Plos ONE: NMe2 zmanjša proliferacijo, migracijo in invazijo želodčnega raka celic za Limit Metastasis

Povzetek

Rak želodca je ena izmed najpogostejših malignih obolenj in ima visoko stopnjo metastaz. Predpostavljamo, da je NMe2
(Nukleozidni difosfat kinaze 2), ki je bil predhodno obravnavati kot gen anti-metastatskega, igra pomembno vlogo v invazivnosti želodca rakavih celic. Z uporabo tehnologije tkivo čip in imunohistokemično, smo dokazali, da je bila NMe2 izraz povezan s stopnjami diferenciacije želodčne rakavih celic in njihovih metastaz v bezgavkah. Ko je NMe2
genski produkt je bil s prekomerno izražen; in vitro
stabilen transfekciji celice iz BGC823 in MKN45 celičnih linijah raka na želodcu je znižano stopnjo proliferacijo, migracijo in invazije skozi kolagen matrico, kar kaže na inhibitorno aktivnost NMe2 pri širjenju in invazije raka želodca. NMe2 bi torej velika kot označevalec tveganja za želodčne invazivnosti raka in morebitnega novega cilja za gensko terapijo za izboljšanje ali povzroči NMe2 izraz

Navedba. Liu Yf, Yang A, Liu W, Wang C, Wang M, Zhang L, et al. (2015) NMe2 Zmanjša orožja, migracije in Invazija želodca celicami raka na Limit metastaz. PLoS ONE 10 (2): e0115968. doi: 10,1371 /journal.pone.0115968

Akademska Urednik: Jian Cao, Stony Brook University, UNITED STATES

Prejeto: 18. april 2014; Sprejeto: 3. december 2014; Objavljeno: 20. februar 2015

Copyright: © 2015 Liu et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje: Ta študija je bila podprta ki jih program podpira Chang-Jiang Štipendisti in inovativna raziskovalna skupina na univerzi (PCSIRT: IRT1137) in temeljnega raziskovalnega sklada za centralnih univerz (lzujbky-2013-ct06). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pri pripravi tega rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Rak ostaja vodilni vzrok smrti, kar predstavlja 14,1 milijona novih primerov in 8,2 milijona smrti v letu 2012 [1]. Število novih primerov naj bi se povečali 70% svetovni do 22 milijonov v naslednjih dveh desetletjih [2]. Rak na pljučih, želodcu, jetrih, debelem črevesu in prsi imajo najvišjo smrtnost [3]. Želodčne rakave celice lahko neposredno razširil na sosednje organe (lokalni invazijo), kot so trebušne slinavke, prečni debelega črevesa, jeter in vranice, kot tudi na oddaljenih bezgavkah, pljučih, in kostnega tkiva. Medtem ko se dva različna patološke procese, so lokalna invazija in oddaljenih metastaz med seboj povezani, kjer se slednja pogosto spodbuja in širi slednje. Genetski mutacije in njihove neobičajne izdelki so ključne značilnosti in omogočanju rakavih celic za orožja, odpornost na apoptozo, lokalna invazija, metastaze, imunski utaje, angiogenezo in odziv na poškodbe DNK. NME
(Nukleozidni difosfat kinaze 2 ali Non-metastatskih celic) predstavlja skupino, povezanimi z rakom in /ali raka regulacijo genov.

NME
sestavljen iz družine 10 genov, ki so znani tudi kot NM23
genov [4] in je bilo povezanih s preprečevanjem rakavih metastaz in invazijo na lokalno tkivo [5]. Med člani te genske družine, NME1
in NMe2
so obširno raziskovali njihove dejavnosti raku zatiranja. NMe2
, ki se preslika na [6,7] kromosomu 17q21, kodira B podenoto nukleozidni difosfat (DRP) kinaze [4]. Njegov produkt Poročali so, da inhibira metastaze raka dojke in melanoma celic; in zmanjšanje v svojem izrazu je povezana z večjim metastatskega potenciala teh rakov [8,9]. Vendar pa je NMe2
čezmernim je bila povezana tudi s slabo prognozo za nevroblastoma in osteosarkom [10,11]. Poleg tega, NMe2
gen ni bila povezana z metastazami endometrija hepatocelularnih in ščitnice raka [12-14]. Ti očitno nasprotujoči podatki kažejo, da ima lahko NMe2 različne učinke na različne vrste rakavih celic in njihovo sposobnost za lokalno napadel okoliških tkiv ali metastaze v oddaljene organe.

