PLoS One: IL-26 Elősegíti a proliferáció és túlélés az emberi gyomorkarcinóma sejtek szabályozásával mérleg STAT1 és STAT3 Activation

absztrakt katalógusa

Az interleukin-26 (IL-26) az egyik a citokinek által Th17 sejtek, amelyek szerepe az emberi daganatok továbbra is ismeretlen. Itt megvizsgáltuk a kifejezés, illetve potenciális szerepét az IL-26 humán gyomorrák (GC). Az IL-26 és a kapcsolódó molekulákat, például az IL-20R1, STAT1 és STAT3 vizsgáltuk real-time PCR és immunohistochemisty. A hatás az IL-26 a sejt proliferációra és a cisplatin indukálta apoptózis analizáltuk BrdU együttműködés assay és a PI-Annexin V co-festéssel, ill. Lentivirális közvetített siRNS-t használjuk, hogy vizsgálja meg a hatásmechanizmusa, és az IL-26 kapcsolódó jelátviteli elemeztük Western blot. Emberi GC szövetekben mutatott megnövekedett szintű IL-26 és a hozzá kapcsolódó molekulák és aktiválását STAT3 jelátvitel, míg STAT1 aktiválás nem különbözött szignifikánsan a GC és a normál gyomor szövetekben. Ezen túlmenően, az IL-26 elsősorban által termelt Th17 és az NK sejtek. Az IL-26 elősegítette a proliferációját és túlélését MKN45, SGC-7901 gyomorrák sejtek dózis-függő módon. Továbbá, az IL-20R2 és IL-10R1, ami két lényeges receptorokat IL-26 jelátviteli, fejeztük mindkét sejtvonalban. Az IL-26 aktivált STAT1 és STAT3 jelző; Azonban a upreguláció expressziójának Bcl-2, Bcl-XL és a c-myc jelezte, hogy a hatás az IL-26 által közvetített STAT3 aktivációt. Kiütése STAT1 és STAT3 kifejezés azt javasolta, hogy a proliferatív és anti-apoptotikus hatását az IL-26 által közvetített moduláció a STAT1 /STAT3 aktivációt. Összefoglalva, emelkedett az IL-26 a humán GC elősegítik proliferációját és túlélését modulálásával STAT1 /STAT3 jelátvitel.

bevezető hivatkozás: A W, Tang Q, Zhang C, Wu J, Gu C, Wu Z, és munkatársai: al. (2013) az IL-26 Elősegíti a proliferáció és túlélés az emberi gyomorkarcinóma sejtek szabályozásával mérleg STAT1 és STAT3 aktiválás. PLoS ONE 8 (5): e63588. doi: 10,1371 /journal.pone.0063588 katalógusa

Szerkesztő: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: október 11, 2012; Elfogadva: április 2, 2013; Megjelent: május 21, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 You et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka ben támogatták a Nemzeti Természettudományi Alapítvány (81170415 XC) és Jiangsu tartomány Key tartományi Tehetségek Program (RC2011079 QT és RC2007056 XC). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák (GC) a második leggyakoribb oka a rák okozta halál a világon. GC nehéz gyógyítani még a nyugati országokban, mert gyakran nem ismeri fel, amíg az előrehaladott szakaszában a betegség [1]. Bár számos tényező társított kifejlődésével és progressziójával GC, közötti kapcsolat krónikus gyomor gyulladás, mint például atrófiás gasztritisz által indukált Helicobacter pylori és a kockázat a GC nyilvánvalóvá vált az elmúlt években [2]. A krónikus gyulladás vezető GC egy hosszú és bonyolult folyamat, amely sok éven keresztül, és az jellemzi, gyulladásos kárt a gyomor nyálkahártya, citokin által indukált DNS-szintézis és a sejt proliferáció, hiperplázia és a karcinogenezis. [3]

