PLoS ONE: Плазма микроРНК, микроРНК-223, микроРНК-21 и микроРНК-218, как новые потенциальные биомаркеры рака желудка Detection

Абстрактный

Фон

микроРНК (миРНК), эндогенная маленький некодирующие РНК, которые стабильно обнаружены в плазме крови человека. Ранняя диагностика рака желудка (GC) очень важно, чтобы улучшить эффект терапии и продлить выживаемость пациентов. Нашей целью было определить, является ли четыре микроРНК (микроРНК-223, MIR-21, микроРНК-218 и MIR-25) тесно связаны с онкогенеза или метастаз GC может служить в качестве новых потенциальных биомаркеров для обнаружения GC.

Методология
<р> Мы изначально были измерены плазменные уровни четырех микроРНК у 10 пациентов GC и 10 здоровых контрольных субъектов с помощью количественной обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (QRT-PCR), а затем сравнили результаты плазмы микроРНК с выражениями в раковых тканях из восьми пациентов GC. И, наконец, наличие микроРНК-223, MIR-21 и MIR-218 в плазме была подтверждена у 60 пациентов GC и 60 здоровых контрольных субъектов, а также были проанализированы площади под приемника операционных характеристик (ROC) кривые этих микроРНК.

Результаты
<р> Мы обнаружили, что плазменные уровни микроРНК-223 ( P
&л; 0,001) и микроРНК-21 ( P
&л; 0,001) были у больных ГЦ значительно выше, чем у здоровых людей, в то время как микроРНК-218 ( P
&л; 0,001) была значительно ниже. ROC анализы дали АУК значения 0.9089 для MIR-223, 0.7944 для MIR-21 и 0.7432 для MIR-218, а также комбинированный анализ ROC показал наивысшую АУК значение 0.9531 при дифференцировании пациентов GC от здоровых людей. Кроме того, плазменные уровни микроРНК-223 ( P
&л; 0,001) и микроРНК-21 ( P
= 0,003) были значительно выше у больных с ГЦ стадии I, чем у здоровых людей. Кроме того, плазменные уровни микроРНК-223 были значительно выше у пациентов с GC хеликобактер пилори
(Hp) инфекции, чем без ( P
= 0,014), и значительно выше у здоровых контрольных субъектов с Hp инфекции, чем без ( P
= 0,016).

выводы
<р> Плазма микроРНК-223, микроРНК-21 и микроРНК-218 являются новыми потенциальными биомаркеров для обнаружения GC .
<р> Образец цитирования: Ли Bs, Чжао илом, Го G, Li W, Чжу Ed, Ло X и др. (2012) Плазменный микроРНК, микроРНК-223, микроРНК-21 и микроРНК-218, в качестве новых потенциальных биомаркеров для обнаружения рака желудка. PLoS ONE 7 (7): e41629. DOI: 10.1371 /journal.pone.0041629
<р> Редактор: Аджай Goel, Бейлор медицинский центр университета, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 21 декабря 2011 года; Принято: 27 июня 2012 года; Опубликовано: 30 июля 2012
<р> Copyright: © Li и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа была поддержана грантом фонда естественных наук Китая (NSFC, № 81071412). Доноры была роль в сборе и анализе данных, но не роль в дизайне исследования, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> рак желудка является четвертым наиболее распространенным злокачественным в мире и второй ведущей причиной смерти от рака у обоих полов во всем мире. Самые высокие показатели смертности, по оценкам, в Восточной Азии [1]. Уровень 5-летней выживаемости при раке желудка составляет менее 20% -25% в США, Европе и Китае [2]. В настоящее время полное хирургическое удаление является наиболее эффективным методом лечения, предлагая отличную (90%) шанс лечения для пациентов с ранними стадиями рака желудка [3]. Для поздних стадий рака желудка, несмотря на хирургическое лечение, около 80% пациентов умирают в течение короткого промежутка времени от локорегионального рецидива (87%) и /или отдаленными метастазами (30%) [4]. Поэтому улучшение ранней диагностики может увеличить вероятность излечения на ранних пациентов GC или продлить выживаемость пациентов с ранней стадией GC. Тем не менее, большинство ШС на ранней стадии трудно обнаружить [5]. Обычные сывороточные маркеры для GC, такие как углеводный антиген 19-9 (CA19-9) и раково антигена (СЕА), отсутствие достаточной чувствительности и специфичности для содействия раннему выявлению.

