM-Dil (rdeča) po protokolu proizvajalca (Invitrogen). Eksozomov, prostazomov iz celic GES-1 smo uporabili celično kontrolo. Označeni Eksosom Suspenzijo smo filtrirali z 100-kDa MWCO votlega membrano vlaken (Millipore) in pretočnem uporabimo kot nevezanega nadzor barvila. HucMSCs (1 x 10 ^{4 /jamico) smo zasejali v 12 vdolbinami vsebujejo lamel in inkubirali pri 37 ° C z označenimi eksozomov, prostazomov (800 mg /ml) za 4 ure pred žetvijo.}

imunofluorescenčnim obarvanje

HucMSCs so bile določene v 4% paraformaldehid 10 minut. Označeni celice so bile pripravljene za fluorescenčno mikroskopijo s per-mobilizacijo 3 minute z 0,1% Triton-X100, blokirana s 5% BSA in inkubirana z zajec monoklonsko anti-β-aktina protitelesa preko noči, čemur sledi inkubacija z Cy2-markirano anti-kunčjega IgG sekundarna protitelesa pri 37 ° C za 45 minut (Jackson ImmunoResearch). Jedra so jih nasprotno z DAPI. Konfokalni slike so bile zaporedno pridobili z TCS sistemom SP5 II (Leica) [32].

CAF Diferenciacija

HucMSCs zasejemo v 6 vdolbinami (5 x 10 ^{3 /dobro) . Dvanajst ur po nasaditvi so hucMSCs obdelamo z eksozomov, prostazomov (800 mg /ml) za sprožitev diferenciacije CAF v prisotnosti ali odsotnosti receptorja 1 zaviralca kinaze SD208 TGF-β (Sigma) ali rekombinantnim humanim TGF-P (5 ng /ml; sigma). Gojišče smo spremenili vsakih 3 dni za 14 dni. Celice smo nato zbrali in pripravili za Western blotting-om in kvantitativno analizo PCR.}

Western blot

Celice zberemo in liziramo z RIPA pufrom (10 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM EGTA, 0,1% SDS, 1 mM NaF, 1 mM Na _{3VO 4, 1 mM PMSF, 1 mg /ml aprotinina, 1 mg /ml leupeptina). Alikvote, ki vsebujejo enake količine proteina bila razbita in nato prenesli v metanol predhodno aktivirana PVDF membrano (Millipore, ZDA). Po zaporedno inkubaciji s primarno in sekundarno protitelo smo signal vizualizirali z uporabo HRP substrat (Millipore, ZDA) in analizirali z MD Image Quant Software. Viri in faktorji redčenja primarnih protiteles so bili: zajec poliklonski anti-CD9 (1:1000, Bioworld), anti-CD81 (1:1000, Epitomics), anti-TGF-β (1:1000, Bioworld), anti-FAP ( 1:1000, Abcam), miška monoklonsko anti-α-SMA (1:1000, santa Cruz), anti-VEGF (1:1000, santa Cruz) in anti-vimentina (1:2000, santa Cruz), anti-N -cadherin (1:1,000, Bioworld), anti-E-kadherina (1:500, SAB), in miško monoklonsko anti-GAPDH. (1:5000; Kangcheng)}

Kvantitativne RT-PCR

Celotna RNA je bila ekstrahirana z TRIzola reagenta (Invitrogen) in cDNA smo sintetizirali z uporabo reverzne transkripcije kit (Toyobo, Japonska) v skladu z navodili proizvajalca. Temeljni premazi so bili proizvedeni s Invitrogen Company (Shanghai, Kitajska). Realnem času RT-PCR smo izvedli zazna spremembo FAP, a-SMA, N-kadherina in IL-6 izražanje genov (Rotor-Gene 6000, Avstralija). Za izravnavo razlike v vhodni RNK in učinkovitosti reverzno transkripcijo, je količinsko za normalizacijo rezultatov tudi endogeni "gospodinjstvo" gen (β-aktina). Vse vzorce smo izvedli v treh izvodih, in vse reakcije smo ponovili 3-krat neodvisno, da se zagotovi ponovljivost.

