PLoS ONE: CEACAM6 Способствует рака желудка инвазии и метастазированию индуцируя Эпителиальные-мезенхимальных перехода через PI3K /AKT Signaling Pathway

Абстрактный
<р> суперэкспрессированный CEACAM6 в опухолевых тканях играет важную роль в инвазии, метастазирования и сопротивление anoikis в различных раковых заболеваний человека. Недавно мы сообщали, что экспрессия CEACAM6 активируется в рак желудка (GC) тканей и способствовало GC метастазирования. Здесь мы сообщаем, что CEACAM6 способствует перитонеальный метастаз в

естественных условиях и отрицательно коррелирует с экспрессией E-кадгерина в GC тканях. Суперэкспрессированный CEACAM6 индуцированных эпителиально-мезенхимальных перехода (EMT) в GC, как измерено ростом в EMT маркеров N-кадгерина, Виментин и Slug тогда как экспрессия Е-кадгерин был уменьшен в CEACAM6-гиперэкспрессией GC клеток; противостоящие результаты наблюдались в CEACAM6-притихли клеток. Кроме того, выражение Е-кадгерин отрицательно коррелирует с глубиной инвазии опухоли, метастазирование узлов лимфы и TNM стадии ГХ тканей. Кроме того, повышенная CEACAM6 матрица металлопротеиназы-9 (MMP-9) деятельность в GC, и анти-MMP-9 антитело может обратить вспять растущую инвазию и миграцию, вызванную CEACAM6. CEACAM6 также повышал уровень фосфорилированного АКТ, который участвует в прогрессии разнообразных опухолей человека. Кроме того, мы наблюдали, что LY294002, ингибитор PI3K, может повернуть вспять CEACAM6-индуцированный EMT с помощью мезенхимальных-эпителиальной перехода. Эти данные позволяют предположить, что CEACAM6 усиливает инвазию и метастазирование в GC путем содействия EMT с помощью сигнализации PI3K /AKT пути
<р> Цитирование:. Занг М, Чжан B, Чжан Y, Li J, L Су, Чжу Z, и др , (2014) CEACAM6 Содействует Рак желудка инвазии и метастазированию индуцируя Эпителиальные-мезенхимальных перехода через PI3K /AKT сигнальным каскадом. PLoS ONE 9 (11): e112908. DOI: 10.1371 /journal.pone.0112908
<р> Редактор: Chun-Минг Вонг, Университет Гонконга, Гонконг
<р> Поступило: 7 августа 2014 года; Принято: 16 октября 2014 года; Опубликовано: 14 ноября 2014
<р> Copyright: © 2014 Занг и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник приписывают наличие
<р> Data:. авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводы полностью доступны без ограничений. Все соответствующие данные находятся в работе
<р> Финансирование:. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов от Национального фонда естественных наук Китая (№ 81172324, № 91229106, № 81272749 и № 81372231), и Ключевой проект Комитета Шанхайской образования (№ 12ZZ105 и No.12ZZ102) и по науке и технике комиссии муниципалитета Шанхая (№ 13ZR1425600). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> GC является одним из наиболее распространенных злокачественных опухолей и одной из основных проблем здравоохранения во всем мире, особенно в странах Восточной Азии, таких как Япония, Корея, Китай, где он является второй причиной, связанной с раком смерти [1] - [3]. Карциноэмбриональный антиген, связанных с клеточной адгезии молекулы 6 (CEACAM6) является glycosylphosphatidylinositol (ИГП) -связанной иммуноглобулин член суперсемейства, который избыточно экспрессируется в различных раковых опухолей человека, особенно желудочно-кишечных раковых заболеваний [4], а также функционирует как фактор межклеточной адгезии [4] - [6]. Хотя CEACAM6 является GPI-якорь на клеточной поверхности гликопротеин в ней отсутствует трансмембранный или внутриклеточный домен, но способен влиять на внутриклеточные сигнальные события и играет важную роль в прогрессии рака желудочно-кишечного тракта [4], [6] - [8]. ГПИ-привязанный молекулы часто колокализуются для небольших мембранных микродоменах в плазматической мембране [9], который может активировать вниз по течению сигнальных каскадов, таких как интегрин сигнального пути [10]. CEACAM6 действует как онкоген в опухолях и способствует инвазии рака, метастазированию сопротивление anoikis и химическую устойчивость, и ингибирует дифференциацию [7], [8], [11]. Мы недавно сообщили, что экспрессия CEACAM6 позитивно регулируется и связан с метастазов в лимфатических узлах в дс ткани [12]. Однако механизмы, с помощью которых CEACAM6 влияния внутриклеточной передачи сигнала в GC, еще предстоит определить.
<Р> Эпителиальные-мезенхимальных перехода (EMT) является не только физиологический процесс, во время эмбрионального развития или регенерации тканей, но и патологическое элемент прогрессирование рака, включая метастазы опухолей, апоптоз и сопротивление старение [13] - [15]. ЕМТ всегда указывает на неблагоприятный клинический прогноз у человека рака. Ряд механизмов, имеющих отношение к ЕМТ инициацию были задокументированы, включая TGF-бета, IL-6, PI3K /AKT, RAF /МАРК и пути SRC [15] - [18]. В нашем предыдущем исследовании мы наблюдали CEACAM6-индуцированной активации SRC в GC клетках [12], а также наблюдалось увеличение числа веретенообразных CEACAM6-гиперэкспрессией клеток по сравнению с контрольными клетками. Таким образом, мы были очень заинтересованы в определении отношения между CEACAM6 и EMT в GC клетки. Несмотря на то, отрицательная корреляция между CEACAM6 и EMT было записано в панкреатических карцином [19], механизмы, с помощью которых CEACAM6 регулирует EMT мало изучены.
<Р> В этом исследовании мы также исследовали эффекты и возможные пути распространения CEACAM6 в GC инвазии и метастазирования, и исследовали ее корреляцию с EMT.

