PLoS One: NMe2 Csökkenti szaporodása, migrációja és invázió a gyomorrák sejtek Limit metasztázis

absztrakt

gyomorrák egyik leggyakoribb rosszindulatú betegségek és magas aránya metasztázist. Feltételezzük, hogy NMe2 katalógusa (nukleozid difoszfát kináz 2), amely korábban tekinthető, mint egy anti-metasztatikus gén szerepet játszik a invazivitását gyomor rákos sejteket. Egy szövet chip technológia és immunhisztokémia, kimutattuk, hogy NMe2 expresszió társított szintje differenciálódását gyomorrák sejtek és az áttétek a nyirokcsomók. Ha az NMe2 katalógusa gén termék túlzott fejezi ki; in vitro katalógusa stabil transzfekció sejtek BGC823 és MKN45 gyomorrák sejtvonalakon is kedvezményes proliferáció, migráció, és invázió a kollagén mátrix, ami arra utal, gátló aktivitását NMe2 a terjedési és invázió gyomorrák. NMe2 Ezért lehet súlyos, mint rizikót gyomorrák invazív és a lehetséges új cél génterápia, hogy fokozza vagy indukálja NMe2 kifejezés. Katalógusa

Citation: Liu yf Yang A, Liu W, Wang C, Wang M, Zhang L, et al. (2015) NMe2 Csökkenti szaporodása, migrációja és invázió a gyomorrák sejtek Limit áttétet. PLoS ONE 10 (2): e0115968. doi: 10,1371 /journal.pone.0115968 katalógusa

Akadémiai Kiadó: Jian Cao, a Stony Brook Egyetem, Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: április 18, 2014; Elfogadva: december 3, 2014; Megjelent: február 20, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Liu et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány támogatott a program támogatja a Chang-Jiang Tudósok és innovatív Research Team University (PCSIRT: IRT1137) és az alapkutatás alapokra a Központi Egyetemi (lzujbky 2013-ct06). A finanszírozók nem volt szerepe a vizsgálat tervezése, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezetés katalógusa

a rák továbbra is a vezető halálok, a számviteli 14,1 millió új esetet és 8,2 millió halálesetet 2012-ben [1]. A számok az új esetek várhatóan növelni 70% világszerte 22 millió a következő két évtizedben [2]. Rák a tüdő, a gyomor, a máj, a vastagbél és a mellek a legmagasabb halálozási [3]. Gyomor rákos sejtek közvetlenül átterjedhet a szomszédos szervek (helyi invázió), mint például a hasnyálmirigy, a keresztirányú vastagbél, a májban és a lépben, valamint a távoli nyirokcsomók, a tüdő, és csontszövet. Miközben két különböző patológiai folyamatok lokális invázió és metasztázis távoli vannak összekötve, ahol az előbbi gyakran elősegíti és terjed az utóbbi. Genetikai mutációk és azok aberráns termékek kulcsfontosságú fémjelzi és Enablers rákos sejtek proliferációra, ellenállás apoptózis, a helyi invázió, metasztázis, immun kijátszása, angiogenezis, és a válasz a DNS-károsodásra. NME katalógusa (nukleozid difoszfát kináz 2 vagy nem áttétes sejtek) csoportját képviseli rákkal kapcsolatos és /vagy a rák-gének szabályozásában. Katalógusa

NME katalógusa családjából áll 10 gének is ismertek, mint a NM23
gének [4] és összefüggésbe hozták a elnyomja a rák metasztázis és invázió a helyi szöveti [5]. Tagjai közül a gén család, NME1 katalógusa és NMe2 katalógusa kiterjedten vizsgálták a rák-gátló tevékenységek. NMe2 katalógusa, amely leképezve kromoszómán 17q21 [6,7], kódolja a B alegység a nukleozid-difoszfát (NFT) kináz [4]. A termék leírták, hogy gátolja a metasztázis mellrák és melanoma sejtek; és csökken a expressziója korrelált a nagyobb metasztatikus potenciálja ezeket a rákos megbetegedések [8,9]. Azonban NMe2 katalógusa túlexpressziót is rossz prognózissal társul a neuroblasztóma és oszteoszarkóma [10,11]. Sőt, a NMe2
gén nem korrelált a metasztázis az endometrium hepatocellularis és pajzsmirigy-karcinóma [12-14]. Ezek a látszólag ellentmondó adatok arra utalnak, hogy NMe2 differenciális lehet hatást gyakorolnak a különböző típusú rákos sejteket, és képesek helyileg terjedtek át a környező szövetekbe vagy áttétet távoli szervekben. Katalógusa

