Plos ONE: MUC4 and MUC1 Izražanje v adenokarcinom želodca povezana s plovil invazijo in bezgavk metastaz: An imunohistokemičnim proučevanje zgodnjega želodca Cancer

Povzetek

smo že poročali, da je MUC4 izraz slab napovedni dejavnik v različnih karcinomov. Naša predhodna študija je tudi pokazala, da je MUC1 izraz v želodcu, vključno z rakom zgodnjih in poznejših fazah slaba prognostični dejavnik. V tej študiji so preučili izraz profili MUC4 in MUC1 jih imunohistokemično (IHC) z uporabo dveh anti-MUC4 monoklonska protitelesa (mAb), 8G7 in 1G8, in anti-MUC1 Mab DF3 v 104 želodca primerkov zgodnje adenokarcinomom želodca z Submukozno invazija (pT1b2), vključno s 197 histoloških podtip poškodb. Pred študijo IHC človeških osebkov, smo ocenili specifičnost obeh mAb z metodo Western blot in IHC dveh MUC4 mRNA izražajo želodčni rak celičnih linij. Mab 8G7 jasno odzvala, medtem ko Mab 1G8 niso pokazali sposobnost odzivanja, bodisi metodo Western blot ali IHC. V IHC od želodca raka, stopnje izraz za MUC4 /8G7 s MAB 8G7, MUC4 /1G8 odkrile MAB 1G8 in MUC1 /DF3 odkrile MAB DF3 odkrite v dobro diferenciranih vrst (70%, 38/54, 67%, 36/54, 52%, je bilo 28/54), bistveno višje od tistih, ki v slabo diferenciranih vrst (18%, 10/55, 36%, 20/55, 13%, 7/55) ( P
< 0,0001; P
= 0,0021; P
< 0,0001), oz. Izraz MUC4 /8G7 bil povezan z limfno invazije (r = 0,304, P
= 0,033). Po drugi strani pa je bil MUC4 /1G8 izraz, povezan z limfno invazije (r = 0.395, P
= 0,001) in bezgavk metastaz (r = 0,296, P
= 0,045). Izraz MUC1 /DF3 bil povezan z limfno invazije (r = 0.357, P
= 0,032) in venske invazije (r = 0,377, P
= 0,024). Skratka, izraz MUC4 kot tudi MUC1 v začetku želodčnih rakov je uporabno dvojno podajo napovedati slabih prognostičnih dejavnikov, povezanih z invazijo plovila

Navedba. Tamura Y, Higashi M, Kitamoto S, Yokoyama S, Osako M, Horinouchi M, et al. (2012) MUC4 in MUC1 Izražanje v adenokarcinom želodca povezana s plovil invazijo in bezgavk metastaz: An imunohistokemičnim proučevanje zgodnjega želodca raka. PLoS ONE 7 (11): e49251. doi: 10,1371 /journal.pone.0049251

Urednik: Fazlul H. Sarkar, Wayne State University School of Medicine, Združene države Amerike

Prejeto: 17. avgust 2012; Sprejeto: 5. oktober 2012; Objavljeno: 13. november 2012

Copyright: © 2012 Tamura et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija bila podprta v delu, ki ga Princes Takamatsu Cancer Research sklada S. Yonezawa; Donacije v obliki pomoči za znanstvene raziskave na znanstveno raziskovanje (B) 23390085 do S. Yonezawa; Znanstvenoraziskovalni (C) 21590399 M. Higashi; Mladi znanstveniki (B) 24701008 S. Yokoyama; Znanstvenoraziskovalni na prednostnih področjih 239349 S. Kitamoto (JSP Fellowship) od Ministrstva za izobraževanje, znanost, šport, kulturo in tehnologijo, na Japonskem; trebušna slinavka Research Foundation of Japan za S. Yokoyama; in Kodama Memorial Foundation, Japonska M. Higashi. S. Batra podpira delno s strani National Institutes of donacij za zdravje (CA78590, CA163120, CA133944 in CA111294). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa. Nobena dodatna zunanja sredstva, prejeta za to študijo

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji izjavi, da ne prihaja do navzkrižja interesov v zvezi z delom v študiji