közötti összefüggést a krónikus gyulladás és az immunrendszer alaposan tanulmányozták, és limfociták a fő mediátorai gyulladásos promoveált karcinogenezis [4]. Th17 sejtek olyan új típusú T-limfociták, amelyek kifejezik RORγT és szekretálnak különböző citokinek, mint az IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22 és IL-26. A differenciálódását Th17 sejtek szabályozza számos citokin, beleértve az IL-1β, IL-6, IL-23, tumornekrózis-faktor-alfa (TNF-α), és a transzformáló növekedési faktor béta (TGF-β) [5], [6] . A legújabb klinikai vizsgálatok azt mutatták, hogy Th17 sejtek szorosan kapcsolódik a H. pylori kapcsolódó patológia és a karcinogenezis GC [7], [8], [9], [10]. Bár számos Th17 kapcsolatos citokinek vizsgálták, keveset tudunk a interleukin-26 (IL-26) viszonyítva a gyomor tumorok.

IL-26 egy szekretált fehérje, amely funkciók akár egy monomer vagy egy homodimer. Eredetileg által leírt Knappe et al. [11] néven AK155. Az IL-26 van gyenge, de szignifikáns szekvencia homológiát az IL-10, és az általa kódolt fehérje tehát egy tagja az IL-10 citokinek családjába, amely leginkább tartozik az osztály-2 citokin család. Az IL-26 lehet kiválasztódik a primer T-sejtek, NK-sejtek és T-sejt-klónok, és általában együtt expresszálva más fontos az IL-10-kapcsolatos citokinek, mint az IL-22 [12], [13]. Az IL-26 kötődik egy különálló sejtfelszíni receptor komplex, amely az IL-20R1 és IL-10R2 láncok, és annak funkcionális tevékenységek eltérnek által közvetített IL-10. IL-20R1 funkciók, mint a specifikus ligandum-kötő lánc az IL-26 és IL-10R2 lényeges második lánc teljes egységei az aktív receptor komplex. Semlegesítő antitestek ellen akár az IL-20R1 vagy IL-10R2 láncok képes blokkolni az IL-26 jelátviteli [12]. Miután teljesen összeszerelt, a receptor komplex megy keresztül konformációs változás (ok), hogy indukálja aktiválás a receptor-asszociált Janus tirozin-kinázok, Jak1 és Tyk2, és az azt követő tranziens dokkoló és foszforilációja a STAT fehérjék, STAT1 és a STAT3 [14], [15 ].

a Th17 kapcsolódó citokin szerepét az IL-26 tumorok nem vizsgálták. Itt megvizsgáltuk a lehetséges részvételét az IL-26 az emberi GC először, és feltárni annak pro-túlélési és proliferatív hatása in vitro katalógusa.

Anyagok és módszerek katalógusa

a betegek katalógusa

a jelen vizsgálatban 60 beteg GC műtéten átesett 2006-2009 az első Affiliated Kórház Nanjing Orvosi Egyetem, a Nanjing, Jiangsu tartomány (1. táblázat). Valamennyi kísérletet elveknek megfelelően kifejezett Helsinki Nyilatkozatban. Tájékoztatás után írásos beleegyezési génexpressziós elemzések szöveteket nyert összes beteg a műtét előtt vagy endoszkópos vizsgálat. A vizsgálati protokollt és engedélyezési eljárások hagyta jóvá az illetékes etikai bizottság az első Affiliated Kórház Nanjing Orvosi Egyetem. A diagnózis és lebonyolítása gyomorrák szerint végeztük a AJCC (TNM) Staging rendszer. Katalógusa