Mivel ezek a változatos NMe2 tevékenységek különböző ráktípusok, elemeztük szöveteket műtétileg eltávolított gyomorrákos betegeknél és a kapcsolódó a NMe2 kifejezés ezekben a szövetekben a patológiai jellemzőit. Ezt a patológia tanulmány egészítette ki in vitro
kísérletekben, ahol megvizsgáltuk aránya proliferáció, migráció és invázió gyomor rákos sejtek, amelyeket stabilan transzfektáltunk a humán NMe2
cDNS túltermelése a termék . Ezek in vitro katalógusa kísérletek lényege, hogy megértsék a invazív rákos sejtek, amelyek kifejezik a különböző szintű NMe2. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Ez a tanulmány által jóváhagyott etikai bizottság végző humán kutatás Lanzhou University, School of Medicine. A betegeket vagy gyámok, ha azok írásos beleegyezést előtt toboroznak a tanulmány. Katalógusa

Tissue immunhisztokémiai katalógusa

Elemeztük NMe2 kifejezés a gyomorrák és a környező ép szövetek műtéti úton eltávolították 139 felvett betegek a hadsereg regionális Kórház a város Lanzhou a 2011-től 2012-ig nem beteg kapott kemoterápia vagy sugárkezelés a műtét előtt. Ezek műtéti úton eltávolították a rákos szöveteket feldolgozott hematoxilin-eozin (HE) festés. Röviden, a viasz modul vágtunk 42 rekesz lyukak (6 × 7 lyuk /chip) 2 mm-es minden. Szövetblokkok ágyaztuk ezek a lyukak (egy minta /lyuk). Ez a viasz modul ezután szekcionált, hogy a szöveteket a 40 beteg lehetne vizsgálni egyszerre egy dia, hogy biztosítsa folt egységesség. A kontroll, első és utolsó lyukak voltak beágyazott szövetet a nem-rákos máj és a vese, ill. NMe2 expressziós detektáltuk kereskedelmi immunhisztokémiai készlet (Peking ZSGB Biotechnology Co, Ltd.) egy nyúl anti-humán NMe2 antitesttel (1: 300 hígítás, Peking bioszintézise Biotechnology Co, Ltd.) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Szintek NMe2 kifejezés arra számszerűen értékeljük, az 1. táblázatban látható egy patológus, aki nem ismerte a klinikai adatok ezen betegek. Katalógusa

Sejttenyésztés és cDNS transzfekció katalógusa

A sejteket a BGC823 és MKN45 gyomor- rákos sejtvonalak vásárolt a kínai Tudományos Akadémia (Sanghaj, Kína). Sejtek a BGC823 vonalon eredetileg egy 62 éves férfi rosszul differenciált adenocarcinoma a gyomor és amelyek az MKN45 származó vonal egy áttétes tömege a máj egy 62 éves japán nő, differenciálatlan adenocarcinoma a gyomor. Sejtek mindkét vonal volt maradék szintje NMe2 kifejezés, és ezért ideális hatásait tanulmányozzuk a túltermelő e gén terméket gyomorrák sejtek in vitro katalógusa.

A sejteket egy DMEM közegben (Sigma, St. Louis, MO, USA), amely 10% borjú-magzat szérumot (Hangzhou Sijiqing biológiai Engineering Materials Co., Ltd., Hangzhou, Kína), 37 ° C-on, 5% CO _{2 és 95 % levegő. 70-80% -a összefolyás, ezeket a sejteket transzfektáltunk a cDNS az emberi NMe2
gént klónoztuk egy pcDNA3.1 vektorba (Shanghai GenePharma Co., LTD. Shanghai, Kína) Lipofectamine 2000 mint a DNS-t hordozó (Invitrogen, Grand Island, NY, US). A sejteket stabilan expresszáló NMe2 (kijelölt NMe2) választott ki növekvő transzfektált sejteket a DMEM tápközegben, amely 1 mg /ml G418-cal. Kontroll sejteket transzfektáltunk a pcDNA vektor nélkül a NMe2
cDNS-inszert (kijelölt mock), és ment az azonos kiválasztása. Un-transzfektált szülői sejteket is megvizsgálták, kiindulási ellenőrzéseket. Egy overexpressziója NMe2 határoztuk meg RT-PCR számszerűsíteni a szint NMe2
mRNS és immunoblot transzfektált sejt lizátumok felhasználásával egy poliklonális NMe2 antitesttel (1: 100 hígítás, Peking bioszintézise Biotechnology Co, Ltd.).}

