PLoS ONE: Plasma microRNAs, miR-223, miR-21 en miR-218, als nieuwe potentiële Biomarkers voor maagkanker Opsporing

De abstracte

Achtergrond

MicroRNAs (miRNAs), endogene kleine niet-coderende RNA's, zijn stabiel gedetecteerd in humaan plasma. Vroege diagnose van maagkanker (GC) is zeer belangrijk voor de therapeutische effect te verbeteren en verlengen van de overleving van patiënten. Ons doel was om te bepalen of vier miRNAs (miR-223, miR-21, miR-218 en miR-25) nauw verbonden met het ontstaan ​​van tumoren of metastase van GC als nieuwe potentiële biomarkers kunnen dienen voor GC-detectie.

Methodologie

We aanvankelijk gemeten plasmaspiegels van de vier miRNAs bij 10 GC patiënten en 10 gezonde controlepersonen door kwantitatieve reverse transcriptie-polymerase kettingreactie (qRT-PCR), en vervolgens vergeleken plasma miRNA resultaten met de uitdrukkingen in kankerweefsels GC acht patiënten. Tenslotte, de aanwezigheid van miR-223, miR-21 en miR-218 in het plasma werd gevalideerd in 60 GC patiënten en 60 gezonde controlepersonen en de gebieden onder de receiver operating characteristic (ROC) krommen van deze miRNAs geanalyseerd.

Resultaten

We vonden dat de plasma niveaus van miR-223 ( P Restaurant < 0,001) en miR-21 ( P Restaurant < 0,001) GC waren patiënten significant hoger dan bij gezonde controles, terwijl miR-218 ( P
< 0,001) significant lager. De ROC analyses leverde de AUC-waarden van 0,9089 voor miR-223, 0,7944 voor miR-21 en 0,7432 voor miR-218, en gecombineerd ROC analyse bleek de hoogste AUC waarde van 0,9531 bij het onderscheiden van GC patiënten van gezonde controles. Bovendien is de plasma niveaus van miR-223 ( P Restaurant < 0,001) en miR-21 ( P
= 0,003) waren significant hoger bij GC patiënten met stadium I dan bij gezonde controles. Bovendien is de plasmaspiegels van miR-223 significant hoger bij patiënten met GC helicobacter pylori
(Hp) infectie dan die zonder ( P
= 0,014) en significant hoger bij gezonde controlepersonen met Hp-infectie dan die zonder ( P
= 0,016).

Conclusies

Plasma miR-223, miR-21 en miR-218 zijn nieuwe potentiële biomarkers voor GC-detectie .

Visum: Li's, Zhao yl, Guo G, Li w, Zhu Ed, Luo X, et al. (2012) Plasma microRNA, miR-223, miR-21 en miR-218, als nieuwe potentiële Biomarkers voor Gastric Cancer Detection. PLoS ONE 7 (7): e41629. doi: 10.1371 /journal.pone.0041629

Editor: Ajay Goel, Baylor University Medical Center, de Verenigde Staten van Amerika

Ontvangen: 21 december 2011; Aanvaard: 27 juni 2012; Gepubliceerd: 30 juli 2012

Copyright: © Li et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Dit werk werd gesteund door een subsidie ​​van Natural Science Foundation of China (NSFC, nr 81071412). De financiers hadden rol in het verzamelen van gegevens en analyse, maar geen rol in de studie design, het besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Maagkanker is de vierde meest voorkomende maligniteit in de wereld en de tweede belangrijke oorzaak van kanker overlijden in zowel mannen als vrouwen over de hele wereld. De hoogste sterftecijfers zijn naar schatting in Oost-Azië [1]. De 5-jaars overlevingskans voor maagkanker is minder dan 20% -25% in de VS, Europa en China [2]. Momenteel, volledige chirurgische resectie is de meest effectieve behandeling, met een uitstekende (90%) kans op genezing bij patiënten met vroege maagkanker [3]. Voor gevorderde maagkanker, ondanks curatieve chirurgie, ongeveer 80% van de patiënten sterven binnen een korte tijd vanaf locoregionale recidief (87%) en /of metastasen (30%) [4]. Daarom is verbetering van de vroege diagnose zou de kans op genezing in het begin van GC patiënten verhogen of verlengen van de overleving van patiënten met een vroeg stadium GC. De meeste beginnende GC moeilijk [5] te detecteren. De conventionele serum markers voor GC zoals koolhydraten antigeen 19-9 (CA19-9) en carcinoembryonaal antigeen (CEA), onvoldoende gevoeligheid en specificiteit vroege detectie te vergemakkelijken.

