PLoS ONE: Plazma mikroRNA, Mir-223, Mir-21 i Mir-218, kao novi snažni Biomarkeri za rak želuca Detection

Sažetak pregled

Pozadina pregled

mikroRNA (miRNAs), endogeni mala nekodirajući RNA, stabilno su otkrivene u ljudskoj plazmi. Rana dijagnoza raka želuca (GC) je vrlo važno kako bi poboljšali učinak terapije i produžiti preživljavanje pacijenata. željeli smo utvrditi da li je četiri miRNAs (Mir-223, Mir-21, Mir-218 i Mir-25) usko povezani s tumorigenezi ili metastaza GC može poslužiti kao nove potencijalne biomarkera za detekciju GC. pregled

Metodologija pregled

u početku smo mjerili razinu u plazmi četiri miRNAs u 10 GC bolesnika i 10 zdravih kontrolnih ispitanika kvantitativnom reverzne transkripcije lančanom reakcijom polimeraze (QRT-PCR), a zatim u usporedbi plazma rezultate Mirna s izrazima u tkivu raka od osam pacijenata GC. Konačno, prisutnost Mir-223, Mir-21 i Mir-218 u plazmi je potvrđen u 60 GC bolesnika i 60 zdravih kontrolnih ispitanika, a analizirani su područja pod prijemnik operativnog karakteristične (RH) krivulje tih miRNAs.

Rezultati

otkrili da su razine u plazmi Mir-223 ( p izvoznici < 0,001) i Mir-21 ( p izvoznici < 0,001) bila je značajno viša u GC bolesnika nego u zdravih osoba, dok je mir-218 ( P izvoznici < 0,001) bila je značajno niža. The ROC analiza dala AUC vrijednosti 0.9089 za Mir-223, 0.7944 za Mir-21 i 0.7432 za Mir-218, te u kombinaciji ROC analiza je otkrila najveću AUC vrijednost 0.9531 u diskriminirati bolesnika GC od zdravih kontrola. Štoviše, razine u plazmi Mir-223 ( P izvoznici < 0,001) i Mir-21 ( P pregled = 0,003) bila je značajno viša u bolesnika s GC fazi sam nego u zdravih osoba. Nadalje, razine u plazmi Mir-223 bila je značajno viša u GC bolesnika s Helicobacter pylori pregled (KS), infekcije od onih bez ( P pregled = 0,014), te znatno veći u zdravih kontrolnih ispitanika s HP-infekciju od onih bez ( p pregled = 0,016). pregled

Zaključci

Plazma mir-223, mir-21 i mir-218 su novi potencijalni biomarkeri za otkrivanje GC . pregled

Izvor: Li bs, Zhao il, Guo G, Li W, Zhu Ed Luo X, et al. (2012) Plazma mikroRNA, Mir-223, Mir-21 i Mir-218, kao novi snažni Biomarkeri za rak želuca Detection. PLoS ONE 7 (7): e41629. doi: 10,1371 /journal.pone.0041629 pregled

Urednik: Ajay Goel, Sveučilište Baylor Medical Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 21. prosinac 2011; Prihvaćeno: 27. lipanj 2012; Objavljeno: 30. srpnja 2012 pregled

Copyright: © Li i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane grant od Natural Science Foundation of China (NSFC, br 81071412). U donatori imali ulogu u prikupljanju podataka i analize, ali ne i ulogu u studiju dizajna, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći zloćudni tumor u svijetu i drugi vodeći uzrok smrti od raka u oba spola u svijetu. Najviše stope smrtnosti, procjenjuju u istočnoj [1] Azije. Stopa preživljavanja od 5 godina za rak želuca manje od 20% -25% u SAD-u, Europi i Kini. [2] Trenutno, kompletna kirurška resekcija je najučinkovitije liječenje, nudeći odličan (90%) šanse za izlječenje bolesnika s ranim rakom želuca [3]. Za uznapredovalim rakom želuca, unatoč ljekovito operacije, oko 80% pacijenata umire u kratkom vremenu od lokoregionalnoj anes recidiva (87%) i /ili udaljenih metastaza (30%) [4]. Dakle, napredak u ranoj dijagnostici može povećati šanse za izlječenje u bolesnika s ranim GC ili produženje života bolesnika s ranim stadijem GC. Međutim, većina se mladi GCS je teško otkriti. [5] Konvencionalni serumski biljezi za GC, kao što su ugljikohidratni antigen 19-9 (CA19-9) i karcinoembrijski antigen (CEA), nedostatak dovoljne osjetljivosti i specifičnosti kako bi se olakšalo rano otkrivanje.