RNS izolálás és RT-PCR

Teljes RNS-t izoláltunk a transzfektált és nem transzfektált sejtek alkalmazásával kereskedelmi RNS-izoláló reagenskészlet (Takara Biotechnology, Dalian, Liaoning, Kína), a gyártó utasításai szerint. RNS-t (2 ug) Minden egyes mintából reverz transzkripcióval segítségével PrimeScript RT Kit, a gyártó utasításai szerint. A komplementer DNS-t reverz transzkripcióval a kivont RNS ezekben a sejtekben amplifikáltuk Taq polimeráz az alábbi primerek használatával az NMe2
cDNS: 5'-AAGCAGCACTACATTGACCTGAAA-3 '(forward) és 5'-GGTCTCCCCAAGCATCACTC-3 "(fordított). Glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH) szintén amplifikáltuk kontrollként az alábbi primerek használatával: 5'-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 '(forward) és 5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3' (reverz). Az amplifikációs reakciót megindítjuk denaturáló DNS, 95 ° C-on 5 perc, amelyet 30 ciklus sablon denaturáló 94 ° C-on 1 perc, a primerek rákapcsolása 60 ° C-on 1 perc, és primer extenzió 72 ° C-on 1 perc. A NMe2 túlexpressziót mennyiségileg meghatározni növekedése NMe2 katalógusa mRNS két szeres vagy nagyobb a kiindulási által színlelt transzfektált sejtekben. Katalógusa

Immunfluoreszcenciás festés NMe2 katalógusa termék

stabilan transzfektált sejteket a NMe2
cDNS és a jármű vektor szélesztünk üveg fedőlemezen, és hagytuk növekedni, amíg összefolyása. Ezeket kétszer öblítjük jéghideg foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS), fix 4% paraformaldehid PBS-ben 15 percig, permeabilizált 0,5% Triton X-100, és inkubáltuk 1% szarvasmarha-szérumalbumin (BSA) 30 perc, hogy blokkolja a nem-specifikus kötődés. A sejteket ezután inkubáltuk nyúl antitest ellen humán NMe2 (1: 100, Peking bioszintézise Biotechnology) 24 órán át 4 ° C-on majd inkubáltuk egy FITC-konjugált másodlagos antitesttel (1: 100, Peking bioszintézise Biotechnology) 1 óra hosszat . Minden antitest hígítottunk PBS-ben, amely 1% BSA-ban. A sejtmagokat ellenfestjük DAPI-t (1: 100 PBS-ben, 10 perc szobahőmérsékleten).

cell cycle analysis

sejteket stabilan expresszáló NMe2 és kontroll sejtek tenyészetben összegyűjtjük és fixáltuk 70% jéghideg etanollal 4 ° C-on 24 óra hosszat, kétszer mossuk jéghideg PBS-sel, majd kezeljük RNáz a (20 ng /ml) 30 percig 37 ° C-on. Ezek inkubáltuk propidium-jodidot (10 ng /ml végső koncentráció), sötétben 30 percig szobahőmérsékleten mielőtt az áramlási citometriás elemzés DNS ploiditás.

Colony-képződés vizsgálatban

A transzfektált és ellenőrzési sejteket kezdeti sűrűségben 1000 sejt per 100 mm-es tenyésztőedényben egy komplett DMEM közeg legfeljebb 4 hétig. Ezeket azután festettük metilibolya. Minden sejt a telepeket, amelyek nagyobbak voltak, mint 2 mm átmérőjű (tartalmazott ≥50 sejtek) megszámoltuk három különböző ételek és átlag ± SEM. Abból a célból, az adatok érvényesítését, mi is számít életképes sejteket, hogy már tenyésztettük, akár 96 órán át. Röviden, a szülői BCG823 és MKN45 sejtek és sejtek, amelyek stabilan transzfektáltunk vagy egy humán NMe2
cDNS vagy a jármű vektor (PC-DNS 3.1) sűrűséggel 2 x 10 ^{4 sejt /ml. Ezeket különálló 48-96 óra után a kezdeti beoltás 1% tripszint és centrifugáltuk 1600 x g-. A sejtüledéket újra szuszpendáljuk PBS-ben, és inkubáltuk 0,04% -a tripánkék 3 percig. A túlélő sejteket megszámoltuk hemocitométert. Katalógusa}