материалы и методы

Этика Заявление
<р> Письменное информированное согласие в исследовании было получено от всех участников. Протокол исследования был одобрен этическим комитетом больницы Жуйцзинь, Shanghai Jiao Tong University школы медицины. Процедуры на животных были проведены в соответствии с протоколом, утвержденным по уходу и использованию комитета Institutional Animal (IACUC) в Shanghai Jiao Tong University, Шанхай, Китай по.

Клеточные линии и образцы ткани
<р> человек GC клеточные линии SGC-7901, MKN-45 и MKN-28 были приобретены из Шанхая институтом биологических наук, китайской академии наук. Клетки культивировали при 37 ° С в атмосфере 5% СО <суб> 2 и насыщенность влажности в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки
. <Р> Желудочный опухоль и прилегающий неопухолевой ткани были получены от 93 пациентов с GC, перенесших хирургическое лечение в Шанхае Цзяотун школы медицины университета Дочернее Жуйцзинь больницы с 2010 по 2013 год пациентов состояла из 69 мужчин и 24 женщин со средним возрастом 62,1 лет (диапазон, 30-85 лет). Ни один из пациентов не получал лучевой терапии или химиотерапии до операции. Клинико-патологическими данные были собраны и патологическое стадирование опухоли определяли в соответствии с классификацией TNM UICC. Гистологическое типирование было выполнено, по крайней мере, двух экспертов, работающих независимо друг от друга патологоанатомами в двойном слепом моды. Данное исследование было одобрено Комитетом по этике Шанхай Жуйцзинь больницы путем, и все пациенты были полностью информированы о экспериментальных процедур.

Вектор строительство и трансфекция
<р> Полная длина CEACAM6 кДНК получали RT- ПЦР из общей РНК, выделенной из образцов ГХ. Последовательности праймеров были 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 '(вперед) и 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3' (обратный). Мы собрали pIRES2-EGFP-CEACAM6 построить путем вставки CEACAM6 кДНК в pIRES2-EGFP вектор. Далее мы трансфицировали pIRES2-EGFP-CEACAM6 или pIRES2-EGFP вектор в SGC-7901 и MKN-45 клеток с использованием Липофектамина 2000 (Invitrogen, Carlsbad, USA) в соответствии с протоколом производителя. Стабильные клоны были отобраны путем непрерывного лечения с G418 (1,2 мг /мл, Gibco, Нью-Йорк, США)

