PLOS ONE: IL-26 promove a proliferação e sobrevivência das células de câncer gástrico humano na regulação do balanço de STAT1 e STAT3 Activation

Sumário

A interleucina-26 (IL-26) é uma das citocinas secretadas pelas células Th17 cujo papel em tumores humanos permanece desconhecido. Aqui, foi investigada a expressão e potencial papel de IL-26 em cancro gástrico humano (CG). A expressão de IL-26 e moléculas relacionadas, tais como a IL-20R1, STAT1 e STAT3 foi analisada por PCR em tempo real e de imunoistoquímica. Os efeitos da IL-26 sobre a proliferação celular e a apoptose induzida por cisplatina foram analisados ​​por ensaio de cooperação BrdU e PI-anexina V co-coloração, respectivamente. Lentivirus mediada siARN foi usado para explorar o seu mecanismo de acção, e a sinalização de IL-26 relacionada foi analisada por Western blotting. tecidos GC humanos apresentaram níveis aumentados de IL-26 e as suas moléculas e de ativação da sinalização da STAT3 relacionados, enquanto a ativação STAT1 não diferiram significativamente entre GC e tecidos gástricos normais. Além disso, a IL-26 foi produzida principalmente pelas células NK e Th17. IL-26 promoveu a proliferação e sobrevivência de células MKN45 e cancro gástrico SGC-7901 de uma maneira dependente da dose. Além disso, a IL-20R2 e IL-10R1, que são essenciais para dois receptores de IL-26 sinalização, foram expressos em ambas as linhas celulares. IL-26 activada STAT1 e STAT3 sinalização; No entanto, a sobre-regulação da expressão de Bcl-2, Bcl-XL e c-myc indicou que o efeito de IL-26 é mediada pela activação da STAT3. Knockdown de STAT1 e STAT3 expressão sugerem que os efeitos proliferativos e anti-apoptóticos de IL-26 são mediados pela modulação da activação de STAT1 /STAT3. Em resumo, os níveis elevados de IL-26 em GC humano promover a proliferação e sobrevivência através da modulação de sinalização STAT1 /STAT3

Citation:. Você W, Tang Q, Zhang C, Wu J, Gu C, Wu Z, et ai. (2013) IL-26 promove a proliferação e sobrevivência de câncer gástrico Human Cells na regulação do balanço de STAT1 e STAT3 Activation. PLoS ONE 8 (5): e63588. doi: 10.1371 /journal.pone.0063588

editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 11 de outubro de 2012; Aceito: 02 de abril de 2013; Publicado em: 21 de maio de 2013

Direitos de autor: © 2013 Você et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações do National Natural Science Foundation (81170415 para XC) e do Programa de talentos Key Provincial da Província de Jiangsu (RC2011079 para QT e RC2007056 para XC). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico (GC) é a segunda causa mais comum de morte por câncer no mundo. GC é difícil de curar, mesmo em países ocidentais, porque muitas vezes não é detectado até os estágios avançados da doença [1]. Embora um certo número de factores associados com o desenvolvimento e progressão de GC, uma ligação entre a inflamação gástrica crónica, tais como gastrite atrófica induzida por Helicobacter pylori e o risco de GC Tornou-se evidente nos últimos anos [2]. A inflamação crónica que conduz a GC é um processo longo e complicado, que ocorre ao longo de muitos anos e é caracterizada por lesões inflamatórias para a proliferação da mucosa gástrica, a síntese de ADN induzida por citocinas de células e, hiperplasia e carcinogénese [3].

A associação entre inflamação crônica eo sistema imunológico tem sido bem estudada, e os linfócitos são os principais mediadores da carcinogênese promoveu-inflamação [4]. células Th17 são um novo tipo de linfócitos T que expressam RORγT e segregam várias citóquinas, incluindo IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22 e IL-26. A diferenciação das células Th17 é regulada por várias citoquinas, incluindo IL-1β, IL-6, IL-23, factor de necrose tumoral alfa (TNF-α), e factor de transformação de crescimento beta (TGF-β) [5], [6] . Estudos clínicos recentes demonstraram que as células Th17 pode estar intimamente relacionada com H. pylori patologia associada e carcinogênese do GC [7], [8], [9], [10]. Embora várias citocinas relacionadas Th17 têm sido estudados, pouco se sabe sobre a interleucina-26 (IL-26) em relação aos tumores gástricos.