Vizsgálatok a sejtek migrációját katalógusa

Két egymást kiegészítő vizsgálatokat végeztünk hatásának mérésére a túltermelő NMe2 az arány sejtek migrációját. Első egy sebgyógyító assay, ahol sejteket szélesztettünk 6 lyukú lemezekre, és hagyjuk növekedni a ≥ 95% konfluens. Mosás után a sejteket kétszer PBS, steril pipetta hegyét használták karcolja egysejtrétegekre (4-5 párhuzamos karcolások /lemez). A sejteket ismét mostuk PBS-sel, fényképezett, hogy jelölje karcos pálya, és inkubáltuk 2,5 ml szérummentes DMEM-közegben. Egy kiindulási mértékétől sejtmigráció, a karcolt terület részben fedett sejtek által vándoroltak be a sérült terület 24-48 órán sérülés után, ami egy kisebb sejtmentes területen. Mivel ez a sebgyógyító assay szemikvantitatív, az eredményeket tovább hitelesítette egy Transwell sejt migrációs vizsgálattal. Röviden, 6 × 10 ^{5 sejt szuszpendáljuk 500 ul szérummentes tápközegben, amely 0,1% BSA-t vittük egy Transwell (BD Biosciences), hogy helyeztünk egy 24 lyukú lemezen. Az alsó kamra tartalmazott 500 ul komplett DMEM közegben. A sejteket hagytuk növekedni a felső kamrában 24 óra hosszat, hogy megkönnyítsék a sejtek migrációját a felső kamrából az alsó kamrába. A végén ezt inkubációs periódus után a membrán a felső kamrában rögzítettük 4% paraformaldehidet, 30 percig, mostuk distill vízzel, és levegőn szárítottuk. A sejteket a szemközti oldalon a kamra (transzmigrált) megfestettük 0,1% -os metil-ibolya (Dade-Behring, Newark, DE) 30 percig, mostuk, és megtekinthető alatt akár jobb mikroszkóp (x 400, Nikon). A sejtmigrációt definiáltuk számok a sejtek a membrán 5 véletlen felülvizsgálat mezőket.}

Vizsgálat sejtek invázióját

Transwell kamrákat bevonva patkány farok I. típusú fibrilláris kollagén [15] 30 percig 37 ° C-on. A felesleges folyadékot eltávolítottuk, és a bevont kamrákat levegőn szárítottuk 1 órán steril környezetben. Sejteket 500 ul szérummentes DMEM-tápközegben, amely 0,1% BSA-t, hogy egy végső sűrűsége 6 × 10 ^{5, és a sejteket a kollagén mátrix egy Transwall hogy helyeztünk egy 24 lyukú lemezen. Az alsó kamra tartalmazott 500 ul komplett DMEM közegben. Cells maradt a membrán felületén óvatosan eltávolítjuk, 24 óra elteltével a sejteket beoltottuk, és a membránt rögzített és megfestettük a sejteket, amelyek transzmigrált keresztül a kollagén mátrix az ellenkező oldalon a transwell membrán.}

Statisztikai elemzések

az összes adatot elemeztük az SPSS 20.0 statisztikai programot. Mennyiségi értékek formájában fejeztük átlagot és SEM. Az alábbi statisztikai analízist alkalmaztuk a vizsgálatban: Fisher-féle egzakt tesztet vagy chi-négyzet próba viszonyának meghatározásában a NMe2 kifejezés és patológiai jellemzői rákos szövetek; egyirányú ANOVA csoportos összehasonlítás között szülői sejtek és transzfektált vagy egy olyan járművet vektort vagy humán NMe2 katalógusa cDNS; és Pearson analízis összefüggést NMe2 kifejezés és differenciálódását és metasztázis a rákos sejteket. katalógusa