Лентивирусов вектор строительства
<р> На основе данных генов CEACAM6 человека, пары олигонуклеотидных последовательностей. и отрицательные контрольные последовательности были разработаны и синтезированы Shanghai Novobio Scientific Co., Ltd. shRNA последовательности были следующими: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 '(вперед), и 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3' (обратный); контроль, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 '(вперед), и 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3' (обратный). CEACAM6 shRNA субклонировали в вектор лентивирусов рл /shRNA /F, чтобы получить рл /shRNA /SHR-CEACAM6 конструкцию. Тогда рл /shRNA /SHR-CEACAM6 или управления лентивирусов векторы трансфицировали в MKN-28 GC клеток. Стабильно трансфицированные клетки отбирали путем обработки 5 мкг /мл бластицидин и были использованы для идентификации и проведения дальнейших исследований.

вестерн-блоттинга
<р> Клетки собирали и лизировали с использованием буфера РИПО (Solarbio, Пекин, Китай ), содержащие 1% ингибиторы ФМСФ протеазы. ДСС набора для анализа (Pierce, Rockford, США) использовали для измерения общей концентрации белка. Эквивалентные количества белка были разделены на 10% SDS-PAGE, и протеины переносили на мембраны ПВДФ. Мембраны блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 2 ч, а затем инкубировали с первичными антителами в течение ночи при температуре 4 ° С. Первичные антитела были следующими: CEACAM6 (1:500; Abcam, США), E-кадгерина (1:500; Cell Signaling Technology (CST), США), N-кадгерина (1:500; CST, США), Виментин ( 1:1000; CST, США), Slug (1:500; CST, США), п-AKT (Ser473) (1:1000; CST, США), общая АКТ (1:1000; CST, США) и GAPDH ( 1:10000; Abcam, США). Мембраны затем инкубировали с вторичными антителами в течение 2 ч при комнатной температуре, и визуализировали с использованием системы обнаружения хемилюминесценции усиливается (Amersham Bioscience, Piscataway, Нью-Джерси, США) в соответствии с протоколом производителя.

иммунофлуоресцентного окрашивания
<р> Клетки культивировали на покровных стеклах в течение 24 ч, а затем фиксировали 4% параформальдегидом в течение 15 мин. Клетки промывали PBS, а затем делают проницаемыми с 0,5% Тритона Х-100 в течение 20 минут и блокировали 5% БСА в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем мы окрашивали клетки с CEACAM6 антителом (1:50; Abcam) при 37 ° С в течение 2 ч, а затем инкубировали с флуоресцентной вторичным антителом в течение 1 ч при комнатной температуре. Ядра окрашивали DAPI. Родамина фаллоидином антитела (1:150; цитоскелета) был использован для визуализации цитоскелета GC клеток. Слайды были проанализированы и отображается на флуоресцентным микроскопом.

Immunohistochemistry
<р> Разделы 4 мкм толщиной были вырезаны из залитых парафином блоков ткани, а затем и депарафинировали регидратации. Иммуногистохимическое окрашивание срезов проводили в соответствии с протоколом, DAKO, с помощью мыши против CEACAM6 (1:100; Abcam) и Е-кадгерина (1:100; ДКБ) при 4 ° С в течение ночи. Срезы затем инкубировали с HRP-меченым вторичным антителом и визуализировали с помощью диаминобензидино. Два патолога, которые были ослеплены на любые данные пациента независимо друг от друга оценивали и набрал секции. Иммуногистохимия пятно оценка = оценка положительных клеток + окрашивание оценка интенсивности. Процент положительных клеток оценивали следующим образом: 0 (10%), 1 (10-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) и 4 (&GТ; 75%). Иммуногистохимическое интенсивность окрашивания оценивали, как не следует: 0 (без окрашивания), 1 (слабое окрашивание), 2 (коричневое окрашивание) и 3 (темно-коричневого окрашивания). Всего десятки ≥3 были определены как положительные для упрощения анализа данных. Для анализа корреляции между CEACAM6 и экспрессии E-кадгерина, Image-Pro Plus версии 6.0 (Media Кибернетика, Inc., Bethesda, MD, USA) использовали для количественной оценки экспрессии CEACAM6 и Е-кадгерина на 20 образцах.

