Абстрактный
<р> рак желудка (GC) является одним из наиболее распространенных злокачественных заболеваний во всем мире. Все новые данные показали, что отклоняющееся экспрессию микроРНК (миРНК) играет важную роль в прогрессии рака. Тем не менее, мало известно о потенциальной роли микроРНК-217 в GC. В данном исследовании мы исследовали роль микроРНК-217 на пролиферацию клеток GC и вторжения. Выражение микроРНК-217 был вниз регулируется в GC клетках и тканях человека GC. Принудительная экспрессия микроРНК-217 тормозится GC клеток пролиферации и инвазии. Кроме того, глипикан-5 (GPC5), новый ocncogene, был идентифицирован как потенциальная мишень микроРНК-217. Кроме того, избыточная экспрессия микроРНК-217 нарушения GPC5-индуцированной пролиферации продвижения и вторжения в GC клетки. В заключение, эти результаты показали, что микроРНК-217 функционирует как подавитель опухоли и ингибирует пролиферацию и инвазию клеток GC путем ориентации GPC5, которые могли бы, следовательно, служить в качестве терапевтической мишени для пациентов GC
<р> Образец цитирования:. Ван H , Dong X, X Гу, Цинь R, Цзя H, Гао J (2015) микроРНК-217 Функции в качестве потенциального опухолевого супрессора в рака желудка с помощью таргетинга GPC5. PLoS ONE 10 (6): e0125474. DOI: 10.1371 /journal.pone.0125474
<р> Редактор: Июнь Ли, Сунь Ят-сеном университета Медицинской школы, Китай
<р> Поступило: 10 октября 2014 года; Принято: 24 марта 2015; Опубликовано: 22 июня 2015
<р> Copyright: © 2015 Wang и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются
<р> Доступность данных: Все соответствующие данные находятся в пределах своих подтверждающей информации, файлов бумаги и
<р> финансирование:.. авторы не имеют никакой поддержки или финансирования сообщать
<р> конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенных злокачественных опухолей человека и второй ведущей причиной смертности от онкологических заболеваний во всем мире, с примерно миллиона новых случаев в год [1-4]. Несмотря на недавние достижения в области метода диагностики, хирургической техники и новых схем химиотерапии, курс выживания в долгосрочной перспективе для GC остается достаточно низкой [5, 6]. У многих пациентов, ГК диагностируется на продвинутой стадии с обширным вторжением и лимфатического метастазирования. Успешные стратегии лечения ограничены, а смертность высока [7]. Поэтому необходимо срочно исследовать основные молекулярные механизмы, лежащие в основе лекарственной устойчивости, гистологическую гетерогенность и развитие метастаз, чтобы идентифицировать новые маркеры для диагностики и лечения для GC
.
MicroRNAs (микроРНК) небольшие, приблизительно 22 -nucleotide, некодирующие РНК, которые функционируют как негативные регуляторы, кодирующих белок генов на пост-транскрипционном уровне [8, 9]. Связываясь с комплементарными последовательностями в 3'-нетранслируемые области (3'-UTR) их мРНК мишеней, микроРНК может вызвать прямую деградацию мРНК или ингибирование трансляционной [10-13]. Растущие доказательства показали, что микроРНК принимают участие во многих важных биологических процессов, включая пролиферацию клеток, их дифференциации, апоптоза, ангиогенеза и иммунного ответа. Дерегуляция микроРНК может привести к аномальным экспрессии генов в различных заболеваний, включая рак желудка [14-16]. Тем не менее, понимание роли и функции микроРНК в GC все еще находится в ранней стадии. Точно так же, роли многих других аберрантно выраженных микроРНК в развитии GC до сих пор неизвестны.
<Р> Подавление MIR-217 является частым событием в различные виды рака, предлагая свою важную роль в онкогенеза [17-19]. Тем не менее, мало известно о потенциальной роли микроРНК-217 в GC. В этом исследовании экспрессия микроРНК-217 была снижена в клеточных линиях GC и тканей. Кроме того, более низкая экспрессия микроРНК-217was связано со стадией pTNM. Сверхэкспрессия MIR-217 подавлено вторжение GC и пролиферацию клеток. Кроме того, анализ люциферазы репортер и вестерн-блот подтвердил, что микроРНК-217might функция как подавитель опухоли в Генеральном targetingGlypican-5 (GPC5).
Заявление по этике
<р> Все пациенты дали согласие на участие в исследовании и дали письменное информированное согласие. Это исследование и согласие было одобрено этическим советом института аффилированном Йанан больницы Куньмина медицинского университета и выполнил Хельсинской декларацией.
Образцы тканей GC человека и в паре -adjacent неопухолевой ткани желудка, которые были дальше, чем в 5 см от опухоли были получены из 50 пациентов, которым была сделана операция резекция в аффилированном Йанан больнице Куньмина медицинского университета. Свежие образцы были замораживали inliquid азот сразу после резекции и хранили при -80 ° С. Все образцы были получены с информированного согласия пациентов и были подтверждены гистологическим окрашиванием гематоксилин-эозином. Гистологическое степень рака оценивали в соответствии с критериями, установленными Всемирной организацией здравоохранения. Ни один из пациентов не получал лучевой терапии или химиотерапии до операции. Характеристики пациентов приведены в таблице S1.