mikroRNA (miRNAs) su male, a ne -coding RNA koja posttranscriptionally reguliraju ekspresiju gena. Aberantna ekspresija miRNAs je povezana s nekoliko oboljenja, uključujući karcinome [6]. Ranija su istraživanja pokazala da je tkivo Mirna izraz profili mogu se smatrati kao dijagnostički biomarkera u raka [7] - [9]. Međutim, ova dijagnostička metoda je ograničen u svom djelotvornosti u Uzorci tkiva nisu prikladni za pristup i invazivni dobiti. Sve veći broj radova izvijestili su kako kruži miRNAs stabilno su otkrivene u različitim tjelesnim tekućinama, uključujući serumu i plazmi [10], [11]. Cirkulacija miRNAs kao nove stabilne biomarkera će biti jedan od najperspektivnijih načina dijagnoze, jer plazme i seruma se lako pristupiti i neinvazivna dobiti. Nedavno, nekoliko perspektivnih serum ili plazma Mirna biomarkera za detekciju GC su identificirani [12], [13]. Pregled

Kako bi istražili tu novu plazmu Mirna potpisi mogu razlikovati pacijente s GC (osobito u ranoj fazi GC) iz zdrave kontrole, odabrali smo četiri miRNAs (Mir-223, Mir-218, Mir-25 i Mir-21), koji je izvijestila da se često dereguliran u GC tkiva i usko povezana s tumorigenezi ili metastaza GC [14] - [21] , trebalo mi je da su razine u plazmi tri miRNAs (Mir-223, Mir-218 i Mir-25) su odstupanja u GC bolesnika, kao i one od Mir-21, koja je tvrdila da je taj potpis može poslužiti kao biomarkera za detekciju GC [12]. Međutim, razina u plazmi Mir-21 u GC pacijenata u različitim fazama TNM nisu identificirani. U ovoj studiji usporedili smo plazmatske razine u četiri miRNAs u GC pacijenata u zdravih kontrola, te ocjenjuje isplativost četiri miRNAs kao nove neinvazivnim biomarkera za detekciju GC. Pregled

Materijali i metode pregled

Pacijenti i uzorci

Svi uzorci su prikupljeni iz pristanak pojedinaca prema protokolima koje je odobrilo Etičko pregled odbor na III Vojnomedicinsku Sveučilišta. Ukupno je 70 bolesnika s GC prije bilo kakvog tretmana i 70 zdravih kontrolnih ispitanika iz jugozapadne bolnice (Chongqing, Kina) su uključene u našoj studiji između 2010. i 2011. godine za GC pacijenata 70, analizirali smo histologijom GC tkiva, uključujući 56 adenokarcinom, 13 mucinozni adenokarcinom i jedan karcinom pečatni prsten, a određuje se tumorske lokacija, uključujući 34 u želučanom tijela, 24 u antruma želuca, 8 u želučanom kardija i 4 u drugi (gornji trbuh, želudac kut, želudac panj). Pacijenti GC su klasificirani prema kliničkim TNM stadija, uključujući 12. etapu (srednja dob 53 godina [raspon, 36-70 godina], 8 muških, 4 ženska), 11 faza II (srednja dob 61 godina [raspon, 36-77 godina], 7 muških, 4 ženska), 36 stadij III (srednja dob 55 godina [raspon, 30-71 godina], 26 muškarac, 10 žena) i 11 stadij IV (srednja dob 53 godina [raspon , 46-66 godina], 9 muških, 2 ženska) .The status HP infekcije su ispitani pomoću anti-HP Antitijela ELISA dijagnostičkih kitova (S20010005), (Beijing Beier biotehnika CO), prikazuje 43 GC bolesnika s HP-infekcije. i 27 bez. Za 70 zdravih kontrolnih ispitanika, 44 muških i 26 ženska bili uključeni, a prosječna dob bila 51 godina [raspon, 26-75 godina]. Rezultati HP infekcije testa pokazali su 31 zdravih kontrolnih ispitanika s HP-om i 39 bez. (Tablica 1). Pregled