MicroRNAs (миРНК) малы, не -coding РНК, которые posttranscriptionally регулируют экспрессию генов. Аберрантная экспрессия микроРНК коррелирует с некоторыми заболеваниями, в том числе раковых заболеваний [6]. Предыдущие исследования показали, что профили экспрессии микроРНК ткани можно рассматривать в качестве диагностических биомаркеров рака [7] - [9]. Тем не менее, этот метод диагностики ограничен в его эффективности в качестве образцов ткани не удобны для доступа и являются инвазивными получить. Все большее число работ сообщают, что циркулирующие микроРНК стабильно обнаружены в различных жидкостях организма, в том числе сыворотки и плазмы [10], [11]. Циркулирующие микроРНК, как новые стабильные биомаркеры было бы одним из наиболее перспективных средств диагностики, так как плазма и сыворотка легко получить доступ и неинвазивный получить. В последнее время несколько перспективных сыворотки или плазмы микроРНК биомаркеров для обнаружения GC были идентифицированы [12], [13].
<Р> Чтобы исследовать эту новую плазму сигнатуры микроРНК можно выделить пациентов с GC (особенно на ранней стадии ГХ) от здоровых управления, мы выбрали четыре микроРНК (MIR-223, микроРНК-218, MIR-25 и MIR-21), который, как сообщается, часто дизрегуляции в GC ткани и тесно коррелирует с онкогенеза или метастаз GC [14] - [21] , Мы предположили, что плазменные уровни трех микроРНК (MIR-223, микроРНК-218 и MIR-25) были аберрантное у больных ГЦ, а также те из MIR-21, который предположил, что эта подпись может служить биомаркером для обнаружения GC [12]. Тем не менее, плазменные уровни микроРНК-21 у больных GC на разных этапах TNM не были идентифицированы. В данном исследовании мы сравнили плазменные уровни четырех микроРНК в GC больных к здоровым контролем и оценивали целесообразность четырех микроРНК в качестве новых неинвазивных биомаркеров для обнаружения GC.

Материалы и методы

Пациенты и образцы
<р> Все образцы были собраны из согласными лиц в соответствии с протоколами, утвержденными Советом по рассмотрению этики на третьего военного медицинского университета. В общей сложности 70 пациентов с GC до какого-либо лечения и 70 здоровых лиц из Юго-западного госпиталя (Чунцин, Китай) были включены в нашем исследовании между 2010 и 2011 для 70 пациентов GC, мы проанализировали гистологию тканей GC, в том числе 56 аденокарцинома, 13 Mucinous аденокарциномы и 1 карциномы перстень клеток, и определили местоположение опухоли, в том числе 34 в теле желудка, 24 в желудочном антрума, 8 в кардии и 4 в других (верхний желудок, желудочный угол, культи желудка). Пациенты GC были классифицированы в соответствии с клинической стадии TNM, в том числе 12 этапа I (средний возраст 53 года [диапазон, 36-70 лет]; 8 мужских, 4 женщины), 11 этап II (средний возраст 61 лет [диапазон, 36-77 лет]; 7 мужчин, 4 женщины), 36 этап III (средний возраст 55 лет [диапазон, 30-71 лет]; 26 мужчина, 10 женщин), и 11 этап IV (средний возраст, 53 лет [диапазон , 46-66 лет], были протестированы 9 самцов, 2 самка) .The статус Hp инфекции с помощью анти-HP антитела ELISA диагностические наборы (S20010005), (ПЕКИН Бейер биоинженерии CO, LTD), показывая 43 GC пациентов с Нр-инфекцией. и 27 без. Для 70 здоровых контрольных субъектов, 44 мужчины и 26 женского пола были включены, а средний возраст составлял 51 лет [диапазон, 26-75 лет]. Результаты теста НР-инфекции показали 31 здоровых субъектов управления с Нр-инфекцией и 39 без. (Таблица 1).
<Р> Плазма клеток, был выделен из всех образцов крови в течение 2 ч сбора с использованием двухстадийного протокола (1500 оборотов в минуту в течение 10 мин, 12000 оборотов в минуту в течение 2 мин), чтобы предотвратить загрязнение клеточными нуклеиновые кислоты. Плазму переносили в чистую пробирку, оставляя фиксированную высоту 0,5 см плазмы супернатанта над осадком, чтобы не мешать гранул [11]. Его хранили при -80 ° С в 450 мкл аликвоты. Восемь пар образцов ткани были собраны из восьми пациентов GC с более высокими уровнями плазмы микроРНК-223 и MIR-21, а также более низкие уровни плазмы микроРНК-218, чем здоровых людей после хирургической резекции, и приблизительно сократить до мм квадратов 1 и немедленно замораживали в жидкий азот.