желатин зимографии
<р> Чтобы исследовать MMP-9 активностью, зимографии проводили с использованием 10% SDS-PAGE гелей, содержащих 1 мг /мл желатина (Sigma). Вкратце, GC-клетки культивировали в бессывороточной среде RPMI-1640, в течение 24 ч и супернатант затем собирали и центрифугировали при 1000 оборотах в минуту в течение 5 мин. Гели промывали дважды в ренатурирования буфере (2,5% Тритон Х-100) в течение 30 мин каждый раз, чтобы удалить SDS после электрофореза и затем инкубировали при 37 ° С в течение 24 ч в реакционном буфере (50 мМ Трис-HCl, рН 7,5, 5 мМ CaCl2, 150 мМ NaCl). Далее мы окрашивали гели с добавлением 0,5% кумасси бриллиантовым синим R-250 в течение 2 ч и обесцвечивают гели в буфере (30% метанола, 10% уксусной кислоты). Бесцветные прозрачные полосы на фоне синего окрашивания представлял желатиназа деятельности.

миграции клеток и вторжения анализы
<р> Для миграции клеток и вторжения анализов, в общей сложности 1 × 10 5 клеток были суспендировали в бессывороточной среде RPMI-1640 с добавлением или без ММР-9 антитела (Abcam, 2 мкг /200 мкл) и высевали в Transwell камерах (8 мкм для 24-луночного планшета; Корнинг Costar, штат Нью-Йорк, США) с или без Матригель ( BD Bioscience, CA, USA) в соответствии с протоколами производителя. Для обоих анализов, среды, содержащей 10% FBS, добавляли в нижнюю камеру в качестве хемоаттрактанту. Через 24 ч после культивирования клетки фиксировали 10% -ным формалином и окрашивали 0,5% кристаллическим фиолетовым. Наконец, клетки в нижней камере были сфотографированы и подсчитывали с помощью инвертированного микроскопа.

Ню мышь ксенотрансплантата модель
<р> Четыре-недельного возраста мужчина BALB /с голых мышей (Институт зоологии Китайской академии наук) были использованы для оценки роли CEACAM6 в брюшины расширения спектра в

естественных условиях. Голые мыши были размещены на определенном патогена среде в лаборатории группы животных, школа медицины, Shanghai Jiao Tong University, Китай. Мыши получали гуманного ухода и протоколы исследования были проведены в соответствии с протоколом, утвержденным Institutional Animal Care и использование комитета (IACUC) по крайней Shanghai Jiao Tong University, Шанхай, Китай. В общей сложности 2 × 10 6 SGC-7901-CEACAM6 или клетки SGC-7901-NC вводили в пять мышей брюшной полости каждой группы (рандомизации). Мыши были умерщвлены на 30-й день после инъекции, и брюшные массы были обследованы и сфотографированы. Все эксперименты проводились в соответствии с официальными рекомендациями китайского сообщества животных.

Статистика
<р> Студенческая т
-test был использован для изучения статистических различий между этими двумя группами , Корреляция между экспрессией E-кадгерина в GC тканях и клинико-патологическими параметрами и экспрессии CEACAM6 анализировали с помощью критерия хи-квадрат или точных тестов Фишера или Pearson анализа коэффициента корреляции. Данные представлены в виде среднего значения ± SD. P
&л; 0,05 и P
&л;. 0,01 считалось статистически значимым и весьма значительным, соответственно