Eredmények katalógusa

Szövetsége NMe2 kifejezés szövettani jellemzői gyomorrák katalógusa

összegyűjtött műtéti mintából származó 139 beteg gyomor adenokarcinóma. A 2. táblázat felsorolja a demográfiai adatokat ezen betegek és hisztológiai jellemzőit rákos szövetet ezeknél a betegeknél. NMe2 kifejezés gyenge volt, vagy nem lehetett kimutatni a rosszul differenciált szöveti volt, de intenzív jól differenciált szöveti szinten összehasonlítható szomszédos normál szövetben (1.). A magas szintű NMe2 expresszió összefüggött egy szignifikánsan csökkentett mértékű metasztázis a nyirokcsomókban ( p
= 0,038), de nem a méret a primer tumor és mélysége a rák inváziót. A Pearson-féle korrelációs elemzés azt mutatta, hogy NMe2 kifejezés független kapcsolatban áll a ráta, a sejt differenciálódás (r = 0,436, p katalógusa = 0,000), és átterjedt a helyi nyirokcsomók (r = -0,281, p
= 0.001, 1. táblázat). katalógusa

hatása NMe2 szaporodási gyomorrák sejtek tenyészetben katalógusa

Ahhoz, hogy tovább vizsgálja a szövetség NMe2 kifejezést patológiai gyomorrák sejtek, megvizsgáltuk a sejtek a BGC823 és MKN45 gyomorrák vonalak, amelyek kifejezett NMe2 gyengén olyan szinten, mint a rosszul differenciált rákos szövetet (ábra. 1). Ezeket a sejteket transzfektáltuk a humán NMe2
cDNS túltermelése NMe2 mint mennyiségileg mérhető növekedését NMe2
mRNS (kvantitatív RT-PCR) és NMe2 protein termék (immunfluoreszcencia, Fig. 2 ).

Ezt követően megvizsgáltuk, hogyan túltermelõ NMe2 szabályozott sejtnövekedést mérésével DNS ploiditási és kolóniaképzést ezeket a sejteket. Azt észleltük, nincs különbség a DNS ploiditás sejtek közötti overexpresszáló NMe2 és azok a nem transzfektált és mesterségesen transzfektált sejtek mindkét vonal (3. táblázat és az S1 ábra.), Ami arra utal, hogy növekedése NMe2 expressziójának nem volt hatása a sejtciklusra. Azonban, NMe2 overexpresszáló sejtek szignifikánsan csökkentett kapacitás kolóniákat formálni tenyészetben, a hamisan transzfektált és nem transzfektált sejtek (ábra. 3). Ezt a megfigyelést által hitelesített eredményeket sejt-számolási módszer (3C.) Hotelben

Hatása NMe2 sejtvándorlásra és invázióját katalógusa

A következőkben képességét értékeltük NMe2 overexpresszáló sejtek vándorlását, mert irányított migráció fontos előfeltétele az invázió, a rákos sejtek a környező szövetek. Ez irányú migráció segítségével vizsgáltuk a sebgyógyító vizsgálat, amely méri a sejtek migrációját a területen a sérülés által létrehozott egy éles tárggyal. Ábrán látható. A 4A és 4B, a szélessége egy sérült terület 48 óra elteltével a tenyészetek nagyobb volt NMe2
-transfected sejtek, mint a nem-transzfektált és mock-transzfektált sejtekben. A lassú migrációs találták sejtekben mindkét sejtvonal, ami arra utal, hogy a sejtek overexpresszáló NMe2 vándorolt ​​sokkal lassabb. Mivel ez a sebgyógyulási vizsgálatban szemi-kvantitatív, mi is mennyiségileg mérik az arány a sejtek migrációját egy Transwell assay. Összhangban a sebgyógyító assay, NMe2 overexpresszáló sejtek vándoroltak át -50% a nem transzfektált vagy mock-transzfektált sejtek (ábra. 4).

