PLOS ONE: microARN Plasma, miR-223, miR-21 et miR-218, comme biomarqueurs potentiels nouveaux pour le cancer gastrique Detection

Résumé

Contexte

microARN (miARN), endogène petite Les ARN non codant, de façon stable détectée dans le plasma humain. Le diagnostic précoce du cancer gastrique (GC) est très important d'améliorer l'effet de la thérapie et de prolonger la survie des patients. Nous avons cherché à déterminer si quatre miARN (miR-223, miR-21, miR-218 et miR-25) étroitement associés à la tumorigenèse ou la métastase de GC peuvent servir de nouveaux biomarqueurs potentiels pour la détection de GC.

Méthodologie

Nous avons d'abord mesuré les concentrations plasmatiques des quatre miARN chez 10 patients du GC et 10 sujets sains de contrôle par inverse quantitative transcription réaction en chaîne par polymérase (qRT-PCR), puis comparé plasma résultats de miARN avec les expressions dans les tissus cancéreux provenant de huit patients atteints de GC. Enfin, la présence de miR-223, miR-21 et miR-218 dans le plasma a été validé chez 60 patients du GC et 60 sujets témoins en bonne santé, et les zones sous le récepteur d'exploitation (ROC) courbes de ces miARN ont été analysés.

Résultats

Nous avons constaté que les taux plasmatiques de miR-223 ( P
< 0,001) et miR-21 ( P
< 0,001) étaient significativement plus élevés chez les patients du GC que chez les témoins sains, tandis que miR-218 ( P
< 0,001) était significativement plus faible. Le ROC des analyses a donné les valeurs de l'ASC de 0,9089 pour miR-223, 0.7944 pour miR-21 et 0,7432 pour miR-218, et l'analyse combinée ROC a révélé la valeur AUC plus élevée de 0,9531 à discriminer les patients du GC de témoins sains. En outre, les taux plasmatiques de miR-223 ( P
< 0,001) et miR-21 ( P
= 0,003) étaient significativement plus élevés chez les patients du GC de stade I que chez les témoins sains. En outre, les taux plasmatiques de miR-223 étaient significativement plus élevés chez les patients du GC avec helicobacter pylori
(Hp) infection que ceux sans ( P
= 0,014), et significativement plus élevés dans les sujets sains de contrôle avec une infection Hp que ceux sans ( P
= 0,016).

plasma miR-223 de Conclusions, miR-21 et miR-218 sont de nouveaux biomarqueurs potentiels pour la détection de GC .

Citation: Li hôtes, Zhao Yl, Guo G, Li W, Zhu Ed, Luo X, et al. (2012) microARN Plasma, miR-223, miR-21 et miR-218, comme biomarqueurs potentiels nouveaux pour la détection du cancer gastrique. PLoS ONE 7 (7): e41629. doi: 10.1371 /journal.pone.0041629

Editeur: Ajay Goel, Baylor University Medical Center, Etats-Unis d'Amérique

Reçu le 21 Décembre 2011; Accepté le 27 Juin 2012; Paru le 30 Juillet, 2012 |

Droit d'auteur: © Li et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Ce travail a été soutenue par une subvention de la Fondation des sciences naturelles de Chine (NSFC, n ° 81071412). Les bailleurs de fonds avaient rôle dans la collecte de données et d'analyse, mais pas rôle dans la conception de l'étude, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré qu'il n'y a pas des intérêts opposés existent