Uvod

rak želodca je četrti najpogostejši rak na svetu in več kot 90% želodčnih rakov, adenokarcinomov [1]. V zadnjem času, na Japonskem, je zgodnje odkrivanje, ki ga rutinsko endoskopskim pregledom v gastroenterologija klinikah za posledico natančne diagnoze in učinkovite kirurške ali endoskopsko zdravljenje, kar ima za posledico relativno boljšo prognozo. Pri analizi 11,261 bolnikov z rakom želodca, zdravljenih z želodčno resekcijo je TNM 5-letno preživetje za stopnjo IA je bila 91,8% in za oder IB je bila stopnja preživetja 84,6% [2]. Na začetku želodca raka, endoskopski Submukozno seciranju (ESD) je prva izbira zdravljenja na Japonskem, vendar so se merila za dodatno operacijo vključno bezgavk seciranje, ko so ESD še vedno sporen [3].

Naša serija za imunohistokemijo (IHC) študije za mucin izražanje v različnih človeških novotvorbe so pokazale, da je izraz MUC1 mucin (pan-epitelijskih-membrana povezana mucin), povezane z invazivno širjenje tumorjev in slabega izida bolnikov, medtem ko izraz MUC2 mucin (črevesne tip izločanja mucin) je povezana z neinvazivno širjenje tumorjev in ugoden izid za bolnike [4], [5]. Naši prejšnji študija je pokazala, da je MUC1 izražanje v želodčnih raka slaba prognostični faktor [6].

MUC4 bil prvič poročali tracheobronchial mucin [7] in je membrano povezan mucin [8]. V naši raziskavi seriji, je bil izraz MUC4 v intrahepatično holangiokarcinom, trebušne slinavke duktalni adenokarcinom, zunaj jeter žolčevoda karcinoma, pljučnega adenokarcinoma in oralno ploščatocelični karcinom neodvisen dejavnik za slabo prognozo in je uporaben dvojno podajo napovedati izid bolnikov [ ,,,0],5], [9] [10] [11] [12] [13]. Na žalost, obstaja nekaj študij izraz profila MUC4 raka človeškega želodca. V tej študiji smo pregledali izražanja profile MUC4 kot tudi MUC1 v začetku želodca tkivih raka, in ugotovila, da MUC4 and MUC1 izraz v zgodnjih želodčnega raka postanejo revni napovedni dejavniki po invaziji limfna plovila, invazije krvnih žil in bezgavk metastaze.

Ker so anti-MUC4 monoklonska protitelesa (mAb), 8G7 in 1G8, je znano, da odkrivanje različnih lokacijah od MUC4 molekule. MAb 8G7 prepozna tandem ponovite zaporedje (STGDTTPLPVTDTSSV) človeškega MUC4α podenote [14]. MAb 1G8 se dvigne proti zaporedjem podganjega (podgana ASGP-2), in prepozna epitop na podganji ASGP-2 podenote, ki ustreza človeški MUC4β podenote, in prikazuje prečni reaktivnost s človeškimi vzorcev [15]. Tako je bila posebna pozornost namenjena primerjavi dveh anti-MUC4 mAb z metodo Western blot in IHC dveh želodčnega raka celičnih linijah, pred obravnavo IHC človeških želodčnega tkiva raka. Poleg tega, ker je polemika o prognostični pomen teh anti-MUC4 mAb, pregledu literature MUC4 izražanja v različnih vrst raka je bila opravljena tudi.

Materiali in metode

Bolniki in tkiv Vzorci

želodca osebki 104 zgodnjih želodčnih raka, ki kažejo Submukozno invazijo, pT1b2, z ali brez bezgavkah metastaze, so bili pridobljeni iz spisa, med letoma 1994 in 2008 za zdravniško društvo bolnišnici Kagoshima-shi. Povprečna starost bolnikov je bila 65,7 (S.D., 9.8, območje, 39-92 let, povprečna starost 66 let); 64 primerov je bilo moških in 40 primerov je bilo žensk. Ta študija je bila izvedena v skladu z vodilnimi načeli Helsinško deklaracijo in odobri Odbor za etiko za pridružitvenega bolnišnici Kagoshima-shi Medical (KMAH 2011/02/02). Obveščena, je pisno soglasje pridobljeno iz vseh bolnikih. V primerih z več kot dvema histoloških tipov mešati v eni lezijo, je bil vsak histološki vzorec neodvisno ocenjevati v skladu z japonsko klasifikaciji želodca karcinomom (JCGC) [16].