kvantitatív valós idejű PCR katalógusa

A reverz transzkripciós reakciót végeztünk SuperScript First-Strand szintézis rendszer ( Invitrogen, CA) a kezelés után az RNS sablonok DNáz I elkerülése genomi DNS-szennyeződést. Annak megállapításához, a relatív szintje cDNS a reverz transzkripcióval mintákat, a valós idejű PCR-t végeztünk a Roche LightCycler480 (Roche Diagnostics, USA) primerek alkalmazásával az IL-26 a következő: előre, AAGCAACGATTCCAGAAGACC és hátra, AAGTCCTCCACAAAGCGTATTTT, egy amplifikált hossza 175 bp. GAPDH-t használtunk kontrollként, a következő primerekkel: előre, AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC; fordított, GGGGTCATTGATGGCAACAATA; felerősített hosszú, 102 bp. A real-time PCR-reakciót végeztünk az utasítások szerint tartalmazza a SYBR® Premix Ex Taq ™ reagenskészlet (Takara, Japán). Az adatokat normalizáltuk a GAPDH szintje a mintákban.

ELISA

IL-26 koncentrációja a szérumban a GC betegek és az egészséges kontrollok alkalmazásával mértük a kereskedelemben kapható szendvics ELISA kitek (Biotang Inc., MA).

Western-blot analízis

a fehérjéket extraháljuk MKN45, SGC7901 és azok STAT1 és STAT3 siRNS módosított sejtvonalak, és mennyiségileg egy protein assay (Bio-Rad Laboratories, CA). A fehérje mintákat (30 ng) frakcionáltuk SDS-PAGE és átvittük egy nitro-cellulóz-membránra. Immunoblot segítségével végeztük elleni antitestek az IL-26, IL-20R1, az IL-10R2, p-STAT3 (S727), a STAT3, p-STAT1 (Y701), STAT1, Bcl-2, Bcl-XL, c-Myc és α- tubulin (összes vásárolt ABCAM, MN). Az eredményeket tettük láthatóvá kemilumineszcens detektáló rendszer (Pierce ECL Substrate Western-blot-érzékelő rendszer, Thermo Scientific, IL), és az expozíció a autoradiográfiás filmre (Kodak XAR film).

immunhisztokémiai (IHC)

a szöveteket összegyűjtöttük és rögzítettük 4% paraformaldehidben egy éjszakán át 4 ° C-on, feldolgozott, és vágjuk 5 jim vastag szakaszok. Immunhisztokémiai festése szakaszok végeztük elleni antitestekkel Az IL-26, IL-20R1, p-STAT3 (S727), és p-STAT1 (Y701) technikák alkalmazásával a korábban ismertetett [16].

BrdU Cell Proliferation Assay

Tenyésztett sejteket sűrűségben 1 × 10 ^{4 sejt /lyuk 96 lyukú lemezeken. A sejtproliferációt a 0, 12, 24, 48, 60 és 72 óra értékeltük a BrdU sejtproliferációs assay kit. BrdU-oldatot (Cell Signaling Technology, MA) adtunk mindegyik lyukhoz, a gyártó utasításai 12 órán át. A sejt proliferációs sebesség mérésével határozzuk meg, az abszorbancia 450 nm-en egy számítógéppel vezérelt mikrolemez-leolvasóval.}

izolálása és tenyésztése humán GC beszivárgott leukociták

friss tumorszövetekben kétszer mostuk RPMI 1640 . Zsíros, kötő-, és elhalt szöveteket eltávolítjuk. A szöveteket darált be 1-2 mm-es darabokra RPMI 1640, átvisszük 15 vagy 50 ml-es kúpos csövekbe, és inkubáltuk hármas enzimes emésztéssel tartalmazó táptalajon DN-áz (30 U /ml), a hialuronidáz (0,1 mg /ml), és kollagenáz (1 mg /ml) 2 órán át, szobahőmérsékleten, enyhe rázás közben. A szöveteket újra szuszpendáljuk 10 ml RPMI 1640 és átszűrjük egy 70-um sejtszűrőn (BD Pharmi). A sejteket csapdába a szűrőt helyeztünk az egyes mérőhelyek között, amely 1 ml T-sejt-tápközegben egy 24 lyukú lemez további kimutatási áramlási citometriával.