introduction

le cancer gastrique est le quatrième cancer le plus fréquent dans le monde et la deuxième cause de décès par cancer chez les deux sexes dans le monde entier. Les taux de mortalité les plus élevés sont estimés en Asie orientale [1]. Le taux de survie à 5 ans pour le cancer gastrique est inférieur à 20% -25% aux Etats-Unis, en Europe et en Chine [2]. Actuellement, la résection chirurgicale complète est le traitement le plus efficace, offrant un excellent (90%) chances de guérison pour les patients atteints de cancer gastrique [3]. Pour le cancer gastrique avancé, en dépit de la chirurgie curative, environ 80% des patients meurent dans un court laps de temps de récidive locorégionale (87%) et /ou de métastases à distance (30%) [4]. Par conséquent, l'amélioration dans le diagnostic précoce pourrait augmenter les chances de guérison chez les patients du GC début ou prolonger la survie des patients atteints de GC au stade précoce. Cependant, la plupart des glucocorticoïdes à un stade précoce sont difficiles à détecter [5]. Les marqueurs sériques classiques pour GC, comme hydrate de carbone antigène 19-9 (CA19-9) et l'antigène carcinoembryonnaire (CEA), le manque de sensibilité suffisante et une spécificité pour faciliter la détection précoce.

Les microARN (miARN) sont de petite taille, non -coding ARNs qui régulent l'expression des gènes posttranscriptionally. L'expression aberrante des miARN a été corrélée à plusieurs maladies, y compris les cancers [6]. Des études antérieures ont indiqué que les profils d'expression tissulaire de miARN peuvent être considérés comme des biomarqueurs de diagnostic du cancer [7] - [9]. Cependant, cette méthode de diagnostic est limitée dans son efficacité en tant que spécimens de tissus ne sont pas commodes d'accès et sont invasives à obtenir. Un nombre croissant de documents signalent que miARN circulants sont stablement détectés dans divers fluides corporels, y compris le sérum et le plasma [10], [11]. Circulant miARN que de nouveaux biomarqueurs stables serait l'un des moyens les plus prometteurs de diagnostic, car le plasma et le sérum sont faciles d'accès et non invasive pour obtenir. Récemment, plusieurs sérum ou miARN plasma biomarqueurs prometteurs pour la détection de GC ont été identifiés [12], [13].

Pour explorer ce roman plasma signatures miARN peuvent distinguer les patients avec GC (particulièrement GC stade précoce) de santé contrôles, nous avons sélectionné quatre miARN (miR-223, miR-218, miR-25 et miR-21) qui avaient été signalés à être fréquemment dérégulée dans les tissus GC et en étroite corrélation avec la tumorigenèse ou la métastase de GC [14] - [21] . Nous avons supposé que les taux plasmatiques des trois miARN (miR-223, miR-218 et miR-25) étaient aberrants chez les patients du GC, ainsi que ceux de miR-21, ce qui suggère que cette signature peut servir de biomarqueur pour la détection de GC [12]. Cependant, les taux plasmatiques de miR-21 chez les patients du GC à différents stades TNM ont pas été identifiés. Dans cette étude, nous avons comparé les taux plasmatiques des quatre miARN chez les patients du GC à des contrôles sains, et évalué la faisabilité des quatre miARN en tant que nouveaux biomarqueurs non invasifs pour la détection de GC.

patients et échantillons

Tous les échantillons ont été prélevés sur des individus consentants selon les protocoles approuvés par le Comité d'éthique à la troisième université médicale militaire. Au total, 70 patients avec GC avant tout traitement et 70 sujets témoins en bonne santé de l'hôpital Southwest (Chongqing, Chine) ont été inclus dans notre étude entre 2010 et 2011. Pour les 70 patients du GC, nous avons analysé l'histologie des tissus du GC, y compris 56 adénocarcinomes, 13 adénocarcinome mucineux et 1 carcinome chevalière, et déterminé les emplacements de la tumeur, y compris 34 dans le corps gastrique, 24 dans l'antre gastrique, 8 dans cardia gastrique et 4 dans d'autres (l'estomac supérieur, angle gastrique, moignon gastrique). Les patients du GC ont été classés selon les stades TNM cliniques, y compris 12 stade I (âge médian, 53 ans [gamme, 36-70 ans]; 8 hommes, 4 femmes), 11 stade II (âge médian, 61 ans [gamme, 36-77 ans]; 7 hommes, 4 femmes), 36 stade III (âge médian, 55 ans [gamme, 30-71 ans]; 26 hommes, 10 femmes), et 11 stade IV (âge médian, 53 ans [gamme , 46-66 ans]; 9 hommes, 2 femmes) .Le statut de l'infection Hp ont été testées en utilisant Anti-HP Anticorps ELISA Kits de diagnostic (S20010005), (BEIJING BEIER BIOINGÉNIERIE CO, LTD), montrant 43 patients du GC avec l'infection Hp. et 27 sans. Pour les 70 sujets témoins en bonne santé, 44 hommes et 26 femmes ont été inclus, et l'âge médian était de 51 ans [gamme, 26-75 ans]. Les résultats du test de l'infection Hp ont montré 31 sujets témoins en bonne santé avec une infection Hp et 39 sans. (Tableau 1).