Vrednotenje monoklonskih protiteles za MUC4

celice in pogoji kultiviranja.

linije človekovih želodčni rak celic (snu-16 in NCI-N87), trebušne rakave celične linije (PANC1 in CAPAN1) smo nabavili pri American Type Culture Collection (Manassas, VA). Oba želodčne rakave celice smo vzdrževali v RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); PANC1 celice so se ohranili v DMEM (Sigma-Aldrich); Capan1 celice smo vzdrževali v DMEM /F-12 (Sigma-Aldrich). Vsi mediji smo dopolnili s 10% fetalnega govejega seruma (GIBCO, Breda, Nizozemska) in 100 U /ml penicilina /100 fig /ml streptomicina (Sigma-Aldrich). Vse celice inkubiramo v 5% CO2 pri 37 ° C in vzdržujemo pri sub-konfluentne nivojih.

ekstrakcijo RNA in RT-PCR.

Celotna RNA je bila ekstrahirana iz celic z uporabo RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Nemčija) in količinsko ga NanoDrop ND-1000 spektrometra. Dobljeni mRNA (2ug) je bila reverzno prepisana na cDNA z visoko zmogljivostjo RNA v cDNA komplet (Applied Biosystems, Foster City, CA). Naslednji primerji so bili oblikovani za kasnejše PCR: MUC4, 5'TGGGACGATGCTGACTTCTC-3 ', 5'-CCCCGTTGTTTGTCATCTTTC-3'; ACTB 5'-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCTG-3 ', 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'. PCR smo izvedli z Amplitaq Gold Fast PCR Master Mix (Applied Biosystems) po protokolu proizvajalca.

ekstrakciji beljakovin in western blot.

Skupaj lizati celic smo pripravili z Ripa pufer, ki vsebuje inhibitor proteaze koktajl (Nacalai Tesque, Kyoto, Japonska). Koncentracijo proteina smo merjeno z BCA testom (Thermo znanstvenega, Rockford, IL). Enaka količina beljakovin lizata ločimo na 2% agaroznem gelu, ki vsebuje SDS in pasivno prenese na PVDF membrano preko noči pri sobni temperaturi. Membrane smo blokirali z 1% posnetega mleka /PBST več kot 2 uri in izpostavimo standardnemu postopku imunološki uporabo specifičnih primarnih protiteles. Primarna protitelesa so naslednji: anti-človeški MUC4 Mab 8G7 (1:1000, ki jih ustvari dr Surinder K. BATRA, University of Nebraska Medical Center, Omaha, NE) in 1G8 (1:1000, kupljene od Invitrogen, Camarillu, CA), in anti-človeški a-tubulin Mab DM1A (1:2,000, Sigma-Aldrich).

imunocitokemija za kultivirane celice.

za MUC4 obarvanje v kultivirane celice, celice smo zasejali v 8-komorni diapozitive (Becton Dickinson and Company, Franklin jezera, NJ) in inkubirali čez noč. Celice so bile določene z 3,7% formaldehida po 10min pri sobni temperaturi in obarvamo z mAb 8G7 (1:24,000) in MAB 1G8 (1:4,000) preko noči pri 4 ° C oz. Zaznavanje signalov je bila izvedena z metodo imunoperoksidazni uporabo Vectastain Elite ABC kit (Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA), v skladu z navodili proizvajalca.

Imunohistokemija za človekove tkiv

IHC za prehrano ljudi želodca karcinomov je bilo izvedeno s pomočjo naslednjih protiteles v največje rezano oddelkov v vsaki tumorja. MUC4 bila odkrita dva mAb, 8G7 in 1G8. Za primerjalno študijo, je MUC1 izraz preučila tudi MAB DF3 (miške IgG, TFB, Tokio, Japonska). IHK smo izvedli z metodo imunoperoksidazni takole. Antigen iskanje je bila izvedena s pomočjo CC1 antigena priklic pufra (pH8.5 EDTA, 10.037 ° C, 30 min., Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) za vse odseke. Po inkubaciji s primarnimi protitelesi (mAb MUC4 /8G7 razredčimo 1:3000, 37 ° C, 32 min .; Mab MUC4 /1G8 razredčimo 1:500, 37 ° C, 24 min .; Mab MUC1 /DF3 razredčili 1:50, 37 ° C, 32 min.) v fosfatnim pufrom pH 7,4 (PBS) z 1% goveji serumski albumin, so odseki obarvajo na benchmark XT avtomatizirano slide Stainer z uporabo kompleta za odkrivanje diaminobenzidine (ultraView DAB, Ventana Medical Systems). Zaradi enostavnosti MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 in MUC1 /DF3 se uporabljajo za označevanje mucin antigene, ki jih vsak protitelesa odkrite.