Th17 és NK sejt izolálása, stimulálása és áramlási citometria

Th17 sejteket nyert in vitro
stimulálásával CD4-pozitív perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMC-k), amelyet izoláltunk áramlási citometriával feltételek mellett (20 ng /ml IL-1β, 20 ng /ml IL-6, 20 ng /ml IL-23, 5 ng /ml TGF-β, 5 ug /ml anti-IL-12, és 5 ng /ml anti-IL-4) a korábban leírt [17]. NK-sejtek alkalmazásával kaptuk egy NK-sejt izolációs készlet vásárolt Miltenyi Biotec (Kat. 130-092-657). Th17 és az NK-sejteket tartottunk fenn in vitro
és stimulált 100 ng /ml LPS-sel és a H. pylori
lizátumokat, illetve, és elemezzük az intracelluláris citokin-festést.

intracelluláris citokin festés sejteket 37 ° C-on 5 órán át egy Leukocyte Aktiválás koktéllal (BD Pharmingen). A sejteket ezután megfestettük felszíni markerek, fix, és permeabilizáltuk IntraPre reagens (Beckman Coulter), és végül festettük intracelluláris markerek. Az adatokat szerzett a FACSVantage SE és elemzik CellQuest szoftvert. Fluorokrómmal konjugált monoklonális antitest az IL-26, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56 és RORγT vásároltunk a BD Pharmingen. Katalógusa

Cisplatin apoptózist és áramlási citometria katalógusa

A vizsgált sejteket komplett tápközegben 1 ug /ml ciszplatin 24 órán át. A sejteket tovább áramlási citometriával analizáltuk (FACSCalibur ™; BD Biosciences, NJ) alkalmazásával a PI /Annexin festő készlet (BD Biosciences).

siRNS tervezése és lentivírus Termelés és Transduction

A siRNS-ek célzás STAT1 és STAT3 terveztünk és szintetizáltunk Genscript Co. (Nanjing, Kína) az alábbiak szerint: az siRNS célzási STAT1, GGACAAGGTTATGTGTATA; és siRNS célzás STAT3, GGACATCAGCGGTAAGACC. A szintetizált siRNS szubklónoztuk lentivirális vektor pLL3.7 által Hapi katalógusa és XhoI katalógusa (New England Biolab, Egyesült Királyság), valamint kontroll siRNS és elemzi pLL3.7-cs, pLL3. 7-STAT1-siRNS és pLL3.7-STAT3-siRNS. Rekombináns lentivírus keletkezett származó 293T-sejtek [16]. Az emberi GC sejtvonalak MKN45 és SGC7901 szereztük Kaiji Biotech Co (Nanjing, Kína) és a Dulbecco-féle módosított Eagle-féle tápközeg (DMEM), amelyet 10% magzati borjúszérummal, 100 U /ml penicillint és 100 egység /ml sztreptomicinnel (Gibco , CA), és a transzdukált lentivírus alkalmazásával polibrént (8 ug /ml).

Statisztikai elemzés

Az eredményeket átlag ± SD három független kísérlet során. Közötti összehasonlításokat csoportok végeztünk a Mann-Whitney U teszt. Az összefüggés az IL-26 expresszió és a különböző klinikai jellemzőit elemeztük a Chi-négyzet próba. P értékek < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

