Ploche ONE: CEACAM6 podporuje rakovina žalúdka invázie a metastázovaniu indukciou epitel-mezenchýme prechod cez PI3K /AKT signálnej dráhy

Abstraktné

nadmerne exprimovaný CEACAM6 v nádorových tkanivách zohráva dôležitú úlohu v invázie, metastázy a odporu anoikis v rôznych ľudských rakovín. Nedávno sme informovali, že CEACAM6 expresie je up-regulovaná u karcinómu žalúdka (GC) tkanív a podporoval GC metastáz. Tu sme správu, že CEACAM6 podporuje peritoneálnej metastázy v
vivo
a je v negatívnej korelácii s E-cadherin expresie v GC tkanivách. Nadmerne vystavený CEACAM6 indukované epiteliálne-mezenchýme prechod (EMT) v GC, merané zvýšenie v EMT markerov N-cadherinu, vimentin a slimák, zatiaľ čo E-cadherin expresie bola znížená GC buniek CEACAM6-nadexprimující; protichodné výsledky boli pozorované v bunkách CEACAM6-umlčaný. Navyše, E-cadherin expresie bola v negatívnej korelácii s hĺbkou invázie nádoru, lymfatických uzlín a TNM fáze GC tkanivách. Navyše, CEACAM6 zvýšené matrix metaloproteinázy-9 (MMP-9), aktivita v GC, a anti-MMP-9 protilátka by mohla zvrátiť rastúci inváziu a migráciu indukovanú CEACAM6. CEACAM6 tiež zvýšené hladiny fosforylovaného AKT, ktorý sa podieľa na progresiu rôznych ľudských nádoroch. Ďalej poznamenal, že LY294002, inhibítor PI3K, by mohla zvrátiť CEACAM6 indukovanú EMT prostredníctvom mezenchymálnych-epitelu prechodu. Tieto zistenia naznačujú, že CEACAM6 zvyšuje inváziu a metastázy v GC podporou EMT prostredníctvom PI3K /Akt signálnej dráhy

Citácia :. Zang M, Zhang B, Zhang Y, Li J, L Su, Zhu Z, et al , (2014) CEACAM6 Podporuje Žalúdočné Cancer invázie a metastázy navodením epitel-mezenchýme prechod cez PI3K /AKT signálne dráhu. PLoS ONE 9 (11): e112908. doi: 10,1371 /journal.pone.0112908

Editor: Chun-Ming Wong, University of Hong Kong, Hong Kong

Prijaté: 7. augusta 2014; Prijaté: 16. októbra 2014; Publikované: 14.novembra 2014

Copyright: © 2014 Zang et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Dostupné dát: Text. autori potvrdzujú, že všetky údaje súvisiace závery sú plne k dispozícii bez obmedzenia. Všetky relevantné údaje sú v novinách

Financovanie :. Táto práca bola podporená grantom z Národného Natural Science Foundation Číny (No. 81172324, 91229106, No. No. 81272749, 81372231 a č), a Key Projekt výboru Shanghai školstva (č 12ZZ105 a No.12ZZ102) a pre vedu a techniku ​​komisie magistrátu Šanghaja (č 13ZR1425600). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

GC je jedným z najčastejších zhubných nádorov a vážneho zdravotného problému po celom svete, najmä vo východoázijských krajinách, ako je Japonsko, Kórea, Čína, kde je druhou príčinou úmrtí na rakovinu súvisiace [1] - [3]. Karcinoembryonální antigén súvisiaci s adhéznou molekula 6 (CEACAM6) je glykosylfosfatidylinositolu (GPI) viazaný imunoglobulín nadčeľade člen, ktorý je nadmerne exprimovaný v mnohých ľudských nádorov, najmä nádorov gastrointestinálneho traktu [4], a funguje ako intercelulárnej adhézny molekuly [4] - [6]. Aj keď CEACAM6 je GPI-ukotvené na bunkový povrch glykoproteínu postráda transmembránovú alebo intracelulárnej doménu, ale je schopná ovplyvniť intracelulárnych signalizačných udalostí a hrá dôležitú úlohu v progresii rakoviny gastrointestinálneho traktu [4], [6] - [8]. GPI-kotvené molekuly sú často spoločne lokalizované na malé membránové mikrodomén v plazmatickej membráne [9], ktoré možno aktivovať po prúde signálnych kaskád, ako je napríklad integrínov signálnej dráhy [10]. CEACAM6 pôsobí ako onkogén v nádoroch a podporuje inváziu rakoviny, metastáz, odolnosť anoikis a chemorezistenci, a inhibuje diferenciáciu [7], [8], [11]. Nedávno sme popísali, že CEACAM6 expresie je up-regulovaná a spojená s lymfatických uzlín v GC tkanív [12]. Avšak mechanizmy, pomocou ktorých CEACAM6 ovplyvňuje vnútrobunkové signálne transdukcia v GC ešte treba určiť.