IL-26 é uma proteína segregada que funciona, quer como um monómero ou um homodimero. Foi originalmente descrito por Knappe et ai. [11] sob o nome de AK155. A IL-26 tem fraca mas significativa homologia de sequência com IL-10, e sua proteína codificada, portanto, é um membro da família da IL-10 de citoquinas, que na sua maioria pertencem à família das citocinas de classe 2. IL-26 pode ser segregada pelas células T primárias, células NK e clones de células T e é geralmente co-expressa com outros importantes citocinas IL-10 relacionadas, tais como a IL-22 [12], [13]. IL-26 se liga a um complexo de receptores distintos da superfície celular que consiste em as cadeias IL-20R1 e IL-10R2, e as suas actividades funcionais são diferentes daquelas mediada por IL-10. IL-20R1 funciona como a cadeia específica de ligação ao ligando de IL-26 e IL-10R2 é uma segunda cadeia essencial para completar a montagem do complexo de receptor activo. Os anticorpos neutralizantes contra, quer a cadeias IL-10R2 ou IL-20R1 podem bloquear a indução de IL-26 de sinalização [12]. Uma vez completamente montado, o complexo receptor sofre uma alteração conformacional (s) que induz a activação de tirosina-quinases Janus associadas ao receptor, Jak1 e Tyk2, e subsequente acoplamento transiente e a fosforilação das proteínas STAT, STAT1 e STAT3 [14], [15 ].

Como uma citoquina relacionada Th17, o papel da IL-26 em tumores não foi investigado. Aqui, nós examinamos o potencial envolvimento de IL-26 em GC humana pela primeira vez e explorou sua pró-sobrevivência e efeitos proliferativos in vitro
.

Materiais e Métodos

os pacientes

o presente estudo incluiu 60 pacientes com GC submetidos à cirurgia 2006-2009 no primeiro Hospital Afiliado da Universidade médica de Nanjing, Nanjing, província de Jiangsu (Tabela 1). Todos os experimentos foram realizados de acordo com os princípios expressos na Declaração de Helsinki. consentimentos informados por escrito para a expressão do gene analisa em tecidos foram obtidos de todos os pacientes antes da cirurgia ou exame endoscópico. Os procedimentos de protocolo e de consentimento do estudo foram aprovados pelo comitê de ética da Primeira Affiliated Hospital da Universidade Médica de Nanjing. O diagnóstico e estadiamento do câncer gástrico foi realizada de acordo com o AJCC (TNM) Staging System.

Quantitative PCR em tempo real

reações de transcrição reversa foram realizadas utilizando o First-Strand Synthesis System SuperScript ( Invitrogen, CA) após o tratamento de moldes de ARN com DNase I, para evitar contaminação do ADN genómico. Para determinar o nível relativo de ADNc nas amostras transcrito de forma inversa, PCR em tempo real foi realizado com o Roche LightCycler480 (Roche Diagnostics IN, EUA) utilizando os iniciadores para a IL-26 como se segue: para a frente, AAGCAACGATTCCAGAAGACC e reverso, AAGTCCTCCACAAAGCGTATTTT, com uma amplificado comprimento de 175 pb. GAPDH foi usada como um controlo, com os seguintes iniciadores: para a frente, AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC; reversa, GGGGTCATTGATGGCAACAATA; comprimento amplificada, 102 pb. A reacção de PCR em tempo real foi realizada de acordo com as instruções incluídas no kit SYBR® Premix Ex Taq ™ (Takara, Japão). Os dados foram normalizados para os níveis de GAPDH nas amostras.

ELISA

IL-26, a concentração no soro de pacientes e controlos saudáveis ​​GC foi medida usando kits de ELISA comercialmente disponíveis sanduíche (Biotang Inc., MA).