MicroRNAs (miRNAs) zijn kleine niet coderende RNA's die posttranscriptionally reguleren genexpressie. Afwijkende expressie van miRNAs is gecorreleerd met een aantal ziekten, waaronder kanker [6]. Eerdere studies hebben aangetoond dat weefsel miRNA expressieprofielen kan worden beschouwd als diagnostische biomarkers bij kanker [7] - [9]. Echter, deze diagnostische methode beperkt de werkzaamheid, weefselmonsters niet gemakkelijk toegankelijk en invasief te verkrijgen. Een toenemend aantal kranten melden dat circulerende miRNAs stabiel worden gedetecteerd in verschillende lichaamsvloeistoffen, zoals serum en plasma [10], [11]. Circulerende miRNA als nieuwe stabiele biomarkers zou een van de meest veelbelovende middelen diagnose, omdat plasma en serum zijn gemakkelijk toegankelijk en niet-invasief verkrijgen. Onlangs heeft een aantal veelbelovende serum of plasma miRNA biomarkers voor GC detectie geïdentificeerd [12], [13].

Om dat nieuwe plasma miRNA handtekeningen kunnen patiënten onderscheiden met GC (in het bijzonder in een vroeg stadium GC) van gezonde verkennen controls, selecteerden we vier miRNAs (miR-223, miR-218, miR-25 en miR-21), die gemeld werden vaak worden ontregeld in GC weefsel en nauw gecorreleerd met het ontstaan ​​van tumoren of metastase van GC [14] - [21] . We veronderstellen dat de plasmaspiegels van de drie miRNAs (miR-223, miR-218 en miR-25) waren afwijkend GC patiënten en die van miR-21, waaruit bleek dat dit als biomerker voor GC detectie kan dienen [12]. De plasmaspiegels van miR-21 GC patiënten in verschillende TNM stadia zijn niet geïdentificeerd. In deze studie hebben we de plasmaspiegels van de vier miRNAs bij GC patiënten met gezonde controles en beoordeelde de haalbaarheid van de vier miRNAs als nieuwe invasieve biomarkers voor detectie GC.

Materialen en Werkwijzen

Patiënten en monsters

Alle monsters werden op basis van de door de Ethics review Board op de derde Militaire Medische Universiteit goedgekeurd protocollen verzameld van toestemming individuen. In totaal werden 70 patiënten met GC voorafgaand aan de behandelingen en 70 gezonde controlepersonen van Southwest Hospital (Chongqing, China) werden opgenomen in onze studie tussen 2010 en 2011. Voor de 70 GC patiënten, analyseerden we de histologie van het GC weefsels, waaronder 56 Darmkanker, 13 Mucineuze adenocarcinoom en 1 zegelring cell carcinoma, en bepaalden de tumor locaties, waaronder 34 in Gastric lichaam, 24 in maag antrum, 8 in de maag cardia en 4 anderen (Upper maag, maag hoek, Gastric stomp). De GC-patiënten werden geclassificeerd volgens de klinische TNM stadia, waaronder 12 stadium I (mediane leeftijd, 53 jaar [range, 36-70 jaar]; 8 man, 4 vrouwen), 11 fase II (mediane leeftijd, 61 jaar [range, 36-77 jaar]; 7 man, 4 vrouwen), 36 stadium III (mediane leeftijd, 55 jaar [range, 30-71 jaar]; 26 mannen, 10 vrouwen) en 11 stadium IV (mediane leeftijd, 53 jaar [range , 46-66 jaar]; 9 man, 2 vrouwelijke) .De status van Hp infectie werden getest met behulp van anti-PS-antilichamen ELISA diagnostische kits (S20010005), (BEIJING BEIER BIOENGINEERING CO, LTD), blijkt 43 GC patiënten met Hp infectie. en 27 zonder. Voor de 70 gezonde proefpersonen, 44 mannen en 26 vrouwen werden opgenomen, en de mediane leeftijd was 51 jaar [range, 26-75 jaar]. De resultaten van Hp infectie test toonde aan 31 gezonde proefpersonen met Hp-infectie en 39 zonder. (Tabel 1).