epiteliálne-mezenchýmových prechod (EMT) je nielen fyziologický proces, v priebehu embryonálneho vývoja a regenerácie tkanív, ale aj patologický prvkom progresie rakoviny, zahŕňajúce metastázy tumorov, apoptóza a odolnosť proti starnutiu [13] - [15]. EMT vždy označuje zlú klinickú prognózu u ľudských nádorov. Mnohé mechanizmy relevantných pre EMT začatie boli zdokumentované, vrátane TGF-beta, IL-6, PI3K /Akt, Raf /MAPK a SRC dráh [15] - [18]. V našej predchádzajúcej štúdii sme pozorovali, CEACAM6 indukované aktivácia SRC v GC buniek [12], a pozorovať zvýšený počet vretenovité bunky CEACAM6-expresiou porovnaní s kontrolnými bunkami. Z toho dôvodu sme sa veľmi zaujímajú o stanovenie vzťahu CEACAM6 a EMT v GC buniek. Hoci negatívna korelácia medzi CEACAM6 a EMT bol zaznamenaný v pankreatických karcinómov [19] mechanizmy, ktoré CEACAM6 upravuje EMT sú zle pochopený.

V tejto štúdii sme ďalej skúmali účinky a potenciálne cesty k CEACAM6 v GC invázie a metastázy, a vyšetroval jeho koreláciu s EMT.

materiály a metódy

Ethics Prehlásenie

písomný informovaný súhlas v štúdii boli získané zo všetkých účastníkov. Protokol štúdie bol schválený etickou komisiou Ruijin nemocnice, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine. postupy na zvieratách sa vykonávali podľa protokolu schváleného používanie a ošetrovanie výboru Institutional Animal (IACUC) v Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, Čína.

Bunkové línie a tkanivové vzorky

Ľudská GC bunkové línie SGC-7901, MKN-45 a MKN-28 boli získané od Shanghai inštitútov pre biologických vied, čínskej akadémie vied. Bunky boli kultivované pri 37 ° C v 5% CO _{2 a nasýtenia vlhkosti v médiu RPMI-1640 s obsahom 10% fetálneho séra hovädzieho dobytka.}

nádor žalúdka a priľahlé non-nádorového tkaniva boli získané od 93 pacientov s GC, ktorí podstúpili kuratívny chirurgický zákrok v závode Shanghai Jiaotong University School of Medicine Affiliated Ruijin nemocnice od roku 2010 do roku 2013. pacientov sa skladala z 69 mužov a 24 žien s priemerným vekom 62,1 rokov (rozmedzie 30-85 rokov). Žiadny z pacientov podstúpilo rádioterapii alebo chemoterapii pred operáciou. Klinicko-patologické údaje boli zhromaždené a patologické tumor staging bola stanovená podľa klasifikácie TNM UICC. Histologické typizácie bola vykonaná s najmenej dvoma patológmi odborných pracujúci nezávisle na sebe v dvojito zaslepenej. Táto štúdia bola schválená etickou komisiou Shanghai Ruijin nemocnice, a všetci pacienti boli plne informovaní o experimentálnych postupov.