Análise Western Blot

As proteínas foram extraídas de MKN45, SGC7901 e sua STAT1 e STAT3 ARNip modificada linhas celulares, e quantificada utilizando um ensaio de proteína (Bio-Rad Laboratories, CA). As amostras de proteína (30 ug) foram fraccionadas por SDS-PAGE e transferidos para uma membrana de nitrocelulose. A imunotransferência foi realizada utilizando anticorpos contra a IL-26, IL-20R1, a IL-10R2, p-STAT3 (S727), a STAT3, p-STAT1 (Y701), STAT1, Bcl-2, Bcl-XL, c-Myc e α- tubulina (todos adquiridos a partir de Abcam, MN). Os resultados foram visualizados com um sistema de detecção quimioluminescente (Pierce sistema ECL Substrato Ocidental detecção de borrão, Thermo Scientific, IL) e exposição a filme de autorradiografia (película Kodak XAR).

imuno-histoquímica (IHQ)

Os tecidos foram recolhidos e fixados em paraformaldeído a 4% durante a noite a 4 ° C, processado, e cortado com 5 mm de espessura. a coloração imuno-histoquímica de secções foi realizada com anticorpos contra a IL-26, IL-20R1, técnicas de p-STAT3 (S727), e p-STAT1 (Y701) utilizando descrito anteriormente [16].

BrdU celular Ensaio de Proliferação

As células em cultura foram colocadas em placas a uma densidade de 1 x 10 placas ^{4 células /cavidade em 96 cavidades. A proliferação celular, a 0, 12, 24, 48, 60 e 72 h, foi avaliada utilizando o kit de ensaio de proliferação de células BrdU. solução de BrdU (tecnologia de sinalização celular, MA) foi adicionada a cada poço de acordo com as instruções do fabricante, durante 12 h. A taxa de proliferação celular foi determinada medindo a absorvância a 450 nm utilizando um computador controlado microplaca-leitor.}

Isolamento e Cultura de GC humano infiltradas Leucócitos

tecidos tumorais frescas foram lavadas duas vezes em meio RPMI 1640 . gordos, conjuntivo, e tecido necrótico foi removido. Os tecidos foram cortados em fragmentos de 1-2 mm peças em meio RPMI 1640, transferidas para 15 tubos de 50 ml ou cónicos, e incubadas com meio de digestão com enzimas de triplo contendo ADNase (30 U /mL), hialuronidase (0,1 mg /mL), e colagenase (1 mg /mL) durante 2 h à temperatura ambiente com agitação suave. Os tecidos foram ressuspensas em 10 ml de RPMI 1640 e filtrada através de um filtro de células de 70 mícrons (BD Pharmigen). As células retidas pelo filtro foram colocados em poços individuais contendo 1 mL de meio de crescimento de células T em uma placa de 24 poços para mais de detecção por citometria de fluxo.

Th17 e NK cela de isolamento, estimulação e análise de citometria de fluxo células

Th17 foram obtidos por in vitro
estimulação de células CD4 positivas mononucleares de sangue periférico (PBMC), que foram isolados por citometria de fluxo sob as condições (20 ng /ml de IL-1β, 20 ng /ml de IL-6, 20 ng /ml de IL-23, 5 ng /mL de TGF-β, 5 ug /ml de anti-IL-12, e 5 ug /ml de anti-IL-4) anteriormente descrito [17]. células NK foram obtidos utilizando um estojo de isolamento de células NK comprado de Miltenyi Biotec (Cat. 130-092-657). Th17 e células NK foram mantidas in vitro
e estimulado por 100 ng /mL de LPS e H. pylori
lisados, respectivamente, e analisados ​​por coloração de citocinas intracelulares.

Para a coloração de citocina intracelular, as células foram estimuladas a 37 ° C durante 5 h, com um cocktail activação dos leucócitos (BD Pharmingen). As células foram então coradas com marcadores de superfície, fixo, e permeabilizadas com IntraPre Reagente (Beckman Coulter) e, finalmente, coradas com marcadores intracelulares. Os dados foram adquiridos em um FACSVantage SE e analisados ​​com o software CellQuest. mAb conjugado com fluorocromo contra a IL-26, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56 e RORγT foram adquiridos da BD Pharmingen.

