PLoS One: CEACAM6 Elősegíti gyomorkarcinóma invázió és metasztázis indukálva Epithelialis-mesenchymalis átmenet útján PI3K /AKT jelátviteli útvonal

absztrakt

overexpresszált CEACAM6 a tumor szövetekben fontos szerepet játszik a invázió, metasztázis és anoikis ellenállás a különböző humán rák. Nemrég számolt be, hogy CEACAM6 kifejezés felülszabáiyoződik Gyomorrák (GC) szövetek és támogatni GC áttétek. Itt azt jelentette, hogy CEACAM6 elősegíti peritoneális áttétek katalógusa vivo katalógusa és negatívan korrelál E-cadherin GC szövetekben. Overexpresszált CEACAM6 indukált epithelialis-mesenchymalis átmenet (EMT) GC, mért emelkedése EMT markerek N-kadherin, vimentin vagy meztelencsiga, míg az E-cadherin expresszió csökkent CEACAM6 overexpresszáló GC-sejtek; szembenálló eredményeket figyeltünk meg CEACAM6-hangtompítós sejteket. Továbbá, E-cadherin expresszió negatívan korrelált a mélysége tumor invázió, nyirokcsomó-metasztázis és TNM-beosztása GC szövetekben. Továbbá, CEACAM6 emelkedett mátrix metalloproteináz-9 (MMP-9) aktivitás GC, és az anti-MMP-9 antitest képes visszafordítani a növekvő invázió és a migráció által indukált CEACAM6. CEACAM6 is emelkedett szintek foszforilált Akt, amely részt vesz a progresszió számos különböző humán daganatok. Azt is megfigyelték, hogy LY294002 egy PI3K gátló, megfordíthatja CEACAM6 indukálta EMT keresztül mesenchymalis epithelialis átmenet. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy CEACAM6 fokozza invázió és metasztázis GC elősegítésével EMT keresztül a PI3K /AKT jelátviteli. Katalógusa

Citation: Zang M, Zhang B, Zhang Y, Li J., Su L, Zhu Z és mtsai . (2014) CEACAM6 Elősegíti gyomorkarcinóma invázió és metasztázis indukálva Epithelialis-mesenchymalis átmenet útján PI3K /AKT jelátviteli útvonal. PLoS ONE 9 (11): e112908. doi: 10,1371 /journal.pone.0112908 katalógusa

Szerkesztő: Chun-Ming Wong, University of Hong Kong, Hong Kong katalógusa

Beérkezett: augusztus 7, 2014; Elfogadva: október 16, 2014; Megjelent: november 14, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Zang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: A szerzők megerősítik, hogy az összes adatot a megállapításokat alátámasztó teljes mértékben hozzáférhető, korlátozás nélkül. Minden lényeges adat a papírra. Katalógusa

Forrás: Ezt a munkát támogatták a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 81172324, 91229106 számú, No. 81272749 és 81372231 számú), és Key Project Shanghai Oktatási Bizottság (No. 12ZZ105 és No.12ZZ102) és Tudományos és Technológiai Bizottságának Shanghai Önkormányzat (No. 13ZR1425600). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

GC egyik leggyakoribb rosszindulatú daganat, és jelentős egészségügyi probléma az egész világon, különösen a kelet-ázsiai országokban, mint Japán, Korea, Kína, ahol ez a második oka a rák okozta halál [1] - [3]. Karcinoembrionális antigén kapcsolatos sejt adhéziós molekula 6 (CEACAM6) egy glikozil-foszfatidilinozitol (GPI) -hez kötődő immunglobulin-szupercsalád tagja, amely túlexpresszálódik különböző humán rákos megbetegedések, különösen a gyomor-bél rák, [4] és funkciókat, mint egy intercelluláris adhéziós molekula [4] - [6]. Bár CEACAM6 egy GPI horgonyzott sejtfelszíni glikoprotein hiányzik egy transzmembrán vagy intracelluláris domén, de képes befolyásolni intracelluláris jelátviteli események és fontos szerepet játszik a gyomor- és bélrendszeri rák progressziójának [4], [6] - [8]. GPI horgonyzott molekulák gyakran együtt lokalizálódik kis membrán mikrodomének a plazma membrán [9], amely aktiválja a jelátviteli kaszkádok, mint például az integrin jelátviteli útvonal [10]. CEACAM6 viselkedik, mint egy onkogént tumorokban, és elősegíti a rák terjedését, metasztázis, anoikis ellenállás és kemorezisztencia, és a differenciálódást gátolja [7], [8], [11]. Nemrég jelentették, hogy CEACAM6 expressziója fokozódik, és társított nyirokcsomó-metasztázis GC szövetekben [12]. Azonban azok a mechanizmusok, amelyeken keresztül CEACAM6 befolyások intracelluláris jelátvitel GC még meg kell határozni. Katalógusa