plasma acellulaire a été isolé de tous les échantillons de sang dans les 2 h de collecte en utilisant un protocole en deux étapes (1 500 tours par minute pendant 10 minutes, 12 000 tours par minute pendant 2 minutes) afin d'empêcher la contamination par des cellules acides nucléiques. Le plasma a été transféré dans un tube frais, en laissant une hauteur fixe de 0,5 cm de surnageant de plasma au-dessus de la pastille pour ne pas perturber le culot [11]. Il a été stocké à -80 ° C en aliquotes de 450 ul. Huit paires d'échantillons de tissus ont été prélevés sur huit patients du GC avec des niveaux plus élevés de plasma miR-223 et miR-21 et des niveaux inférieurs de plasma miR-218 que les témoins en bonne santé après résection chirurgicale, et d'environ coupés à 1 mm carrés et immédiatement congelés dans l'azote liquide.

Extraction de l'ARN

ARN totaux ont été extraits à partir de 400 ul de plasma en utilisant le kit MIRVANA PARIS (Ambion) selon le protocole du fabricant et on a élue avec 105 ul de pré-chauffé ( 95 ° la solution C) Elution. Pour permettre la normalisation de la variation d'échantillon à échantillon dans l'étape d'isolement d'ARN, 10 pi de 0,05 uM synthétique C. elegans de miR-39 (ARN de synthèse des oligonucléotides synthétisés par GenePharma) ont été ajoutés à chaque échantillon dénaturé après combinaison de l'échantillon de plasma avec la solution dénaturant [11]. Pour les tissus congelés, l'ARN total a été extrait en utilisant le réactif Trizol (Invitrogen) selon le protocole du fabricant, et enfin remis en suspension dans 60 ul de (95 ° C) de l'eau préchauffée sans nucléase.

quantitative reverse- transcriptase réaction en chaîne par polymérase (qRT-PCR)

La réaction de transcription inverse a été réalisée en utilisant un kit TaqMan microARN reverse transcription (Applied Biosystems). L'ADNc a été synthétisé par 5 volumes de pi contenant 1,67 pl d'extrait d'ARN, 0.5μl de 10 x tampon de transcription inverse, 0,05 ul de mM dNTPs 100, 0.063 ul d'inhibiteur de RNase (20 U ul ^{-1), 0,33 ul de Mutiscribe transcriptase inverse (50 U ul -1), 0,5 pi de l'amorce spécifique du gène et 1.887 pi d'eau sans nucléase. Les réactions ont été incubées à 16 ° C pendant 30 min, puis 42 ° C pendant 30 min, puis 85 ° C pendant 5 minutes avant d'être maintenu à 4 ° C. L'ADNc synthétisé a été dilué 2 fois par l'eau exempte d'armes nucléaires. Les réactions de PCR quantitatives ont été effectuées en utilisant 2 pl de solution d'ADNc, 5 pi de TaqMan 2 × parfait Master Mix (Takara), 0,25 ul de gène spécifique d'amorces /sonde (TaqMan® microARN Assays, Applied Biosystems. Tableau S1) et 2,75 ul de l'eau sans nucléase dans un volume final de 10 ul, et courir sur un iQ5 Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories, Inc) thermocycleur. Les mélanges réactionnels ont été incubés à 95 ° C pendant 2 min, puis 40 cycles de 95 ° C pendant 15 s et 60 ° C pendant 30 s. Le seuil de cycle ( C
_{t) valeurs ont été calculées avec le logiciel Bio-Rad iQ5 2.1 Système optique Standard Edition 2.1.94.0617.}}