Cisplatina e Apoptose Induzida por análise citométrica de fluxo

As células foram cultivadas analisados em meio completo com 1 ug /mL de cisplatina durante 24 h. As células foram ainda analisadas por citometria de fluxo (FACSCalibur ™; BD Biosciences, NJ). Utilizando um kit de coloração PI /anexina (BD Biosciences)

siRNA Concepção e Lentivírus Produção e transdução

Os siRNAs segmentação STAT1 e STAT3 foram concebidos e sintetizados por Genscript Co. (Nanjing, China) como segue: siRNA segmentação STAT1, GGACAAGGTTATGTGTATA; e siRNA segmentação STAT3, GGACATCAGCGGTAAGACC. Os siRNAs sintetizados foram subclonados no pLL3.7 vector lentiviral pelo Hapi
e XhoI
(New England Biolab, Reino Unido), juntamente com controle de siRNA e nomeado pLL3.7-CS, PLL3. 7-STAT1-siRNA e pLL3.7-STAT3 siRNA. lentivírus recombinante foi gerado a partir de células 293T [16]. As linhas de células de GC humana MKN45 e SGC7901 foram adquiridos a Kaiji Biotech Co (Nanjing, China) e cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal de vitelo, 100 U /ml de penicilina e 100 U /mL de estreptomicina (Gibco , CA), e transduzidas com lentivírus com polibreno (8 ug /ml).

Análise estatística

Os resultados são expressos como média ± DP de três experiências independentes. As comparações entre os grupos foram realizadas com o teste de Mann-Whitney. A correlação de expressão IL-26 e várias características clínicas foram analisados ​​utilizando o teste do qui-quadrado. Os valores de P < 0,05 foram considerados como estatisticamente significativos

Resultados

1.. A ativação de IL-26 e STAT3 Relacionados Sinalização aumentou em câncer gástrico humano
expressão

IL-26 no câncer gástrico humano foi examinada em 60 tecidos tumorais frescas e emparelhados tecidos do estômago normais adjacentes de 60 pacientes do GC. a análise por PCR em tempo real mostraram significativa sobre-expressão de IL-26 ARNm em GC humana em comparação com tecidos normais gástricas (p = 0,004, por Mann-Whitney U) (Figura 1A). Séricos de IL-26 níveis também foram significativamente maiores em pacientes do GC do que nos controles saudáveis ​​(P = 0,0064, pelo Mann-Whitney U) (Figura 1B). Além disso, a análise da expressão da proteína IL-26 em 60 amostras de tecidos embebidos em parafina mostrou expressão positiva em 47 amostras de GC, e fracamente positiva (n = 14) ou negativo (n = 46) a expressão em tecidos normais adjacentes. As células positivas para IL-26 estavam localizados principalmente em tecidos não-parenquimatosas, que podem consistir de células do sistema imunológico e que se infiltram em circundantes ou tecidos do cancro gástrico normais. Além disso, uma quantificação dos resultados de coloração IHC com mais a imagem-Pro (versão 5.0) em cinco campos aleatórios por lâmina mostrou que a IL-26 foi significativamente maior nos tecidos de GC do que em tecidos normais adjacentes (P = 0,0087, pelo teste de Mann-Whitney U. teste). Detecção e quantificação da expressão de IL-20R1, um receptor de IL-26, mostraram que foi expresso em níveis significativamente mais elevados em GC humana do que em tecidos normais (P = 0,0041, teste de Mann-Whitney U). O estado de activação de STAT1 e STAT3, que são importantes factores de sinalização a jusante de IL-26, foi investigado por IHC utilizando anticorpos específicos contra os resíduos fosforilados. Um aumento significativo da p-STAT3 (S727) foi detectada em tecidos GC, enquanto não há diferenças estatisticamente significativas em p-STAT1 níveis (Y701) foram detectados entre os tecidos humanos GC e tecidos normais (P = 0,0094 para STAT3 e P = 0,392 para STAT1 , pelo Mann-Whitney U) (Figura 1C, D).

a análise da correlação entre IL-26 expressão e características clínico-patológicas mostrou associação estatisticamente significativa entre IL-26 expressão e tamanho do tumor e H . pylori
infecção (Tabela 1).