Migracija Vsebnost

HucMSCs (8 × 10 ^{4 v 200 ul) suspendiramo v serumu -brezplačen medij smo naložili v zgornjem predelu in 500! Li mediju brez seruma (SFM), ki vsebuje 800 ug /ml eksozomov, prostazomov v prisotnosti ali odsotnosti TGF-β receptorja 1 kinazo zaviralca SD208 (2 uM) dodamo k dnu transwell (Corning). Po kulturi pri 37 ° C 6 ur, celice zgornja membrana smo obrisati z bombažno krpico. Celice, ki so prehajali skozi membrano so bile določene s 4% paraformaldehida in obarvamo s kristalno vijolično. Celice smo opazili pod mikroskopom in vsaj 10 polja celice smo testirali za vsako skupino.}

TGF-β nevtralizacijo

HucMSCs smo obdelali s tumorskimi eksozomov, prostazomov (800 mg /ml), da sprožilo CAF diferenciacija v prisotnosti ali odsotnosti TGF-β protitelesa (R &D). Pred poskusi, proti TGF-β protitelo (20 g /ml) smo inkubirali z eksozomov, prostazomov pri 37 ° C 2 uri.

Statistična analiza

Vsi podatki so bili izraženi kot sredstvo ± SD. SPSS programska oprema je bila uporabljena za analizo podatkov. Sredstvo različnih terapevtskih skupinah smo primerjali z dvosmernim testom ANOVA ali t-test. P < 0.05 smo imeli statistično značilno

Rezultati

eksozomov, prostazomov Karakterizacija in Internalizacija

smo izolirali in identificirali eksozomov, prostazomov glede na njihovo edinstveno velikost in gostoto.. Kot je prikazano na sliki. 1A-a, so imeli eksozomov, prostazomov značilno skledici podobno obliko omejen z lipidni dvosloj s premerom v razponu od 40 do 100 nm. Potrdili smo obilno ekspresijo exosomal označevalcev CD9 in CD81 v naših izoliranih eksozomov, prostazomov z Western blot (sl. 1A-B). Po naših predhodnih študij, smo pripravili človeški izpeljani jem popkovini in označen s (podatki niso prikazani). Da bi raziskali internalizacijo eksozomov, prostazomov s hucMSCs, smo označeni za eksozomov, prostazomov s CM-Dil. Kot je prikazano na sliki 1B je bila internalizirati SGC7901 celice izpeljani eksozomov, prostazomov in zbira v hucMSCs po inkubaciji za 4 ure, medtem ko kontrolna eksozomov, prostazomov pokazala minimalen učinek. V primerjavi z SGC7901 skupino, so bile manj GES-1, ki izhajajo eksozomov, prostazomov povzeli hucMSCs.

-bula izvira eksozomov, prostazomov spodbujanje hucMSCs diferenciacija na KGZS

Domnevali smo, da lahko s tumorjem izhaja eksozomov, prostazomov inducira diferenciacijo hucMSCs na KGZS in vitro
. KGZS bila definirana kot povečano ekspresijo FAP in α-SMA proteinov. HucMSCs enoplastna je kultivirali v mediju, ki vsebuje 800 mikrogramov /ml SGC7901 eksozomov, prostazomov in ges-1 eksozomov, prostazomov. Kvantitativne RT-PCR analize so pokazale, da SGC7901 eksozomov, prostazomov vendar ne GES-1-eksozomov, prostazomov spodbuja izražanje CAF markerjev v MSC na 36 ur (sl. 2A) in 14 d (sl. 2B) po indukciji, oz. V primerjavi z nezdravljeno skupino, tumor eksozomov, prostazomov zdravljenje posledico zvišanje FAP, a-SMA, N-kadherina, in ravni vimentina proteinski (sl. 2C). Kolektivno, ti rezultati kažejo, da hucMSCs opravijo CAF razlikovanje v odgovor na tumorja eksozomov, prostazomov izpostavljenost.

-bula izvira eksozomov, prostazomov spodbujanje hucMSCs migracije

Za analizo, ali je bil migracijski sposobnost hucMSCs vpliva tumorskih eksozomov, prostazomov, hucMSCs bili kultivirani v transwell in povzroča, da se selijo v tumorskih eksozomov, prostazomov. Kot je prikazano na slikah 3A in 3B, po 6 urah po inkubaciji tumorske eksozomov, prostazomov spodbujali migracijo hucMSCs bolj učinkovite kot običajne eksozomov, prostazomov celice pridobljene. Prav tako smo pokazali, da se je povečala migracija hucMSCs s tumorskih eksozomov, prostazomov blokirana, ki jih sočasno z TGF-β R1 zaviralcem SD208. Poleg tega smo preučili vpliv SGC7901 eksozomov, prostazomov o migracijah hucMSCs s pomočjo praske testom. Rezultati so bili v skladu s tisto transwell migracije testu, kar kaže na zmanjševanje razkoraka razdalje v tumorsko Eksosom obdelani skupini (sl. S1). Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da lahko tumorja eksozomov, prostazomov spodbujajo migracijo hucMSCs in vitro
.