1. Fokozott aktiválása IL-26 és a kapcsolódó STAT3 Jelzés Humán gyomorkarcinóma katalógusa

Az IL-26 expresszió humán gyomorrák vizsgáltuk 60 friss tumorszövetmintákból párosított szomszédos normál szövetben gyomor 60 GC betegeknél. Real-time PCR analízis azt mutatta, jelentős túlzott expressziója az IL-26 mRNS-t humán GC összehasonlítva a normál gyomor szövetekben (p = 0,004, Mann-Whitney U teszt) (1a ábra). Szérum IL-26 szint is szignifikánsan magasabb volt a GC betegekben, mint az egészséges kontrollokban (p = 0,0064, Mann-Whitney U teszt) (1B ábra). Továbbá analízis az IL-26 fehérje expressziója 60 paraffinba ágyazott szöveti mintákon mutatott pozitív expressziót 47 GC mintákban, és gyengén pozitív (n = 14) vagy negatív (N = 46) expressziós a szomszédos normál szövetekben. Az IL-26 pozitív sejtek elsősorban található nem-parenchymás szövetekben, ami állhat immunsejtek környező és a beszivárgó rák vagy normál gyomor szövetekben. Továbbá számszerűsítése a IHC festést eredményeket Image-Pro Plus (ver 5.0) öt random mező per dia azt mutatták, hogy az IL-26 expresszió szignifikánsan magasabb volt a GC szövetekben, mint a szomszédos normál szövetekben (P = 0,0087, Mann-Whitney U- teszt). Kimutatása és mennyiségi meghatározása az IL-20R1, egy receptor az IL-26, azt mutatta, hogy nem fejezték ki az szignifikánsan magasabb szinteket humán GC mint a normál szövetekben (P = 0,0041, Mann-Whitney U teszt). Az aktiválási állapotát a STAT1 és STAT3, amelyek fontos jelátviteli tényezők az IL-26, vizsgáltuk felhasználásával IHC elleni specifikus antitestek foszforilált maradványok. Jelentős növekedés p-STAT3 (S727) detektáltunk GC szövetekben, miközben nincs statisztikailag szignifikáns különbség a p-STAT1 (Y701) szint között észlelt emberi GC szövetek és normál szövetekben (P = 0,0094 a STAT3 és P = 0,392 a STAT1 , Mann-Whitney U teszt) (1C, D). katalógusa

elemzése összefüggést az IL-26 expresszió klinikopatológiai jellemzők mutatott statisztikailag szignifikáns összefüggést az IL-26 expresszió és a tumor mérete és H . pylori fertőzés katalógusa (1. táblázat). katalógusa

2. Th17 és NK-sejtek a fő celluláris forrásai az IL-26 az emberi gyomorkarcinóma

A sejtes forrásból az IL-26 primer T-sejtek, a természetes ölősejtek (NK-sejtek) és a T-sejt-klónok stimuláció után specifikus antigének vagy mitogén lektinek [14]. Ezért, hogy határozza meg a forrás az IL-26 a humán GC, tumor beszűrődő leukociták (TIL) izoláltunk 20 friss humán GC szövetminták és társ-festettük a különböző markerek. Az IL-26 expresszió szignifikánsan magasabb volt a CD3-pozitív sejtek (T-sejtek) a humán GC TIL mint a T-sejtekben származó perifériás vér mono-nukleáris sejteket (PBMC-k) (16,52 ± 9,32% T-TIL vs. 3,78 ± 2,91% a T-PBMC-, P < 0,0001), ami összhangban volt az eredmények a real-time PCR és IHC (ábra 2a1, A2). Közül az összes T-sejtek, 13,5 ± 3,71% a CD4-pozitív T-sejtek expresszált IL-26, míg csak 3,21 ± 2,61% a CD8 T-sejtek pozitív volt az IL-26 (ábra 2A3, A4). Továbbá, CO-festés az IL-26 CD4 és RORγt, markere Th17 sejtek, megfigyelhető volt, és 53,21 ± 16,82% Th17-t expresszáló sejtek IL-26 a humán gyomorrák minta (ábra 2a5, A6). Az IL-26 NK-sejtekben, egy másik gyakran számoltak celluláris forrás az IL-26, analizáltuk számát mérő CD3-, CD16 +, CD56 + sejtek végzett együttes festéssel IL-26, ami azt mutatta, hogy a 43.81 ± 19.44% -a összesen NK sejtek interleukin-26 (ábra 2a7, a8). Mindezzel együtt, az eredmények arra utalnak, hogy a fő celluláris forrását IL-26 humán GC voltak Th17 és NK-sejtek és az egyes komponensek százalékos arányának volna össze a kördiagram (ábra 2a9 és a10). Katalógusa