A hámsejtek mesenchymalis tranzíció (EMT) nemcsak élettani folyamat az embrionális fejlődés során, vagy a szövetek regenerálódását, hanem egy kóros elem rák progressziójának bevonásával tumor metasztázis, az apoptózis és az öregedés ellenállás [13] - [15]. EMT mindig azt mutatja, rossz klinikai prognózisát a humán daganatokban. Számos mechanizmus releváns EMT iniciációs dokumentálták, beleértve a TGF-β, IL-6, PI3K /Akt, RAF /MAPK és az src utak [15] - [18]. Korábbi vizsgálatunkban azt tapasztaltuk, CEACAM6 kiváltott SRC aktiváció GC sejtekben [12], és a megfigyelt fokozott számban orsó alakú CEACAM6 overexpresszáló sejtek, mint a kontroll sejtekben. Ezért mi nagyon érdekel közötti viszonyt CEACAM6 és EMT GC sejtekben. Bár negatív korreláció CEACAM6 és EMT rögzítésre került hasnyálmirigyrák [19], a mechanizmusok, amelyek CEACAM6 szabályozza EMT nehezen érthető. Katalógusa

Ebben a tanulmányban azt vizsgálták tovább, a hatások és a lehetséges utak CEACAM6 GC invázió és metasztázis, és vizsgálták a korreláció EMT. katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

Etikai nyilatkozat katalógusa

írásos beleegyező nyilatkozatot a vizsgálat nyerték minden résztvevő számára. A vizsgálati protokollt jóváhagyta az etikai bizottság a Ruijin Kórház, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine. Állati eljárást végeztek protokoll szerint jóváhagyta az Institutional Animál Care and Use Committee (IACUC) a Shanghai Jiao Tong Egyetem, Sanghaj, Kína. Katalógusa

sejtvonalak és szövetminták

Az emberi GC sejtvonalak SGC-7901, MKN-45 és MKN-28 vásároltunk a Shanghai Institutes for Biological Sciences, a kínai Tudományos Akadémia. A sejteket 37 ° C hőmérsékleten 5% CO _{2 és a telítettség páratartalom RPMI-1640 közegben, amely 10% magzati borjúszérumot.}

Gyomor tumor és a szomszédos, nem tumoros szövetekben kaptuk 93 betegek GC átesett kuratív műtét Shanghai Jiaotong Orvostudományi Egyetem Affiliated Ruijin Kórház 2010-től 2013-ig a betegek állt 69 férfi és 24 nő, átlagéletkoruk 62,1 év volt (tartomány, 30-85 év). Egyik beteg kapott sugárterápia vagy kemoterápia a műtét előtt. Klinikopatológiai adatokat összegyűjtöttük, és patológiai stádium szerint határoztuk meg az UICC TNM osztályozás. A szövettani tipizálás végeztük legalább két szakértő patológusok önállóan működő kettős vak módszerrel. Ez a tanulmány által jóváhagyott Etikai Bizottsága Shanghai Ruijin Kórház, és minden beteget teljes körű tájékoztatást a kísérleti eljárások. Katalógusa

vektor építési és transzfekciós katalógusa

A teljes hosszúságú cDNS CEACAM6 kaptuk RT- PCR-rel kivont teljes RNS-GC mintákból. A primer szekvenciákat 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 '(forward) és 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3' (reverz). Mi össze egy pIRES2-eGFP-CEACAM6 konstrukció beiktatásával CEACAM6 cDNS pIRES2-eGFP vektort. Mi következő transzfektált pIRES2-eGFP-CEACAM6 vagy pIRES2-eGFP vektort SGC-7901 és MKN-45 sejteket Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carisbad, USA), összhangban a gyártó utasításai szerint. Stabil klónokat szelektáltunk folyamatos kezelés G418-at (1,2 mg /ml, Gibco, New York, USA).