Zaradi teh različnih NMe2 dejavnosti na različnih vrst raka, smo analizirali tkiva kirurško odstraniti pri bolnikih z rakom želodca in ga povezali NMe2 izraz v teh tkivih s svojimi patološkimi lastnostmi. Ta študija je patologija je bila dopolnjena s in vitro
poskusih, kjer smo pregledanih stopnje jedrskega orožja, migracije in invazije na želodcu rakavih celic, ki so bile stabilno transficirane s človeškim NMe2
cDNA za prekomerno svoj izdelek . Te in vitro
poskusi so namenjeni za razumevanje invazivnosti rakavih celic, ki izražajo različne stopnje NMe2.

Materiali in metode

Ta študija je odobrila etični odbor za vodenje ljudi raziskave Lanzhou University, School of Medicine. Bolniki ali njihovi skrbniki, če njihova pisno privolitev pred zaposlitvijo v študiji.

Tissue imunohistokemija

Analizirali smo NMe2 izraz v želodcu raka in sosednjih normalnih tkivih kirurško odstranili s 139 bolniki sprejeti v vojski Regional Hospital v mestu Lanzhou od 2011 do 2012. Brez bolnikov je prejemalo kemoterapijo ali obsevanjem, terapijo pred operacijo. Ti kirurško odstranili rakave tkiva so bili obdelani za hematoksilinom in eozin (HE) barvanjem. Na kratko, je vosek modul udaril 42 zaslonke lukenj (6 x 7 luknje /čip) vsake 2 mm. Tkivo bloki so bili vgrajeni v teh lukenj (en vzorec /luknjo). To vosek modul smo nato prerezana, tako da se lahko tkiva od 40 bolnikov preučiti istočasno na enem stekelce, da se zagotovi madežev enotnosti. Za nadzor, so prvi in ​​zadnji luknji vgrajeni s tkivom iz ne-rakasto jetra in ledvice oz. NMe2 izraz je bila odkrita z uporabo komercialno imunohistokemija komplet (Peking ZSGB Biotechnology Co, Ltd) z kunčjega anti-človeški NMe2 protitelesa (1: 300 redčenje, Peking biosintezo Biotechnology Co., Ltd) je v skladu z navodili proizvajalca. Ravni NMe2 izražanja so številčno ekipo, kot je prikazano v tabeli 1, ki jih patolog, ki je bil slep na kliničnih informacij o teh bolnikov.

celične kulture in cDNA transfekciji

Celice iz BGC823 in MKN45 želodca celične linije raka so bile kupljene iz kitajske akademije znanosti (Shanghai, Kitajska). Celice v BGC823 linije so bile prvotno od 62-letnega moškega s slabo diferencirani adenokarcinom želodca in tistimi v skladu MKN45 izhaja iz metastatskega mase jeter iz 62-letna Japonka z nediferencirani adenokarcinomom želodec. Celice iz obeh linij imel preostale stopnje NMe2 izražanja in so zato primerna za preučevanje učinka prekomerno ekspresijo tega gena proizvod na želodcu rakave celice vitro
.