plazma stanica bez izolira se iz svih uzoraka krvi u roku od 2 sata od prikupljanja pomoću dva koraka protokol (1.500 okretaja u minuti tijekom 10 minuta, 12,000 okretaja u minuti tijekom 2 minute), da se spriječi kontaminacija staničnim nukleinske kiseline. Plazma je bila premještena u novu epruvetu, ostavljajući fiksnu visine 0,5 cm plazma supernatant iznad taloga kako bi se izbjeglo remećenje talog [11]. Je pohranjen pri -80 ° C, u 450 ul alikvota. Osam parova uzoraka tkiva su prikupljeni od osam pacijenata GC s višim razinama plazme Mir-223 i Mir-21, kao i nižih razina plazme Mir-218 od zdravih kontrola nakon kirurške resekcije, a otprilike izrezati na 1 mm trgovima i odmah zamrznuti u tekući dušik. pregled

RNA ekstrakcija pregled

ukupni RNA su izvađeni iz 400 ul plazme pomoću mirVana PARIS Kit (Ambion) u skladu s uputama proizvođača, te eluiraju sa 105 ul prethodno zagrijana ( 95 ° C otopina) Ispiranje. Da bi se omogućilo normalizaciju uzorka-na-uzorka varijacije u stupnju izolacije RNA, 10 ul 0,05 uM sintetičke C. elegans pregled miR -39 (sintetski RNK oligo-nukleotide sintetizirani GenePharma) je dodan u svaku denaturiranog uzorak nakon kombiniranjem uzorak plazme s denaturirajuća otopina [11]. Za smrznute tkiva, ukupna RNA je ekstrahirana pomoću Trizol reagensa (Invitrogen) prema uputama proizvođača, te na kraju resuspendiraju u 60 ul prethodno zagrijanu (95 ° C) nuclease-free water. Pregled

Kvantitativna obrnutom smjeru transkriptaze lančane reakcije polimeraze (PCR-QRT) pregled

reakcija reverzne transkripcije je provedena upotrebom Taqman mikrornk reverzne transkripcije Kit (Applied Biosystems). cDNA sintetiziran je iz 5 volumena ul koji sadrži 1,67 ul ekstrakta RNA, 0.5μl 10 × pufera reverzne transkripcije, 0.05 uL 100 mM dNTPs, 0.063 ul inhibitora RNAze (20 U ul ^{1), 0,33 ul Mutiscribe reverzne transkriptaze (50 jedinica ul 1), 0,5 ul gena specifičnih početnica i 1,887 ul nukleaznog bez vode. Reakcije su inkubirane na 16 ° C 30 minuta, a zatim 42 ° C tijekom 30 minuta, zatim 85 ° C tijekom 5 minuta, zatim se održava na 4 ° C. CDNA je sintetizirana razrijeđena je 2 puta nuklearne bez vode. Kvantitativne PCR reakcije su izvedene primjenom 2 ul cDNA otopine, 5 ul TaqMan 2 × pogodno Master Mix (Takara), 0,25 ul genski specifične primere /sonde (TaqMan® mikrornk testovi, Applied Biosystems. Tablica S1) i 2.75 ul od nuclease-free vode u konačnom volumenu od 10 ul, te izvoditi na Bio-Rad IQ5 (Bio-Rad Laboratories, Inc.) termocikleru. Reakcijska smjesa se inkubira na 95 ° C 2 min, zatim 40 ciklusa od 95 ° C za 15 s i 60 ° C tijekom 30 s. Prag Ciklus ( C pregled _{t) vrijednosti su izračunate sa Softverom Bio-Rad iQ5 2.1 Standard Edition Optički sustav 2.1.94.0617. pregled}}

