PLoS ONE: NMe2 уменьшает пролиферацию, миграцию и инвазии клеток рака желудка Ограничить Metastasis

Абстрактный
<р> Рак желудка является одним из наиболее распространенных злокачественных заболеваний и имеет высокий уровень метастазирования. Мы предполагаем, что NMe2
(нуклеозид-дифосфат киназа 2), который ранее был рассмотрен в качестве анти-метастатического гена, играет определенную роль в инвазивности клеток рака желудка. Использование технологии чипа ткани и иммуногистохимии, мы показали, что экспрессия NMe2 была связана с уровнями дифференциации клеток рака желудка и их метастазов в лимфатические узлы. Когда NMe2
продукт гена был чрезмерно выраженное; в пробирке
стабильной трансфекции клетки из BGC823 и MKN45 линий рака желудка клеток снизили темпы пролиферации, миграции и инвазии через коллаген матрица, что говорит об ингибировании активности NMe2 в распространении и инвазии рака желудка. NMe2 может, следовательно, тяжелая в качестве маркера риска для желудка инвазии рака и потенциальной новой мишени для генной терапии, чтобы усилить или вызвать экспрессию NMe2
<р> Образец цитирования:. Лю Ю.Ф., Ян А, Лю W, Ван C, Ван M, L Zhang и др. (2015) NMe2 уменьшает пролиферацию, миграцию и вторжение клеток рака желудка по ограничению метастазирования. PLoS ONE 10 (2): e0115968. DOI: 10.1371 /journal.pone.0115968
<р> Академический редактор: Цзянь Цао, Stony Brook University, США
<р> Поступило: 18 апреля 2014 года; Принято 3 декабря 2014 года; Опубликовано: 20 февраля 2015
<р> Copyright: © 2015 Лю и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование: Это исследование было поддержано по программе поддержки для Чан-Цзян ученых и инновационной исследовательской группы в университете (PCSIRT: IRT1137) и Основные исследовательские фонды для центральных университетов (lzujbky-2013-ct06). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> Рак остается одной из ведущих причин смерти, что составляет 14,1 млн новых случаев заболевания и 8,2 миллиона случаев смерти в 2012 году [1]. Число новых случаев, как ожидается, увеличится на 70% во всем мире до 22 млн в течение следующих двух [2] десятилетий. Раки в легких, желудка, печени, толстой кишки и груди имеют самую высокую смертность [3]. Клетки рака желудка могут непосредственно распространяться на соседние органы (локальная инвазия), таких как поджелудочная железа, поперечной ободочной кишки, печени и селезенки, а также в отдаленные лимфатические узлы, легкие и костной ткани. Будучи два различных патологических процессов, локальная инвазия и метастазирование удаленного взаимосвязаны, где бывший часто способствует и распространяется последний. Генетические мутации и их аномальным продукты являются ключевыми признаками и средства обеспечения раковых клеток для пролиферации, устойчивость к апоптозу, локальная инвазия, метастазирование, иммунная, уклонение от уплаты ангиогенез, и ответ на повреждение ДНК. NME
(нуклеозид дифосфат киназа 2 или Non-метастатических клеток) представляет собой группу раковых ассоциированных и /или рак регуляции генов.