Результаты

CEACAM6 влияет на клеточной морфологии и цитоскелета
<р> Наши предыдущие результаты подразумевали, что MKN-28 GC клетки по своей природе экспрессируют высокие уровни CEACAM6, в то время как SGC-7901 и MKN-45 GC клетки экспрессируют низкие уровни [12]. Сверхэкспрессия CEACAM6 в SGC-7901 и MKN-45 GC клеток и ослабление экспрессии CEACAM6 в MKN-28 GC клеток П.Л. /shRNA /SHR-CEACAM6 лентивирусов векторов были подтверждены на уровне белка с помощью Вестерн-блот-анализа (рис. 1А). Иммунофлюоресценции анализы показали, что всегда SGC-7901-CEACAM6 клетки выражены больше белка, чем CEACAM6 SGC-7901-NC клетки (рис. 1б).
<Р> Интересно, что клеточная морфология была изменена следующая затухания CEACAM6 и избыточной экспрессии. По сравнению с контрольными клетками, СГК-7901-CEACAM6 и MKN-45-CEACAM6 клетки демонстрировали более мезенхимальных морфологию, и были spindle- и веретенообразные-образную форму (рис. 1С). С другой стороны, типичный переход от мезенхимальных к эпителиальным морфологии была обнаружена в MKN-28-ш клеток по сравнению с MKN-28-н.д. клеток (рис. 1в). Тем не менее, было неясно, если CEACAM6 избыточная экспрессия подействовал на цитоскелета, таким образом иммунофлуоресцентного окрашивания F-актина проводили окрашивание. Интересно, что наблюдалось больше размера веретенообразные формы клеток для MKN-45-CEACAM6 и СГК-7901-CEACAM6 линии по сравнению с контрольными клетками (рис. 1D).

CEACAM6 отрицательно связана с Е-кадгерина в GC ткани
<р> Иммуногистохимическое анализ был использован для определения уровней экспрессии E-кадгерина в раковых тканях и парными смежных неопухолевых тканей. Иммуногистохимическое окрашивание показало экспрессию Е-кадгерин был ниже в опухолевых тканях, чем в соседних неопухолевых тканей, и показали, что Е-кадгерин, в основном, находится в cytomembrane эпителиальных клеток (рис. 2D, Е, F). Далее, мы исследовали связь между экспрессией E-кадгерина и клинико-патологическими особенностями GC, и обнаружили, что подавляются Е-кадгерин был связан с глубиной инвазии ( P
= 0,046), метастазов в лимфатических узлах ( P
= 0,013), и стадии TNM ( P
= 0,035), но не с другими клинико-патологическими факторами, включая пол, возраст, или дифференциации (таблица 1). Кроме того, CEACAM6 отрицательно коррелировала с EMT в панкреатических карцином [19] и подавления CEACAM6 может увеличить активность промотора E-кадгерина в колоректального рака [20].
<Р> Кроме того, мы исследовали взаимосвязь между Е-кадгерина и выражения CEACAM6 в ШС по последовательной секции иммуногистохимии (20 проб). экспрессия CEACAM6 в опухолевых тканях выше, чем в совпавших неопухолевых тканях (рис. 2А, В, С), в соответствии с нашими предыдущими результатами [12]. Интересно, что мы обнаружили, что выражение CEACAM6 отрицательно коррелировала с экспрессией E-кадгерина в GC тканей Пирсоном анализа коэффициента корреляции ( P
&л; 0,01;. Рис 2G).

CEACAM6 индуцирует EMT в GC клетки
<р> EMT-родственные белки в GC клетки оценивали с помощью Вестерн-блот-анализа. Мы наблюдали, что N-кадгерина, Виментин и уровни белка Slug были увеличены, в то время как Е-кадгерин был уменьшен в CEACAM6-гиперэкспрессией клеток по сравнению с соответствующими контрольными клетками (рис. 3а, б). Converse результаты были получены после того, как CEACAM6 был сбит в клетках MKN-28 (рис. 3C, D). Эти результаты свидетельствуют о функциональной роли CEACAM6 в регуляции EMT в клетках GC. Кроме того, эти наблюдения в GC клетки были сходны с выводами, содержащимися в GC ткани.