Вестерн-блот
<р> Общий белок экстрагируют из замороженных образцов (или клетки) с использованием общего белка Extraction Kit (серийник, Нанкин , Китай) в соответствии с инструкциями изготовителя. Измерение концентрации белка проводили с помощью ВСА Protein Assay Kit (кейген). Вестерн-блот-анализ проводили, как описано ранее [22]. Первичные антитела, используемые для вестерн-блоттинга были кроличьи поликлональные анти-GPC5 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), мышиное моноклональное анти-GAPDH (Cell Signaling Technology, Беверли, штат Массачусетс, США).
Статистический анализ
<р> Статистический анализ проводили с использованием статистического пакета программ SPSS 17.0. Эксперименты были повторены самостоятельно, по крайней мере в три раза, и данные представлены как среднее значение ± SD. Связь между микроРНК-217 и GPC5 анализировали с использованием корреляции тест Спирмена. Сравнения между группами по статистической значимости были проведены с сопряженным Стьюдента два Стьюдента тест или однофакторного дисперсионного анализа. P &л; 0,05 рассматривалось как статистически значимое.
Выражение MIR-217 подавляются в строках GC клеток
<р> Мы, во-первых количественно уровень экспрессии микроРНК-217 в четырех линии человеческих клеток GC (SGC-7901, ГГК-27, MGC-803, MKN-45) и ГЭС-1 с использованием Нозерн-блот (рис. 1А) Уровень экспрессии микроРНК-217 wasdecreased в линиях GC клеток по сравнению с ГЭС-1. QuantitativeRT-ПЦР также показал, что экспрессия микроРНК-217 была снижена в клеточных линиях GC (SGC-7901, HGC-27, MGC-803, MKN-45) по сравнению с ГЭС-1, нормальная желудочная эпителиальной клеточной линии (рис 1В ).
MIR-217 подавляется в GC тканях
<р> Количественный ОТ-ПЦР использовали для изучения микроРНК-217 выражение в 50 тканях GC и их парными соседних нераковых тканей. Представительные гистологические характеристики GC и его парными соседних нераковых тканей были показаны на рис 2А. Среди 50 опухолевых тканей, 44 случая экспонируются снижение экспрессии микроРНК-217 по сравнению с соседними нормальными тканями (88%, 44 из 50, рис 2В). Выражение микроРНК-217 был в ГЦ тканях ниже, чем в соседних нераковых тканях (рис 2С). Кроме того, более низкие уровни экспрессии микроРНК-217 связаны со стадией pTNM ГК пациентов (рис 2D).
микроРНК -217 посттранскрипционная уменьшает экспрессию GPC5 непосредственно ориентации его 3'UTR
<р> Анализ с использованием имеющихся алгоритмов показал, что GPC5 был теоретический целевой ген микроРНК-217 (рис 4а) [24]. Для того, чтобы доказать, что микроРНК-217 непосредственно ориентированы на GPC53'UTR, мы провели гена люциферазы анализов репортер. Внематочная из микроРНК-217 пониженной активности люциферазы в репортерного гена дикого типа GPC5, но не мутант GPC5 3'UTR, указывая, что микроРНК-217 непосредственно ориентированы на GPC5 3'UTR (рис 4б). Уровень мРНК GPC5 уменьшалось после трансфекции с микроРНК-217 мимике и увеличилась после трансфекции с ингибитором микроРНК-217 с использованием QRT-ПЦР (рис 4в). В соответствии с этим результатом, способность MIR-217, чтобы регулировать экспрессию белка GPC5 была подтверждена с помощью Вестерн-блоттинга (рис 4D).
Гиперэкспрессия GPC5 способствовали распространению GC клеток и вторжения. Когда микроРНК-217 имитируют и Pez-GPC5 были котрансфицируют в ТЖК-27 клеток, микроРНК-217 экспрессия уменьшил GPC5-индуцированной пролиферации клеток GC и инвазии (рис 5А и 5С). Ингибирование GPC5 уменьшил пролиферацию клеток GC и вторжения. Когда ингибитор микроРНК-217 и shGPC5 были котрансфицируют в ТЖК-27 клеток, микроРНК-217 способствует ингибитор пролиферации shGPC5-заторможенной клеток и инвазию (фиг.5В и 5D).
В заключение, данное исследование показало, что MIR-217was подавляются в GC тканях и клеточных линиях. Низкие уровни экспрессии микроРНК-217 были связаны с pTNM стадии пациентов. выражение Внематочная микроРНК-217 приводит к подавлению пролиферации GC клеток и вторжения. Дальнейшее исследование показало, что GPC5 был потенциальной мишенью микроРНК-217. микроРНК-217 может служить прогностическим для прогноза и терапевтической мишенью для пациентов GC.
Поддержка Информация
S1 Таблица. Резюме клинико-патологическими параметров больных раком желудка
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0125474.s001
(DOCX)
S2 Таблица. Грунтовка последовательность
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0125474.s002
(DOCX)