Celice smo kultivirali je z DMEM medij (Sigma, St. Louis, MO, ZDA), ki vsebuje 10% fetalnega telečjega seruma (Hangzhou Sijiqing Biological Engineering Materials Co., Ltd, Hangzhou, Kitajska), pri 37 ° C s 5% CO _{2 in 95 % zraka. Pri 70-80% od sotočja, so te celice transfektirali s cDNA za človeško NMe2
gena, ki je kloniran v pcDNA3.1 vektor (Shanghai GenePharma Co., Ltd. Shanghai, Kitajska), z uporabo Lipofectamine 2000 kot nosilec DNK (Invitrogen, Grand Island, NY, ZDA). Celice stabilno izražajo NMe2 (označeno kot NMe2) so bili izbrani z gojenjem transfektiranih celic v mediju DMEM, ki vsebuje 1 mg /ml G418. Kontrolne celice transfektiramo z vektorjem pcDNA brez NMe2
cDNA vstaviti (imenovana za mock) in doživel isto izbiro. Un-transficirane starševske celice so bili pregledani tudi osnovne kontrole. Čezmernim NMe2 je bila določena z RT-PCR količinsko raven NMe2
mRNA in s immunoblots v transfekciji celičnih lizatov uporabo poliklonsko NMe2 protitelo (1:. 100 redčenje, Peking biosintezo Biotechnology Co., Ltd)}

RNA izolacija in RT-PCR

Total RNA smo izolirali iz transfekciji in netransfektiranih celic z uporabo kompleta komercialno RNA izolacije (Takara biotehnologija, Dalian, Liaoning, Kitajska), v skladu z navodili proizvajalca. RNA (2 mikrogramov) iz vsakega vzorca smo reverzno prepisana z uporabo PrimeScript RT Kit po protokolu proizvajalca. Komplementarna DNA obratno prepisane iz RNA pridobljen iz teh celic smo pomnožili s Taq polimerazo z uporabo naslednjih primerjev za NMe2
cDNA: 5'-AAGCAGCACTACATTGACCTGAAA-3 '(terminsko) in 5-GGTCTCCCCAAGCATCACTC-3 "(nazaj). Gliceraldehid 3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH) smo pomnožili tudi nadzor nad uporabo naslednjih primerjev: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 '(naprej) in 5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3' (nazaj). Reakcijo pomnoževanja smo sprožili z denaturacijsko DNA pri 95 ° C za 5 minut, čemur sledi 30 ciklov šablone denaturirnih pri 94 ° C 1min, premaz kaljenja pri 60 ° C 1min in oligonukleotidni podaljšanje pri 72 ° C 1min. NMe2 overexpression smo kvantitativno opredeljena kot povečanje NMe2
mRNA, ki ga dva krat ali več od izhodišča, ki ga navideznih transfekcije celic.

Imunofluorescenčni obarvanje NMe2
izdelka

Celice stabilno transfektirane s NMe2
cDNA in vektorja vozila so nanese na steklene coverslips in pustimo, da rastejo do sotočja. So bile dvakrat speremo z ledeno-hladno fosfatnim pufrom (PBS), določena v 4% paraformaldehida v PBS za 15min, permeabiliziramo z 0,5% Triton X-100, in inkubiramo z 1% govejega seruma albumina (BSA) za 30 min blokirati nespecifične vezave. Celice smo nato inkubirali s protitelesom kunca proti človeški NMe2 (1: 100, Beijing biosintezo Biotechnology) za 24 ur pri 4 ° C, čemur sledi inkubacija s FITC konjugiranim sekundarnih protiteles (1: 100, Beijing biosintezo Biotechnology) 1 uro . Vse protitelesa smo razredčili v PBS, ki vsebuje 1% BSA. Jedra smo jih nasprotno z DAPI (1: 100 v PBS, 10 min pri sobni temperaturi).

Cell ciklusu

celice stabilno izražajo NMe2 in kontrolnih celic v kulturi zberemo in pritrjena z 70% ledeno hladnim etanolom pri 4 ° C za 24 ur, izperemo dvakrat z ledeno mrzlo PBS, nato pa obdelamo z RNazo A (20 mg /ml) 30 minut pri 37 ° C. So inkubiramo s propidijevim jodidom (10 ug /ml končne koncentracije) v temi 30 minut pri sobni temperaturi pred analizo s pretočno citometrijo za ploidnostjo DNA.