CEACAM6 повышает активность ММР-9 в GC клетки
<р> Хорошо известно, что адгезия, деградация и миграция основные проблемы в метастазирования рака. Желатин зимографии проводилось с целью изучения влияния CEACAM6 на активность ММР-9, который играет важную роль в деградации ECM. ММР-9 активность в СГК-7901-CEACAM6 и клетках MKN-45-CEACAM6 была увеличена по сравнению с их контрольными группами (рис. 4А, В). Далее мы исследовали, приводит ли повышенная активность ММР-9, индуцированный CEACAM6 в GC клетки в истинном приросте числа вторжения и миграции клеток. Таким образом, мы рассмотрели вклад активного анти-MMP-9 антитела или PBS к CEACAM6-гиперэкспрессией GC клеток. Как и следовало ожидать, существуют значительные различия в количестве вторжения и миграции клеток в клетках антител, обработанных по сравнению с PBS-обработанных клеток ( P
&л; 0,01;. Рис 4C, D, E, F).

CEACAM6 фосфорилированного AKT активирует в клетках GC
<р> Мы наблюдавшимся ранее, что активность SRC индуцировали CEACAM6 в SGC-7901 GC клеток. АКТ является ниже по течению белка SRC и резко связано с ЕМТ, инвазию и метастазирование в опухолевой прогрессии. Поэтому мы оценивали AKT активность в CEACAM6-гиперэкспрессией GC клеток. Вестерн-блоттинг показал, что АКТ фосфорилирование по серину 473 было заметно увеличилась в CEACAM6 сверхэкспрессией GC клеток по сравнению с контрольными группами (рис. 5, а, б). Чтобы исследовать, были ли изменения EMT, индуцированный CEACAM6 через PI3K /Akt пути, СГК-7901-CEACAM6 и MKN-45-CEACAM6 клетки обрабатывали 100 нМ LY294002 в течение 24 ч. Интересно, что Е-кадгерин был увеличен и N-кадгерин был сокращен в LY294002 обработанных CEACAM6-гиперэкспрессией клеток по сравнению с контрольной группой, как измерено с помощью Вестерн-блот-анализа (рис. 5C, D).

CEACAM6 способствует распространению перитонеального в естественных условиях
<р> Наконец, мы исследовали влияние CEACAM6 оверэкспрессии на перитонеальном распространения и метастазирования в

естественных условиях. Мы вводили SGC-7901-CEACAM6 и SGC-7901-NC клетки в животах голых мышей. Широкое распространение перитонеального наблюдалось в группе SGC-7901-CEACAM6 по сравнению с группой SGC-7901-NC (рис. 6А). Были значительно более видимые перитонеального узелки в группе SGC-7901-CEACAM6, чем в контрольной группе (5,400 ± 0,510 против
1,400 ± 0,245, P
&л;. 0,01;. Фиг.6В ). Кроме того, избыточная экспрессия CEACAM6 повышения метастазирование в

естественных условиях также сообщалось при раке поджелудочной железы [19].