celvrij plasma geïsoleerd van alle bloedmonsters binnen 2 uur verzameld onder toepassing van een tweestaps protocol (1500 rpm gedurende 10 min, 12.000 rpm gedurende 2 min) om vervuiling te voorkomen door cellulaire nucleïnezuren. Plasma werd overgebracht naar een nieuwe buis, waardoor een vaste hoogte van 0,5 cm plasma supernatant boven de pellet te verstoren de pellet [11]. Werd bewaard bij -80 ° C in 450 gl aliquots. Acht paar weefselmonsters werden verzameld uit acht GC patiënten met hogere niveaus van plasma miR-223 en miR-21, en lagere niveaus van plasma miR-218 dan gezonde controles na chirurgische resectie en ongeveer gesneden 1 mm vierkantjes en onmiddellijk bevroren in vloeibare stikstof.

RNA-extractie

Totaal RNA werd geëxtraheerd van 400 pi plasma met de Mirvana PARIS Kit (Ambion) volgens het protocol van de fabrikant en geëlueerd met 105 ui voorverwarmd ( 95 ° C) elutieoplossing. Met het oog op de normalisering van monster tot monster variatie in de RNA isolatiestap, 10 pl 0,05 uM synthetisch C. elegans
miR-39 (synthetische RNA oligonucleotiden gesynthetiseerd door GenePharma) werd aan elk monster toegevoegd gedenatureerd na het combineren van het plasmamonster met denaturering oplossing [11]. Voor de bevroren weefsel werd totaal RNA geëxtraheerd met behulp van TRIzol reagens (Invitrogen) volgens het protocol van de fabrikant, en tenslotte opnieuw gesuspendeerd in 60 pl voorverwarmde (95 ° C) nuclease-vrij water.

Kwantitatieve reverse transcriptase Polymerase Chain Reaction (qRT-PCR)

De reverse transcriptie reactie werd met behulp van een Taqman MicroRNA reverse transcriptie Kit (Applied Biosystems) uitgevoerd. cDNA werd gesynthetiseerd in 5 pl volumes met 1,67 gl RNA-extract, 0.5μl van 10 × reverse transcriptie buffer, 0,05 pl van 100 mM dNTPs, 0,063 gl RNase Inhibitor (20 U ul ^{-1), 0,33 pl Mutiscribe reverse transcriptase (50 U pl -1), 0,5 pi van gen-specifieke primer en 1,887 ul nuclease-vrij water. De reacties werden gedurende 5 min geïncubeerd bij 16 ° C gedurende 30 min, gevolgd door 42 ° C gedurende 30 min, vervolgens 85 ° C alvorens te worden gehouden bij 4 ° C. De gesynthetiseerde cDNA werd verdund 2 maal door kernwapenvrije water. Kwantitatieve PCR reacties werden uitgevoerd met 2 pl cDNA-oplossing, 5 pl 2 x TaqMan Perfect Master Mix (Takara), 0,25 pl genspecifieke primers /probe (TaqMan MicroRNA Assays, Applied Biosystems. Tabel S1) en 2,75 gl van nuclease-vrij water in een uiteindelijk volume van 10 ui, en draaien op een Bio-Rad IQ5 (Bio-Rad Laboratories, Inc) thermocycler. De reactiemengsels werden geïncubeerd bij 95 ° C gedurende 2 minuten, gevolgd door 40 cycli van 95 ° C gedurende 15 s en 60 ° C gedurende 30 s. De cyclus drempel ( C
_{t) waarden werden berekend met de Bio-Rad IQ5 2.1 Standard Edition Optical System Software 2.1.94.0617.}}