Točkovanje rezultatov in statistično analizo.

Štiri zaslepljeni raziskovalce ( YT, MH, MG in SY) je ocenila podatke obarvanja IHC samostojno. Ko je ocena razlikovala med štirimi, je končna odločitev na podlagi soglasja. Rezultate smo ovrednotili na osnovi odstotka pozitivno obarvanih celic karcinoma, in podatke o odstotkih so bile razdeljene v šest razredov z naslednjo sistem točkovanja: negativen, nobeden od celic karcinoma obarvanih; šibek, < 5% celic karcinoma obarvanih; 1+, ≥5% < 25%; 2+, ≥25% < 50%; 3+, ≥50% < 75%; in 4+: ≥75% obarvajo. Primeri z ≥ 5% od celic karcinoma obarvanih bili ocenjeni kot pozitivni. Statistična analiza je bila opravljena s neparametrični metodami in z uporabo EXCEL-Statistics ver.3 programsko opremo, ki nastane Hisae Yanai, Fakulteta za znanost, Saitama University (OMS Publishing, Japonska).

Preživetje bolnikov smo primerjali med skupino s pozitivno MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ali MUC1 /DF3 izražanja in skupina z negativnim izrazom po metodi Kaplan-Meier, in razlike med krivuljami preživetja smo testirali s testom log-rang. Verjetnostjo P < 0.05 smo imeli statistično značilno

Rezultati

Vrednotenje Two monoklonskih protiteles za MUC4

Da bi raziskali razlike v specifičnosti protiteles med 8G7 in 1G8, mi. izvajajo RT-PCR, Western blot in analiza IHC z dvema želodčni rak celičnih linij, snu-16 in NCI-N87 celice. MUC4 mRNA je bila zaznana v dveh želodčnega raka celičnih linijah (sl. 1A). V skladu s prejšnjim poročilom [14], so naši podatki kažejo, da 8G7 priznana zelo visoko protein molekulsko maso (več kot 500 kD, ki je bila pričakovana velikost za avtohtone MUC4). Nasprotno, 1G8 ne kaže imunološko pasov (sl. 1B). Enak rezultat so opazili v analizi IHC (sl. 1C).

Imunohistokemijsko iz želodca osebkov

Imunohistokemijsko ne-neoplastične želodčne sluznice.

V brez -neoplastic sluznico od primerov z rakom želodca, je MUC4 /8G7 izraženo včasih v citoplazmi površine sluznice epitela, in pogosto ampak šibko v citoplazmi fundic in pilorično žlez (Slika S1 A in D). MUC4 /1G8 smo pogosto izražene v temenu celic in citoplazme sluznice epitela površine, in pogosto toda šibko v citoplazmi fundic in pilorusa žlez (Slika S1 B in E) in je bil ves čas videti na vaskularni endotelij. MUC1 /DF3 je včasih izražena v sluznice epitela površine, in vedno v fundic žlez (še posebej intenzivno na vrhovih celic), ne pa tudi v pilorično žlez (Slika S1 C in F).

Imunohistokemijsko od adenokarcinom želodca.

Proučili smo želodca primerkov 104 zgodnjih želodčnega raka (pT1b2), saj smo želeli, da bi se izognili glavne degenerativne spremembe, ki so pogosto videti v naprednih tumorskih tkivih, ter prilagoditi stopnjo za natančnejšo primerjavo med ugotovitve IHC in clinicopathologic dejavniki.

Ko so bili več kot dva histološki vrsti mešane v eni lezijo v želodca osebki 104 zgodnjih želodca raka, je bil vsak histološki vzorec neodvisno ocenjevati v skladu z JCGC [16]. Zato je v želodca osebki 104, lahko ocenjujemo 197 karcinom žarišča različnih histoloških tipov v celoti.