Les concentrations plasmatiques de miARN ont été calculées en utilisant une norme courbe construit en utilisant miARN synthétiques [22]. Les miARN de référence standard ont été amplifiés pour chaque réaction. Toutefois, l'expression des miARN à partir d'échantillons de tissus a été normalisé en utilisant la 2 ^{-ΔΔ C
_{t méthode de la C
t valeurs des miARN d'intérêt par rapport à RNU6B.}}

la normalisation des données qRT-PCR expérimentale de plasma en utilisant synthétique C. elegans miR-39

C. elegans de miR-39, qui est dépourvu d'homologie de séquence miARN humains, a été sélectionné pour normaliser les données expérimentales qRT-PCR. Des quantités connues de synthèse C. elegans
miR-39 ont été dilués pour produire C
_{t valeurs dans le C
plages de valeurs de t des courbes standard miARN. Nous empiriquement ajouté 10 pi de 0,05 uM synthétique C. elegans
miR-39 à 400 ul de plasma après combinaison de l'échantillon de plasma avec la solution dénaturant. Le C. elegans
miR-39 a été amplifié, ainsi que d'autres miARN. La formule suivante a été utilisée pour régler la C
t valeurs de miARN (miR-223, miR-21, miR-218 et miR-25) dans tous les échantillons de plasma: Normalized_ C
valeur de t pour le miARN dans l'échantillon = Raw_ C
valeur t - [(SpikeIn_ Average_ C
t valeur de l'échantillon donné) - (Median_ SpikeIn_ C
t)] [11]. Le normalized_ C
valeur t a ensuite été utilisée pour calculer la concentration de chaque miARN.}

Analyse statistique

Le test de Mann-Whitney a été utilisé pour comparer les différences des concentrations plasmatiques de miARN et les rapports miRNA entre le groupe de cancer et le groupe sain. A deux côtés χ ^{2 test a été utilisé pour comparer les différences de sexe, d'âge ou Hp statut d'infection entre les patients du GC et les contrôles sains. test ANOVA a été utilisé pour analyser la relation entre les niveaux de miR-223, miR-21, les étapes miR-218 et TNM. Récepteur-operating characteristic (ROC) courbes et l'aire sous la courbe ROC (AUC) ont été utilisés pour évaluer la faisabilité de l'utilisation des taux plasmatiques de miARN comme outils de diagnostic pour la détection de GC. L'indice Youden a été utilisé pour sélectionner les valeurs de coupure optimales. A P
valeur inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées à l'aide du logiciel SPSS 13.0 et graphiques ont été générés en utilisant GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc, Caligornia).}

Résultats

Caractérise des sujets

Cent quarante sujets, y compris les 70 patients du GC et 70 sujets témoins en bonne santé, ont été recrutés dans cette étude. Aucune différence significative dans le sexe ou l'âge n'a été observée entre les patients du GC et les contrôles sains ( P
= 0,371, P
= 0,398, χ ^{2 essais, respectivement). Hp statut d'infection était significativement différente entre les patients du GC et les contrôles sains ( P
= 0,042) (tableau 1).}