Экстракция РНК
<р> Всего РНК экстрагировали из 400 мкл плазмы с использованием набора Mirvana Париж (Амбион) в соответствии с протоколом производителя и элюировали 105 мкл предварительно подогретого ( 95 ° C раствор) элюирования. Для обеспечения нормализации изменения образца к образцу в стадии выделения РНК, 10 мкл 0,05 мкМ синтетического C. Элеганс
микроРНК-39 (синтетической РНК олиго-нуклеотиды, синтезированные GenePharma) добавляли к каждому образцу денатурированного после объединения образца плазмы с денатурирующих раствора [11]. Для замороженных тканей, Суммарную РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя, и, наконец, вновь суспендируют в 60 мкл предварительно подогретого (95 ° C) нуклеазы без воды.

Количественный реверс- транскриптазы полимеразной цепной реакции (QRT-ПЦР)
<р> реакцию обратной транскрипции проводили с использованием Taqman микроРНК с обратной транскрипцией Kit (Applied Biosystems). кДНК синтезировали в 5 объемах мкл, содержащем 1,67 мкл экстракта РНК, 0,5 мкл 10 × буфера обратной транскрипции, 0,05 мкл 100 мМ дНТФ, 0,063 мкл РНКазы ингибитора (20 ед мкл -1), 0,33 мкл Mutiscribe ревертазам (50 ед мкл -1), 0,5 мкл праймера ген-специфического и 1.887 мкл нуклеазы без воды. Реакции инкубировали при 16 ° С в течение 30 мин, а затем 42 ° С в течение 30 мин, затем 85 ° С в течение 5 мин, а затем выдерживают при температуре 4 ° С. Синтезировали кДНК разводили в 2 раза по безъядерной воды. Количественные ПЦР-реакции проводили с использованием 2 мкл кДНК раствора, 5 мкл TaqMan 2 × Совершенная Master Mix (Takara), 0,25 мкл гена-специфических праймеров /зонда (TaqMan® микроРНК анализы, Applied Biosystems. Таблица S1) и 2,75 мкл из нуклеазы без воды в конечном объеме 10 мкл, и запустить на Bio-Rad iQ5 (Bio-Rad Laboratories, Inc) амплификатора. Реакционные смеси инкубировали при 95 ° С в течение 2 мин, затем 40 циклов при 95 ° С в течение 15 с и 60 ° С в течение 30 с. Пороговый цикл ( C
<суб> T) значения были рассчитаны с программным обеспечением Bio-Rad iQ5 2.1 Standard Edition оптическая система 2.1.94.0617.
<Р> Концентрации в плазме микроРНК были рассчитаны с использованием стандартной кривая построена с использованием синтетических миРНК [22]. Стандартные опорные микроРНК амплифицировали в каждой реакции. Однако экспрессия микроРНК из образцов ткани была нормализована с помощью 2 -ΔΔ C
<суб> метод т от C
<югу> т значения микроРНК интересов по отношению к RNU6B.

Нормализация экспериментальной QRT-PCR Данные из плазмы с использованием синтетических C. Элеганс микроРНК-39

C. Элеганс
микроРНК-39, в котором отсутствует последовательность гомологии к человеческим микроРНК, был выбран для нормализации экспериментальных данных QRT-PCR. Известные количества синтетического C. Элеганс
микроРНК-39 были разведены, чтобы произвести C
<югу> т значения в пределах C
<суб> диапазоны т значение стандартного кривых микроРНК. Мы эмпирически добавляли 10 мкл 0,05 мкМ синтетического C. Элеганс
MIR-39 до 400 мкл плазмы после объединения образца плазмы с денатурирующих раствором. C. Элеганс
микроРНК-39 амплифицировали, а также другие микроРНК. Следующая формула использовалась для корректировки C
<суб> т значения микроРНК (MIR-223, MIR-21, микроРНК-218 и MIR-25) во всех образцах плазмы: Normalized_ C
<суб> т значение для миРНК в образце = Raw_ C
<суб> т значение - [(SpikeIn_ Average_ C
<югу> т значение данного образца) - (Median_ SpikeIn_ C
<суб> т)] [11]. Normalized_ C
<югу> значение т затем используется для расчета концентрации каждого микроРНК.