Vektorové stavba a transfekční

Celovečerný CEACAM6 cDNA bola získaná RT PCR z celkovej RNA extrahované zo vzoriek GC. Tieto sekvencie primérov boli 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 '(kódujúce) a 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3' (reverzný). zhromaždil sme sa pIRES2-eGFP-CEACAM6 postaviť vložením CEACAM6 cDNA do pIRES2-eGFP vektora. Ďalej sme transfekovány pIRES2-eGFP-CEACAM6 alebo pIRES2-EGFP vektora do SGC-7901 a MKN-45 buniek s použitím Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, USA) podľa protokolu výrobcu. Stabilné klony boli vybrané kontinuálnym pôsobením G418 (1,2 mg /ml, Gibco, New York, USA)

lentivirový vektor konštrukcia

Na základe údajov ľudských CEACAM6 génu, páru oligonukleotidových sekvencií základe. a negatívne kontrolné sekvencie boli navrhnuté a syntetizované Shanghai Novobio Scientific Co., Ltd. zhrnieme sekvencie boli nasledovné: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 '(dopredu) a 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3' (reverzný); ovládanie, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 '(dopredu) a 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3' (reverzný). CEACAM6 zhrnie bola subklonována do PL /zhrnieme /F lentivirovým vektorom za účelom získania PL /zhrnieme /SHR-CEACAM6 konštrukt. Potom PL /zhrnieme /SHR-CEACAM6 alebo kontrolovať lentivirálním vektorov boli transfekovány do MKN-28 GC buniek. Stabilne transfekované bunky sa selektovali spracovaním s 5 ug /ml blasticidin a boli použité pre identifikáciu a ďalší výskum.

Western blotting

Bunky boli zozbierané a lyžovanie s použitím pufra RIPA (Solarbio, Peking, Čína ) obsahujúci 1% inhibítory PMSF proteázy. BCA assay kit (Pierce, Rockford, USA) bola použitá na meranie celkovej koncentrácie proteínu. Ekvivalentné množstvo proteínu boli oddelené 10% SDS-PAGE, a vyriešiť proteíny prenesené na PVDF membrány. Membrány boli blokované 5% odstredeného mlieka po dobu 2 hodín a potom inkubované s primárnymi protilátkami cez noc pri teplote 4 ° C. Primárne protilátky boli nasledovné: CEACAM6 (1: 500; abca, USA), E-cadherinu (1: 500; Cell Signaling Technology (CST), USA), N-cadherinu (1: 500, CST, USA), vimentin ( 1: 1000, CST, USA), Slug (1: 500, CST, USA), p-AKT (Ser473) (1: 1000, CST, USA), celkový Akt (1: 1000, CST, USA) a GAPDH ( 1: 10000; abca, USA). Membrány potom boli inkubované so sekundárnou protilátkou po dobu 2 hodín pri teplote miestnosti a boli vizualizované za použitia rozšírenej detekcie chemiluminiscencie systém (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) v súlade s protokolom výrobcu.

imunofluorescenčné farbenie

Bunky boli kultivované na krycích sklíčkach po dobu 24 hodín a potom fixované 4% paraformaldehydom po dobu 15 minút. Bunky boli premyté PBS, potom permeabilizovány 0,5% Triton X-100 po dobu 20 minút a blokované 5% BSA počas 30 minút pri teplote miestnosti. Ďalej sme zafarbené bunky sa CEACAM6 protilátky (1:50; abca) pri teplote 37 ° C po dobu 2 hodín, s následnou inkubáciou s fluorescenčným sekundárnej protilátky po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti. Jadrá boli zafarbené DAPI. Rodamín phalloidin protilátka (1: 150, Cytoskelet) bol použitý pre vizualizáciu cytoskelet GC buniek. Sklíčka bola analyzovaná a zobrazený na fluorescenčným mikroskopom.

Imunohistochémia

Sekcia 4 um silné boli narezané z parafínových tkanivových blokov a potom deparafinizovány a rehydratovať. Imunohistochemické farbenie rezov bolo vykonané podľa protokolu DAKO, použitím myších anti-CEACAM6 (1: 100; abca) a E-cadherin (1: 100, CST) pri 4 ° C cez noc. Sklíčka bola potom inkubovaná s HRP-značenú sekundárnou protilátkou a vizualizované pomocou Diaminobenzidine. Dvaja patológovia, ktorí boli oslepení, aby so všetkými údajmi o pacientoch nezávisle stanovená a zaznamenal sekcie. Imunohistochémia škvrna skóre = pozitívna bunka skóre + farbenie intenzity skóre. Percento pozitívnych buniek bola hodnotená nasledovne: 0 (10%), 1 (10 - 25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) a 4 (výťažok 75%). Imunohistochemické farbenie intenzita bola odstupňovaná nasledovne: 0 (bez zafarbenia), 1 (slabé farbenie), 2 (hnedý postriekania) a 3 (tmavo hnedé škvrny). Celkové skóre ≥3 boli definované ako pozitívne pre zjednodušenie analýzy dát. Analyzovať vzťah medzi CEACAM6 a E-cadherin prejavu, Image-Pro Plus verzia 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD, USA) bola použitá na kvantifikáciu expresie CEACAM6 a E-cadherinu na 20 vzoriek.