lentivirális vektorral építési

alapján emberi CEACAM6 gén adatokat, egy pár oligonukleotid-szekvenciák és a negatív kontroll szekvenciák terveztünk és szintetizáltunk Shanghai Novobio Scientific Co., Ltd. shRNS szekvenciák a következők voltak: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 '(előre), és az 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3' (reverz); kontroll, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 '(előre), és az 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3' (reverz). CEACAM6 shRNS szubklónoztuk PL /shRNS /F lentivirális vektor szerezni PL /shRNS /SHR-CEACAM6 konstrukciót. Ezután PL /shRNS /SHR-CEACAM6 vagy ellenőrzik Lentivirális vektorokat transzfektáljuk MKN-28 GC sejteket. Stabilan transzfektált sejteket kiválasztott végzett kezeléssel 5 ng /ml Blasticidin és használtak azonosítás és a további kutatást.

Western blot

sejteket elkülönítettük, és lizáljuk RIPA-pufferben (Solarbio, Peking, Kína ), amely 1% PMSF-et proteáz inhibitorok. Egy BCA assay kit (Pierce, Rockford, USA) mértük az összes protein koncentrációt. Egyenértékű mennyiségű fehérjét elválasztottuk 10% SDS-PAGE, és a rezolvált fehérjéket átvittük PVDF-membránokra. A membránokat blokkoltuk 5% lefölözött tej, 2 órán át, majd inkubáltuk primer antitestekkel egy éjszakán át 4 ° C hőmérsékleten. Primer antitestek a következők voltak: CEACAM6 (1:500; ABCAM, USA), az E-kadherin (1:500; Cell Signaling Technology (CST), Amerikai Egyesült Államok), N-kadherin (1:500; CST, USA), A vimentin ( 1:1000; CST, USA), meztelencsiga (1:500; CST, USA), a p-Akt (Ser473) (1:1000; CST, USA), totál Akt (1:1000; CST, USA) és GAPDH ( 1:10000; ABCAM, USA). A membránokat ezután inkubáltuk szekunder antitesttel 2 órán át szobahőmérsékleten, majd tettük láthatóvá alkalmazásával fokozott kemilumineszcencia detektáló rendszer (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) szerint a gyártó utasításai szerint.

immunfluoreszcens festéssel katalógusa

a sejteket fedőlemezen 24 órán át, majd fixáltuk 4% paraformaldehiddel 15 percig. A sejteket PBS-sel mostuk, majd permeabilizáltuk 0,5% Triton X-100-on 20 percig és blokkoltuk 5% BSA-on 30 percig, szobahőmérsékleten. Mi következő festett a sejteket CEACAM6 antitesttel (1:50; ABCAM) 37 ° C-on 2 órán át, majd inkubáltuk fluoreszcens másodlagos antitesttel 1 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A sejtmagokat festettük DAPI. Rodamin falloidin antitest (1:150; Citoszkeleton) alkalmaztunk, hogy szemléltesse a citoszkeleton GC sejteket. Diák elemeztük és leképezve fluoreszcens mikroszkóp alatt. Katalógusa

Az immunhisztokémiai katalógusa

Profilok 4 mm vastag vágunk paraffinba ágyazott szövettani blokkok majd paraffint és rehydráltuk. Immunhisztokémiai festése szakaszok szerint végeztük a DAKO protokoll használatával egér anti-CEACAM6 (1:100; ABCAM) és az E-cadherin (1:100; CST) 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át. Lemezeket ezután inkubáltuk HRP-vel jelzett szekunder antitesttel, és láthatóvá tettük diaminobenzidin. Két patológus akiket elvakított minden beteg adatait függetlenül értékelni és szerezte a szakaszok. Az immunhisztokémiai festés pontszám = pozitív sejt pontszám + festés intenzitását pontszámot. A pozitív sejtek százalékos aránya pontoztuk a következők szerint: 0 (10%), 1 (10-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) és 4 (> 75%). Immunhisztokémiai festődés intenzitása osztályoztuk a következők szerint: 0 (nincs festés), 1 (gyenge festődés), 2 (barna festődés) és 3 (sötét barna festődés). Összesen pontszámok ≥3 definiáltuk pozitív adatok analízisének egyszerűsítésére. Elemezni az összefüggést CEACAM6 és E-cadherin, Image-Pro Plus 6.0 (Media Kibernetikai, Inc., Bethesda, MD, USA) használtunk számszerűsíteni kifejezése CEACAM6 és E-cadherin 20 mintát. Katalógusa