kolonija-tvorba vsebnosti

transfektiranih in kontrolne celice kultiviramo pri začetni gostoti 1000 celic na 100 mm kulture posodo v popolni DMEM mediju do 4 tedne. Nato so obarvali z metil vijolično. Vse celične kolonije, ki so bile v premeru večji od 2 mm (vsebuje ≥ 50 celic) smo šteli v treh ločenih jedi in izražene kot povprečje ± SEM. Za potrditev podatkov, smo šteli tudi za življenje sposobne celice, ki so bile kultiviramo do 96 ur. Na kratko smo starševska BCG823 in MKN45 celice in celice, ki so bile stabilno transficirane z bodisi človeškega NMe2
cDNA ali vektorja vozila (pc-DNA 3,1) prekrita z gostoto 2 x 10 ^{4 celic /ml. Bili so samostojna 48-96 ur po začetnem sejanje z 1% tripsina in centrifugirali pri 1600 x g. Celične pelete smo ponovno suspendirali v PBS in inkubiramo z 0,04% trypan modrega 3 minute. Preživele celice so bili prešteti na hemocitometru.}

Testi za migracije celic

dva komplementarna teste smo izvedli merjenje vpliva prekomerno ekspresijo NMe2 na stopnji migracije celic. Prva je bila, celjenje ran testom, kjer so celice prekrita v 6 vdolbinicami in pustimo, da rastejo do ≥ 95% konfluentnih. Po spiranju celice dvakrat s PBS, je sterilno pipeto tip uporablja praska celic strnjena plast (4-5 vzporedne raze /ploščo). Celice smo ponovno sprali s PBS, fotografirali označiti poškodovanih skladbe, in inkubiramo z 2,5 ml seruma DMEM mediju. Na osnovni stopnji migracije celic, je bil opraskan območje delno pokrita s celicami prešle v poškodovano območje 24-48 ur po poškodbi, zaradi česar na manjšem območju brez celic. Ker je to, celjenje ran test je semi-kvantitativno, so bili rezultati še dodatno potrjeni z Transwell migracije celic testom. Na kratko, 6 x 10 ^{5 celicah, suspendirane v 500 ul v mediju brez seruma, ki vsebuje 0,1% BSA zasadimo v Transwell (BD Biosciences), ki je bila dana v 24 vdolbinicami. Spodnja komora vsebuje 500 xl popolne DMEM medija. Celice pustimo, da rastejo v zgornji komori 24 ur, da se olajša migracijo celic iz zgornje komore v spodnjo komoro. Na koncu tega inkubacijski dobi, je membrana v zgornji komori pritrjen s 4% paraformaldehida v 30 minutah speremo z vodo destilirati in posušimo na zraku. Celice na nasprotni strani komore (transmigrated) smo obarvali z 0,1% metil vijoličasto (Dade-Behring, Newark, DE) 30 minut, izperemo in gledano pod up-desno mikroskopom (x 400 Nikon). Cell migracija je bila opredeljena kot število celic na membrani v 5 naključnih področjih pregleda.}

Test za mobilni invazije

Transwell zbornice so bile obložene z vrsto rat repa I fibrilarnega kolagen [15] 30 min pri 37 ° C. Presežek tekočine smo odstranili in prevlečena komore smo posušili na zraku 1 uro v sterilnem okolju. Celice smo suspendirali v 500 ul iz seruma DMEM mediju, ki vsebuje 0,1% BSA do končne gostote 6 x 10 ^{5, prevlečeni na kolagensko matrico v transwell, ki je bila dana v 24 vdolbinicami. Spodnja komora vsebuje 500 xl popolne DMEM medija. Celice ostal na površini membrane bili previdno odstranimo 24 h po bile celice zasejali in membrana je fiksna in obarvamo za celice, ki so transmigrated skozi kolagensko matrico na nasprotni strani transwell membrane.}

Statistična analiza

Vsi podatki so bili analizirani s pomočjo statističnega programa SPSS 20.0. Količinske vrednosti so izražene kot povprečje in SEM. Naslednje statistične analize so bili uporabljeni v študiji: Fisherjev natančni test ali test hi-kvadrat za opredelitev razmerja med NMe2 izražanja in patološke značilnosti raka tkiva; eden od načinov, ANOVA za skupinsko primerjavo med starševske celice in celice transfekciji bodisi vektor vozila ali človeka NMe2
cDNA; in Pearson analiza za korelacijo med NMe2 izražanja in diferenciacijo in metastaze rakavih celic.