Koncentracije Mirna plazme izračunate su korištenjem standardnog krivulja izgrađen korištenjem sintetičkih miRNAs [22]. Standardnim referencama miRNAs umnoženi su za svaku reakciju. Međutim, izraz miRNAs iz uzoraka tkiva se normalizira pomoću 2 ^{-ΔΔ C pregled _{t metoda iz C pregled t vrijednosti miRNAs od interesa u odnosu na RNU6B. pregled}}

Normalizacija eksperimentalnu QRT-PCR Podaci iz plazme pomoću Synthetic C. elegans mir-39 pregled

C. elegans pregled miR-39, koji nema homologiju sekvence kao ljudski miRNAs, odabran je za normalizaciju eksperimentalnih podataka QRT-PCR. Poznati količine sintetičkog C. elegans pregled Mir-39 su razrijeđeni proizvoditi C pregled _{T vrijednosti u C pregled t raspona vrijednosti od Mirne standardnim krivuljama. Empirijski je dodao 10 ul 0,05 uM sintetičke C. elegans
Mir-39 do 400 jal plazme nakon kombiniranja uzorka plazme s denaturiranje Solution. C. elegans
miR-39 je amplificiran kao i druge miRNAs. Sljedeća formula se koristi za podešavanje C
T vrijednostima, miRNAs (Mir-223, Mir-21, Mir-218 i Mir-25) u svim uzorcima plazme: Normalized_ C
t vrijednost za Mirne u uzorku = Raw_ C pregled t vrijednost - [(SpikeIn_ Average_ C pregled t vrijednost danog uzorka) - (Median_ SpikeIn_ C pregled t)] [11]. Normalized_ C pregled t vrijednost je zatim korištena za izračunavanje koncentracije svakog Mirne. Pregled}

Statistička analiza pregled

Mann-Whitney test je korišten za usporedbu razlike u plazma koncentracijama Mirne i omjera Mirna između skupine raka i zdrave skupine. Dvostrani χ ^{2 test je korišten za usporedbu razlike u spolu, dobi i statusa HP infekcije između GC bolesnika i zdravih kontrola. ANOVA test je korišten za analizu odnosa između razina Mir-223, Mir-21, Mir-218 i TNM stadija. Receiver-operativni karakteristične (RH) krivulje i površine pod ROC krivulje (AUC) korišteni su za procjenu izvedivosti korištenja plazmatske razine miRNAs kao dijagnostički alat za otkrivanje GC. Youden indeks se koristi za odabir optimalnih vrijednosti kritična. P pregled vrijednost manja od 0,05 smatrala se statistički značajnom. Sve statističke analize provedene su pomoću SPSS 13.0 softver i grafovi su uporabom GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc, Caligornia). Pregled}

Results pregled

karakterizira subjekata pregled

Jedan od sto Ovih subjekti, uključujući 70 GC bolesnika i 70 zdravih kontrolnih ispitanika, su regrutirani u ovoj studiji. Nisu pronađene značajne razlike u spolu ili dobi između GC bolesnika i zdravih kontrola ( P pregled = 0,371, P
= 0,398, χ ^{2 testa, respektivno). HP stanje infekcije bila značajno različita između GC bolesnika i zdravih kontrola ( P pregled = 0,042) (tablica 1). Pregled}