zselatin zimográfia

Annak vizsgálatára MMP-9-aktivitás, zimográfia végeztünk 10% SDS-PAGE-géleken, amely 1 mg /ml zselatin (Sigma). Röviden, a GC-sejteket tenyésztettünk szérummentes RPMI-1640 tápközegben 24 óra, és a felülúszót összegyűjtjük, és lecentrifugáltuk 1000 rpm-en, 5 percig. A géleket kétszer mostuk renaturáció pufferben (2,5% Triton X-100) 30 percig minden egyes alkalommal az SDS eltávolítása céljából elektroforézis után, majd inkubáljuk 37 ° C-on 24 órán át reakció pufferben (50 mM Tris-HCI pH 7,5, 5 mM CaCI2, 150 mM NaCl). Mi következő festett gélek 0,5% Coomassie Brilliant Blue R-250-on 2 órán majd a festéket eltávolítjuk a gélek pufferben (30% metanol, 10% ecetsav). Átlátszó szalagok, a háttérben a kék festéssel képviselte a zselatináz tevékenységét. Katalógusa

Cell migrációs és behatolás vizsgálatokban katalógusa

A sejt migrációs és behatolás vizsgálatokban összesen 1 × 10 ^{5 sejteket szuszpendáljuk szérummentes RPMI-1640-ben vagy anélkül MMP-9 antitest (ABCAM, 2 ug /200 ul), és szélesztünk transwell kamrák (8 um, 24-lyukú lemezen; Corning Costar, NY, USA), vagy anélkül Matrigel ( BD Bioscience, CA, USA) alkalmazásával a gyártó protokollja szerint. Mindkét vizsgálati eljárások, tápközegben, amely 10% FBS-t adtunk az alsó kamrába, mint egy kemoattraktáns. 24 óra eltelte után a kultúra, a sejteket rögzítettük 10% formaiinban és megfestettük 0,5% kristályibolya. Végül a sejteket az alsó kamrába lefényképezzük és megszámoltuk fordított mikroszkóppal. Katalógusa}

csupasz egér xenograft modell katalógusa

Négy hetes hím BALB /c csupasz egerek (Zoológiai Intézet, Kínai Tudományos Akadémia Sciences) használták, hogy értékelje a szerepe CEACAM6 peritoneális terjed katalógusa vivo katalógusa. Meztelen egereket egy meghatározott kórokozóktól mentes környezetben az Állat-Laboratóriumi berendezés, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong Egyetem, Kína. Az egerek humánus ellátást és a vizsgálati protokollok szerint hajtottuk végre, hogy a protokoll által jóváhagyott intézményi Animal Care and Use Committee (IACUC) a Shanghai Jiao Tong Egyetem, Sanghaj, Kína. Összesen 2 × 10 ^{6 SGC-7901-CEACAM6 vagy SGC-7901-NC sejteket injektált öt egér hasüregébe minden csoportban (a véletlen besorolás). Az egereket eutanáziát a 30. napon az injekció beadását követően, és a hasi tömegek leképezett és fényképezett. Minden kísérletet összhangban hivatalos ajánlások a kínai állati közösség. Katalógusa}

Statisztika katalógusa

Student t katalógusa próba volt vizsgálatához használt statisztikai különbség a két csoport között . Közötti összefüggések E-cadherin GC szövetek és klinikopatológiai paraméterek és CEACAM6 kifejezés elemeztük chi-négyzet vagy Fisher-tesztet vagy Pearson-féle korrelációs együttható elemzés. Az adatokat mutatjuk átlag ± SD. P katalógusa < 0,05 és P katalógusa < 0,01 értéket tekintettük statisztikailag szignifikáns és igen jelentős volt. Katalógusa

Eredmények katalógusa

CEACAM6 befolyásolja sejtek morfológiája és a citoszkeleton katalógusa

a korábbi eredmények azt sugallta, hogy MKN-28 GC sejtek eleve kifejezni a magas szintű CEACAM6, míg SGC-7901 és MKN-45 GC sejtek alacsony szinten fejezik [12]. Túlexpressziója CEACAM6 a SGC-7901 és MKN-45 GC sejtek és csillapítása CEACAM6 expresszió MKN-28 GC sejtek PL /shRNS /SHR-CEACAM6 lentivírus vektorok is megerősítette a protein szinten Western-blot-analízis (1A.). Immunfluoreszcens vizsgálatok azt mutatták, hogy mindig SGC-7901-CEACAM6 sejtek kifejezett több CEACAM6 fehérjét, mint SGC-7901-NC-sejtek (ábra. 1B). Katalógusa