NME
состоит из семейства 10 генов, которые также известен как nm23
генов [4] и был связан с подавлением метастазирования рака и вторжение в местную ткань [5]. Среди членов этого семейства генов, NME1
и NMe2
широко изучены для их рака подавляющие деятельности. NMe2
, который отображается на хромосоме 17q21 [6,7], кодирует субъединицу киназы нуклеозид-дифосфат (НДП) [4]. Его продукт, как сообщается, ингибирует метастазы рака молочной железы и клеток меланомы; и снижение его экспрессии коррелировала с большим метастатическим потенциалом этих видов рака [8,9]. Тем не менее, NMe2
избыточная экспрессия была также связана с плохим прогнозом для нейробластомы и остеосаркома [10,11]. Кроме того, NMe2
ген не коррелировала с метастаз эндометрия гепатоцеллюлярного и карциномы щитовидной железы [12-14]. Эти, по-видимому противоречивые данные свидетельствуют о том, что NMe2 может иметь различные эффекты на различных типах раковых клеток и их способность локально вторгаются в окружающие ткани или метастазирует в отдаленные органы.
<Р> Из-за этих разнообразных NMe2 деятельности на различных типах рака, мы проанализировали ткани удалены хирургическим путем у пациентов с раком желудка и связанных с ними экспрессию NMe2 в этих тканях с их патологическими характеристиками. Это исследование патологии была дополнена в пробирке
экспериментах, где мы изучали уровень пролиферации, миграции и инвазии клеток рака желудка, которые были стабильно трансфицированных с человеческим NMe2
кДНК гиперэкспрессией свой продукт , Это в пробирке
эксперименты предназначены для понимания инвазивность раковых клеток, которые выражают различные уровни NMe2.

Материалы и методы
<р> Это исследование было одобрено этическим комитетом по проведение человеческого исследования Ланьчжоу университета, факультет медицины. Пациенты или их опекунов при условии их письменное информированное согласие перед тем, как набраны в исследование.

Tissue иммуногистохимии
<р> Мы проанализировали экспрессию NMe2 в рака желудка и соседних нормальных тканей хирургическим путем удалены из 139 пациентов, поступивших в армии областная клиническая больница в городе Ланьчжоу от 2011 до 2012. ни один из пациентов получали химиотерапии или лучевой терапии до операции. Эти удалены хирургическим путем раковые ткани обрабатывали для окрашивания гематоксилином и эозином (HE). Если коротко, то модуль воска пробило 42 отверстия диафрагмы (6 × 7 отверстий /чип) 2 мм каждая. Тканевые блоки были встроены в эти отверстия (один образец /отверстие). Этот модуль парафин затем разрезали так, что ткани из 40 пациентов, могут быть рассмотрены одновременно на одном слайде, чтобы обеспечить равномерность пятна. Для контроля, первые и последние отверстия были встроены с тканью из нераковая печени и почек, соответственно. Выражение NMe2 было обнаружено с использованием коммерческого набора для иммуногистохимии (Пекин ZSGB биотехнологии Co, Ltd) с кроличьей анти-антитела человека NMe2 (1: 300 разведение, Пекин Биосинтез биотехнологии Co, Ltd.) в соответствии с инструкциями изготовителя. Уровни экспрессии NMe2 численно оценивали как показано в таблице 1, патологоанатомом, который не знал клинической информации этих пациентов.

клеточной культуры, и кДНК трансфекция
<р> Клетки из желудка BGC823 и MKN45 линии клеток рака были приобретены у китайской академии наук (Шанхай, Китай). Клетки в BGC823 линии были родом из 62-летний мужчина с плохо дифференцированной аденокарциномы желудка и те, в линии MKN45, полученной из метастатического массы печени от 62-летней японской женщины с недифференцированной аденокарциномой желудок. Клетки из обеих линий имели остаточные уровни экспрессии NMe2 и, таким образом, идеально подходит для изучения влияния гиперэкспрессией этот продукт гена на желудочных раковых клеток в пробирке
.
<Р> Клетки культивировали в DMEM среду (Sigma, St. Louis, МО, США), содержащей 10% фетальной сыворотки теленка (Ханчжоу Sijiqing биологической инженерии материалы Лтд, Ханчжоу, Китай) при 37 ° с с 5% CO <суб> 2 и 95 % воздух. На 70-80% слияния, эти клетки были трансфицированы кДНК человеческого NMe2
гена, который был клонирован в вектор pcDNA3.1 (Shanghai GenePharma Co., Ltd. Шанхай, Китай) с использованием липофектамина 2000 в качестве носителя ДНК (Invitrogen, Grand Island, NY, США). Клетки, стабильно экспрессирующие NMe2 (обозначенный как NMe2), были отобраны путем выращивания трансфектированных клеток в среде DMEM, содержащей 1 мг /мл G418. Контрольные клетки трансфицированы с вектором pcDNA без NMe2
вставки кДНК (обозначен как насмешка) и прошли тот же выбор. Un-трансфицированные родительские клетки были также рассмотрены в качестве базовых элементов управления. Избыточная экспрессия NMe2 определяли с помощью ОТ-ПЦР для количественного определения уровня NMe2
мРНК и путем иммуноблоттинга трансфецированных клеточных лизатов с использованием поликлонального антитела NMe2 (1:. 100 разбавление, Пекин Биосинтез биотехнологии Co, Ltd)