Rezultati

Združenje NMe2 izražanja s histološko raka želodca

Zbrali smo kirurških vzorec iz 139 bolnikih z adenokarcinomom želodca. Tabela 2 navaja demografske podatke teh bolnikov in histoloških značilnosti raka tkiva od teh bolnikov. NMe2 izraz je bila slaba ali ne zazna v slabo diferencirano tkivo, vendar je bilo intenzivno tudi diferencirano tkivo na ravni, ki je primerljiva s sosednjih zdravih tkivih (sl. 1). Visoka stopnja NMe2 izražanja je bila povezana z bistveno znižano stopnjo metastaz v bezgavkah ( p
= 0,038), ne pa z velikostjo primarnega tumorja in globine raka invazijo. Analiza Pearson korelacija je pokazala, da je bila NMe2 izraz neodvisno povezana s stopnjo diferenciacije celic (r = 0,436, p
= 0,000) in se razširil na lokalnih bezgavk (r = -0,281, p
= 0.001, tabela 1).

Vpliv NMe2 o širjenju želodca rakavih celic v kulturi

Da bi še dodatno preuči združenje NMe2 izražanja s patološkimi lastnostmi želodca rakavih celic, smo proučevali celice iz BGC823 in MKN45 raka želodca vodov, ki izražen NMe2 šibko na ravni primerjavi s slabo diferenciranega tkiva raka (sl. 1). Te celice smo transfektirali s človeškim NMe2
cDNA s čezmerno NMe2 kvantitativno merjena s povečanjem NMe2
mRNA (kvantitativno RT-PCR) in NMe2 proteinskega produkta (imunofluorescence, sl. 2 ).

nato smo raziskovali, kako prekomerno ekspresijo NMe2 rast regulirana celic z merjenjem ploidnost DNA in nastanek kolonij teh celic. Zaznali smo, da ni razlike v ploidnostjo DNA med celicami s prekomerno ekspresijo NMe2 in tiste netransfektiranih in modelnimi transfekcije celic iz obeh linij (tabela 3 in S1 sl.), kar kaže, da je povečanje NMe2 izražanja ne vpliva na celičnih ciklov. Vendar, NMe2-prekomerno ekspresijo celic imela bistveno zmanjšano sposobnost, da tvorijo kolonije v kulturi v primerjavi z lažnim transfektirana in netransfektiranih celic (sl. 3). Ta ugotovitev je bila potrjena z rezultati iz metode celice štetje (sl. 3C)

Vpliv NMe2 na celični migraciji in invazije

Naslednja ocenili sposobnost NMe2-prekomerno ekspresijo celic za selitev, saj usmerjane migracije je pomemben predpogoj za invazijo rakavih celic v okolici tkiva. To directional migracije je preučila uporabo celjenje rane testa, ki meri stopnjo celic migracij v območju škodo, ki jo ostrim predmetom ustvarili. Kot je prikazano na sliki. 4A in 4B, je širina poškodovanega območja po 48 ur v kulturah večja za NMe2
-transfected celice kot za netransfektiranih in navidezno transfekcije celic. Počasno migracije je bilo v celicah od obeh celičnih linijah, kar pomeni, da celice s prekomerno ekspresijo NMe2 izselili veliko počasneje. Ker je to celjenje ran testa semi-kvantitativno, smo tudi kvantitativno izmeri hitrost migracije celic z uporabo Transwell testa. Skladna s testom, celjenje ran, NMe2 prekomerno ekspresijo celic migrira v ~50% od netransfektiranih ali demonstracijskimi transfektirali celic (sl. 4).

zmanjšanje migracije celic bi lahko zmanjšalo sposobnost teh celic invazijo v okoliška tkiva. Da bi raziskali to možnost, merimo invazijo rakavih celic na kolagena matrico v uveljavljenem transwell komorni testom. BGC823 celice, ki prekomerno NMe2 bistveno zmanjša njihovo sposobnost, da napadejo kolagensko matrico 60% netransfektiranih in modelnimi transfektiramo celice (sl. 5). Stopnja invazije bil podobno zmanjša MKN45 celic, transfektiranih s NMe2
cDNA v primerjavi s starševske celice in tiste, transfektirana z vektorjem vozila (sl. 5).