A csökkenés sejtmigráció potenciálisan csökkentheti a képességét, ezen sejtek betörni a környező szöveteket. Annak vizsgálatára, ezt a lehetőséget, mérjük az invázió, a rákos sejtek a kollagén mátrix egy jól megalapozott transzwell kamra vizsgálatban. BGC823 sejtek túlzott mértékben NMe2 jelentősen csökkentette a képességüket, hogy támadják egy kollagén mátrix 60% a nem transzfektált és mock-transzfektált sejtek (ábra. 5). Ez az arány a megszállás hasonlóképpen csökken a MKN45 transzfektált sejtekben a NMe2 katalógusa cDNS képest szülői sejtek és azok transzfektált jármű vektor (ábra. 5). Katalógusa

Vita katalógusa

megvizsgáltuk a kapcsolat a NMe2 expresszióját és jellemzőit gyomorrák szövetekben sebészileg eltávolítják a betegektől és tenyésztett sejtek két ismert gyomorrák vonalak. A tanulmány azért szükséges, mert NMe2
eredetileg azonosították az első metasztázis szuppresszor gén, de azt a képességét, hogy blokkolja a rák helyi invázió és távoli metasztázis tűnik sejttípus-specifikus között rákos megbetegedések, amelyek eddig vizsgálták [8- 14]. Például egy elemzést 35 betegek pajzsmirigy papilláris karcinóma és 11 metasztatikus nyirokcsomók szignifikánsan csökkent szintje a NME1
mRNS áttétes nyirokcsomókban, míg NMe2
mRNS-t nem változott az eredeti tumor és a nyirokcsomókban [14], ami arra utal eltérés szerepei NME1 és NMe2 a rák terjedését és áttétét. A meta-analízis 278 vastagbélrákos betegek, 177 emlőrákos 137 petefészekrákos és 77 tüdőrákos is talált alacsonyabb szinten NMe2 kifejezés áttétes rák, mint a nem-metasztatikus [17]. Azonban annak ellenére, hogy negatív összefüggés a NME1 /NMe2 kifejezés és a rák terjedését, hogy a helyi nyirokcsomók és a méhnyálkahártya beszivárgás, NME kifejezés azonban nem párosult a TNM pontszámok és a differenciálás méhen belüli membrán karcinóma és a méhnyakrák [16]. Itt, adunk számos bizonyíték, hogy NMe2 korlátozza a proliferáció, migráció és invázió az extracelluláris mátrix a gyomor rákos sejteket.

Először is, egy magasabb szintű NMe2 expresszió található jól differenciált és kevésbé invazív szöveti származó gyomorrák sebészileg eltávolítják, mielőtt a kemoterápia és a sugárterápia egy nagy pácienscsoporton (1. táblázat & ábra. 1). A metasztázis a rákos a helyi nyirokcsomókba gyakrabban találtak a rákos szövetekben, hogy volt egy alacsony szintű NMe2 expresszió és ez a korreláció közötti NMe2 expresszió és differenciálódását /metasztázis ezekben beteg szövetekben marad, miután az adatokat rétegzett a kor, nem, a mérete a primer tumor és mélysége invázió (1. táblázat és 2. futam). Ezek az eredmények összhangban vannak a legutóbbi jelentésében, hogy NMe2 kötődik a telomer ismétlés kötő faktor 2 a sejtmagban, hogy csökkentse a telomeráz aktivitás [37], ami arra utal, mechanikus kapcsolat NMe2 kifejezése és a túlélés a rákos sejtek. Katalógusa

Másodszor, vizsgált hatását túl-expresszáló NMe2 arányára a proliferáció, migráció, és invázió az extracelluláris mátrix in vitro
sejteket a két jól tanulmányozott gyomor rákos sejtvonal BGC823 és MKN45 [18-21]. A transzfekciót humán NMe2
cDNS eredményezett két-szeres vagy nagyobb mértékű NMe2 expresszió ezekben a sejtekben, összehasonlítva gúnyolni transzfektált sejtek (ábra. 2). Ez NMe2 túltermelése nem változtatta meg a DNS ploidia (3. táblázat), de jelentősen lelassult a kolóniaképzést ezen sejtek (3.), Ami arra utal, hogy a túltermelő NMe2 késlelteti átmenetet DNS-replikáció, a mitózis. Ez az eredmény összhangban van a korábbi jelentések, hogy NMe2 nem befolyásolja a növekedést a tenyésztett rákos sejteket, és nem jár együtt a méret a primer rák beültettük az állatok [22-27]. Azonban ez összeegyeztethetetlen jelentések NMe2 elősegíti [28,29] vagy csökkenti [30] elterjedése más típusú rákos sejteket. Pontos ellentmondás okairól még tovább kell vizsgálni, de ezek az adatok arra utalnak, sejttípus-specifikus hatásait a NMe2 katalógusa gén patogenezisében rák. Katalógusa