-Tumor izhaja eksozomov, prostazomov Vključi Smad2 /3 in p38 v hucMSCs

TGF β se je izkazalo, da je prisoten na površini eksozomov, prostazomov [33] in ključnega pomena za CAF diferenciacijo. Nato smo raziskali, ali je TGF-β pot odgovoren za indukcijo MSC prehoda na KGZS, ki ga tumorskih eksozomov, prostazomov. Najprej smo dokazali prisotnost TGF-P v tumorskih eksozomov, prostazomov (sl. 4A). V primerjavi z tumorskih eksozomov, prostazomov, običajne eksozomov, prostazomov celice pridobljene pokazala nižjo raven TGF-β izražanja. Za oceno, ali je razlikovanje hucMSCs za KGZS povezana z aktivacijo TGF-β poti, v smo pregledali stanje fosforiliranega SMAD 2/3 po tumorja eksozomov, prostazomov zdravljenja. Rezultati so pokazali, da je bila Smad 2/3 fosforilacijo povečala za tumorske eksozomov, prostazomov na 15 min po zdravljenju in dosegla najvišjo raven v 60 min po zdravljenju, medtem ko je skupni Smad 2/3 vsebnosti beljakovin niso bili prizadeti. Prav tako smo določili nivo fosforiliranega p38 in ugotovili, da je p38 fosforilacijo povečala tudi tumorjev eksozomov, prostazomov (sl. 4B). V nasprotju s tem pa GES-1 izpeljani eksozomov, prostazomov ni mogoče aktivirati Smad2 /3 in p38 (sl. 4C). Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da je tumor eksozomov, prostazomov posebej aktivirati Smad2 /3 in p38 v hucMSCs.

TGF-beta poti, inhibicije Blocks Tumor eksozomov, prostazomov inducirane Smad2 /3 in p38 Aktivacija

Da bi pokazali, ali aktivacija Smad2 /3 in p38 je specifičen za TGF-beta signalizacijo z tumorskih eksozomov, prostazomov sprožila smo blokirali TGF-P signalno pot z TGF-P R1inhibitor in zaznali stopnje fosforiliranim Smad2 /3 in p38. Kot je prikazano na sliki. 5A, povečana fosforilacija Smad2 /3 in p38 naslednji tumorja eksozomov, prostazomov zdravljenje je obrnil s TGF-β R1 inhibitor, SD208, na način, ki je odvisen od odmerka. Nadalje pokazati TGF-P iz tumorskih eksozomov, prostazomov, da aktivira hucMSCs smo nevtralizirali TGF-P v tumorskih eksozomov, prostazomov uporabo proti TGF-beta protitelesa. Skladna z rezultati TGF-beta zaviralec R1 je bila povečana fosforilacijo Smad2 /3 in p38 v hucMSCs obrnil tudi TGF-beta protitelesa (sl. 5B). Če povzamemo, ti podatki kažejo, da TGF-β iz tumorskih eksozomov, prostazomov komunicira z TGF-P receptorja na hucMSCs, ki vodi do zaporedno aktivacijo Smad2 /3 in p38 v hucMSCs.

TGF-β Pathway inhibicije obrne Tumorske eksozomov, prostazomov inducirano hucMSCs Diferenciacija za KGZS

za prikaz TGF-β /TGF-β R1 interakcija je odgovoren za razlikovanje hucMSCs na KGZS v tumorskih eksozomov, prostazomov povzročenih, smo blokirali TGF-ß signalizacijo z SD208 in TGF-beta nevtralizacijo protitelo sledijo tumorja eksozomov, prostazomov zdravljenja. Kot je prikazano na sliki 6A-a, zdravljenje z SD208 (2 uM) za 14 dni močno obrnilo tumorske eksozomov, prostazomov-inducirane ekspresije CAF označevalci, vključno FAP, a-SMA, N-kadherina in vimentina v hucMSCs. Prav tako je potrdil ta učinek s pomočjo eksozomov, prostazomov iz HGC-27 želodčnih rakavih celic (sl. 6A-b). Poleg tega je zdravljenje z anti-TGF-beta protitelesa privedla do podobne učinke, opažene pri TGF-β R1 inhibitor (sl. 6B). Skratka, ti podatki kažejo, da je tumor eksozomov, prostazomov posredovanje diferenciacijo hucMSCs na KGZS z aktivacijo TGF-beta /SMAD signalnih poti.