2. Th17 e células NK são a principal Fontes celulares de IL-26 em cancro gástrico humano

As fontes celulares de IL-26 são células T primárias, células assassinas naturais (NK) e clones de células T após estimulação com antigénios específicos ou lectinas mitogénicas [14]. Portanto, para definir a fonte de IL-26 humana em GC, se infiltram no tumor (TIL leucócitos) foram isoladas a partir de 20 amostras de tecidos humanos frescos GC e co-coradas com marcadores diferentes. IL-26 foi significativamente maior em células positivas para CD3 (células T) a partir de TILs GC humanos do que em células T derivadas de células do sangue periférico mono-nucleares (PBMC) (16,52 ± 9,32% para o t-TIL vs 3,78 ± 2,91% para T-PBMC, P < 0,0001), que foi consistente com os resultados de PCR em tempo real e IHC (Figura 2a1, A2). Entre o número total de células T, de 13,5 ± 3,71% de células T positivas para CD4 expressa IL-26, enquanto que apenas 3,21 ± 2,61% das células T CD8 foram positivas para IL-26 (Figura 2a3, A4). Além disso, a co-coloração de IL-26 com CD4 e RORγt, um marcador para células Th17, foi observado, com 53,21 ± 16,82% de células que expressam a IL-Th17 26 em amostras de cancro gástrico humano (Figura 2A5, A6). A expressão de IL-26 nas células NK, outra fonte celular frequentemente relatados da IL-26, foi analisada através da medição do número de CD3-, CD16 +, células CD56 + co-coloração com IL-26, que mostrou que 43,81 ± 19,44% de total de células NK secretam IL-26 (Figura 2a7, A8). Tomados em conjunto, os nossos resultados indicaram que as principais fontes celulares de IL-26 em GC humana eram células Th17 e NK eo percentual de cada componente foram resumidos em um gráfico de pizza (Figura 2a9 e A10).

Para investigar a secreção de IL-26 nas células NK e Th17, PBMCs foram recolhidas a partir de 20 voluntários saudáveis ​​e estimulados sob condições polarizantes Th17. A outra fonte principal de IL-26, as células NK, foi obtido a partir de PBMC utilizando um kit de isolamento de NK humana comercial. As características das células NK e Th17 induzidas ou isoladas foram verificadas por coloração de citocinas intracelulares e adicionalmente analisados ​​por citometria de fluxo (Figura 2B1, B2). A estimulação de células NK e Th17 com LPS e H.pylori
lisados ​​resultou num aumento significativo na secreção de IL-26, indicando que a IL-26 é uma citocina fundamental na resposta do cancro gástrico (Figura 2C).

3. In vitro
proliferativa e anti-apoptóticos Efeitos de IL-26

O efeito da IL-26 foi investigada com uma série de in vitro
estudos realizados em dois humana linhas de células de GC, MKN45 e SGC-7901. O efeito de IL-26 sobre a proliferação celular foi avaliada com o ensaio incooperation BrdU nas células tratadas com diferentes concentrações de IL-26 (1, 10 e 50 ng /mL). Não foram observadas diferenças significativas na proliferação de células entre as células não tratadas e as tratadas com 1 ng /ml de IL-26. No entanto, a taxa de proliferação de células aumentou significativamente em resposta a 10 e 50 ng /ml de IL-26 em comparação com células não tratadas que em (Figura 3A). Além disso, a avaliação do efeito anti-apoptótico de IL-26 por co-coloração com PI-AnnexinV em células tratadas com a quimioterapia com cisplatina fármaco para vários pontos de tempo mostraram que a IL-26 teve um efeito anti-apoptótico significativa até mesmo a uma dose de 1 ng /mL. O efeito anti-apoptótico aumentou com concentrações crescentes de IL-26 a 10 e 50 ng /mL (Figura 3B1, B2). Estes resultados indicaram que a IL-26 tem efeitos proliferativos e anti-apoptóticos em linhas de células humanas de GC, o que explica em parte a associação entre a expressão de IL-26 e as características clínicas diferentes observados em estudos clínicos. No entanto, o mecanismo molecular subjacente precisa ser analisada com mais profundidade.