Med 197 poškodb, je bilo 15 lezije papilarnega adenokarcinoma (PAP) (sl. 2A-D), 39 dobro diferenciranega cevastega adenokarcinom (tub1) (sl. 2E-H), 52 zmerno diferencirane cevastega adenokarcinom (tub2) (sl. 2I-L), 6 mucinozni karcinomov (MUC) (sl. 2M-P), 8 trdnih tipa slabo diferencirano adenokarcinom (por1) (sl. 2Q-T), 47 brez trdnega tipa slabo diferencirano adenokarcinom (por2) (sl. 2U-X) in 30 karcinomom pečat obroča (sIG) (sl. 2Y-b), ki temelji na okviru skupne histološko klasifikacije raka želodca v JCGC [16]. Glede na kontekst, v klasifikaciji WHO tumorjev želodca [17], kot tudi, da je v JCGC [16], pap in tub1 so bile razvrščene v "dobro diferenciranega adenokarcinoma", in por1 in por2 so bile razvrščene v "slabo diferenciranih adenokarcinom ". Podatki o stopnji ekspresije MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 in MUC1 /DF3 so povzeti na sliki 3. Podroben število in odstotek pozitivno obarvanih neoplastične celice, ki uporabljajo sistem točkovanja so povzeti v preglednici S1.

izražanje profil MUC4 /8G7.

med 197 adenokarcinom lezij, je MUC4 /8G7 izraženo v 83. lezije (42%). MUC4 /8G7 pokazale bistveno višjo stopnjo pozitivnega izražanja (≥5% od celic karcinoma obarvanih) v dobro diferencirane vrste (pap + tub1: 70%, 38/54) kot pri slabo diferenciranih vrstah (por1 + por2: 18% , 10/55) ( P
< 0,0001) (slika 3A, puščice).. MUC4 /8G7 bila izražena predvsem v citoplazmi v neoplastičnih celicah PAP (sl. 2B), tub1 (sl. 2F) in tub2 (sl. 2J), v primerih s pozitivnim izražanja.

Expression profilom od MUC4 /1G8.

med 197 adenokarcinom lezij, je MUC4 /1G8 izraženo v 95 lezij (48%). MUC4 /1G8 pokazala bistveno višjo stopnjo pozitivnega izražanja v dobro diferenciranih vrstah (PAP + tub1: 67%, 36/54), kot da je v slabo diferencirane vrste (por1 + por2: 36%, 20/55) ( P
= 0,0021) (sl. 3B, puščice). MUC4 /1G8 bila izražena predvsem na vrhovih celične PAP (sl. 2C), tub1 (sl. 2G) in tub2 (sl. 2K) ali v intracitoplazemski mucin snovi sig (sl. 2a), v primerih s pozitiven izraz.

izražanje profil MUC1 /DF3.

med 197 adenokarcinom lezij MUC1 /DF3 je bilo izraženo v 62 lezij (31%). MUC1 /DF3 pokazala bistveno višjo stopnjo pozitivnega izražanja v dobro diferenciranih vrstah (PAP + tub1: 52%, 28/54), kot da je v slabo diferencirane vrste (por1 + por2: 13%, 7/55) ( P
< 0,0001) (slika 3C, puščice).. MUC1 /DF3 je bila izražena predvsem na vrhovih celičnih pap, tub1 in tub2 (sl. 2L), v primerih s pozitivnim izražanja.

Primerjava mucin izraza v vsakem histološki tip.

v tub1 so izraz stopnje MUC4 /8G7 in MUC4 /1G8 bistveno višja od MUC1 /DF3 ( P
= 0,0106 in P
= 0.039, v tem zaporedju) (sl. 3, * 1). V por2 je bila stopnja izraz MUC4 /1G8 bistveno višja od MUC4 /8G7 ( P
= 0,0286), ali da od MUC1 /DF3 ( P
= 0,0005) (Sl. 3 * 2). V sig, je izraz stopnja MUC4 /1G8 bistveno višja od MUC4 /8G7 ( P
= 0,0158), ali da od MUC1 /DF3 (sig, P
= 0,0019) (Sl . 3, * 3). V drugih histolgical tipov (pap, tub2, muc in por1), ni bilo pomembne razlike v stopnjah izražanja med MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 in MUC1 /DF3 (sl. 3).