Статистический анализ
<р> тест Манна-Уитни был использован для сравнения различий в плазме концентрации микроРНК и соотношения микроРНК между группой рака и здоровой группы. Двусторонний χ 2 тест был использован для сравнения различий пола, возраста или статуса НР-инфекции между пациентами ГХ и здоровой контрольной группы. тест ANOVA использовали для анализа взаимосвязи между уровнями MIR-223, микроРНК-21, микроРНК-218 и TNM стадии. Приемник-характеристических (ROC) кривых и площадь под кривой (AUC) были использованы для оценки возможности использования плазменных уровней микроРНК в качестве диагностических средств для обнаружения GC. Индекс Youden был использован для выбора оптимальных значений среза. A P
значение менее 0,05 считалось статистически значимым. Все статистические анализы были проведены с использованием SPSS 13,0 программного обеспечения и графики были получены с использованием GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc, Caligornia).

Результаты

Характеризует субъектов
<р> Сто сорок предметов, в том числе 70 пациентов GC и 70 здоровых контрольных субъектов, были приняты на работу в данном исследовании. Никаких существенных различий в пола или возраста не было обнаружено между пациентами ГХ и здоровой контрольной группы ( P
= 0,371, P
= 0,398, χ ^{2 тестов, соответственно). статус НР-инфекции значительно отличалась между пациентами ГХ и здоровой контрольной группы ( P
= 0,042) (таблица 1).}

Оценка количественного RT-PCR для измерения микроРНК в плазме <бр>

для того, чтобы определить динамический диапазон и чувствительность микроРНК количественной оценки с помощью ПЦР в реальном времени, синтетические однонитевые микроРНК серийно разводили в 10 раз по сравнению с концентрацией от 0,1 до 0,000001 фМоль для MIR-223, MIR-218, зер- 25, и микроРНК-21 по рекомендации GenePharma микроРНК Reference Panel. Линейность количественного RT-PCR между логарифмическими значениями входных микроРНК и C
<суб> значения т было подтверждено для каждого синтетического микроРНК, MIR-223, MIR-218, MIR-25 и MIR -21 (R ^{2 = 0,997, R 2 = 0,998, R 2 = 0,993 и R 2 = 0,999, соответственно) (рисунок 1).}

Предварительный скрининг плазменного микроРНК, которая может контролировать GC
<р> Четыре микроРНК, микроРНК-223, микроРНК-218, микроРНК-25 и микроРНК-21, были аберрантно выражены в GC тканях. Для того, чтобы исследовать вопрос о том, что уровни четырех микроРНК настоящего дерегуляции в плазме больных с GC, мы изначально были измерены плазменные уровни четырех микроРНК у 10 пациентов GC и 10 здоровых людей. Как и следовало ожидать, плазменные уровни микроРНК-223 и MIR-21 были значительно выше у пациентов с ГК, чем у здоровых лиц ( P
&л; 0,001), в то время как микроРНК-218 были значительно ниже ( P
&л; 0,001). Однако плазменные уровни микроРНК-25 существенно не отличались между пациентами ГХ и здоровой контрольной группы ( P
= 0,970) (рис 2 (A-D)). Сообщалось, что уровни микроРНК-21 в плазме GC может отражать те, в первичной ткани GC [12]. Для того, чтобы исследовать вопрос о том, что уровни трех микроРНК (MIR-223, микроРНК-218 и MIR-21) в GC плазме может отражать те, в первичной ткани GC, мы тестировали уровни трех микроРНК в восьми пар GC ткани и прилегающей нормальной ткани образцы из пациентов 8 GC которых в плазме уровни микроРНК-223, микроРНК-21 были значительно выше, и микроРНК-218 был значительно ниже. Как показано на рисунке 2Е, уровни экспрессии микроРНК-223 были в первичных тканей GC выше, чем в контрольной группе в семи из восьми пациентов анализировали (87,5%) и микроРНК-21 в восьми пациентов (100%), в то время как микроРНК-218 был ниже у семи пациентов (87,5%), что свидетельствует о том, что уровни этих трех микроРНК в плазме ГХ отражение те в первичной ткани GC.