Выделение РНК и RT-PCR
<р> Общую РНК выделяли из трансфицированных и не-трансфицированных клеток с использованием набора коммерческого выделения РНК (Takara Biotechnology, Далянь, Ляонин, Китай) в соответствии с инструкциями изготовителя. РНК (2 мкг) из каждого образца обратной транскрипции с использованием набора PrimeScript RT в соответствии с протоколом производителя. Комплементарную ДНК транскрибируется в противоположном направлении из РНК, выделенной из этих клеток амплифицировали с помощью Taq-полимеразы с использованием следующих праймеров для NMe2
кДНК: 5'-AAGCAGCACTACATTGACCTGAAA-3 '(вперед) и 5'-GGTCTCCCCAAGCATCACTC-3 ' (задний ход). Глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы (GAPDH), был также усилен в качестве контроля с использованием следующих праймеров: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 '(вперед) и 5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3' (обратный). Реакцию амплификации инициирована денатурации ДНК при 95 ° С в течение 5 мин, затем 30 циклов денатурации матрицы при 94 ° С в течение 1 мин, отжига праймеров при 60 ° С в течение 1 мин и удлинение праймера при 72 ° С в течение 1 мин. NMe2 избыточная экспрессия количественно определяется как увеличение NMe2
мРНК в два раза или больше от базовой линии, установленной бутафорских трансфицированных клеток.

Иммунофлуоресценции окрашивание NMe2
продукта
<р> Клетки, стабильно трансфицированные NMe2
кДНК и вектор транспортного средства высевали на покровные стекла и позволяли расти до слияния. Их дважды промывали охлажденным льдом фосфатно-солевым буферным раствором (PBS), фиксировали в 4% параформальдегида в PBS в течение 15 минут, делают проницаемыми с 0,5% тритона Х-100 и инкубировали с 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) в течение 30 мин, чтобы блокировать неспецифическое связывание. Затем клетки инкубируют с кроличьим антителом против человеческого NMe2 (1: 100, Пекин Биосинтез биотехнологии) в течение 24 ч при 4 ° С, с последующей инкубацией с FITC-конъюгированным вторичным антителом (1: 100, Пекин Биосинтез биотехнологии) в течение 1 ч , Все антитела разводили в PBS, содержащем 1% БСА. Ядра контрастно DAPI (1: 100 в PBS, 10 мин при комнатной температуре).

клеточного цикла анализа
<р> Клетки, стабильно экспрессирующие NMe2 и контрольных клеток в культуре, собирали и фиксировали 70% охлажденного льдом этанола при температуре 4 ° с в течение 24 ч, дважды промывали охлажденным льдом PBS, а затем обрабатывали РНКазой а (20 мкг /мл) в течение 30 мин при 37 ° с. Их инкубировали с пропидийиодидом (10 мкг /мл конечной концентрации), в темноте в течение 30 мин при комнатной температуре перед проведением анализа с помощью проточной цитометрии для плоидности ДНК.