Pogovor

V tej študiji smo opisali roman mehanizem, s katerim tumorske celice inducira diferenciacijo MSC na KGZS. Naši podatki kažejo, da: (1) želodčni rak celica izpeljani eksozomov, prostazomov steka hucMSCs; (2) želodčni karcinom izpeljani eksozomov, prostazomov sproži hucMSCs diferenciacijo do KGZS in (3) TGF-β /Smad pot posreduje prehod hucMSCs na KGZS. Naši rezultati kažejo, da lahko TGF-β v tumorskih eksozomov, prostazomov interakcijo z TGF-beta R1 na hucMSCs, ki izhaja iz aktiviranja SMAD poti v hucMSCs in kasnejšo diferenciacijo hucMSCs do KGZS.

Čeprav je bila prijavljena da tumorske eksozomov, prostazomov lahko izboljša metastatskega aktivnost tumorskih celic [34], vloga tumorskih eksozomov, prostazomov v MSC še ni razkrila. Naši rezultati kažejo, da lahko tumorske celice uravnavajo mobilnost MSC, kar kaže, da so tumorske celice lahko zaposli MSC iz kostnega mozga ali drugih tkiv v mikrookolju tumorja stranskih Eksosom posredovano mehanizma.

izpostavitev tumorske eksozomov, prostazomov poveča ekspresijo CAF markerji v MSC, kar kaže, da so tumorske eksozomov, prostazomov sproži stikalo fenotipa od MSC v KGZS. Medtem ko je bila ta knjiga v pripravi, Cho et al. poročali, da bi lahko eksozomov, prostazomov iz dojk in jajčnikov rakavih celic inducira maščobnega tkiva, ki izhajajo MSC pridobiti fizioloških in funkcionalnih lastnosti, tumorskih podporo myofibroblasts [35], [36]. Naše delo je v skladu s svojimi ugotovitvami in nadalje dokazuje, da je ta proces Smad odvisna.

V sedanji raziskavi smo predstavili dokaze, da je tumor eksozomov, prostazomov ponujajo učinkovito platformo za prenos določenih sporočil MSC, spodbujanje MSC-CAF prehod. Številne prejšnje študije so pokazale, da je TGF-β izrazili eksozomov, prostazomov rakave celice pridobljene in ta oblika TGF-P je biološko aktiven pri vožnji Smad-odvisno signaliziranje [33], [37]. TGF-β je ključni regulator obnove izvornih celic in diferenciacije [38]. Preverili smo prisotnost TGF-ß v želodcu, ki izhajajo eksozomov, prostazomov rakavih celic in potrdili interakcijo TGF-β /TGF-β R1 posredovano aktivacijo Smad2 /3 in CAF razlikovanje hucMSCs.

To je bilo dokazano, da jem lahko spodbujajo rakavih metastaz [4], [39]. so prav tako poročali smo, da ustvarjenem človek MSC pogojena medij in eksozomov, prostazomov povečanje vaskularnega endotelijskega rastnega faktorja (VEGF) izraz v tumorskih celicah in spodbujanje rasti tumorja in vivo
[18], [19]. Ali bi lahko eksozomov, prostazomov iz MSC igrajo vlogo pri rakastih metastaz ni bila obravnavana. Opazili smo, da je MSC eksozomov, prostazomov spodbujanje prehoda na epitelijskih-to-mesenchyme (EMT) v želodčnih rakavih celicah, vendar so z njimi povezane mehanizme, je še vedno treba raziskati v prihodnjih študijah.

Na koncu bomo pokazali v tej študiji da želodčni rak celic, pridobljenih eksozomov, prostazomov imajo sposobnost, da povzroči diferenciacijo MSC v KGZS in aktiviranje TGF-beta /SMAD poti tumorskih eksozomov, prostazomov prispeva k prehodu MSC na KGZS. Naše ugotovitve zagotoviti nov mehanizem, s katerim tumorske celice povzroči jem da se diferencirajo v tumorskih stromalnih celice in sodelujejo pri oblikovanju tumorja mikrookolja.

Podpora Informacije
Slika S1. izpeljani eksozomov, prostazomov
Rak želodca celic spodbujanje hucMSCs migracije. HucMSCs smo obdelali s celico želodčnega raka (SGC7901) pridobljenih eksozomov, prostazomov (800 ug /ml). Praske matrika smo izvedli za analizo migracije sposobnost celic. (A-c) neobdelani hucMSCs; (D-f) SGC7901-eksozomov, prostazomov zdravljene hucMSCs. Lestvica bar = 50 um
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052465.s001
(TIF)

• Plos ONE: pričakovano študijo o pojavnosti Pooperativni venske trombembolije v korejski Rak želodca bolnikov: preiskavo o uporabi zahodnih smernic za azijske raka Patients
• Plos ONE: napovednih Vrednost obranega bezgavk in Ratio metastatskega limfnih vozlov pri želodčnih bolnikih z rakom: Rezultati študije 1101 Patients