Érdekes sejtek morfológiáját megváltoztatták következő CEACAM6 csillapítás és túltermelése. Összehasonlítva a kontroll sejtek, SGC-7901-CEACAM6 és MKN-45-CEACAM6 sejteket mutatott több mesenchymalis-szerű morfológiájú, és voltak spindle- és fusiform alakú (ábra. 1C). Ezzel szemben a tipikus átmenet mesenchymalis az epitheliális morfológia volt kimutatható MKN-28-sh sejtek képest MKN-28-nc sejtek (ábra. 1C). Ugyanakkor nem volt világos, ha CEACAM6 túltermelése hatással volt a citoszkeleton, így immunofluoreszcens festés F-aktin festést végeztünk. Érdekes módon, a nagyobb méretű fusiform alakú sejteket figyeltünk MKN-45-CEACAM6, SGC-7901-CEACAM6 vonalak, mint a kontroll sejtek (ábra. 1D).

CEACAM6 negatívan társított E-cadherin in GC szövetek

immunhisztokémiai analízist használták, hogy meghatározzák a szint az E-cadherin expresszió rákos szövetekben és párosítva szomszédos, nem-daganatos szövetekben. Az immunhisztokémiai mutatta, E-cadherin expresszió alacsonyabb volt a tumor szövetekben, mint a szomszédos, nem-daganatos szövetekben, és kiderült, hogy az E-cadherin főleg található a cytomembrane a hámsejtek (ábra. 2D, E, F). Ezután megvizsgáltuk a kapcsolatát E-cadherin klinikopatológiai jellemzői GC, és megállapította, hogy downregulált E-cadherin társult mélysége invázió ( P katalógusa = 0,046), nyirokcsomó áttét ( P katalógusa = 0,013), és a TNM ( P katalógusa = 0,035), de más klinikopatológiai tényezők, köztük a nem, az életkor, vagy differenciálódás (1. táblázat). Emellett CEACAM6 negatívan korrelált EMT hasnyálmirigyrák [19] és CEACAM6 elnyomás növelheti E-cadherin promoter aktivitását vastagbélrákban [20]. Katalógusa

Továbbá vizsgáltuk az összefüggést az E-cadherin és CEACAM6 kifejezés a GC soros szakasz immunhisztokémiai (20 minta). CEACAM6 expresszió a tumor szövetekben magasabb volt, mint a párosított nem-daganatos szövetekben (2A., B, C), amely összhangban áll a korábbi eredményeket [12]. Érdekes módon azt találtuk, hogy a CEACAM6 kifejezés negatívan korrelált E-cadherin GC szövetekben Pearson-féle korrelációs együttható elemzés ( P &katalógusa 0,01; ábra. 2G). Katalógusa

CEACAM6 indukál EMT GC-sejtek

EMT kapcsolódó fehérjék GC sejteket értékeltük Western blot analízissel. Megfigyeltük, hogy az N-kadherin, vimentin vagy meztelencsiga fehérje szintje emelkedett, míg az E-cadherin csökkent az CEACAM6 overexpresszáló sejtek összehasonlítva a megfelelő kontroll sejtek (3A., B). Converse eredményeket kaptunk után CEACAM6 ütötték le MKN-28 sejteket (3C., D). Ezek az eredmények arra utalnak funkcionális szerepe CEACAM6 szabályozásában EMT GC sejtekben. Sőt, ezek a megfigyelések GC sejtekben hasonló volt a megállapítások GC szövetben.