Razmerje med MUC4 ali MUC1 izražanja in limfni invazijo plovilo, invazija krvnih žil in bezgavk metastaze.

semikvantitivnimi ocena limfne invazije (ly), venska invazije (v) in status bezgavk metastaze (N) je opredeljen v JCGC [16]. Limfna invazija (ly) je bila ocenjena na naslednji način; ly0, ne limfna invazija; Ly1, minimalno limfna invazija; ly2, zmerno limfna invazija; in ly3, označena limfni invazijo. Za vensko invazije (v), podobna ocena (v0 do v3) je bilo izvedeno z elastično obarvanje (Victoria-modro), ki je bila dodana hematoksilin-eozinom barvanje. Skupno število bezgavk in število vpletenih bezgavk na vsaki vozlišča postaje (N) so bile zabeležene kot sledi; N0, no regionalno bezgavko metastaze; N1, metastaze v 1-2 regionalnih bezgavkah; in N2, metastaze v 3-6 regionalnih bezgavkah. Regionalno bezgavko metastaze so opazili pri 55 bolnikih (N1, 41 primerov, N2, 14 primerov). Ni bilo statistično značilna korelacija med histološke vrste in limfne invazije, vensko invazijo ali status bezgavk metastaz.

V vsakem primeru je najvišja ocena od šestih IHC razredov (negativen, šibek, 1+, 2+, 3+ ali 4+) v različnih histološke vrste je šteje kot rezultat IHC v vsakem posamezniku, na primer "Rezultat IHC 4+" za primer, z [tub1 rezultat, 3+; tub2 ocena, 4+]. Ocenili smo korelacijo med rezultatom IHC in ly, V in N dejavnikov pri vsakem bolniku. Kot je razvidno iz tabele 1, je MUC4 /8G7 izraz, povezan z limfno invazije (r = 0,304, P
= 0,033). Izraz MUC4 /1G8 bil povezan z limfno invazije (r = 0.395, P
= 0,001) in bezgavk metastaz (r = 0,296, P
= 0,045). Izraz MUC1 /DF3 bil povezan z limfno invazije (r = 0,357, P
= 0,032) in venske invazije (r = 0,377, P
= 0,024).

Poleg tega smo pregledali korelacijo med IHC mnogo MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 in MUC1 /DF3. Kot je prikazano v tabeli 2, je bila korelacija med rezultatom MUC4 /8G7 in rezultat MUC4 /1G8 (r = 0.486, P
< 0,0001). V nasprotju s tem pa je bil med oceno MUC4 /8G7 in rezultat MUC1 /DF3 (r = 0,267, P
= 0,202) ni nobene povezave, in tam je bil med oceno MUC4 /1G8 in rezultat MUC1 /DF3 (r ni nobene povezave = 0,245, P
= 0,269).

Razmerje med MUC4 ali MUC1 izražanja in preživetje.

med 104 bolniki, spremlja podatke smo pridobili za 87 bolnikov. Mediana spremljanja obdobje je bilo 47,5 mesecev (razpon, 0-193 mesecev). Pri 87 bolnikih, en bolnik je umrl od raka želodca 39 mesecev po operaciji, en bolnik je pokazala, jeter, metastaze, ampak preživela za 78 mesecev, pri dveh bolnikih je umrl zaradi drugih bolezni. Pri 85 bolnikih, razen pri dveh bolnikih umrl zaradi drugih bolezni, Kaplan-Meier ocena smo testirali s testom log-rang. Med pozitivne skupine in negativno skupino (MUC4 /8G7 + vs -, MUC4 /1G8 + vs - ali MUC1 /DF3 + vs -), log-rang test skupnega preživetja (MUC4 /8G7, P = 0,27; MUC4 /1G8, P = 0,37; MUC1 /DF3, P = 0,22) in preživetje brez napredovanja bolezni (MUC4 /8G7, P = 0,85; MUC4 /1G8, P = 0,23; MUC1 /DF3, P = 0,83), ni pokazala bistvenih razlik. Nadaljnja analiza 42 bolnikov preživela že več kot 5 let niso pokazale pomembne razlike.

Pogovor

Pred kratkim smo poročali, da je izraz MUC4 neodvisen slaba napovedni dejavnik pancreatobiliary adenokarcinoma [ ,,,0],10], [11], [12], kakor tudi pljučnega adenokarcinoma [13] in ustni ploščatocelični karcinom [9]. MUC1 so poročali, da je slabo napovedni dejavnik v različnih človeških novotvorbe tudi [4], [5]. Naša predhodna študija želodca, vključno z rakom zgodnjem raka in naprednih raka je pokazala, da je MUC1 koristen prognostični dejavnik slabega izida pri bolnikih, [6]. V tej študiji se je razmerje med mucin izražanja in izid za bolnika ni mogoče oceniti, saj so želodca raka v zgodnji fazi na pT1b2 in večina bolnikov, ki so imeli ugoden izid. Kljub temu pa smo dobili naslednje rezultate: (1) MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 in MUC1 /DF3 izrazi so bili povezani z limfno invazijo. (2) Izraz MUC4 /1G8 bil povezan z bezgavkah metastaze. (3) MU1 /DF3 izraz je bil povezan z vensko invazijo. Na Japonskem, ESD je prva izbira za zdravljenje zgodnje oblike raka želodca [3]. Preizkus MUC4 kot tudi MUC1 v vzorcih ESD lahko pojasni, ali dodatno operacijo, vključno bezgavk seciranje ali pogostega spremljanja za metastaz so potrebne.