колоний формирование анализа
<р> трансфицированных и контрольные клетки культивировали при исходной плотности 1000 клеток на 100-мм чашки для культивирования в полной среде DMEM среде в течение до 4 недель. Затем их окрашивали метиловым фиолетовым. Все колонии клеток, которые были больше, чем 2 мм в диаметре (≥50 содержали клетки) подсчитывали в трех отдельных блюд и выражали в виде среднего значения ± SEM. С целью проверки достоверности данных, мы также подсчитаны жизнеспособные клетки, которые культивировали в течение 96 часов. Если коротко, то родительские BCG823 и MKN45 клетки и клетки, которые были стабильно трансфицированы либо человека NMe2
кДНК или вектор транспортного средства (PC-ДНК 3.1) высевали при плотности 2 х 10 4 клеток /мл. Они были отделены 48-96 ч после первоначального посева с 1% -ным трипсином и центрифугировали при 1600 х г. Клеточные гранулы повторно суспендировали в PBS и инкубировали с 0,04% трипанового синего в течение 3 мин. Выжившие клетки подсчитывали на гемоцитометра.

Анализы для миграции клеток
<р> Два дополнительных анализы проводили для оценки влияния гиперэкспрессией NMe2 на скорость миграции клеток. Сначала был ранозаживляющего анализ, где клетки высевали в 6-луночные планшеты и позволяли расти до ≥ 95% сплошности. После промывания клетки дважды PBS, стерильный наконечник пипетки был использован для того чтобы поцарапать клеточный монослой (4-5 параллельных царапин /пластина). Клетки снова промывали PBS, фотографировали, чтобы пометить царапинами треки, и инкубировали с 2,5 мл не содержащей сыворотки DMEM среде. При базовой скорости миграции клеток, поцарапанный область была частично покрыта клетками мигрировали в травмированной области 24-48 ч после травмы, в результате чего в меньшем бесклеточной области. Поскольку эта ранозаживляющие анализ является полуколичественный, результаты были дополнительно подтверждены с помощью анализа миграции клеток Transwell. В кратком изложении, 6 × 10 5 клеток, суспендированных в 500 мкл бессывороточной среды, содержащей 0,1% бычьего сывороточного альбумина, высевали в Transwell (BD Biosciences), который был помещен в 24-луночный планшет. Нижняя камера содержала 500 мкл полной DMEM среды. Клетки оставляли расти в верхней камере в течение 24 ч, чтобы облегчить миграцию клеток из верхней камеры в нижнюю камеру. В конце этого периода инкубации мембрану в верхней камере фиксировали 4% параформальдегида в течение 30 мин, промывают водой перегонку, и сушат на воздухе. Клетки на противоположной стороне камеры (переселены) окрашивали 0,1% метилового фиолетового (Dade-Behring, Newark, DE) в течение 30 мин, промывали, и смотреть под восходящем правом микроскопа (х 400, NIKON). Миграция клеток была определена как количество клеток на мембране в 5 областях случайных обзора.

Анализ для проникновению клеток
<р> Transwell камеры были покрыты крысиный хвост типа I фибриллярными коллагена [15] в течение 30 мин при 37 ° С. Избыток жидкости удаляли и камеры с покрытием сушили на воздухе в течение 1 ч в стерильной среде. Клетки суспендировали в 500 мкл не содержащей сыворотки DMEM среде, содержащей 0,1% БСА до конечной плотности 6 × 10 ^{5 и высевали на коллагеновой основе в Transwell, который был помещен в 24-луночный планшет. Нижняя камера содержала 500 мкл полной DMEM среды. Клетки оставались на поверхности мембраны осторожно удаляют через 24 часа после того, как клетки высевали, и мембрану фиксировали и окрашивали для клеток, которые переселенных через коллагеновой матрицы к противоположной стороне мембраны Transwell.}

Статистический анализ

Все данные были проанализированы с помощью статистической программы SPSS 20.0. Количественные значения были выражены как среднее и SEM. Следующие статистические анализы были использованы в исследовании: Фишера точный тест или критерий хи-квадрат для определения взаимосвязи между экспрессией NMe2 и патологических характеристик ткани рака; один из способов ANOVA для сравнения групп среди родительских клеток и клеток, трансфицированных либо с вектором транспортного средства или человека NMe2
кДНК; и Pearson анализ корреляции между выражением NMe2 и дифференцировки и метастазирование раковых клеток.