CEACAM6 emeli az MMP-9 GC sejtekben

Köztudott, hogy a tapadás, degradáció és a migráció legfontosabb kérdések a rák áttétet. Zselatin zimográfia végeztünk hatásainak vizsgálata CEACAM6 az MMP-9, ami fontos az ECM lebomlása. MMP-9-aktivitás SGC-7901-CEACAM6 és MKN-45-CEACAM6 sejtek képest emelkedett a kontroll csoportban (4a., B). Mi következő vizsgáltuk, hogy a megnövekedett aktivitása az MMP-9 által indukált CEACAM6 GC sejtekben eredményezte igaz növekmény számának betörő és vándorló sejtek. Mi tehát megvizsgálta a hatóanyag az anti-MMP-9 ellenanyag vagy PBS CEACAM6-túltermelő GC sejteket. Ahogy az várható, voltak jelentős különbségek számának betörő és migráló sejtek antitest-kezelt sejtek összehasonlítva PBS-sel kezelt sejtek ( p
&0,01; ábra. A 4C, D, E, F).

CEACAM6 upregulálja foszforilált AKT GC sejtek katalógusa

korábban már megfigyelték, hogy az SRC aktivitást indukált CEACAM6 az SGC-7901 GC sejteket. AKT egy downstream fehérje az SRC és drámaian társított EMT, invázió és metasztázis a tumor progresszióját. Kidolgoztunk tehát AKT aktivitás CEACAM6-túltermelő GC sejteket. Western blot azt mutatta, hogy az Akt foszforiláció szerin 473-ben jelentősen nőtt CEACAM6 overexpresszáló GC sejtek, mint a kontroll csoportban (ábra. 5A, B). Annak vizsgálatára, hogy EMT változások által indukált CEACAM6 keresztül a PI3K /AKT útvonal, SGC-7901-CEACAM6 és MKN-45-CEACAM6 sejteket kezeltünk 100 nM LY294002 24 órán át. Érdekes módon, az E-cadherin nőtt és az N-kadherin csökkent az LY294002-vel kezelt CEACAM6 overexpresszáló sejtek a kontrollokhoz képest, mért Western-blot-analízis (ábra. 5C, D).

CEACAM6 elősegíti peritoneális terjed in vivo katalógusa

Végül megvizsgáltuk a hatásait CEACAM6 túltermelése peritoneális terjed és metasztázisok katalógusa vivo katalógusa. Mi injektált SGC-7901-CEACAM6, SGC-7901-NC sejtek a hasa csupasz egerekben. Kiterjedt peritoneális terjedése volt megfigyelhető az SGC-7901-CEACAM6 csoportban, mint a CSKP-7901-NC-csoport (6A.). Szignifikánsan jobban látható peritoneális csomók a SGC-7901-CEACAM6 csoportban, mint a kontroll csoportban (5,400 ± 0,510 vs. Katalógusa 1,400 ± 0,245, P &katalógusa 0,01; 6B. ). Emellett túltermelése CEACAM6 fokozó metasztázis katalógusa vivo katalógusa is beszámoltak a hasnyálmirigyrákban [19]. Katalógusa

Vita katalógusa

GC a második ok a rák okozta halál világszerte [1]. Egyre több bizonyíték jelzi, hogy CEACAM6 fontos szerepet játszik a gasztrointesztinális rák progressziójának [7], [20] - [22], és CEACAM6 szélesebb körben oszlik el, mint a CEA (CEACAM5) a normál szövetekben, és jelentős expressziót sok hámban [4]. CEACAM6 befolyások jelátviteli eseményeket homofil és Heterofil tapadás más CEACAMs vagy integrin [23], [24]. A tanulmány célja az volt, hogy megvizsgálja az észrevételeket a GPI-horgonyzott fehérje CEACAM6 GC progresszióját. Katalógusa

Érdekes, azt tapasztaltuk, hogy sejt morfológiája és citoszkeleton szerkezetét változtatta stabil upreguláció és downregulációját CEACAM6 GC sejtekben. CEACAM6 overexpresszáló sejtek voltak, mezenhimális-szerű és mutatott a orsó és fusiform alakú, és több aktin stressz rostok észleltek, mint a kontroll csoportban, egy meghatározott folyamat például EMT. A mesenchymalis fenotípus felruházza sejtek több vándorló és invazív tulajdonságait [15]. Ez a megfigyelés összhangban volt a katalógusa vivo katalógusa eredménye, amelynek során CEACAM6 indukált kiterjedt hashártya terjed nude egerekben. MET figyeltek következő elhallgattatása CEACAM6 GC sejtekben. Ezek a megfigyelések igazolták, hogy CEACAM6 lehet vonni indukáló EMT GC. Mi a következő közötti összefüggést vizsgáltuk CEACAM6 és E-cadherin, a marker EMT, a GC szövetek immunhisztokémiai festéssel. Ahogy az várható volt, szignifikáns negatív korreláció volt megfigyelhető a CEACAM6 és E-cadherin és E-cadherin társult mélysége tumor invázió, nyirokcsomó áttétek és TNM GC szövetekben. Emellett CEACAM6 támogatni nyirokcsomómetastasis ( P katalógusa = 0,001) 98 GC szövetekben korábbi tanulmány [12]. Korábbi eredmények azt mutatták, hogy CEACAM6 csillapítás fokozott E-cadherin promoter aktivitást a colorectalis rák [20]. Ennek alapján a fent említett eredményeket, azt feltételezték, hogy CEACAM6 mozdítani GC invázió és metasztázis indukálva EMT és szolgálhat a mesenchymalis markert.