Évaluation de RT-PCR quantitative pour mesurer les miARN dans le plasma

pour définir la plage dynamique et la sensibilité de miRNA quantification par PCR en temps réel, les miARN simple brin synthétiques ont été dilués en série de 10 fois à partir des concentrations de 0,1 à ,000001 fmol pour miR-223, miR-218, Mir- 25 et miR-21 sur la recommandation du Groupe de référence GenePharma miARN. La linéarité de la RT-PCR quantitative entre les valeurs logarithmiques des miARN d'entrée et le C
_{valeurs t a été confirmé pour chaque miARN synthétique, miR-223, miR-218, miR-25 et miR -21 (R ^{2 = 0,997, R 2 = 0,998, R 2 = 0,993 et ​​R 2 = 0,999, respectivement) (figure 1).}}

dépistage préliminaire des miARN plasma qui peut surveiller GC

Quatre miARN, miR-223, miR-218, miR-25 et miR-21, ont été exprimé de manière aberrante dans les tissus du GC. Afin de déterminer si les niveaux des quatre miARN présents dysrégulation dans le plasma des patients atteints de GC, nous avons d'abord mesuré les niveaux plasmatiques des quatre miARN chez 10 patients du GC et 10 témoins sains. Comme prévu, les taux plasmatiques de miR-223 et miR-21 étaient significativement plus élevés chez les patients atteints de GC que chez les témoins en bonne santé ( P
< 0,001), tandis que miR-218 étaient significativement plus faibles ( P
< 0,001). Toutefois, les taux plasmatiques de miR-25 ne sont pas significativement différente entre les patients atteints de GC et les contrôles sains ( P
= 0,970) (figure 2 (A-D)). Il a été rapporté que les niveaux de miR-21 dans GC plasma pourraient refléter celles dans le tissu GC primaire [12]. Afin de déterminer si les niveaux de trois miARN (miR-223, miR-218 et miR-21) dans GC plasma peuvent refléter celles dans le tissu GC primaire, nous avons testé les niveaux des trois miARN dans huit paires de tissus GC et le tissu normal adjacent les échantillons des patients 8 GC dont les concentrations plasmatiques de miR-223, miR-21 étaient significativement plus élevés, et miR-218 était significativement plus faible. Comme on le voit sur la figure 2E, les niveaux de miR-223 expression étaient plus élevés dans les tissus du GC primaire que chez les témoins dans sept des huit patients analysés (87,5%) et miR-21 chez huit patients (100%), tandis que miR-218 était inférieur chez sept patients (87,5%), ce qui suggère que les niveaux de ces trois miARN dans GC plasma reflètent ceux dans le tissu GC primaire.

les niveaux plasmatiques de miR-223, miR-21, miR-218 et miR -25 ont été validés en grande échelle

pour évaluer les niveaux plasmatiques de quatre miARN ci-dessus en tant que marqueurs de diagnostic pour la détection de GC, 60 autres patients du GC et 60 sujets témoins en bonne santé ont été ajoutés dans ce test de validation. Comme on le voit sur la figure 3, les niveaux de miR-223 et miR-21 étaient significativement plus élevés dans le plasma que dans le GC contrôle ( P
< 0,001), tandis que miR-218 était significativement plus faible ( P
< 0,001). Cependant, les taux plasmatiques de miR-25 ne sont pas significativement différente entre les patients du GC et les contrôles sains ( P
= 0,082) (Figure S1). Les valeurs de concentration des quatre ARNmi mesurés dans le plasma des sujets ont été présentés dans le tableau S2. analyses ROC de courbes ont été réalisées pour évaluer la valeur diagnostique pour les trois miARN plasmatiques et a révélé que les trois miARN plasmatiques étaient des biomarqueurs utiles pour distinguer GC des contrôles normaux avec AUCs (aires sous la courbe ROC) de 0,9089 (95% CI: 0,8598 à 0,9580 ) pour miR-223, 0.7944 (IC à 95%: 0,7211 à 0,8677) pour miR-21 et 0,7432 (IC à 95%: de 0,6628 à 0,8236) pour miR-218. À la valeur seuil optimale de 0,7286 à la valeur de sensibilité + spécificité-1 considérée comme maximale pour miR-223, la sensibilité et la spécificité étaient de 84,29% et 88,57%; à la valeur de coupure de 0.5000 pour miR-21, la sensibilité et la spécificité étaient 74,29% et 75,71%, et à la coupure de 0,3858 pour miR-218, la sensibilité et la spécificité étaient 94.29% et 44.29%. Pour élever la valeur de diagnostic, la courbe ROC de la combinaison des analyses ont été effectuées par (miR-223 multiplié par miR-21) divisé par miR-218. Le rapport de (miR-223 × miR-21) /miR-218 a donné la valeur la plus élevée ASC de 0,9531 (IC à 95%: 0,9222 au 0,9839) et la valeur de coupure optimale de 0.7715, la sensibilité et la spécificité étaient 84.29% et 92.86% , qui a indiqué que la signature de la combinaison a une valeur de diagnostic fort potentiel pour la détection de GC.