Želatína zymografie

Pre zistenie aktivity MMP-9, zymografie bola vykonaná za použitia 10% SDS-PAGE géloch, ktoré obsahujú 1 mg /ml želatíny (Sigma). V stručnosti, GC bunky boli kultivované v bezsérovém médiu RPMI-1640 počas 24 hodín a supernatant sa potom oddelí a odstredí pri 1000 otáčkach za minútu po dobu 5 minút. Gély boli dvakrát premyté v renaturace pufri (2,5% Triton X-100) po dobu 30 min vždy pre odstránenie SDS po elektroforéze a potom inkubované pri teplote 37 ° C počas 24 h v reakčnom pufri (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 5 mM CaCl2, 150 mM NaCl). Ďalej sme zafarbené gélov 0,5% Coomassie Brilliant Blue R-250 po dobu 2 hodín a odfarbí gélov v pufri (30% metanolu, 10% kyselina octová). Priehľadné pásy v pozadí modré zafarbenie reprezentoval gelatináza aktivity.

migrácie a invázie buniek testy

V prípade migrácie a invázie testoch bunkovej celkom 1 x 10 ^{5 buniek boli suspenduje v bezsérovém RPMI-1640 s alebo bez MMP-9, protilátky (abca, 2 ug /200 ul) a nanesené na transwell komôr (8 um do 24-jamkové doštičky; Corning Costar, NY, USA), s alebo bez Matrigelu ( BD Bioscience, CA, USA) podľa protokolu výrobcu. Pre obidva testy, médiu obsahujúcom 10% FBS bolo pridané do dolnej komory ako chemoatraktantu. Po 24 hodinách sa kultúry, boli bunky fixované 10% formalínom a zafarbené pomocou 0,5% kryštálovej violete. Nakoniec, bunky v dolnej komory boli vyfotografované a počítané obrátenej mikroskopie.}

holé myši modelu xenoimplantátu

Štyri týždne staré mužskej Balb /c nahých myší (Ústav zoológie, Čínska akadémia Sciences) boli použité pre vyhodnotenie role CEACAM6 peritoneálnej šírenie v
vivo
. Nahé myši boli umiestnené v špecificky prostého patogénov prostredie v Animal Laboratory jednotka, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University v Číne. Myši dostali humánne starostlivosť a študijné protokoly boli vykonané podľa protokolu schváleného používanie a ošetrovanie výboru Institutional Animal (IACUC) Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, Čína. Celkom 2 x 10 ^{6 SGC-7901-CEACAM6 alebo SGC-7901-NC bunky injekčne do piatich myší brušnej dutiny každej skupiny (randomizácie). Myši boli usmrtené 30. deň po injekcii, a brušné masy boli zobrazené a fotografované. Všetky experimenty boli vykonávané v súlade s oficiálnymi odporúčaniami čínskej zvieracieho spoločenstiev.}

Štatistiky

Študent je t
-test bol použitý na skúmanie štatistické rozdiely medzi týmito dvoma skupinami , Korelácia medzi E-cadherin expresie v GC tkanivách a klinicko-parametrov a CEACAM6 prejavu boli analyzované pomocou chi-kvadrát alebo Fisherov presný testy alebo analýzy Pearson korelačný koeficient. Údaje sú uvedené ako priemer ± SD. P Hotel < 0,05 a P
. ≪ 0,01 bola považovaná za štatisticky významné a veľmi významné, respektíve

Výsledky

CEACAM6 ovplyvňuje morfológia buniek a cytoskelet

Naše predchádzajúce výsledky naznačil, že MKN-28 GC buniek inherentne exprimujú vysoké hladiny CEACAM6, zatiaľ čo SGC-7901 a MKN-45 GC bunky exprimujú nízke hladiny [12]. Nadmerná expresia CEACAM6 v SGC-7901 a MKN-45 GC buniek a útlmu CEACAM6 expresiu v MKN-28 GC buniek PL /zhrnieme /SHR-CEACAM6 lentivirových vektorov bola potvrdená na úrovni proteínu Western blot analýzou (obr. 1A). Imunofluorescenčné testy vždy ukázali, že SGC-7901-CEACAM6 bunky exprimovali viac CEACAM6 bielkovín ako SGC-7901-NC bunky (obr. 1b).