Diskusija

smo raziskovali odnos med izražanja in značilnosti raka želodca v tkivih kirurško odstranili iz bolnikov NMe2 in v gojenih celic iz dveh znanih želodčnega raka linij. Študija je potrebno, ker NMe2
je bila prvotno opredeljena kot prva gen metastaz supresor, vendar se zdi, da je tip celic posebno med raka, ki so se doslej proučevali [8- njegovo sposobnost, da blokira raka lokalno invazijo in daljinski metastaze 14]. Na primer, analiza 35 bolnikov s ščitnico papilarnega karcinoma in 11 metastatskih bezgavk so pokazale bistveno nižjo raven NME1
mRNA v metastatskih bezgavk, ker NMe2
mRNA ni bila spremenjena v prvotni tumor in bezgavke [14], kar kaže na razlikovalne vloge NME1 in NMe2 v invaziji raka in metastaz. Meta-analiza 278 bolnikov z rakom debelega črevesa, 177 z rakom dojke, 137 z rakom na jajčnikih in 77 z rakom na pljučih najti tudi znižano stopnjo NMe2 izražanja v metastatskim rakom v primerjavi z ne-metastatskega raka [17]. Kljub negativni povezanosti med NME1 /NMe2 izražanja in raka invazije na lokalne bezgavke in endometrija infiltracija, NME izraz ni bila povezana z TNM rezultati in diferenciacijo maternici membrane raka in raka materničnega vratu [16]. Tukaj, nudimo več vrstic dokazov, ki NMe2 omejuje proliferacijo, migracijo in invazijo na ekstracelularnega matriksa želodca rakavih celic.

Najprej se ugotovi, višja raven NMe2 izražanja v dobro diferencirani in manj invazivne tkivo zaradi raka želodca kirurško odstraniti pred kemoterapijo in radioterapijo v veliki kohorti bolnikov (tabela 1 &. slika 1). Metastaze raka na lokalnih bezgavk je bolj pogosto najdemo v tkivu raka, ki so imele nizko stopnjo NMe2 izražanja in to korelacijo med NMe2 izražanja in diferenciacija /metastaz v teh tkivih bolnikov ostane po tem, ko so bili podatki, stratifikacija za starost, spol je velikost primarnega tumorja in globina invazije (Tabela 1 & 2). Te ugotovitve so skladne z nedavnem poročilu, ki NMe2 veže telomere ponovitev zavezujoč faktor 2 v jedru, da se zmanjša aktivnost telomeraze [37], kar kaže na sistematično povezavo med NMe2 izražanja in preživetje rakavih celic.

Na drugi strani smo preučeni učinki prekomernega izražanja NMe2 na delež proliferacijo, migracijo in invazije na zunajcelični matriks in vitro
celic iz dveh dobro študiral želodčni rak celičnih linijah BGC823 in MKN45 [18-21]. Transfekcija s človekom NMe2
cDNA povzročila dvakratno ali večjo stopnjo NMe2 izražanja v teh celic v primerjavi z navidezno transfektirane celice (sl. 2). To NMe2 čezmernim niso spremenile DNA ploidije (tabela 3), vendar je močno upočasnila tvorbo kolonije teh celic (sl. 3), kar kaže, da je prekomerno ekspresijo NMe2 upočasni prehod od replikacije DNA z mitozo. Ta rezultat je skladen s prejšnjimi poročil, ki NMe2 ne vpliva na rast gojenih rakavih celic in ni povezana z velikostjo primarnega raka vsadi v živalih [22-27]. Vendar pa je v nasprotju s poročili, da NMe2 spodbuja [28,29] ali zmanjša [30] širjenje drugih vrst rakavih celic. Natančni razlogi za neskladnost je treba še dodatno raziskati, vendar ti podatki kažejo, tip značilne učinke celic za NMe2
gen o patogenezi raka.