4. Os efeitos proliferativos e anti-apoptóticos de IL-26, estão associadas com a STAT3 Activação

Estudos anteriores demonstraram que a ligação de IL-26 para o seu complexo de receptor pode induzir a activação da STAT3 rápida e a um grau menor, STAT1 [ ,,,0],12]. Portanto, determinou-se em primeiro lugar a expressão do complexo receptor de IL-26 (IL-20R1 e IL-10R2) em MKN45 e SGC7901 células e verificou-se que ambos os receptores estão presentes em linhas celulares de GC para confirmar que a transdução da IL-26 sinais era possível (Figura 4A). Em seguida, analisou a activação de STAT1 e STAT3 sinalização e mostraram que a fosforilação do resíduo de STAT3 S727 e Y701 de STAT1 aumentada em resposta a 10 ng /ml de IL-26. IFN-γ (10 ng /mL) e IL-6 (30 ng /mL) foram utilizadas como controlos de activação de STAT1 e STAT3, respectivamente (Figura 4B). Com base em estudos anteriores que mostraram que STAT1 e STAT3 vias de sinalização tem efeitos opostos sobre a tumorigénese [18], nós investigamos alvos a jusante de STAT1 e STAT3 para elucidar os mecanismos subjacentes aos efeitos proliferativos e pró-sobrevivência de IL-26 mediada por STAT1 e STAT3 sinalização em linhas celulares de GC. Os nossos resultados mostraram que a IL-26 regulada positivamente a estimulação da expressão de Bcl-2, Bcl-XL e c-myc, sugerindo que a IL-26 tem um efeito mais forte na activação da STAT3 do que em STAT1 de sinalização, directa ou indirectamente (Figura 4B). Este resultado também contribui para a nossa compreensão do pró-sobrevivência e efeito proliferativo de IL-26 em linhas celulares GC humanos.

5. O efeito promotor tumoral de IL-26 está dependente do STAT1 /Equilíbrio
STAT3

O efeito de IL-26 sobre o equilíbrio entre STAT1 e STAT3 activação foi investigada usando lentiviral mediada silenciamento de ARNsi de STAT1 e STAT3 no MKN45 e células SGC-7901. O ARNsi correspondente eficazmente regulados negativamente a expressão de STAT1 e STAT3, em ambas as linhas celulares (Figura 5A). A proliferação celular foi avaliada por ensaio de cooperação de BrdU nas células transfectadas ARNsi de controlo e linhas de células tratadas GC STAT1 e STAT3 siRNA cultivadas em meio contendo 10 ng /ml de IL-26. Knockdown de expressão STAT3 inibiu significativamente o crescimento de células MKN45 e SGC-7901, ao passo que STAT1 knockdown não teve nenhum efeito sobre a proliferação celular (Figura 5B1, B2). A cisplatina induziu apoptose foi avaliada pela PI-Anexina co-coloração V nas mesmas células mantidas em meio com 10 ng /ml de IL-26, e os resultados mostraram uma diminuição significativa no efeito pró-sobrevivência de IL-26 em células STAT3 knockdown , ao passo que não há alterações estatisticamente significativas na taxa de apoptose foram detectados em resposta ao silenciamento de STAT1 (Figura 5C1, C2). Estes resultados indicam que a IL-26 tem pró-sobrevivência e efeitos proliferativos sobre linhas de células GC humana mediadas pelo menos parcialmente, pela sinalização STAT1 /STAT3.

Discussão

Estudos anteriores mostraram que a IL-26 é co-expressa com outra citoquina relacionada com a IL-10 importante, a IL-22, que também é segregado pelas células Th17 [19], [20]. No entanto, a expressão e o papel da IL-26 em cancro humano não foi investigada em detalhe. Aqui, nós examinamos pela primeira vez que a expressão de IL-26 em tecidos humanos e GC mostrou que a IL-26 e moléculas relacionadas, tais como IL-20R1 são sobre-expressos em tecidos humanos GC.