плазма уровни микроРНК-223, MIR-21, микроРНК-218 и микроРНК -25 подтверждались в крупном масштабе
<р> для того, чтобы оценить плазменные уровни выше четырех микроРНК в качестве диагностических маркеров для обнаружения GC, еще 60 GC больных и 60 здоровых индивидуумов в группе контроля были добавлены в этом тесте проверки. Как показано на рисунке 3, уровни микроРНК-223 и MIR-21 были в GC плазме значительно выше, чем в контроле ( P
&л; 0,001), в то время как микроРНК-218 был значительно ниже ( P
&л; 0,001). Однако плазменные уровни микроРНК-25 существенно не отличались между пациентами ГХ и здоровой контрольной группы ( P
= 0,082) (рис S1). Значения концентрации четырех микроРНК, измеренных в плазме испытуемых были приведены в таблице S2. ROC анализ кривой были проведены для оценки диагностического значения для трех плазменных микроРНК и показал, что три плазменных микроРНК были ценные биомаркеров для различения GC от нормального контроля с ППК (площадей под кривой ROC) от 0,9089 (95% ДИ: 0,8598 до 0.9580 ) для MIR-223, 0.7944 (95% ДИ: 0,7211 до 0,8677) для микроРНК-21 и 0.7432 (95% ДИ: 0,6628 до 0,8236) для MIR-218. При оптимальном значении среза 0.7286 со значением чувствительности + специфичности-1 считается максимальной для MIR-223, чувствительность и специфичность составили 84,29% и 88,57%; при значении среза 0.5000 для MIR-21, чувствительность и специфичность составили 74,29% и 75,71%, а при обрезании 0.3858 для MIR-218, чувствительность и специфичность составили 94,29% и 44,29%. Для того, чтобы поднять значение диагноза, комбинация ROC кривой анализы были выполнены (MIR-223, умноженное на MIR-21), разделенная на MIR-218. Отношение (микроРНК-223 × микроРНК-21) /микроРНК-218 дали самую высокую АУК значение 0,9531 (95% ДИ: 0.9222 до 0.9839) и оптимальное значение среза 0.7715, чувствительность и специфичность составили 84,29% и 92,86% , в котором указывалось, что сочетание подписи имеет сильную потенциальную ценность диагностики для обнаружения GC.

плазма уровни микроРНК-223, микроРНК-218 и MIR-21 в GC больных с различными клинического состояния
<р> уровни в плазме этих трех микроРНК у больных GC на разных стадиях TNM (12 с I, 11 с II, 36 с III или 11 с IV) были проанализированы, чтобы определить, являются ли три плазменных микроРНК может обнаружить на ранней стадии ГХ. Как показано на рисунке 4A, плазменные уровни трех микроРНК существенно не отличались по четыре этапа (MIR-223, P
= 0,244; микроРНК-218, P
= 0,664; микроРНК -21, P
= 0,596), однако, каждая из четырех стадий, включая I этап пациентов был значительно повышен в плазме микроРНК-223 и микроРНК-21 по сравнению со здоровыми контролем (P < 0,01), и микроРНК -218 значительно снизилась в, III и IV ( P
&л; 0,01) II стадии, в то время как микроРНК-218 существенно не отличались между стадией I пациентов и здоровых лиц ( P
= 0,071). Кроме того, мы сравнили уровни трех микроРНК в плазме от больных ГХ с метастазами без нее. Как показано на рисунке 4B, плазменные уровни трех микроРНК не было никаких существенных различий между пациентами с метастазами GC и те без (MIR-223, P
= 0,320; MIR-218, P
= 0,979;. микроРНК-21, P
= 0,310)

Отношения между плазменными уровнями MIR-223, MIR-21, микроРНК-218 и Hp инфекции статуса субъектов