Evaluacija Kvantitativna RT-PCR za mjerenje miRNAs u plazmi

da biste definirali dinamički raspon i osjetljivost Mirna kvantifikacije u realnom vremenu PCR, sintetski jednolančanih miRNAs su serijski razrijede 10 puta od koncentracije 0,1 do 0.000001 fmol za Mir-223, Mir-218, miR- 25 i mir-21 na preporuku GenePharma Mirna referentnog ploči. Linearnost kvantitativnog RT-PCR između logaritamskih vrijednosti ulaznih miRNAs i C pregled _{T vrijednosti je potvrdio za svaku sintetičkog Mirne, Mir-223, Mir-218, Mir-25 i Mir -21 (R ^{2 = 0,997, R 2 = 0,998, R 2 = 0,993 i R 2 = 0,999, odnosno) (Slika 1). pregled}}

Prethodno Screening plazma miRNAs koja može pratiti GC pregled

Četiri miRNAs, mir-223, mir-218, mir-25 i mir-21, bili su neuobičajeno izražene u GC tkiva. Da bi istražili da li su razine četiri miRNAs ovom poremećajem u plazmi bolesnika s GC, mi početno mjere plazmatske razine u četiri miRNAs u 10 GC bolesnika i 10 zdravih kontrola. Kao što se očekivalo, razine u plazmi Mir-223 i Mir-21 bila je značajno viša u GC bolesnika nego u zdravih osoba ( P izvoznici < 0,001), dok je Mir-218 bile su značajno niže ( P
< 0,001). Međutim, razina u plazmi Mir-25 nisu bile značajno različite između GC bolesnika i zdravih kontrola ( P pregled = 0,970) (Slika 2 (A-D)). On je izvijestio da su razine Mir-21 u GC plazmi može odražavati one u osnovnoj GC tkiva [12]. Da bi istražili da li su nivoi tri miRNAs (Mir-223, Mir-218 i Mir-21) u GC plazmi može odražavati one u osnovnoj GC tkiva, testirali smo razine tri miRNAs u osam parova GC tkiva i susjedna normalnom tkivu uzorci iz 8 GC pacijenata čije plazma razine Mir-223, Mir-21 bili su znatno veći, a Mir-218 bio je znatno manji. Kao što je prikazano na slici 2E, razina ekspresije Mir-223 bila je viša u osnovnim GC tkivima nego u kontrola u sedam od osam pacijenata analizirali (87,5%) i Mir-21 u osam pacijenata (100%), dok je Mir-218 bio je niža u sedam bolesnika (87,5%), što ukazuje da su razine tih triju miRNAs u GC plazme odražava onih u primarnoj GC tkiva. pregled

plazmatske razine Mir-223, Mir-21, Mir-218 i miR -25 bili validirani u velikim razmjerima pregled

Da bi se procijenile razine u plazmi iznad četiri miRNAs kao dijagnostički biljezi za otkrivanje GC, još 60 GC bolesnika i 60 zdravih kontrolnih ispitanika su dodani u ovom testu provjere valjanosti. Kao što je prikazano na slici 3, razine Mir-223 i Mir-21 bila je značajno viša u GC plazmi u odnosu na kontrolu ( P izvoznici < 0,001), dok je Mir-218 bio je znatno manji ( P pregled < 0,001). Međutim, razina u plazmi Mir-25 nisu bile značajno različite između GC bolesnika i zdravih kontrola ( P pregled = 0,082) (Slika S1). A koncentracije vrijednosti četiri miRNAs izmjerenih u plazmi ispitanika prikazane su u tablici S2. ROC krivulja analiza izvedena je procijeniti dijagnostičku vrijednost za tri plazme miRNAs i otkrio da su tri plazma miRNAs su vrijedne biomarkera za razlikovanje GC od normalnih kontrola s AUC (površina ispod ROC krivulje) od 0,9089 (95% CI: 0,8598 do 0.9580 ) za Mir-223, 0.7944 (95% CI: 0,7211 do 0,8677) za Mir-21 i 0.7432 (95% CI: 0,6628 do 0,8236) za Mir-218. Na optimalne granične vrijednosti od 0.7286 s vrijednošću osjetljivosti + specifičnosti-1 smatra se maksimalno za Mir-223, osjetljivost i specifičnost bila 84,29% odnosno 88,57%; na granice od 0.5000 za Mir-21, osjetljivost i specifičnost bila 74.29% i 75.71%, a na porama 0.3858 za Mir-218, osjetljivost i specifičnost bila 94,29%, odnosno 44,29%. Da podignu dijagnostičke vrijednosti, kombinacija ROC krivulja analize provedene su (Mir-223 pomnožen s MIR-21) podijeljena Mir-218. Omjer (Mir-223 × Mir-21) /Mir-218 dala najvišu AUC vrijednosti 0,9531 (95% CI: 0.9222 do 0.9839) i optimalnu kritična vrijednost 0.7715, osjetljivost i specifičnost bili 84,29% i 92,86% , što ukazuje da je kombinacija potpis ima jak potencijal dijagnoze vrijednost za detekciju GC. pregled