Результаты

Ассоциация экспрессии NMe2 с гистологическими характеристиками рака желудка
<р> Мы собрали хирургических образцов из 139 больных с аденокарциномой желудка. В таблице 2 перечислены демографические данные этих пациентов и гистологических характеристик ткани рака от этих пациентов. Выражение NMe2 было слабым или не обнаружены в слабо дифференцированной ткани, но был интенсивным в хорошо дифференцированной ткани на уровне, сопоставимом с нормальной тканью (рис. 1). Высокий уровень экспрессии NMe2 был связан со значительно сниженной скоростью метастазами в лимфатические узлы ( р
= 0,038), но не с размером первичной опухоли и глубины инвазии рака. Анализ корреляции Пирсона показал, что экспрессия NMe2 была независимо связана с уровнем клеточной дифференцировки (г = 0,436, р
= 0,000) и распространяются на местные лимфатические узлы (г = -0,281, р <бр> = 0,001, таблица 1).

Влияние NMe2 на пролиферацию клеток рака желудка в культуре
<р> Для дальнейшего изучения связи экспрессии NMe2 с патологическими характеристиками клеток рака желудка, мы исследовали клетки от BGC823 и MKN45 линий рака желудка, который выражается NMe2 слабо на уровне по сравнению с плохо дифференцированной ткани рака (рис. 1). Эти клетки были трансфицированы с человеческим NMe2
кДНК гиперэкспрессией NMe2, как количественно измерено увеличением NMe2
мРНК (количественный RT-PCR) белкового продукта и NMe2 (иммунофлюоресценции, рис. 2 ).
<р> затем мы исследовали, как гиперэкспрессией рост регулируемых клеток NMe2 путем измерения плоидности ДНК и образование колоний этих клеток. Мы не обнаружили никакой разницы в плоидности ДНК между клетками с гиперэкспрессией NMe2 и тех не-трансфицировали и ложнотрансфицированных клеток из обеих линий (таблица 3 и S1 Рис.), Предполагая, что увеличение экспрессии NMe2 не оказывает никакого влияния на клеточных циклов. Тем не менее, NMe2 сверхэкспрессией клетки имели значительно сниженную способность к образованию колоний в культуре по сравнению с Sham трансфецированных, так и не-трансфицированных клетках (рис. 3). Это наблюдение было подтверждено результатами метода клеточного подсчета (рис. 3в)

Влияние NMe2 на клеточной миграции и инвазии
<р> Далее мы оценивали способность NMe2-гиперэкспрессией клеток мигрировать из направленная миграция является важной предпосылкой для вторжения раковых клеток в окружающие ткани. Направленный миграции был рассмотрен с использованием ранозаживляющим анализа, который измеряет скорость миграции клеток в зону повреждения, создаваемого острым предметом. Как показано на рис. 4A и 4B, ширина травмированной области после 48 часов в культурах было больше для NMe2
-transfected клеток, чем для не-трансфецировали и ложнотрансфицированных клетках. Медленная миграция была обнаружена в клетках из обеих клеточных линий, предполагая, что клетки, избыточно экспрессирующие NMe2 мигрировали гораздо медленнее. Поскольку эта ранозаживляющее анализ полуколичественного, мы также количественно измерить скорость миграции клеток с использованием анализа Transwell. В соответствии с ранозаживляющего анализа, NMe2 избыточно экспрессирующие клетки мигрируют при ~50% не трансфицированы или ложнотрансфицированных клетках (рис. 4).
<Р> Уменьшение миграции клеток может потенциально привести к снижению способности этих клеток вторгнуться в окружающие ткани. Чтобы исследовать эту возможность, мы измеряем вторжение раковых клеток к коллагеновой матрице в хорошо налаженной анализе Transwell камеры. BGC823 клетки, которые избыточно экспрессируется NMe2 значительно снижается их способность к вторжению коллагеновой матрице до 60% не трансфицированы и ложнотрансфицированных клетках (рис. 5). Скорость вторжения так же была снижена в MKN45 клетках, трансфицированных NMe2
кДНК по сравнению с родительскими клетками и те трансфицируют вектором транспортного средства (рис. 5).