Metastasis a vezető oka a rákhoz kapcsolódó halál, de már nehéz tanulmányozni, mivel magában foglalja egy sor ritka, sztochasztikus eseményeket. Számos lehetséges jelátviteli utak releváns rák metasztázis szemléltettük, beleértve a PI3K /Akt, MAPK /ERK, FAK-SRC, JAK /STAT, NF-kβ, és az MMP-k utak [25] - [27]. Ebben a vizsgálatban, overexpressziója CEACAM6 emelkedett MMP-9 aktivitását, és az anti-MMP-9 antitest képes visszafordítani a növekvő invazív és migrációs tulajdonságokat által indukált CEACAM6. EMT beavatás szignifikáns összefüggést mutat a rákos áttétek, és elősegíti az őssejt tulajdonságait, megakadályozza az apoptózist és az öregedés, és hozzájárul az immunszuppresszió daganatos progresszió [15]. EMT lehet indukált aktiválása révén a PI3K /AKT jelátviteli útvonal [28], [29]. CEACAM6 funkcionál intercelluláris adhéziós molekula és alkothatnak nagyobb lipid raftok kölcsönhatásban önmagában vagy más CEACAMs, ily módon aktiválja a jelátviteli kaszkádok, mint például az integrin és a PI3K /AKT utakat [10], [30]. Ezért megvizsgáltuk a hatását CEACAM6 overexpresszió koncentrációjáról AKT foszforiláció GC sejtekben. Foszforilált AKT emelkedtek a CEACAM6 overexpresszáló sejtek, összhangban áll a korábbi eredményeket megjegyezte hasnyálmirigyrák [8], [11]. Ezen megfigyelések szerint, Hipotézisünk amellyel CEACAM6 indukálta EMT előfordul aktiválása révén a PI3K /AKT jelátviteli kaszkád GC. Sőt, CEACAM6 overexpresszáló sejteket kezeltek LY294002, egy PI3K gátló, ment megfordítása EMT keresztül MET. Így arra a következtetésre jutunk, hogy CEACAM6 indukál EMT aktiválásával PI3K /AKT jelátviteli GC és szolgálhat a potenciális célpont a daganat kezelésére. Katalógusa

Összefoglalva, azt bizonyítja, hogy a CEACAM6 viselkedik, mint egy onkogén elősegítésével EMT via PI3K /AKT aktivációt GC. Továbbá, E-cadherin markánsan downregulált GC szövetekben, mint a páros szomszédos, nem daganatos szövetekben. CEACAM6 elősegíti invázió és metasztázis katalógusa vitro katalógusa és katalógusa vivo katalógusa, és lehet, hogy egy potenciális új diagnosztikai és prognosztikai marker és az új cél GC terápiát.

alátámasztó információk katalógusa ellenőrzőlista S1.
ARRIVE irányelveket. Minden in vivo kísérletekben a kézirat szerint exportálják a ARRIVE irányelveket. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0112908.s001 katalógusa (DOC) hotelben

Köszönetnyilvánítás katalógusa

szeretnék köszönetet mondani Xuehua Chen és Jianian Zhang a technikai segítségnyújtás, a Beiqin Yu neki anyagi támogatást. katalógusa

• PLoS One: RABEX-5 fokozódik, és játszik egy onkogén szerepe a gyomorrák Fejlesztési aktiválásával VEGF jelzés Pathway
• PLoS One: Az Early orális etetésére után gyomorkarcinóma Sebészet megvalósítható? A rendszeres áttekintése és meta-analízis, randomizált, kontrollált Trials