De plasma miRNA concentraties werden berekend met behulp van een standaard curve geconstrueerd met synthetische miRNAs [22]. De standaard referentie miRNAs werden versterkt voor elke reactie. Echter, de expressie van miRNAs uit weefselmonsters werd genormaliseerd met behulp van de 2 ^{-ΔΔ C
_{t methode vanaf de C
t-waarden van de miRNAs van belang ten opzichte van RNU6B.}}

Normalisatie van Experimental qRT-PCR gegevens uit het plasma met behulp van synthetische C. elegans miR-39

C. elegans
miR-39, die sequentiehomologie ontbreekt aan menselijke miRNAs, werd geselecteerd voor de experimentele qRT-PCR data te normaliseren. Bekende hoeveelheden synthetische C. elegans
miR-39 werden verdund om te produceren C
_{t-waarden binnen de C
t waarde bereiken van de miRNA standaard curves. We empirisch toegevoegd 10 ul van 0,05 uM synthetisch C. elegans
miR-39-400 ul van plasma na het combineren van het plasma monster met Denaturing Solution. De C. elegans
miR-39 werd evenals versterkt andere miRNAs. De volgende formule werd gebruikt voor het instellen van de C
t-waarden van miRNAs (miR-223, miR-21, miR-218 en miR-25) in alle plasmamonsters: Normalized_ C
t waarde voor de miRNA in de steekproef = Raw_ C
t-waarde - [(SpikeIn_ Average_ C
t waarde van de sample) - (Median_ SpikeIn_ C
t)] [11]. De normalized_ C
t-waarde werd vervolgens gebruikt om de concentratie van elke miRNA berekenen.}

Statistische analyse

De Mann-Whitney test werd gebruikt om de verschillen te vergelijken in plasma miRNA concentraties en de miRNA verhoudingen tussen de kanker-groep en de gezonde groep. Een twee-zijdig χ ^{2 test werd gebruikt om de verschillen in geslacht, leeftijd of Hp infectiestatus tussen GC patiënten en gezonde controles vergelijken. ANOVA-test werd gebruikt om het verband tussen de niveaus van miR-223, miR-21, miR-218 en TNM stadia analyseren. Receiver-operating characteristic (ROC) krommen en het gebied onder de curve (AUC) werden gebruikt om de haalbaarheid van het gebruik plasmaspiegels van miRNAs als diagnostische hulpmiddelen voor het detecteren GC beoordelen. De Youden index werd gebruikt om de optimale cutoff waarden. A P
waarde van minder dan 0,05 werd als statistisch significant. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van SPSS 13.0 software en grafieken werden gegenereerd met behulp van GraphPad Prism 5.0 (Graphpad Software Inc, Caligornia).}

Resultaten

Dit duidt van onderwerpen

Honderd en veertig onderwerpen, waarvan 70 GC patiënten en 70 gezonde proefpersonen werden gerekruteerd in deze studie. Er werden geen significante verschillen in geslacht of leeftijd werden gevonden tussen de GC patiënten en de gezonde controles ( P
= 0,371, P
= 0,398, χ ^{2 test, respectievelijk). Hp infectiestatus was significant verschillend tussen de GC patiënten en de gezonde controles ( P
= 0,042) (tabel 1).}