Je zaujímavé, že bunková morfológia bol zmenený po útlme CEACAM6 a zvýšenou expresiou. V porovnaní s kontrolnými bunkami, SGC-7901-CEACAM6 a MKN-45-CEACAM6 bunky vykazovali viac mezenchýme podobné morfológiu a boli spindle- a vretenovité tvaru (obr. 1C). Naopak, typická prechod z mezenchýmových na epitelové morfológia bola zistená v MKN-28-SH buniek v porovnaní s MKN-28-nc buniek (obr. 1C). Avšak, to bolo jasné, či CEACAM6 nadmerná expresia malo vplyv na cytoskelet, teda imunofluorescenčný farbenie F-aktínu farbenie bolo vykonané. Je zaujímavé, že vyššia veľkostnej bunky vretenovité tvaru boli pozorované pre MKN-45-CEACAM6 a SGC-7901-CEACAM6 línie v porovnaní s kontrolnými bunkami (obr. 1D).

CEACAM6 je negatívne spojené s E-cadherinu v GC tkaniva

Imunohistochemické analýza bola použitá na stanovenie hladiny E-cadherin expresie v nádorových tkanivách a párových priľahlých non-nádorových tkanivách. Imunohistochemické farbenie ukázalo, E-cadherin expresie bola nižšia v nádorových tkanivách, než je v priľahlých non-nádorových tkanivách, a ukázalo sa, že E-cadherin sa nachádza hlavne v cytomembrány epiteliálnych buniek (Obr. 2D, E, F). Ďalej sme skúmali vzťah medzi E-cadherin expresie a klinicko-rysy GC, a zistili, že downregulated E-cadherin bol spojený s hĺbkou invázie ( P
= 0,046), lymfatických uzlín ( P
= 0,013), a stav TNM ( P
= 0,035), ale nie s ostatnými klinicko faktorov, vrátane pohlavia, veku, alebo diferenciácie (Tabuľka 1). Navyše, CEACAM6 negatívne koreluje s EMT v pankreatických karcinómov [19] a potlačenie CEACAM6 môže zvýšiť E-cadherinu promotorovou aktivitu v kolorektálneho karcinómu [20].

Ďalej sme skúmali súvislosť medzi E-cadherinu a expresie CEACAM6 v GC sériovým sekcie imunohistochémia (20 vzoriek). CEACAM6 expresie v nádorových tkanivách bola vyššia ako v prípade zodpovedajúcich bez nádorových tkanív (obr. 2A, B, C), v súlade s našimi predchádzajúcimi výsledkami [12]. Zaujímavé je, že sme zistili, že CEACAM6 expresie bola v negatívnej korelácii s E-cadherin expresie v GC tkanív Pearson analýzy korelačný koeficient ( P Hotel &0,01; obr. 2G).

CEACAM6 indukuje EMT v GC bunky

proteíny EMT spojený v GC buniek bola hodnotená pomocou analýzy western blot. Pozorovali sme, že N-cadherinu, Vimentin a hladiny Slug proteínov boli zvýšené, zatiaľ čo E-cadherin bol znížený v bunkách CEACAM6-expresiou v porovnaní s ich príslušnými kontrolnými bunkami (obr. 3A, B). Konverzný výsledky boli získané po CEACAM6 bol zrazený v MKN-28 bunkách (obr. 3C, D). Tieto výsledky naznačujú funkčnú úlohu pri regulácii CEACAM6 EMT v GC buniek. Okrem toho, tieto pozorovania v GC buniek boli podobné s nálezmi v GC tkanive.