további vizsgálata az IL-26 in Th17 és az NK-sejtek, a PBMC-ket gyűjtöttünk 20 egészséges önkéntes és stimulált alatt Th17 polarizáló körülmények között. A másik fő forrása az IL-26, az NK-sejtek, példában kapott PBMC-t egy kereskedelmi humán NK izolációs készlet. A jellemzői a kiváltott vagy izolált Th17 és az NK-sejteket igazoltuk intracelluláris citokin-festéssel és a további áramlási citometriával elemezzük (ábra 2B1, b2). Stimulálása Th17 és az NK-sejtek LPS-sel és a H. pylori
lizátumokat eredményezett jelentős növekedést az IL-26, jelezve, hogy az IL-26 egy fontos citokin válasz a gyomorrák (2C ábra).

3. In vitro katalógusa proliferatív és anti-apoptotikus hatása az IL-26 katalógusa

Az IL-26-ben tovább vizsgáltuk egy sorozat in vitro katalógusa végzett vizsgálatokban két emberi GC sejtvonalak, MKN45, SGC-7901. Az IL-26 a sejt proliferációt pedig az a BrdU incooperation assay-val kezelt sejtekben különböző koncentrációjú IL-26 (1, 10 és 50 ng /ml). Nem volt lényeges különbség a sejtburjánzás mutattunk között kezeletlen sejtek és az említett kezelt 1 ng /ml IL-26. Ugyanakkor ez az arány a sejtproliferáció jelentősen nőtt válaszul 10 és 50 ng /ml IL-26, összehasonlítva a kezeletlen sejtek (3A ábra). Továbbá, értékelése az anti-apoptotikus hatását az IL-26 a PI-Annexin V co-festés-val kezelt sejtekben a kemoterápiás gyógyszer ciszplatin különböző ideig foltok azt mutatták, hogy az IL-26 volt jelentős anti-apoptotikus hatást még egy adag 1 ng /ml. Az anti-apoptotikus hatást nőtt növekvő koncentrációjú IL-26 és 10 közötti, 50 ng /ml (ábra 3B1, B2). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy az IL-26-proliferatív és anti-apoptotikus hatással van az emberi GC sejtvonalak, amely részben megmagyarázza a szövetség között az IL-26 expresszió és különböző klinikai jellemzők megfigyelhető a klinikai vizsgálatok során. Ugyanakkor a mögöttes molekuláris mechanizmust ki kell vizsgálni. Katalógusa

4. A proliferatív és anti-apoptotikus hatásokat az IL-26 van társítva STAT3 Aktiválás

Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a kötelező érvényű az IL-26 a receptorához komplex indukálhat gyors aktiválódását STAT3 és kisebb mértékben, STAT1 [ ,,,0],12]. Ezért először meghatároztuk a kifejezés az IL-26 receptor komplex (IL-20R1 és IL-10R2) A MKN45 és SGC7901 sejtek és ellenőrizte, hogy mindkét receptor jelen voltak GC sejtvonalakban, hogy erősítse meg, hogy a transzdukciós az IL-26 jeleket volt lehetséges (4a ábra). Ezután vizsgáltuk aktiválását STAT1 és STAT3 jelző- és azt mutatta, hogy a foszforiláció a S727 maradék a STAT3 és Y701 a STAT1 nőtt válaszul 10 ng /ml IL-26. IFN-γ (10 ng /ml) és IL-6 (30 ng /ml) használtunk aktiválás vezérlés a STAT1 és a STAT3, illetve (4b ábra). Korábbi tanulmányok azt mutatják, hogy STAT1 és STAT3 jelátviteli ellentétes hatással tumorogenezisben [18], megvizsgáltuk a downstream célpontok a STAT1 és STAT3 további megvilágítása a mechanizmusban, a proliferatív és pro-túlélési hatása az IL-26 által közvetített STAT1 és STAT3 jelző GC sejtvonalakban. Eredményeink azt mutatták, hogy az IL-26 stimuláció serkentett expresszióját a Bcl-2, Bcl-XL és c-myc, ami arra utal, hogy az IL-26 van egy erősebb hatással STAT3 aktiválás, mint STAT1 jelző- közvetlenül vagy közvetve (4b ábra). Ez az eredmény is hozzájárul ahhoz, hogy megértsük a pro-túlélési és proliferatív hatása az IL-26 humán GC sejtvonalak. Katalógusa