Evaluatie van kwantitatieve RT-PCR voor het meten van de miRNAs in plasma

Om het dynamisch bereik en de gevoeligheid van miRNA kwantificering door real-time PCR, de synthetische enkelstrengs miRNAs werden serieel verdund 10-voudig van concentraties van ,1-,000001 fmol voor miR-223, miR-218, buitenspiegels definiëren 25 en miR-21 op voordracht van de GenePharma miRNA Referentie Panel. De lineariteit van de kwantitatieve RT-PCR tussen de logaritmische waarden van de input miRNAs en de C
_{t-waarden werd bevestigd voor elke synthetische miRNA, miR-223, miR-218, miR-25 en miR -21 (R ^{2 = 0,997, R 2 = 0,998, R 2 = 0,993 en R 2 = 0,999, respectievelijk) (figuur 1).}}

Eerste screening Plasma miRNAs die kunnen Monitor GC

Vier miRNAs, miR-223, miR-218, miR-25 en miR-21, werden aberrantly uitgedrukt in GC weefsels. Om te onderzoeken of de niveaus van de vier miRNAs onderhavige ontregeling in plasma van patiënten met GC, we aanvankelijk de plasmaspiegels van de vier miRNAs gemeten GC 10 patiënten en 10 gezonde controles. Zoals verwacht, de plasma niveaus van miR-223 en miR-21 waren significant hoger bij GC patiënten dan bij gezonde controles ( P Restaurant < 0,001), terwijl miR-218 waren significant lager ( P
< 0,001). De plasmaspiegels van miR-25 waren niet significant verschillend tussen de GC patiënten en de gezonde controles ( P
= 0,970) (Figuur 2 (A-D)). Vermeld is dat de niveaus van miR-21 in GC plasma kon overeen met die in primaire GC weefsels [12]. Om te onderzoeken of de niveaus van drie miRNAs (miR-223, miR-218 en miR-21) in GC plasma overeen met die in primaire GC weefsel, testten we de niveaus van de drie miRNAs in acht paar GC weefsel en aangrenzend normaal weefsel monsters van 8 GC patiënten bij wie plasmaniveaus van miR-223, miR-21 waren significant hoger en miR-218 significant lager. Zoals getoond in figuur 2E, de expressie van miR-223 was hoger in primaire GC weefsels dan in controles in zeven van de acht patiënten geanalyseerd (87,5%) en miR-21 in acht patiënten (100%), terwijl miR-218 was lager bij zeven patiënten (87,5%), wat suggereert dat de niveaus van deze drie miRNAs in GC plasma weerspiegeld die in het primair GC weefsel.

de plasmaspiegels van miR-223, miR-21, miR-218 en miR -25 zijn gevalideerd in grootschalige

Om de plasma niveaus van meer dan vier miRNAs te evalueren als diagnostische merkers voor GC-detectie, nog eens 60 GC patiënten en 60 gezonde proefpersonen werden in deze validatie test toegevoegd. Zoals getoond in figuur 3, het niveau van miR-223 en miR-21 waren in GC plasma significant hoger dan in de controle ( P
< 0,001), terwijl miR-218 was significant lager ( P Restaurant < 0,001). De plasmaspiegels van miR-25 waren niet significant verschillend tussen de GC patiënten en de gezonde controles ( P
= 0,082) (figuur S1). De concentratiewaarden van de vier miRNAs gemeten in het plasma van patiënten worden getoond in tabel S2. ROC curve analyses werden uitgevoerd om de diagnostische waarde van de drie plasma miRNAs evalueren en bleek dat de drie plasma miRNAs waren waardevolle biomarkers te onderscheiden GC van normale controles AUC (gebied onder de curve) van 0,9089 (95% CI: 0,8598-,9580 ) voor miR-223, 0,7944 (95% CI: ,7211-,8677) voor miR-21 en 0,7432 (95% CI: ,6628-,8236) voor miR-218. Voor optimale afkapwaarde van 0,7286 met de waarde van de gevoeligheid + specificiteit-1 als maximale zijn voor miR-223, de gevoeligheid en specificiteit waren 84,29% en 88,57%; de cutoff waarde van 0,5000 voor miR-21, de gevoeligheid en specificiteit waren 74,29% en 75,71%, en bij de afsnijfrequentie van 0,3858 voor miR-218, de gevoeligheid en specificiteit waren 94,29% en 44,29%. Om de diagnose waarde verheffen, analyseert de combinatie ROC-curve werden uitgevoerd door (miR-223, vermenigvuldigd met miR-21) gedeeld door miR-218. De verhouding van (miR-223 × miR-21) /miR-218 leverde de hoogste AUC waarde van 0,9531 (95% CI: 0,9222-,9839) en de optimale cutoff waarde van 0,7715, de gevoeligheid en specificiteit waren 84,29% en 92,86% , waaruit bleek dat de handtekening combinatie heeft een sterk potentieel diagnose waarde voor GC-detectie.