CEACAM6 zvyšuje aktivitu MMP-9 v GC buniek

Je dobre známe, že adhézia, migrácia a degradácie sú hlavnými problémami v nádorových metastáz. Želatína zymografie bola vykonaná s cieľom skúmať účinky CEACAM6 na aktivitu MMP-9, čo je dôležité v degradácii ECM. MMP-9 aktivita v SGC-7901-CEACAM6 a MKN-45-CEACAM6 buniek sa zvýšila v porovnaní s ich kontrolných skupín (Obr. 4A, B). Ďalej sme skúmali, či zvýšená aktivita MMP-9 indukovanej CEACAM6 v GC buniek za následok skutočný prírastok počtu inváziu a migráciu buniek. Preto sme skúmali prínos aktívnej anti-MMP-9 protilátky alebo PBS na GC buniek CEACAM6-nadexprimující. Ako sa dalo očakávať, že sa významné rozdiely v počte napádanie a migrácia buniek u buniek ošetrených protilátkou v porovnaní s PBS-ošetrených buniek ( P Hotel &0,01; obr. 4C, D, E, F).

CEACAM6 upregulates fosforylovaný Akt v GC buniek

sme už skôr uviedol, že SRC aktivita bola vyvolaná CEACAM6 v SGC-7901 GC buniek. AKT je downstream proteín SRC a je výrazne spojené s EMT, inváziu a metastázy v progresii nádoru. Preto sme hodnotili Akt činnosť v GC buniek CEACAM6-nadexprimující. Western blot ukazuje, že fosforylácie AKT na serínu 473 bola výrazne zvýšená u GC buniek CEACAM6-nadexprimující v porovnaní s kontrolnou skupinou (obr. 5A, B). Skúmať, či boli zmeny EMT vyvolané CEACAM6 cez PI3K /Akt dráhy, SGC-7901-CEACAM6 a MKN-45-CEACAM6 bunky boli ošetrené 100 nM LY294002 po dobu 24 hodín. Je zaujímavé, že E-cadherin sa zvýšil a N-cadherin bol znížený v bunkách CEACAM6-expresiou LY294002 liečených v porovnaní s kontrolami, ako je merané pomocou analýzy western blot (obr. 5C, D).

CEACAM6 podporuje peritoneálnej šírenie in vivo

na záver sme skúmali účinky CEACAM6 nadexpresiou na peritoneálnej šírenie a metastáz v
vivo
. injekčne sme SGC-7901-CEACAM6 a SGC-7901-NC bunky do brucha nahých myší. Rozsiahly peritoneálnej šírenie bolo pozorované v skupine SGC-7901-CEACAM6 v porovnaní so skupinou SGC-7901-NC (obr. 6A). Bolo výrazne viditeľné peritoneálnej uzly v skupine SGC-7901-CEACAM6 než u kontrolnej skupiny (5,400 ± 0,510 vs
1,400 ± 0,245, P
. ≪ 0,01; obr. 6B ). Navyše, zvýšená expresia CEACAM6 zvýšenie metastáz v
vivo
bola tiež hlásená u rakoviny pankreasu [19].

Diskusia

GC je druhá príčina úmrtia na nádorové ochorenie na celom svete [1]. Pribúda dôkazov naznačuje, že CEACAM6 hrá dôležitú úlohu v gastrointestinálne rakoviny progresie [7], [20] - [22], a CEACAM6 je viac široko distribuovaný ako CEA (CEACAM5) v normálnych tkanivách, s významnou expresiu v mnohých epitelu [4]. CEACAM6 vplyvmi intracelulárnych signalizačných udalostí cez homophilic a heterofilných priľnavosťou s ďalšími CEACAMs alebo integrínov [23] [24]. Účelom tejto štúdie bolo skúmať príspevky GPI-ukotvená bielkovín CEACAM6 progresiu GC.

Zaujímavé je, že sme zistili, že bunková morfológia a cytoskeletu štruktúra bola zmenená stabilná upregulací a Downregulace CEACAM6 v GC buniek. Bunky nadmerne exprimujúce CEACAM6-boli viac mezenchymálnych podobné a vykazuje tvar vretena a fusiforme, a boli zistené ďalšie aktínu stresová vlákna v porovnaní s kontrolnou skupinou, v procese definovaná ako EMT. Mezenchymálnych fenotyp dotuje bunky s viac ťažných a invazívnych vlastností [15]. Toto pozorovanie bolo v súlade s v
vivo
Výsledky čím CEACAM6 vyvolané rozsiahle peritoneálnej šíri do holých myší. MET bolo pozorované nasledujúce umlčanie CEACAM6 v GC buniek. Tieto pozorovania ukázali, že CEACAM6 sa môže podieľať na indukciu EMT v GC. Ďalej sme skúmali vzťah medzi CEACAM6 a E-cadherinu, markeru EMT, v GC tkanivách imunohistochemickým farbením. Ako sa dalo očakávať, významná negatívna korelácia bola pozorovaná medzi CEACAM6 a E-cadherinu, a E-cadherin expresie bola spojená s hĺbkou invázie nádoru, lymfatických uzlín a TNM fáze GC tkanivách. Navyše, CEACAM6 podporoval lymfatických uzlín ( P
= 0,001) v 98 GC tkanivách v našej predchádzajúcej štúdie [12]. Predchádzajúce výsledky ukázali, že zvýšená CEACAM6 útlm E-cadherinu promotorovou aktivitu v kolorektálneho karcinómu [20]. Na základe uvedených poznatkov sme predpokladali, že CEACAM6 podporoval GC invázie a metastáz indukciou EMT a môže slúžiť ako mezenchýme marker.