5. A tumor elősegítő hatását az IL-26 függ a STAT1 /STAT3 Balance

A hatás az IL-26 közötti egyensúly STAT1 és STAT3 aktiváció alkalmazásával vizsgáltuk lentivirális közvetített siRNS hangtompító a STAT1 és STAT3 a MKN45 és SGC-7901 sejtek. A megfelelő siRNS hatékonyan alulszabályozott expresszióját STAT1 és STAT3 mindkét sejtvonalban (5A ábra). Sejtproliferációt értékelték BrdU együttműködés assay kontroll siRNS transzfektált sejtek és STAT1 és STAT3 siRNS kezelt GC sejtvonalakat tartalmazó tápközegben növesztettük 10 ng /ml IL-26. Kiütése STAT3 expresszió szignifikánsan gátolta a növekedést a MKN45, SGC-7901 sejteket, míg a STAT1 kiütése nem volt hatása a sejt proliferációt (ábra 5B1, B2). Cisplatin indukálta apoptózis megítélése a PI-Annexin V co-festéssel ugyanabban tartott sejteket média 10 ng /ml IL-26, és az eredmények azt mutatták, jelentős csökkenését a pro-túlélési hatása az IL-26 in STAT3 knockdown sejtekben , mivel nem volt statisztikailag szignifikáns változás mértéke apoptózis detektáltunk válaszul STAT1 hangtompító (ábra 5C1, C2). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy az IL-26 olyan pro-túlélési és proliferatív hatást az emberi GC sejtvonalak által közvetített legalább részben STAT1 /STAT3 jelátvitel.

Discussion

Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy az IL-26 ko-expresszált egy másik fontos az IL-10-kapcsolatos citokin, az IL-22, amely szintén által szekretált Th17 sejtek [19], [20]. Azonban a kifejezés és a szerepe az IL-26 humán rákos nem vizsgálták részletesen. Itt megvizsgáltuk az első alkalommal az IL-26 a humán GC szövetek és azt mutatták, hogy az IL-26 és rokon molekulák, mint például az IL-20R1 expresszálódnak a humán GC szövetekben.

IL-26 co -expressed IFN-γ és IL-22 a humán Th1 klónok, de nem a Th2 klónok. Továbbá, az IL-26 co-expresszált IL-17 és az IL-22 által Th17 sejtek fontos alcsoportját CD4 + T-helper sejtek, amely különbözik a Th1 és Th2-sejtek [12], [21]. A jelen vizsgálatban, az IL-26-t találtuk, hogy elő elsősorban a CD4 pozitív T-helper sejtek humán GC, melyek közül csaknem a fele a Th17 sejtek szekretált IL-26. Megvizsgáltuk másik lehetséges celluláris forrás, NK-sejtek, amelyek a beszámolók szerint kapcsolatban áll a tumor térfogata és terjesztése az emberi GC [22], [23], és megmutatta, hogy az NK sejtek szintén fontos az IL-26 termelést. Eredményeink által támogatott egy nemrégiben készült tanulmány, amelyben egy újszerű részhalmaza CD56 + NKp44 + NK sejtek találtuk, hogy együtt fejezi ki az IL-22 és IL-26, különösen a kezelésre adott válasz az IL-23 [24]. Hughes és munkatársai katalógusa. leírtak egy másik alcsoportját éretlen NK-sejtek, amelyek nem expresszálnak CD56 vagy NKp44 de kifejezik CD117 és CD161 és konstitutíven expresszálják az IL-22 és IL-26 [25]. Sőt, mi eredmények azt mutatták, az első alkalommal, hogy az IL-26 elősegíti a proliferációját humán GC-sejtek által befolyásoló egyensúlya STAT1 és STAT3 aktiváció, ezáltal új bizonyítékok közötti kapcsolat NK-sejtek és a tumor térfogatát az emberi GC.