Обсуждение
<р> GC является второй причиной от связанных с раком смерти во всем мире [1]. Появляется все больше данных указывает на то, что CEACAM6 играет важную роль в желудочно-кишечный рак прогрессии [7], [20] - [22], и CEACAM6 более широко распространена, чем СЕА (CEACAM5) в нормальных тканях, со значительным выражением во многих эпителии [4]. CEACAM6 влияет на внутриклеточные сигнальные события через гомофильной и гетерофильных адгезии с другими CEACAMs или интегринов [23], [24]. Целью данного исследования было изучение вклада GPI-якорь белка CEACAM6 в прогрессии GC.
<Р> Интересно, что мы обнаружили, что морфология клеток и структура цитоскелета была изменена стабильная повышающую регуляцию и понижающей CEACAM6 в GC клетки. CEACAM6-гиперэкспрессией клетки были более мезенхимальных типа и выставлены форму веретена и веретенообразную, и больше актин напряжений волокна были обнаружены по сравнению с контрольными группами, в процессе определяется как ЕМТ. Мезенхимальных фенотипа жертвует клеток с большим количеством перелетных и инвазионных свойствами [15]. Это наблюдение согласуется с в
естественных
результаты которой CEACAM6 индуцированные обширные перитонеального расширения спектра у голых мышей. MET наблюдалось следующее молчание CEACAM6 в GC клетки. Эти наблюдения показали, что CEACAM6 могут участвовать в индукции EMT в GC. Далее мы исследовали корреляцию между CEACAM6 и Е-кадгерина, маркер EMT, в GC тканей иммуногистохимического окрашивания. Как и ожидалось, наблюдалась значительная отрицательная корреляция между CEACAM6 и Е-кадгерина, и экспрессии E-кадгерина был связан с глубиной инвазии опухоли, метастазирование узлов лимфы и TNM стадии ГХ тканей. Кроме того, CEACAM6 способствовало метастазов в лимфатических узлах ( P
= 0,001) в 98 тканях ГХ в нашем предыдущем исследовании [12]. Предыдущие результаты показали, что ослабление CEACAM6 увеличилась активность промотора E-кадгерина в колоректального рака [20]. На основании вышеуказанных результатов, мы предположили, что способствовало CEACAM6 GC инвазии и метастазированию путем индукции EMT и может служить маркером мезенхимального.
<Р> Метастазы является основной причиной рака-ассоциированной смерти, но было трудно учиться, потому что ему включает в себя ряд редких, случайных событий. Ряд потенциальных сигнальных путей, имеющих отношение к метастазирования рака было показано, в том числе PI3K /AKT, МАРК /ERK, Фак-SRC, JAK /STAT, NF-kβ и путей ММР [25] - [27]. В этом исследовании избыточная экспрессия CEACAM6 повышенные MMP-9 активностью, и анти-MMP-9 антитело может обратить вспять возрастающие инвазивные и миграционные свойства, индуцированные CEACAM6. EMT инициация достоверно коррелирует с метастазами рака, и индуцирует свойства стволовых клеток, предотвращает апоптоз и старении, а также способствует иммуносупрессии в прогрессии рака [15]. EMT может быть вызван путем активации сигнального PI3K /AKT пути [28], [29]. CEACAM6 функционирует как фактор межклеточной адгезии и могут образовывать более крупные липидные рафты, взаимодействуя с самим собой или другими CEACAMs, тем самым активируя вниз по течению сигнальных каскадов, таких как интегрин и PI3K /Akt пути [10], [30]. Поэтому мы исследовали влияние CEACAM6 избыточной экспрессии на уровнях AKT фосфорилирования в клетках GC. Фосфорилированные уровни AKT были увеличены в CEACAM6-гиперэкспрессией клетках, в соответствии с ранее полученными результатами было отмечено в панкреатических карцином [8], [11]. Согласно этим наблюдениям, мы предлагаем гипотезу которой CEACAM6-индуцированной EMT происходит через активацию PI3K /AKT сигнального каскада в GC. Кроме того, CEACAM6-гиперэкспрессией клетки, обработанные LY294002, ингибитор PI3K, подвергся реверсирование ЕМТ через MET. Таким образом, мы приходим к выводу, что CEACAM6 индуцирует EMT путем активации PI3K /Akt сигнального пути в GC и может служить в качестве потенциальной мишенью в лечении опухолей.
<Р> В заключение, мы продемонстрировали, что CEACAM6 действует как онкоген путем содействия EMT через активацию PI3K /AKT в GC. Кроме того, Е-кадгерин заметно подавлена ​​в тканях GC, чем спаренных смежных неопухолевых тканей. CEACAM6 способствует инвазии и метастазированию в
экстракорпорального
и в

естественных условиях, и может быть потенциальным новым диагностическим и прогностическим маркером и новым мишенью для GC терапия.

поддержка информации
Контрольный список S1.
ARRIVE руководящих принципов. Все эксперименты в естественных условиях в нашей рукописи были экспортированы в соответствии с руководящими принципами ARRIVE
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0112908.s001
(DOC)

Выражение признательности
<р> We хотел бы поблагодарить Xuehua Чен и Чжан Jianian для технической помощи, Beiqin Ю. за ее материально-технического обеспечения.

• PLoS ONE: RABEX-5 усиливает свою активность и играет роль онкогенных в развитии рака желудка путем активации сигналь…
• PLoS ONE: Раннее кормление через рот после того, как рак желудка хирургии реализуемое? Систематический обзор и ме…