plazmatske razine Mir-223, Mir-218 i Mir-21 u GC bolesnika s različitim kliničkim Status pregled

razine plazme te tri miRNAs kod pacijenata GC u različitim fazama TNM (12 s i, 11 s II, 36 sa III, ili 11 s IV) su analizirani kako bi se utvrdilo da li tri plazma miRNAs može otkriti u ranoj fazi GC. Kao što je prikazano na slici 4A, razine u plazmi tri miRNAs nisu bili značajno različiti kroz četiri faze (Mir-223, P pregled = 0,244; Mir-218, P pregled = 0,664; miR -21, P pregled = 0,596), no svaki od četiri faze, uključujući pacijente Faza i je značajno povišena u plazmi mir-223 i mir-21 u usporedbi s kontrolnom skupinom (P < 0,01), a miR -218 značajno smanjen u fazi II, III i IV ( P izvoznici < 0,01), dok je mir-218 nije bila značajno različita između faze i pacijenti i zdravih kontrola ( P
= 0,071). Nadalje, u usporedbi je razina tri miRNAs u plazmi iz GC bolesnika s metastazama na one bez. Kao što je prikazano na Slici 4B, razine u plazmi tri miRNAs imali značajne razlike između pacijenata GC s metastazama i one bez (Mir-223, P pregled = 0,320; Mir-218, P
= 0,979;. Mir-21, P pregled = 0,310) pregled

Odnos između razine od Mir-223, Mir-21, Mir-218 i HP infekcije status subjekata

Osim toga, mi smo testirali status HP infekcije u 140 predmeta kao što je gore opisano, i analizirali razinu u plazmi tri miRNAs u GC bolesnika 70 (43 s HP-om i 27 bez) i 70 zdrave kontrolnu skupinu (31 s HP-infekcije i 39 bez) za procjenu odnosa između razine u tri miRNAs i HP status infekcije ispitanika. Kao što je prikazano na slici 5, razine u plazmi Mir-21 ( P pregled = 0,875, P pregled = 0,527) i Mir-218 ( P pregled = 0,097, P pregled = 0,539) nisu značajno različite između GC bolesnika s HP-om i onih bez, a između zdravih kontrola s HP-om i onih bez, respektivno. Međutim, Mir-223 bila je značajno viša u GC bolesnika s HP infekcije u odnosu na one bez ( P pregled = 0,014), a značajno je viša u zdravih osoba s HP-infekcije u odnosu na one bez ( P
= 0.016). Razine plazme Mir-223 ( P izvoznici < 0,001) i Mir-21 ( P izvoznici < 0,001) bili su značajno povišene u GC bolesnika s HP infekcije ili čiji je bez odnosu sa zdravim kontrolama s HP-infekcije ili čiji je bez, a mir-218 bio je znatno manji ( P izvoznici < 0,05). Ovi podaci pružaju snažne dokaze da su tri Mirna potpisi mogu razlikovati pacijente GC sa ili bez HP infekcije od zdravih kontrola. Pregled