Tretje, v nasprotju z minimalnim učinkom o širjenju želodca rakavih celic, prevelike količine NMe2 posledico znatno zmanjšanje celični migraciji in invazije skozi kolagenske matrico, kot je prikazano v treh različnih, vendar komplementarnih teste (sliki 4 &. 5). Naši podatki potrjujejo prejšnje ugotovitve podobnih zaviralne učinke na raka dojke [8], oralno rakom skvamoznih celic [28] in celice melanoma [9], čeprav so izjeme ponovno opozoriti na jetrnih celic [13,29] in karcinomi celic [31]. Treba je še treba določiti kot ali zmanjša migracije in vdor NMe2-prekomerno ekspresijo celic so posledica zmanjšano sposobnost teh celic do orožja.

Naši rezultati označene želodčnih rakave celice tako občutljiva, da pretirano izražena NMe2, ampak Ključno vprašanje ostaja, kaj ureja te različne dejavnosti NMe2 med različnimi vrstami rakavih celic. Ena od možnih mehanizem je, da je dejavnost NMe2 odvisna od nabavnih in prodajnih molekul, ki sodelujejo z NMe2 v določenem tipu celic. so bili predhodno ugotovljenih več molekul za interakcijo ali urejanje NMe2, kot EGFR, c-erbB-2
, c-erbB-3
in seks steroid receptor v karcinom jajčnikov [32]. Plakoglobin so poročali za interakcijo z NMe2 za spodbujanje svoj izraz v celice iz človeškega jezika skvamoznega karcinoma [33]. NMe2 Ugotovljeno je bilo tudi za interakcijo z Mdm2 (Mouse dvojna minut 2 homolog) zmanjšanje gibljivost ledvičnih celic karcinoma [34]. Mdm2 je E3 ubikvitin-protein ligazo in služi kot negativni regulator supresorski na p53 tumorja. Razmerje med Zdi se, da bolj zapleteno NMe2
genov in genov myc
družino. Proizvodi NME1
in NMe2
geni so predlagali, da je dolvodno od C- myc
regulativnega poti [7], ki so vključeni v zmanjšanjem števila CDC42 funkcija nevroblastoma [35]. NMe2 poročajo tudi interakcijo z G-kvadrupleksa DNA v nukleazo preobčutljivimi element c-myc
promotor za indukcijo c-myc izraz [36]. Pristop sistem biologija, naj preuči te posebne poti namesto posameznih molekul, se lahko zahteva, da razklati vloge NMe2
gena in njegovega izdelka v različnih vrst raka.

Če povzamemo, smo dokazali da čezmernim NMe2 zmanjšuje migracijo in vdor želodčnih rakavih celic na matriksa in vitro
. Kot rezultat je NMe2 izraz povezan z dobro diferencirano in manj invasitve histologijo raka želodca. Ti rezultati kažejo, da je NMe2
gen in njegov izdelek lahko služi kot potencialni marker za napovedovanje invazivnosti raka želodca in tudi kot terapevtski cilj, da se lahko do urejene z gensko terapijo.

Podpora Informacije
S1 sl. Učinek NMe2 prekomerno na ciklus želodca rakave celice celice.
Ploidnost DNA celic, transfektiranih s NMe2
cDNA smo analizirali s pretočno citometrijo z uporabo komercialne opreme v skladu z navodili proizvajalca. Plošče A-C so za starševski BCG823 celice in tiste transfektirali z NMe2
cDNA ali vektor. Plošče D-F so bili za MKN45 celic z enakimi zdravljenja
doi:. 10,1371 /journal.pone.0115968.s001
(DOC)

• Plos ONE: Transcription Dejavniki in microRNA-Co-reguliranih genov želodčnega raka invazijo v ex vivo
• Plos ONE: klinični pomen in tveganja Dejavniki samotno bezgavko metastaze želodčnega raka