de plasmaspiegels van miR-223, miR-218 en miR-21 in GC Patiënten met verschillende Clinical Status

de plasmaspiegels van deze drie miRNAs in de GC patiënten in verschillende stadia TNM (12 met I, II met 11, 36 of 11 met III met IV) werden geanalyseerd om te bepalen of de drie plasma miRNAs beginnende GC kan detecteren. Zoals weergegeven in figuur 4A, de plasma niveaus van de drie miRNAs waren niet significant verschillend in vier fasen (miR-223, P
= 0,244; miR-218, P
= 0,664; miR -21 P
= 0,596), maar elk van de vier fasen waaronder stadium I patiënten hadden significant verhoogd plasma miR-223 en miR-21 in vergelijking met de gezonde controles (P < 0,01) en miR -218 was significant afgenomen in fase II, III en IV ( P Restaurant < 0,01), terwijl miR-218 was niet significant verschillend tussen de fase I-patiënten en de gezonde controles ( P
= 0,071). Verder hebben we de niveaus van de drie miRNAs in plasma van de GC patiënten met metastasen die zonder. Zoals getoond in figuur 4B, de plasma niveaus van de drie miRNAs geen significante verschillen tussen de GC patiënten met metastasen en zonder (miR-223, P
= 0,320; miR-218, P
= 0,979;. miR-21, P
= 0,310)

Relatie tussen de plasmaspiegels van miR-223, miR-21, miR-218 en HP Infectie status van onderwerpen

Bovendien hebben wij de status van Hp infectie bij de 140 proefpersonen getest zoals hierboven beschreven, en de plasmaspiegel van de drie miRNAs geanalyseerd in de 70 GC patiënten (43 HP-infectie en 27 zonder) en 70 gezonde controlepatiënten (31 HP-infectie en 39 zonder) de verhouding tussen de plasmaniveaus van de drie miRNAs en Hp infectiestatus van de onderwerpen te evalueren. Zoals weergegeven in figuur 5, de plasma niveaus van miR-21 ( P
= 0,875, P
= 0,527) en miR-218 ( P
= 0,097, P
= 0,539) waren niet significant verschillend tussen de GC patiënten met HP-infectie en die zonder, en tussen de gezonde controles Hp-infectie en die zonder, resp. Echter, miR-223 was significant hoger bij de patiënten met GC Hp infectie dan die zonder ( P
= 0,014) en significant hoger in de gezonde controles Hp infectie dan die zonder ( P
= 0,016). De plasmaspiegels van miR-223 ( P
< 0,001) en miR-21 ( P
< 0,001) waren significant verhoogd in de GC patiënten met Hp infectie of wiens zonder vergelijking met de gezonde controles met Hp-infectie of waarvan zonder, terwijl miR-218 was significant lager ( P Restaurant < 0,05). Deze gegevens verschaffen sterke bewijzen dat de drie miRNA signaturen GC patiënten kunnen onderscheiden met of zonder Hp besmetting van gezonde controles.