Rasprava pregled

U ovoj studiji, razine četiri miRNAs (Mir-223, mir-218, mir-21 i mir-25) u plazmi od 70 GC bolesnika i 70 zdravih kontrola analizirani su. U skladu s prethodnim studijama po Tsujiura et al [12], naša analiza je također pokazala da su značajno više razine u plazmi Mir-21 u GC pacijenata. Otkrili smo da su razine Mir-223 bila je značajno viša u GC plazmi nego u kontrolnoj skupini, dok je Mir-218 bio je znatno manji. Kombinirani ROC analiza pokazala najveću AUC 0.9531 sa 84,29% osjetljivošću i 92,86% specifičnosti za omjer (miR-223 × miR-21) /mir-218 u diskriminirati GC od kontrole. Također smo analizirali razinu u plazmi Mir-223, Mir-21, Mir-218 u GC bolesnika s različitim kliničkim statusom (TNM stadij ili metastaza) te odnos između razine u tri miRNAs i HP status infekcije ispitanika. pregled

Iako miR-223 objavljeno je da se gotovo isključivo u koštanoj srži izraženi [23], njegova prekomjerna ekspresija opažena je u mnogim tipovima karcinoma, kao što su karcinom jednjaka [16], hepatocelularnog karcinoma [24], GC [14], [15]. Nedavno, Xiaohua Li izvijestio da je Mir-223 je pojačana ekspresija samo u metastatskim stanicama raka želuca i stimulirana bez metastaza želučane stanice raka migraciju i invaziju [25]. Zašto su razine u plazmi Mir-223 bila je značajno viša u bolesnika s ranim stadijem GC? U GC mikrookoliša, mnogi tumor-asocirane stanice kao što su makrofagi, mijeloidne stanice, dendritične stanice i T-stanice, imaju sposobnost da oslobodi exosomes koji Shuttle i mRNA i mikrornk drugim stanicama ili cirkulaciji [26]. Za rane faze GC, Mir-223 može biti viša u nekim tumorom stanica i predan u perifernoj krvi putem exosmes. Nedavni dokazi pokazuju da Mir-223 izdana od strane makrofaga vratio se u stanicama raka dojke i regulirala invazivnost stanica karcinoma dojke [27]. Dokazano je da je obnova Mir-218 smanjuje ekspresiju Robo1 i inhibira rak želuca invaziju i metastaziranje stanica In vitro
i In vivo pregled [17]. Pojačanom ekspresijom Mir-218 rezultirao je značajno smanjena aktivnost rasta stanica i stanica invaziju AGS stanicama u usporedbi s onom kod kontrole [20]. Gao C i suradnici [21] su izvijestili da je razina ekspresije Mir-218 su značajno smanjeni u GC tkiva, u inficirane s H. pylori želučane sluznice, a inficirane s H. pylori AGS stanice. U našoj studiji, razine u plazmi Mir-218 nisu bile značajno različite između GC bolesnika s HP-om i onih bez, ili između zdravih kontrolnih ispitanika s HP-om i onih bez. Razine miRNAs mogu biti različiti između GC plazmi i želučane sluznice. Mir-21 je izraženo u različitim oblicima raka, uključujući rak dojke [28], raka pluća [29], raka debelog crijeva [30], a GC [18], [19]. Iako Tsujiura sur [12] izvijestili da su razine u plazmi Mir-21 su značajno povišene u GC bolesnika, njegova razina u plazmi od GC bolesnika na različitim TNM jelenima nisu identificirani. Pregled