Обсуждение
<р> Мы исследовали взаимосвязь между выражением NMe2 и характеристиками рака желудка в тканях хирургически удаленных из пациентов, и в культивируемых клетках из двух известных желудочных линий рака. Исследование необходимо, так как <ЕМ> NMe2
был первоначально идентифицирован в качестве первого гена-супрессора метастаза, но его способность блокировать рак локальной инвазии и метастазирования удаленный по-видимому, тип клеток среди конкретных видов рака, которые до сих пор были изучены [8- 14]. Например, анализ 35 пациентов с щитовидной папиллярной карциномы и 11 метастатических лимфатических узлов показал значительно сниженный уровень NME1
мРНК в метастатических лимфатических узлов, в то время как <ЕМ> NMe2
мРНК не изменилась в исходной опухоли и лимфатических узлов [14], предполагая, дифференциальные роли NME1 и NMe2 в инвазии и метастазирования рака. Мета-анализ 278 пациентов с раком толстой кишки, 177 с раком молочной железы, 137 с раком яичников и 77 с раком легких также обнаружили пониженный уровень экспрессии NMe2 в метастатического рака по сравнению с не метастатическим раком [17]. Тем не менее, несмотря на отрицательные ассоциации между выражением NME1 /NMe2 и инвазии рака в местный лимфатических узлов и инфильтрации эндометрия, экспрессия NME не было связано с TNM оценки и дифференциации внутриутробного мембраны карциномы и рака шейки матки [16]. Здесь мы приводим несколько линий доказательств того, что NMe2 ограничивает пролиферацию, миграцию и инвазию в внеклеточного матрикса клеток рака желудка.