les niveaux plasmatiques de miR-223, miR-218 et miR-21 dans GC les patients atteints de différents états cliniques

les taux plasmatiques de ces trois miARN chez les patients du GC à différents stades TNM (12 avec I, 11 avec II, 36 avec III ou 11 avec IV) ont été analysées pour déterminer si les trois miARN plasmatiques peuvent détecter GC au stade précoce. Comme le montre la figure 4A, les taux plasmatiques des trois miARN ne sont pas significativement différents à travers quatre étapes (miR-223, P
= 0,244; miR-218, P
= 0.664; miR plasma -21, P
= 0,596), cependant, chacune des quatre étapes, y compris I patients de stade avaient significativement élevé miR-223 et miR-21 par rapport aux témoins sains (P < 0,01), et miR -218 était significativement diminué dans le stade II, III et IV ( P
< 0,01), alors que miR-218 ne sont pas significativement différente entre les patients de stade I et les contrôles sains ( P
= 0,071). De plus, nous avons comparé les niveaux des trois miARN dans le plasma des patients atteints de GC avec métastases les autres. Comme cela est représenté sur la figure 4B, les taux plasmatiques des trois miARN ont eu aucune différence significative entre les patients atteints de GC avec des métastases et celles sans (miR-223 P
= 0,320; miR-218 P
= 0,979;. miR-21, P
= 0,310)

relation entre les niveaux plasmatiques de miR-223, miR-21, miR-218 et Hp infection Statut des sujets

en outre, nous avons testé l'état de l'infection Hp dans les 140 sujets comme décrit ci-dessus, et analysé les concentrations plasmatiques des trois miARN dans les 70 patients du GC (43 avec l'infection Hp et 27 sans) et le 70 sain sujets témoins (31 à l'infection Hp et 39 sans) pour évaluer la relation entre les concentrations plasmatiques des trois miARN et Hp état d'infection des sujets. Comme le montre la Figure 5, les taux plasmatiques de miR-21 ( P
= 0,875, P
= 0,527) et miR-218 ( P
= 0,097, P
= 0,539) ne sont pas significativement différente entre les patients du GC avec l'infection Hp et les autres, et entre les contrôles sains avec l'infection Hp et les autres, respectivement. Cependant, miR-223 était significativement plus élevée chez les patients atteints d'une infection GC Hp que ceux sans ( P
= 0,014), et significativement plus élevée chez les témoins en bonne santé avec une infection Hp que ceux sans ( P
= 0,016). Les taux plasmatiques de miR-223 ( P
< 0,001) et miR-21 ( P
< 0,001) étaient significativement plus élevés chez les patients du GC avec l'infection Hp ou dont sans lorsque comparé avec les témoins en bonne santé avec une infection Hp ou dont sans, alors que miR-218 était significativement plus faible ( P
< 0,05). Ces données fournissent des preuves solides que les trois signatures miARN peuvent distinguer les patients du GC avec ou sans infection Hp de témoins en bonne santé.