Sve veći broj radova izvijestio koji kruži miRNAs može poslužiti kao neinvazivnim biomarkera za detekciju GC. Nedavno, Hanshao Liu izvijestio da je serum Mir-378 je značajno povišen u GC bolesnika s TNM fazi sam, što ukazuje da je ova Mirna potpis može poslužiti kao novi neinvazivna biomarkera za rano otkrivanje GC [31]. Ali stanje Hp infekcije u GC bolesnika i zdravih kontrola nije spomenuta. Poznato je da HP infekcija je jedan od glavnih uzroka GC, uključujući gastričku adenokarcinom, želučani MALT limfom. Ako su razine u plazmi /serumu od specifičnih cirkulirajućih miRNAs su dereguliran samo u GC bolesnika s HP infekcije, ali ne i kod onih bez, a miRNAs mogu poslužiti kao biomarkeri za otkrivanje bolesnika s HP-infekcije umjesto otkrivanje bolesnika s GC.

u ovoj studiji, iako smo analizirali razinu u plazmi Mir-223, Mir-21 i Mir-218 u GC pacijenata u različitim fazama TNM, broj ranoj fazi uzoraka GC bio skroman. Broj plazma miRNAs testiranih na trening set je bio ograničen. U budućnosti istrage, možemo pristupiti veći broj ranoj fazi uzoraka GC ocijeniti ulogu plazme Mir-223, Mir-21, Mir-218 ili druge plazme miRNAs povezan s GC u ranom otkrivanju GC. Pregled

u svrhu traženja učinkovitih krvi na bazi biomarkera za detekciju GC produžiti preživljavanje pacijenata s početkom GC, mnogi istraživači su usmjerene na kruži miRNAs, koji su nedavno izvijestili da služi kao učinkovit i ne-invazivne biomarkera za detekciju raznih oblika raka ili drugih bolesti [32] - [35]. Iako je osjetljivost i specifičnost kruži Mirna biomarkera za detekciju GC su mnogo veći nego da od biomarkera u serumu (CA19-9 i CEA) koji se trenutno koristi, to je dug put koji će ići pred kruži miRNAs kao dijagnozu se koristi za otkrivanje GC jer razinama kruži Mirna mogla biti znatno viša ili niža u raznim bolestima. Buduće studije kruži Mirna biomarkera može se usredotočiti na kombinirajući profile ekspresije kruži miRNAs iz svih uobičajenih bolesti kako bi se dobili konkretne biomarkera za jedinstvenu otkrivanja bolesti. Iako Jianning Song [36] preporučuje Mir-16 i Mir-93 kao pogodne referentni geni za serum Mirna analize GC bolesnika i zdravih kontrola, veličina uzorka je skroman. Metode normalizacije koriste za određivanje razine cirkulirajućih miRNAs treba biti jedinstven. Pregled

Na kraju, utvrdili smo da su tri plazma miRNAs (Mir-223, Mir-21 i Mir-218) može potencijalno služiti kao nove neinvazivnih biomarkera za detekciju GC. Bilo Mir-223 i Mir-21 ima sposobnost da otkrije u ranoj fazi GC će se pojaviti u budućim istraživanjima. Pregled

popratne podatke
Slika S1. pregled Validacija plazma razinama Mir-25 u GC bolesnika i zdravih kontrola. Kutija je nacrtano koncentracija u plazmi Mir-25 u GC pacijentima (GC, n = 70) i ​​zdravih kontrola (NC, n = 70). Linije unutar kutije označavaju srednje vrijednosti. Brkovi Box parcela: min max. Nema značajne razlike između GC bolesnika i zdravih kontrolnih ispitanika pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s001 pregled (TIF) pregled Tablica S1.
zreli mikroRNA i njihovu odgovaraju primer /sondom AB testu ID. pregled doi: 10,1371 /journal.pone.0041629.s002 pregled (docx) pregled Tablica S2.
koncentracija vrijednosti četiri miRNAs izmjerenih u plazmi ispitanika. pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s003 pregled (XLSX) pregled

Izvori pregled

Zahvaljujemo Yun Zhao za tehničku podršku pregled