Naši prejšnje študije so pokazale, da ni bilo siginificant korelacije med MUC4 izražanja in MUC1 izraz [10] [11] [12] [13]. Tudi v tej študiji želodčnega raka v zgodnji fazi, ni bilo siginificant povezava med izražanjem MUC4 in MUC1. Oba MUC4 in MUC1 izraz v želodcu raka so lahko povezane s slabimi prognostičnih dejavnikov, kot so limfne invazije, vensko invazije in bezgavkah metastaze, s pomočjo različnih mehanizmov.

V prejšnji raziskavi želodca raka uporabo Mab 8G7, Senapati et al. je pokazala, da MUC4 /8G7 izraz ni bil povezan s tipom tumorja, stopnjo ali stopnjo diferenciacije [18]. Zanimivo je, da so rezultati pokazali 42% stopnjo izražanja v fazi raka I (n = 19), ki je v skladu z našimi podatki (MUC4 /8G7: 42% in MUC4 /1G8: 48%) v tej študiji, ki je preučila fazi I raka (n = 104). Vendar pa naša študija je pokazala, da sta bila oba MUC4 /8G7 in MUC4 /1G8 izrazi razlikujejo med histološke vrste, in so bile znatno višje v dobro diferenciranih vrste kot v slabo diferencirane vrste. MUC1 /DF3 izraz je tudi bistveno višja v dobro diferenciranih vrste kot v slabo diferencirane vrste. poročali smo, da je MUC1 izraz visoka dobro diferencirano adenokarcinom v želodcu raka, vključno z rakom v napredovalem stadiju, in visoka MUC1 ekspresija lahko vplivajo na preživetje bolnikov z dobro diferenciranim adenokarcinomom želodca [6]. Visoka izraz MUC4 v dobro diferenciran adenokarcinom tudi lahko vplivajo na preživetje bolnikov z rakom želodca. V prejšnji raziskavi [6], je bila stopnja visoke izražanja MUC1 /DF3 bistveno višja v naprednih raka na želodcu, kot da je v zgodnjih želodčnega raka. Odnos MUC4 izražanja z invazijo želodčnega raka bi bilo zanimivo področje študija.

Na voljo je polemika glede prognostičnega pomena MUC4 /8G7 in MUC4 /1G8 izražanja. Tako smo pregledali 19 členov MUC4 IHC študije, ki se uporablja za različna tkiva človeškega raka (tabela 3). Pomen MUC4 /8G7 in MUC4 /1G8 ni bilo mogoče oceniti v 8 študij 19. Ena študija z uporabo poliklonalno anti-MIUC4 protitelesa, je poročal, da je MUC4 izraz, povezan z rezultatom fovorabel [19], tri študije kažejo nobene korelacije med MUC4 izražanja in prognozo [20] [21] [22], druge tri študije ni imajo kakršne koli pripombe na korelacijo med MUC4 izražanja in prognozo [18] [23] [24], in preostali študija raka ščitnice poročali o MUC4 izraz v raka [25]. Po drugi strani pa v drugih 11 členov, je bila očitna razlika med prognostičnega pomena med MUC4 /8G7 izražanja in MUC4 /1G8 izražanja. Večina raziskav, ki uporabljajo 8G7, ki je bil ustvarjen človekovo MUC4 se MUC4 /8G7 izraz, povezan z agresivnim obnašanjem tumorjev ali slabega izida na področju človekovih karcinomov [9] [10] [11] [12] [13], [ ,,,0],26]. Nasprotno, večina študij, ki uporabljajo 1G8, ki je bilo postavljeno pred rat ASGP-2, je opisano, da je MUC4 /1G8 izraz, povezan z ugodnim izidom [27] [28] [29] [30], čeprav je eno študijo trebušne slinavke adenokarcinom je opisano, da je MUC4 /1G8 izraz, povezan s slabo preživetja [31]. Ta jasna razlika se postavlja vprašanje, ali imajo 8G7 in 1G8 bistveno drugačne znake. MAb 1G8 je bilo postavljeno s pomočjo podgane Muc4 epitop [15]. Human MUC4 in rat Muc4 kaže več kot 60% peptidno zaporedje podobnosti [32], vendar niso enaki. Omeniti je treba, da IHC uporabo Mab 1G8 vedno kaže pozitivno barvanje v žilnega endotelija, kar je nekoliko nenavadno, kot izraz MUC4 ki je eden od članov MUCINS.