Discussie

In deze studie, de niveaus van vier miRNAs (miR-223, miR-218, miR-21 en miR-25) in het plasma van 70 GC patiënten en 70 gezonde controles werden geanalyseerd. Consistent met eerdere studies van Tsujiura et al [12] Onze analyse toonde ook aan dat de aanzienlijk hogere plasmaspiegels van miR-21 GC patiënten. We vonden dat de niveaus van miR-223 waren GC plasma significant hoger dan in de controle, terwijl miR-218 significant lager. De gecombineerde ROC analyse toont een hoogste AUC van 0,9531 met 84,29% 92,86% gevoeligheid en specificiteit voor de verhouding (miR-223 × miR-21) /miR-218 in het onderscheiden van GC controles. We analyseerden ook de plasmaspiegels van miR-223, miR-21, miR-218 GC patiënten met verschillende klinische status (TNM of metastase) en de verhouding tussen de plasmaniveaus van de drie miRNAs en Hp infectiestatus van de proefpersonen.

Hoewel miR-223 is beschreven dat bijna uitsluitend tot expressie gebracht in beenmerg [23], zijn overexpressie is waargenomen in vele soorten kanker, zoals slokdarmcarcinoom [16], hepatocellulair carcinoom [24], en GC [14], [15]. Onlangs, Li Xiaohua gemeld dat miR-223 alleen werd overexpressie in uitgezaaide maagkanker cellen en gestimuleerd niet-uitgezaaide maagkanker cellen migratie en invasie [25]. Waarom de plasmaspiegels van miR-223 waren significant hoger bij patiënten met een vroeg stadium GC? In het GC micro Veel tumor geassocieerde cellen, zoals macrofagen, myeloïde cellen, dendritische cellen en T-cellen, hebben het vermogen om exosomes, dat zowel mRNA en microRNA shuttle andere cellen of verkeer [26] loslaat. Voor een vroeg stadium GC, misschien miR-223 zijn up-gereguleerd in sommige tumor-geassocieerde cellen en in het perifere bloed geleverd via exosmes. Uit recente gegevens blijkt dat miR-223 vrijgegeven door macrofagen werd vervoerd in borstkankercellen en gereguleerd het invasieve karakter van borstkankercellen [27]. Het is aangetoond dat het herstel van miR-218 onderdrukt Robo1 expressie en remt maagkanker invasie en metastase in vitro Kopen en In vivo
[17]. Overexpressie van miR-218 leidde tot een significant verminderde celgroei activiteit en invasie van AGS cellen vergeleken met die van de controle [20]. Gao C et al [21] gemeld dat de expressie van miR-218 aanzienlijk GC weefsels werden verlaagd, in H. pylori geïnfecteerde maagslijmvlies, en met H. pylori geïnfecteerde cellen AGS. In onze studie was de plasmaspiegels van miR-218 was niet significant verschillend tussen GC patiënten met HP-infectie en zonder of tussen gezonde controlepersonen met Hp-infectie en die zonder. De niveaus van miRNAs kunnen verschillend tussen GC plasma en maagslijmvlies zijn. MiR-21 is overexpressie in verschillende kankers, waaronder borstkanker [28], longkanker [29], darmkanker [30] en GC [18], [19]. Hoewel Tsujiura et al [12] gemeld dat de plasmaconcentraties van miR-21 aanzienlijk zijn verhoogd in patiënten GC zijn de niveaus in plasma van patiënten met verschillende GC TNM mannetjes niet geïdentificeerd.