Кроме того, мы проверили статус Hp инфекции у 140 испытуемых, как описано выше, и анализировали плазменные уровни трех микроРНК в 70 пациентов GC (43 с Hp инфекции и 27 без) и 70 здоровых контрольная группа (31 Hp с инфекцией и 39 без), чтобы оценить взаимосвязь между уровнями в плазме крови трех микроРНК и Hp статуса инфекции субъектов. Как показано на рисунке 5, плазменные уровни микроРНК-21 ( P
= 0,875, P
= 0,527) и микроРНК-218 ( P
= 0,097, P
= 0,539) существенно не отличались между пациентами GC с Нр-инфекцией и без него, а также между здоровой контрольной группы с Нр-инфекцией и без него, соответственно. Тем не менее, микроРНК-223 был значительно выше у пациентов с GC Hp инфекции, чем без ( P
= 0,014), и значительно выше у здоровых людей с Hp инфекции, чем без ( P <бр> = 0,016). Уровни в плазме MIR-223 ( P
&л; 0,001) и микроРНК-21 ( P
&л; 0,001) были значительно выше у пациентов с GC Hp инфекции или без которого по сравнению с здоровой контрольной группы с Нр-инфекцией или у которых без него, в то время как микроРНК-218 был значительно ниже ( P
&л; 0,05). Эти данные дают сильные доказательства того, что три подписи микроРНК могут отличить пациентов GC с или без Hp инфекции от здоровых людей.

Обсуждение
<р> В этом исследовании уровни четырех микроРНК (MIR-223, микроРНК-218, микроРНК-21 и микроРНК-25) в плазме крови от 70 пациентов GC и 70 здоровых людей были проанализированы. В соответствии с предыдущими исследованиями по Tsujiura и др [12], наш анализ также показал, что значительно более высокие плазменные уровни микроРНК-21 у больных ГЦ. Мы обнаружили, что уровни микроРНК-223 были в GC плазме значительно выше, чем в контроле, тогда как микроРНК-218 был значительно ниже. Объединенный ROC анализ показал самую высокую АУК 0.9531 с 84,29% чувствительностью и 92,86% специфичности для отношения (микроРНК-223 × микроРНК-21) /MIR-218 в дискриминации GC из контрольной группы. Мы также проанализировали плазменные уровни микроРНК-223, MIR-21, MIR-218 у больных GC при различных клинического состояния (стадии TNM или метастазирование) и взаимосвязи между уровнями в плазме крови трех микроРНК и Hp статуса инфекции субъектов.
<р> Хотя микроРНК-223 было сообщено, почти исключительно выражены в костном мозге [23], его избыточная экспрессия наблюдается во многих видов рака, таких как рак пищевода [16], гепатоцеллюлярной карциномы [24], и GC [14], [15]. Недавно Сяохуа Ли сообщил, что микроРНК-223 был избыточно экспрессируется только в метастатических клеток рака желудка и стимулировали неметастатической клеток рака желудка миграцию и инвазию [25]. Почему плазменные уровни микроРНК-223 были значительно выше у пациентов с ранней стадией GC? В GC микросреды, многие ассоциированные с опухолью клетки, такие как макрофаги, миелоидных клеток, дендритных клеток и Т-клеток, имеют способность высвобождать экзосомы, которые Челночное как мРНК и микроРНК в другие клетки или циркуляции [26]. Для ранней стадии ГХ, микроРНК-223 может быть повышающей регуляции в некоторых ассоциированных с опухолью клеток и доставлены в периферической крови через exosmes. Последние данные показали, что микроРНК-223 выпущен макрофагами курсировал в клетках рака молочной железы и регулирует инвазивность клеток рака молочной железы [27]. Было показано, что восстановление MIR-218 подавляет экспрессию Robo1 и ингибирует желудочную инвазию и метастазирование раковых клеток в пробирке
и В естественных условиях
[17]. Избыточная экспрессия микроРНК-218 привело к значительно сниженную активность роста клеток и проникновению клеток в клетки AGS сравнению с контролем [20]. Гао C и др [21] сообщили, что уровни экспрессии микроРНК-218 были значительно уменьшены в ГЦ тканях, в H. Pylori-инфицированной слизистой оболочки желудка, а также в H. Pylori-инфицированные клетки AGS. В нашем исследовании, плазменные уровни микроРНК-218 существенно не отличались между ГЦ пациентов с Нр-инфекцией и без, или между здоровой контрольной группой с Нр-инфекцией и без нее. Уровни микроРНК могут отличаться между ГХ плазмы и слизистой оболочки желудка. MIR-21 гиперэкспрессируется в различных видов рака, включая рак молочной железы [28], рак легкого [29], рак толстой кишки [30], и GC [18], [19]. Хотя Tsujiura и др [12] сообщили, что плазменные уровни микроРНК-21 были значительно выше у пациентов с GC, его уровни в плазме крови у пациентов GC при различных оленьи TNM не были идентифицированы.
<Р> Увеличение количества работ сообщалось что циркулирующие микроРНК может служить неинвазивных биомаркеров для обнаружения GC. В последнее время Лю Hanshao сообщил, что сыворотка микроРНК-378 был значительно повышен у пациентов с ГК стадии TNM I, предполагая, что эта микроРНК подпись может служить в качестве нового неинвазивного биомаркера для раннего обнаружения GC [31]. Но статус Hp инфекции у больных ГХ и здоровой контрольной группы не были упомянуты. Хорошо известно, что Нр-инфекция является одной из основных причин, в том числе GC аденокарциномы желудка, желудка MALT лимфома. Если уровни в плазме /сыворотке крови специфических циркулирующих микроРНК были дизрегуляции только в GC пациентов с НР-инфекции, но не в тех, без этого элемента, микроРНК могут служить в качестве биомаркеров для выявления пациентов с НР-инфекции, а не на выявлении больных с ГХ.