metastáza je hlavnou príčinou rakoviny spojené s smrť, ale bolo ťažké študovať preto, že zahŕňa rad vzácnych, náhodných udalostí. Rad potenciálnych signalizačných dráh týkajúcich sa nádorových metastáz bola znázornená vrátane PI3K /Akt, MAPK /EKR, FAK-SRC, AKO /STAT, NF-kβ a MMP dráhy [25] - [27]. V tejto štúdii, nadmerná expresia CEACAM6 zvýšenej MMP-9 aktivitu, a anti-MMP-9 protilátky by mohla zvrátiť rastúci invazívne a migračné vlastnosti, vyvolané CEACAM6. EMT iniciácie je významne koreluje s nádorových metastáz, a vyvoláva kmeňových vlastností buniek, zabraňuje apoptózu a starnutiu a prispieva k imunosupresie progresie rakoviny [15]. EMT možno indukovať prostredníctvom aktivácie PI3K /Akt signálnej dráhy [28], [29]. CEACAM6 funguje ako medzibunkovej adhézny molekuly a môžu tvoriť väčšiu lipidovej rafty interakcií so sebou samým alebo inými CEACAMs, čím sa aktivuje po prúde signálnych kaskád, ako je integrínu a PI3K /Akt dráhy [10], [30]. Preto sme skúmali účinky CEACAM6 nadmernej expresie na úrovni AKT fosforylácie v GC buniek. Fosforylovanej Akt hladiny boli v bunkách CEACAM6-nadmernou expresiou zvyšuje, v súlade s predchádzajúcimi výsledkami uvedené v pankreatických karcinómov [8], [11]. Podľa týchto pozorovaní, navrhujeme hypotézu, pričom CEACAM6 indukovanú EMT dochádza prostredníctvom aktivácie PI3K /Akt signálne kaskádu v GC. Okrem toho CEACAM6-expresiou bunky ošetrené LY294002, ktorý je inhibítorom PI3K, podstúpil obrátenie EMT cez THP. Preto sme k záveru, že CEACAM6 indukuje EMT aktiváciou PI3K /Akt signálne dráhy v GC a môžu slúžiť ako potenciálne ciele v liečbe nádorov.

Na záver, nám ukázali, že CEACAM6 pôsobí ako onkogén podporou EMT cez PI3K /Akt aktiváciu v GC. Navyše, E-cadherin je výrazne downregulated v GC tkanivách než párových susedných bez nádorových tkanív. CEACAM6 podporuje inváziu a metastázy v
vitro stroje a v
vivo
, a môže byť potenciálny nový diagnostický a prognostický ukazovateľ a nový cieľ pre GC terapie.

Podporné informácie
Checklist S1.
prídete pokyny. Všetky experimenty in vivo na našom rukopisu boli vyvezené v súlade s pokynmi dorazí
doi :. 10,1371 /journal.pone.0112908.s001
(DOC)

Poďakovanie

by som poďakovať Xuehua Chen a Zhang Jianian pre technickú pomoc, aby Beiqin Yu za jej hmotnej podpory.

• Ploche ONE: RABEX-5 je stimulovaná a hrá onkogénnych úlohu v žalúdku vzniku rakoviny aktiváciou VEGF signalizácia Pathway
• Ploche ONE: Je Early Oral skrmovať po rakovinou žalúdka chirurgia realizovateľné? Systematický prehľad a Meta-analýza randomizovaných kontrolovaných štúdií