A harmadik, ellentétben minimális hatása proliferációjára gyomorrák-sejtek, a overexpressziója NMe2 eredményezi jelentős csökkenése sejt migrációs és behatolás révén a kollagén mátrix amint azt a három különálló, de egymást kiegészítő vizsgálatok (ábra. 4 & 5). Adataink alátámasztják korábbi eredményei hasonló gátló hatással mellrák [8], orális laphámrákos [28] és a melanoma sejtek [9], bár kivételek ismét megjegyezte, hepatocelluláris [13,29] és a colorectalis carcinoma sejtekben [31]. Azt még meg kell határozni például, hogy csökken a migráció és invázió NMe2 overexpresszáló sejteket eredményezett csökkent képessége, hogy e sejtek szaporodását. Katalógusa

Eredményeink azonosítottak gyomorrák sejtek érzékenyek túiexpresszálódó NMe2, de a kritikus kérdés továbbra is az, hogy mit szabályozza ezeket a változatos NMe2 tevékenységek a különböző típusú rákos sejteket. Ennek egyik lehetséges módja, hogy a NMe2 tevékenység függ felfelé és lefelé molekulák kölcsönhatásba NMe2 egy adott sejttípus. Több molekula előzőleg azonosított kölcsönhatásba vagy szabályozzák NMe2, mint például az EGFR, C-erbB-2
, C-erbB-3
és nemi szteroid receptor petefészek karcinómákban [32]. Plakoglobin jelentették, hogy kölcsönhatásba lépnek NMe2 előmozdítása expresszióját sejtek humán nyelv laphámrák [33]. NMe2 is megállapították, hogy kölcsönhatásba lépnek a MDM2 (mouse double minute 2 homológja), hogy csökkentse a motilitását vese karcinóma sejtek [34]. MDM2 egy E3 ubikvitin-protein ligáz és ez szolgál a negatív szabályozója a p53 tumorszuppresszor. A kapcsolat a NMe2 katalógusa gén és gének myc katalógusa család tűnik bonyolultabb. Termékek a NME1 katalógusa és NMe2 katalógusa géneket már javasolták, hogy a downstream a C- myc katalógusa szabályozási út [7], és részt vesz a leszabályozza CDC42 funkció neuroblastomában [35]. NMe2 is beszámoltak, hogy kölcsönhatásba lépnek a G-quadruplex DNS nukleáz túlérzékeny eleme a c-myc katalógusa promoter indukáló c-myc kifejezés [36]. A rendszer biológia megközelítés, hogy vizsgálja meg ezeket a különleges utak helyett az egyes molekulák szükség lehet boncolgatni szerepei NMe2 katalógusa gén és az általa termelt különböző típusú rákos megbetegedések. Katalógusa

Összefoglalva bemutattuk, hogy túltermelése NMe2 csökkenti a migrációs és behatolás gyomorrák sejtek a celluláris mátrix in vitro katalógusa. Ennek eredményeként, NMe2 kifejezés társul a jól differenciált és kevésbé invasitve szövettani gyomorrák. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az NMe2
gén és terméke is szolgálhat, mint egy potenciális markerként előrejelzésére invazivitását gyomorrák és úgy is, mint terápiás célpont lehet akár szabályozott keresztül génterápia.

Támogató Információs katalógusa S1 ábra. Hatása NMe2 túlexpresszió gyomor rákos sejtek sejtciklus.
A DNS ploiditás transzfektált sejtek NMe2
cDNS-t áramlási citometriával analizáltuk kereskedelmi forgalomban beszerezhető reagenskészlet alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. A panelek az A-C volt a szülői BCG823 sejtek és azok transzfektált NMe2
cDNS-t vagy vektor. A panelek D-F voltak MKN45 sejtek azonos kezeléshez. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0115968.s001 katalógusa (DOC) hotelben

• PLoS One: transzkripciós faktorok mikroRNS-Co-gének gyomorrákban Invasion Ex Vivo
• PLoS One: a klinikai jelentősége, a rizikófaktorok Magányos nyirokcsomó-metasztázis Gyomor Cancer