Во-первых, более высокий уровень экспрессии NMe2 встречается в хорошо дифференцированной и менее инвазивной ткани от рака желудка удалены хирургическим путем до химиотерапии и лучевой терапии в большой группе пациентов (таблица 1 &Amp;. рис 1). Метастаз рака к местным лимфатических узлов чаще обнаруживаются в опухолевой ткани, которая имела низкий уровень экспрессии NMe2 и эту корреляцию между экспрессией NMe2 и дифференциации /метастаза в этих тканях пациента остается после того, как данные были разделены по возрасту, полу, размер первичной опухоли и глубина инвазии (таблица 1 &Amp; 2). Эти данные согласуются с результатами недавнего доклада, который связывает NMe2 теломер повторение связывания фактора 2 в ядре, чтобы уменьшить активность теломеразы [37], что указывает на механистическую связь между выражением NMe2 и выживания раковых клеток.
<Р> Во-вторых, мы рассмотренные эффекты сверхэкспресирующим NMe2 по темпам распространения, миграции и вторжения в внеклеточного матрикса в пробирке
клеток из двух хорошо изученных желудка линий раковых клеток BGC823 и MKN45 [18-21]. Трансфекция с человеком NMe2
кДНК привело к двукратному или более высокий уровень экспрессии NMe2 в этих клетках по сравнению с издеваться трансфицированных клеток (рис. 2). Эта избыточная экспрессия NMe2 не изменял ДНК плоидности (таблица 3), но значительно замедлили образование колоний этих клеток (рис. 3), предполагая, что гиперэкспрессией NMe2 задерживает переход от репликации ДНК в митозе. Этот результат согласуется с предыдущими сообщениями, что NMe2 не влияет на рост культивируемых раковых клеток и не связан с размером первичного рака, имплантированных в животных [22-27]. Тем не менее, это не согласуется с сообщениями, что способствует NMe2 [28,29] или уменьшает [30] распространение других типов раковых клеток. Точные причины расхождения остается в дальнейшем исследовании, но эти данные указывают на то эффекты типоспецифические ячейка NMe2
ген на патогенезе рака.
<Р> Третий, в отличие от минимального эффекта на пролиферацию клеток рака желудка, избыточная экспрессия NMe2 приводит значительное снижение миграции клеток и вторжения через матрицу коллагена, как показано в трех различных, но дополняющих друг друга анализов (рис 4 &Amp;. 5). Наши данные подтверждают предыдущие выводы подобных тормозящее действие на рак молочной железы [8], устные плоскоклеточный рак [28] и клетках меланомы [9], хотя исключения были вновь отмечены в гепатоцеллюлярной [13,29] и колоректального карциномы клеток [31]. Остается определить, является ли уменьшенный миграцию и вторжение NMe2 сверхэкспрессией клеток обусловлены снижением способности этих клеток к пролиферации.
<Р> Наши результаты определили рак желудка клетки чувствительны к сверхэкспрессии NMe2, но критический вопрос остается то, что регулирует эти различные виды деятельности NMe2 среди различных типов раковых клеток. Один потенциальный механизм является то, что активность NMe2 зависит от того, вверх и вниз по течению молекул, которые взаимодействуют с NMe2 в данном типе клеток. Несколько молекул ранее были идентифицированы, чтобы взаимодействовать или регулировать NMe2, такие как EGFR, с-ErbB-2
, с-ErbB-3
и половых стероидов рецептора при раке яичников [32]. Plakoglobin было сообщено взаимодействовать с NMe2 для содействия его экспрессии в клетках человеческого языка плоскоклеточного рака [33]. NMe2 было также обнаружено, что взаимодействие с MDM2 (Мышь двойной минут 2 гомолога), чтобы уменьшить моторику почечных клеток карциномы [34]. MDM2 является Е3 убиквитин-протеин-лигазы и служит в качестве отрицательного регулятора опухолевого супрессора р53. Отношения между NMe2
генов и генов Мус
семьи оказывается более сложным. Товары из NME1
и NMe2
гены были предложены, чтобы быть ниже по потоку от c- Мус
регуляторного пути [7] и участвует в понижающей регуляции функция Cdc42 в нейробластомы [35]. NMe2 также сообщается взаимодействовать с G-квадруплексной ДНК в нуклеазная гиперчувствительной элемент с-Мус
промотора, чтобы вызвать с-Мус экспрессию [36]. Система биологии подход для изучения этих конкретных путей вместо отдельных молекул может потребоваться рассекать ролей NMe2
гена и его продукта в различных типах рака.
<Р> Таким образом, мы показали, что избыточная экспрессия NMe2 уменьшает миграцию и инвазию клеток рака желудка в клеточной матрице в пробирке
. В результате выражение NMe2 связано с хорошо дифференцированной и менее invasitve гистологии рака желудка. Эти результаты свидетельствуют о том, что NMe2
ген и его продукт может служить в качестве потенциального маркера для прогнозирования инвазивность рака желудка, а также в качестве терапевтической мишени, которые могут быть повышающей регуляции с помощью генной терапии.

поддержка информация
S1 рис. Влияние NMe2 оверэкспрессии на желудочную раковые клетки клеточного цикла.
ДНК плоидности клеток, трансфицированных NMe2
кДНК анализировали с помощью проточной цитометрии с использованием коммерческого набора в соответствии с инструкциями изготовителя. Панели A-C были для BCG823 клеток родительских и те трансфицировали NMe2
кДНК или вектор. Панели D-F были для MKN45 клеток с теми же процедурами
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0115968.s001
(DOC)

• PLoS ONE: транскрипционные факторы и микроРНК-Co-регулируемых генов в рак желудка Вторжение в Ex Vivo
• PLoS ONE: Клиническое значение и факторы риска уединенных лимфатического узла Метастазы в желудочном Cancer