Discussion

Dans cette étude, les niveaux de quatre miARN (miR-223, miR-218, miR-21 et miR-25) dans le plasma de 70 patients du GC et 70 témoins sains ont été analysés. En accord avec les études précédentes par tsujiura et al [12], notre analyse a également montré que les concentrations plasmatiques significativement plus élevés de miR-21 chez les patients du GC. Nous avons constaté que les niveaux de miR-223 étaient significativement plus élevés dans le plasma GC que dans le contrôle, tandis que miR-218 était significativement plus faible. ROC combinée analyses ont révélé une AUC plus élevée de 0,9531 à 84,29% de sensibilité et 92,86% de spécificité pour le rapport de (miR-223 miR-× 21) /miR-218 pour discriminer GC des témoins. Nous avons également analysé les taux plasmatiques de miR-223, miR-21, miR-218 chez les patients du GC au statut différent clinique (stade TNM ou de métastases) et la relation entre les concentrations plasmatiques des trois miARN et Hp état d'infection des sujets.

Bien que miR-223 a été rapportée comme étant presque exclusivement exprimé dans la moelle osseuse [23], sa surexpression a été observé dans de nombreux types de cancer, comme le cancer de l'œsophage [16], le carcinome hépatocellulaire [24], et GC [14], [15]. Récemment, Xiaohua Li a rapporté que miR-223 n'a été surexprimé dans les cellules métastatiques de cancer gastrique stimulé et non métastatique de l'estomac la migration des cellules cancéreuses et l'invasion [25]. Pourquoi les taux plasmatiques de miR-223 étaient significativement plus élevés chez les patients avec GC au stade précoce? Dans le microenvironnement GC, les cellules tumorales associées à de nombreuses, telles que les macrophages, les cellules myéloïdes, les cellules dendritiques et les cellules T, ont la capacité de libérer des exosomes, qui font la navette à la fois de l'ARNm et microARN à d'autres cellules ou la circulation [26]. Pour GC au stade précoce, miR-223 pourrait être régulée à la hausse dans certaines cellules tumorales associées et livré dans le sang périphérique via exosmes. Des données récentes ont indiqué que miR-223 libéré par les macrophages a été la navette dans les cellules du cancer du sein et réglementé l'invasivité des cellules du cancer du sein [27]. Il a été démontré que la restauration de miR-218 réprime l'expression Robo1 et inhibe l'invasion des cellules cancéreuses et les métastases gastrique in vitro et

in vivo [17]. La surexpression de miR-218 a entraîné une diminution significative de l'activité de la croissance cellulaire et l'invasion cellulaire des cellules AGS par rapport à celui du contrôle [20]. Gao C et al [21] ont rapporté que les niveaux d'expression de miR-218 ont été réduits de manière significative dans les tissus de GC dans la muqueuse gastrique infectés par H. pylori et chez H. pylori infectées par les cellules AGS. Dans notre étude, les taux plasmatiques de miR-218 ne sont pas significativement différente entre les patients du GC avec l'infection Hp et les autres, ou entre les sujets témoins en bonne santé avec une infection Hp et les autres. Les niveaux de miARN peuvent être différents entre le plasma de GC et de la muqueuse gastrique. MiR-21 est surexprimé dans divers cancers, y compris le cancer du sein [28], le cancer du poumon [29], le cancer du côlon [30] et CG [18], [19]. Bien que tsujiura et al [12] ont rapporté que les concentrations plasmatiques de miR-21 étaient significativement plus élevés chez les patients du GC, ses niveaux dans le plasma de patients atteints de GC à différents cerfs TNM ont pas été identifiés.