IL-26 é co -expressed com IFN-γ e IL-22 em clones Th1 humanos, mas não em clones Th2. Além disso, a IL-26 é co-expressa com IL-17 e IL-22 por células Th17, um importante subconjunto de células T auxiliares CD4 + que é distinta de células Th1 e Th2 [12], [21]. No presente estudo, a IL-26 foi encontrada para ser produzida principalmente por células T auxiliares positivas para CD4 humano em GC, entre os quais cerca de metade das células Th17 secretadas IL-26. Foram examinados outra fonte possível celular, as células NK, as quais são referidos como sendo relacionado com o volume tumoral e a disseminação do GC humano [22], [23] e demonstrou que as células NK foram também fontes importantes de IL-26 de produção. Os nossos resultados são confirmados por um estudo recente em que se verificou um novo subconjunto de células CD56 + NKp44 + NK para co-expressa a IL-22 e IL-26, especialmente em resposta ao tratamento com IL-23 [24]. Hughes et al
. descrito um subconjunto diferente de células NK imaturas que não expressam CD56 ou NKp44 mas expressam CD117 e CD161 e constitutivamente expresso de IL-22 e IL-26 [25]. Além disso, os nossos resultados mostraram pela primeira vez que a IL-26 promove a proliferação de células humanas por GC afectando o equilíbrio de STAT1 e STAT3 activação, proporcionando assim uma nova evidência da relação entre as células NK e o volume do tumor em GC humana.

IL-26 foi avaliado para sinalizar através de um complexo receptor heterodimérico composto das cadeias IL-20R1 e IL-10R2. IL-20R1 funciona como a cadeia específica de ligação ao ligando de IL-26 e IL-10R2 funções como uma segunda cadeia essencial para completar a montagem do complexo de receptor activo. Os anticorpos neutralizantes contra, quer a cadeias IL-20R1 ou IL-10R2 são capazes de bloquear a sinalização de IL-26. Uma vez completamente montado, o complexo receptor sofre uma alteração conformacional (s) que induz a activação de tirosina-quinases Janus associadas ao receptor, Jak1 e Tyk2, e o subsequente acoplamento transiente e a fosforilação das proteínas STAT, STAT1 e STAT3 [26], [27]. Como um dos factores de sinalização a jusante de IL-26, a STAT3 é mais frequentemente associada a tumorigénese e é também considerado como um oncogene. STAT3, que é considerado um ponto de convergência de numerosas vias de sinalização oncogénicos, é constitutivamente activada tanto em células tumorais e em células do sistema imunológico no microambiente tumoral [28], [29], [30]. Em particular, a ativação STAT3 tem sido relatada em cerca de 70% dos tumores sólidos e hematológicos, incluindo mieloma múltiplo, vários linfomas e leucemia, câncer de mama, câncer de cabeça e pescoço, câncer de próstata, carcinoma do ovário, melanoma, carcinoma renal, carcinoma colorectal e do timo tumores epiteliais [31]. STAT3 é conhecido para promover a proliferação celular e angiogénese e desempenhar um papel no tumor imuno-fuga, mas também prejudica a capacidade de invasão e potencial metastático de tumores. Os nossos resultados mostraram que a STAT3 é activada em tecidos humanos GC e a sua activação pode ser associada com excesso de secreção de IL-26. Por outro lado, não foram detectadas diferenças significativas no outro alvo a jusante de IL-26, STAT1, entre tumor e tecidos normais adjacentes. STAT1 e STAT3 estão pensados ​​para desempenhar papéis opostos na tumorigênese [18]. STAT1 tem uma matriz de complexo de funções em ambas as células de tumor e o sistema imunitário e é geralmente considerado como um supressor de tumor devido ao seu papel na inibição do crescimento e na promoção de apoptose [32].

Em resumo, mostrou que a IL -26 promove o crescimento celular e previne a apoptose de células de cancro gástrico humano por modular o equilíbrio de sinalização STAT1 /STAT3, indicando que a IL-26 pode ser um indicador de prognóstico valioso e alvo terapêutico em doentes com cancro gástrico.

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