в этом исследовании, хотя мы проанализировали плазменные уровни микроРНК-223, MIR-21 и MIR-218 у больных GC на разных этапах TNM, количество ранней стадии проб GC был скромным. Число плазменных микроРНК испытанных в тренировочном наборе было ограничено. В дальнейшем исследовании, мы можем получить доступ к большее количество ранней стадии проб GC оценить роль плазмы микроРНК-223, микроРНК-21, MIR-218 или других плазменных микроРНК, связанный с GC в раннем выявлении GC.
<р> с целью поиска эффективных биомаркеров в крови на основе для обнаружения GC, чтобы продлить выживаемость больных с ранними стадиями GC, многие исследователи сосредоточились на циркулирующих микроРНК, которые недавно были зарегистрированы, чтобы служить в качестве эффективного и неинвазивного биомаркера для обнаружения различные виды рака и других заболеваний [32] - [35]. Хотя чувствительность и специфичность циркулирующих микроРНК биомаркеров для обнаружения GC намного выше, чем у сыворотки биомаркеров (CA19-9 и CEA), используемых в настоящее время, это долгий путь, прежде чем циркулирующие микроРНК в качестве клинического диагноза используются для обнаружения GC , так как уровни циркулирующего микроРНК может быть значительно выше или ниже при различных заболеваниях. Будущие исследования циркулирующих микроРНК биомаркеров может сосредоточиться на объединении профили экспрессии циркулирующих микроРНК из всех распространенных заболеваний для получения специфических биомаркеров для уникального выявления заболевания. Хотя Jianning песни [36] рекомендовал MIR-16 и MIR-93, как подходящие ссылки на гены для анализа сыворотки микроРНК для больных ГХ и здоровой контрольной группы, размер выборки скромнее. Методы нормализации, используемые для определения уровней циркулирующих микроРНК должны быть унифицированы.
<Р> В заключение, мы определили, что три плазменных микроРНК (MIR-223, MIR-21 и MIR-218) потенциально могут служить в качестве новых неинвазивных биомаркеров для обнаружения GC. Является ли микроРНК-223 и микроРНК-21 имеют возможность обнаруживать на ранней стадии GC будут определены в будущих исследованиях.

Поддержка информации Рисунок S1 изображения.
Проверка уровней в плазме MIR-25 у пациентов GC и здоровых людей. Вставка графики плазменной концентрации микроРНК-25 у больных GC (GC, п = 70) и здоровых (NC, п = 70). Линии внутри коробки обозначают медианы. Усы коробчатых участков: от минимального до максимального. Никаких существенных различий не наблюдалось между пациентами GC и здоровых контрольных субъектов
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s001
(TIF)
таблице S1.
зрелой микроРНК и их соответствие праймера /зонда AB анализа ID.
DOI: 10.1371 /journal.pone.0041629.s002
(DOCX)
Таблица S2.
Значения концентрации четырех микроРНК, измеренных в плазме субъектов.
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0041629.s003
(XLSX)

Выражение признательности
<р> Мы благодарим Юн Чжао за техническую поддержку

• PLoS ONE: Мета-анализ интерлейкина-10 -592 Обр полиморфизма, связанного с раком желудка риска
• PLoS ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin Индуцирует Митохондрии зависимом апоптозе через ERK Путь в рака желудка человека SGC-7901 кл…