Augmentation du nombre de documents rapporté que miARN circulants peuvent servir de biomarqueurs non invasifs pour la détection de GC. Récemment, Hanshao Liu a rapporté que le sérum miR-378 a été significativement plus élevée chez les patients du GC avec le stade TNM I, ce qui suggère que cette signature miARN peut servir comme un nouveau biomarqueur non invasif de dépistage précoce du GC [31]. Mais l'état de l'infection Hp chez les patients du GC et des contrôles sains ont pas été mentionné. Il est bien connu que l'infection Hp est l'une des principales causes de la GC, y compris l'adénocarcinome gastrique, le lymphome gastrique du MALT. Si les niveaux de miARN circulants spécifiques de plasma /sérum ont été seulement dérégulée chez les patients du GC avec l'infection Hp mais pas dans ceux du dehors, les miARN pourraient servir de biomarqueurs pour la détection des patients atteints d'une infection Hp au lieu de la détection des patients avec GC.

dans cette étude, bien que nous avons analysé les taux plasmatiques de miR-223, miR-21 et miR-218 chez les patients du GC à différents stades TNM, le nombre d'échantillons GC stade précoce a été modeste. Le nombre de miARN plasmatiques testés dans la série de formation a été limitée. Dans l'enquête sur l'avenir, nous pouvons accéder à plus de nombre d'échantillons de GC à un stade précoce pour évaluer le rôle du plasma miR-223, miR-21, miR-218 ou d'autres miARN plasmatiques associés à GC dans la détection précoce du GC.

dans le but de rechercher des biomarqueurs sanguins efficaces pour la détection de GC pour prolonger la survie des patients atteints de GC précoce, de nombreux chercheurs se sont concentrés sur la circulation d'ARNmi, qui ont été récemment rapportés à servir d'biomarqueur efficace et non invasive pour détecter divers cancers ou d'autres maladies [32] - [35]. Bien que la sensibilité et la spécificité de la circulation des biomarqueurs miARN pour la détection de GC sont beaucoup plus élevés que celui des biomarqueurs sériques (CA19-9 et CEA) actuellement utilisés, il est un long chemin à parcourir avant de faire circuler miARN comme un diagnostic clinique sont utilisés pour détecter GC , parce que les niveaux d'un miARN circulant pourraient être sensiblement plus élevé ou plus bas dans diverses maladies. Les études futures de circulation biomarqueurs miARN peuvent se concentrer sur la combinaison des profils d'expression des miARN circulation de toutes les maladies courantes pour obtenir les biomarqueurs spécifiques pour la détection de la maladie unique. Bien que Jianning Song [36] recommandé miR-16 et miR-93 gènes de référence comme appropriés pour l'analyse miRNA sérum pour les patients du GC et des contrôles sains, la taille de l'échantillon est modeste. Les méthodes de normalisation utilisées pour déterminer les niveaux de miARN en circulation devraient être unifiés.

En conclusion, nous avons constaté que trois miARN plasmatiques (miR-223, miR-21 et miR-218) peuvent potentiellement servir de nouveaux biomarqueurs non invasifs pour la détection par GC. Que miR-223 et miR-21 ont une capacité de détecter GC stade précoce seront identifiés dans les études futures.

Informations complémentaires
Figure S1.
Validation des taux plasmatiques de miR-25 chez des patients atteints de GC et des témoins sains. Box parcelles des concentrations plasmatiques de miR-25 chez les patients du GC (GC, n = 70) et des contrôles sains (NC, n = 70). Les lignes à l'intérieur des cases indiquent les valeurs médianes. Les moustaches de boîtes à moustaches: Min Max. Aucune différence significative n'a été observée entre les patients du GC et les sujets témoins en bonne santé
doi:. 10.1371 /journal.pone.0041629.s001
(TIF)
Tableau S1.
Les microARN matures et leur appariés amorce /sonde AB test ID.
doi: 10.1371 /journal.pone.0041629.s002
(DOCX)
Tableau S2.
Les valeurs de concentration des quatre ARNmi mesurés dans le plasma des sujets.
doi:. 10.1371 /journal.pone.0041629.s003
(XLSX)

Remerciements

Nous remercions Yun Zhao pour le soutien technique

• PLOS ONE: Une méta-analyse de l'interleukine-10 -592 promoteur polymorphisme associé à Gastric Cancer Risk
• PLOS ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin Induit mitochondries Apoptose dépendante par ERK Pathway dans les cellules gastriques humaines du cancer SGC-7901