Steeds meer kranten schreven dat circulerende miRNAs kan dienen als invasieve biomarkers voor detectie GC. Onlangs Hanshao Liu gemeld dat serum miR-378 werd in de GC patiënten met TNM I significant verhoogd, wat suggereert dat dit miRNA handtekening kan dienen als nieuw noninvasive biomarker voor de vroege detectie van GC [31]. Maar de Hp infectie status in de GC-patiënten en gezonde controles werden niet genoemd. Het is bekend dat Hp infectie is een van de belangrijkste oorzaken van GC, zoals maagdarmkanker, gastrisch MALT lymfoom. Als de plasma /serum niveaus van de specifieke circulerende miRNAs werden alleen verstoord bij GC patiënten met Hp infectie, maar niet in die zonder kan de miRNAs dienen als biomarkers voor detectie van patiënten met Hp infectie in plaats van de detectie van patiënten met GC.

in deze studie, hoewel we de plasma niveaus van miR-223, miR-21 en miR-218 geanalyseerd GC patiënten bij verschillende TNM stadia, het aantal vroegtijdige stadium GC monsters was bescheiden. Het aantal plasma miRNAs getest in training set was beperkt. In de toekomst onderzoek, kunnen we toegang krijgen tot meer aantal early-stage GC samples om de rol van plasma miR-223, miR-21, miR-218 of andere plasma miRNAs in verband met GC in de vroege opsporing van GC te evalueren.

Ten behoeve van het zoeken doeltreffende bloedtests biomarkers voor GC detectie om de overleving van patiënten met vroege GC verlengen, hebben vele onderzoekers gericht op circulerende miRNAs, die onlangs gemeld om te dienen als een effectieve en niet-invasieve biomarker voor het detecteren verschillende soorten kanker en andere ziekten [32] - [35]. Hoewel de gevoeligheid en specificiteit van circulerende miRNA biomarkers voor GC detectie zijn veel hoger dan die van het serum biomarkers (CA19-9 en CEA) momenteel gebruikt, is een lange weg te gaan voordat circulerende miRNAs een klinische diagnose worden gebruikt voor het detecteren GC omdat de niveaus van circulerende miRNA aanzienlijk hoger of lager bij verschillende ziekten kunnen zijn. Toekomstige studies van circulerende miRNA biomarkers kunnen zich richten op het combineren van de expressie profielen van circulerende miRNAs uit alle voorkomende ziekten aan de specifieke biomarkers voor unieke detectie van de ziekte te krijgen. Hoewel Jianning Song [36] te bevelen miR-16 en miR-93 als geschikte referentie-genen voor serum miRNA analyse voor GC-patiënten en gezonde controles, de steekproefomvang is bescheiden. De normalisatie methoden om de niveaus van circulerende miRNAs bepalen moeten worden verenigd.

Tenslotte identificeerden we dat drie plasma miRNAs (miR-223, miR-21 en miR-218) mogelijk kunnen dienen als nieuwe biomarkers noninvasive GC detectie. Of miR-223 en miR-21 hebben een mogelijkheid om in een vroeg stadium op te sporen GC zullen worden geïdentificeerd in toekomstige studies.

Ondersteunende informatie
Figuur S1.
Validatie van de plasma niveaus van miR-25 in GC-patiënten en gezonde controles. Staafdiagrammen van de plasmaconcentraties van miR-25 in patiënten GC (GC, n = 70) en gezonde controles (NC, n = 70). De lijnen in de vakken geven de medianen. De snorharen van boxplots: Min Max. Geen significant verschil waargenomen tussen GC patiënten en gezonde controlepersonen
doi:. 10.1371 /journal.pone.0041629.s001
(TIF)
Tabel S1. Ondernemingen De volwassen microRNAs en hun geëvenaard primer /probe AB assay ID.
doi: 10.1371 /journal.pone.0041629.s002
(docx)
tabel S2. Ondernemingen De concentratiewaarden van de vier miRNAs gemeten in het plasma van patiënten.
doi:. 10.1371 /journal.pone.0041629.s003
(XLSX)

Dankwoord

Wij danken Yun Zhao voor technische ondersteuning

• PLoS ONE: een meta-analyse van interleukine-10 -592 Promoter polymorfisme geassocieerd met maagkanker Risk
• PLoS ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin induceert Mitochondriën afhankelijke apoptose door de ERK Pathway in Human MaagKanker SGC-7901 Cells