IL-26 leírták, hogy jeleket egy heterodimer receptor-komplex tagjai az IL-20R1 és IL-10R2 lánc. IL-20R1 funkciók, mint a specifikus ligandum-kötő lánc az IL-26 és IL-10R2 funkciók, mint alapvető második lánc befejezni a szerelvény az aktív receptor komplex. Semlegesítő antitestek ellen akár az IL-20R1 vagy IL-10R2 láncok képes gátolni az IL-26 jelátviteli. Miután teljesen összeszerelt, a receptor komplex megy keresztül konformációs változás (ok), hogy indukálja az aktiválás a receptor-asszociált Janus tirozin-kinázok, Jak1 és Tyk2, és az ezt követő tranziens dokkoló és foszforilációja a STAT fehérjék, STAT1 és a STAT3, [26] [27]. Mint az egyik jelátviteli tényezők az IL-26, STAT3 leggyakrabban társított tumorigenezis és úgy is tekinthető, mint egy onkogént. STAT3, amely tekinthető egy pont a konvergencia számos onkogén jelátviteli utakat, IS konstitutívan aktivált mind a tumorsejtekben, és az immun sejtek a tumor mikrokörnyezetében [28], [29], [30]. Közelebbről, a STAT3 aktiváció számoltak be közel 70% -át a szilárd és hematológiai tumorokat, beleértve a myeloma multiplex, több limfómák és a leukémia, mellrák, fej-nyak rák, prosztatarák, petefészek-karcinóma, melanoma, vese- karcinóma, kolorektális karcinóma és thymus epiteliális tumorok [31]. STAT3 ismert, hogy elősegíti a sejtek szaporodását és az angiogenezist, és szerepet játszanak a tumor immun-escape, de ez is rontja a invazivitását és metasztatikus potenciálját daganatok. Eredményeink azt mutatták, hogy STAT3 aktivált humán GC szövetek és az aktiválás összefüggésben lehet túlzott IL-26 szekréció. Másrészt, nem volt szignifikáns különbség mutatható ki a többi downstream célpontja az IL-26, STAT1, között a tumor és a szomszédos normál szövetekben. STAT1 és STAT3 úgy gondolják, hogy játszani ellentétes szerepeket a tumorigenezisben [18]. STAT1 van egy komplex tömb funkciók egyaránt tumorsejtek és az immunrendszer és általában tekinteni, mint egy tumorszuppresszor játszott szerepe miatt a növekedés gátlás és apoptózis promóciós [32].

Összefoglalva, kimutattuk, hogy az IL -26 elősegíti a sejtnövekedést, és megakadályozza az apoptózist a humán gyomorrák sejtek modulálja az egyensúlyt a STAT1 /STAT3 jelátvitel, jelezve, hogy az IL-26 lehet egy értékes prognosztikai indikátor és terápiás célpont a gyomor rákos betegeknél.

• PLoS One: a rövid távú klinikai vonatkozása tartozék bal artéria hepatica áteső betegek radikális gastrectomián gyomorrák
• PLoS One: Enterococcus faecalis fertőzés gyulladást okoz, intracelluláris Oxphos független ROS termelés, és DNS károsodás humán gyomorkarcinóma Cells