Tako smo ocenili specifičnost MPt 8G7 in Mab 1G8 z Western blot in IHC dveh želodca raka celičnih linijah. Naša Western blot analiza je pokazala, da Mab 8G7 priznana zelo visoko protein molekulsko maso (več kot 500 kD, ki je bila pričakovana velikost za avtohtone MUC4), medtem ko Mab 1G8 ne kaže imunološko pasove. Analiza IHK tudi pokazala Mab 8G7 pozitivno barvanje temveč Mab 1G8 negativno obarvanje v dveh želodčnega raka celičnih linij. MUC4 mRNA je bila izražena tudi v dveh želodčnih linij rakavih celic v tej študiji, kot je prikazano v predhodni študiji analizo pankreatičnih linij rakava celica po RT-PCR in Severne analiz blot [33], [34]. Oba Mab 8G7 in Mab 1G8 reagirajo s človeškimi želodca tkiva raka, čeprav lokacije MUC4 /8G7 in MUC4 /1G8 izražanja je pokazala veliko razliko. Pri želodčnih tkiva raka, je MUC4 /8G7 izraža predvsem v citoplazmi na neoplastične celice pap in kad, medtem ko je bila MUC4 /1G8 izražena predvsem na vrhovih celičnih pap in kad ali intracitoplazmičnimi mucin vsebino sig. Ker citoplazemske izraz vzorec MUC4 /8G7 se kaže tudi v trebušne slinavke adenokarcinom, intrahepatično holangiokarcinom, dodatno jeter žolčevoda karcinoma, pljučnega adenokarcinoma in ustne ploščatoceličnim karcinomom [9] [10] [11] [12] [13 ] lahko intracitoplazemski MUC4 /8G7 izraz vzorec v želodčnih tkivih raka bilo smiselno. V nasprotju s tem lahko linearni izraz vzorec MUC4 /1G8 skupaj z vrhov celičnih želodčnega tkiva raka odražajo neznane funkcije ali značilnosti MUC4β podenote s MAB 1G8 ugotovljenih postavljeno pred rat antigen, [15], kot je ta študija je pokazala, da MUC4 /1G8 izraz bile povezane z limfnim invazije in bezgavk metastaz, da so slabe prognostičnih dejavnikov, tudi v zgodnjem raku želodca. Zlasti v por2 in sig je bila stopnja izraz MUC4 /1G8 bistveno višja od MUC4 /8G7 ali od MUC1 /DF3. Poleg tega je bilo siginificant korelacija med MUC4 /8G7 izražanja in MUC4 /1G8 izražanja v obravnavanih bolnikov. Tako je IHC signal MUC4 /1G8 odkriti v vzorcih želodca lahko kažejo znaten pomen antigen, ki ga Mab 1G8 odkrite, čeprav ni bilo reaktivnost MUC4 /1G8 izražanja v človeškem želodcu raka celičnih linijah (snu-16 in NCI- N87). Epitop ga MAB 1G8 odkrita je področje zanimanja za prihodnje raziskave.

Na koncu je v tej študiji zgodnjih želodca raka, so opazili MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 in MUC1 /DF3 izraza predvsem v dobro diferencirane adenokarcinomov. Izraz MUC4 /8G7 bil povezan z limfno invazijo. Izraz MUC4 /1G8 bil povezan z limfno invazijo in bezgavkah metastaze. Izraz MUC1 /DF3 bil povezan z limfno invazijo in venske invazijo. Preučitev MUC4 in MUC1 izražanja v želodcu raka bi postal koristen dvojno podajo napovedati slabih prognostičnih dejavnikov, povezanih z invazijo plovil, tudi v zgodnji fazi.

Podpora Informacije
Slika S1.
V ne-neoplastične sluznice primerov z rakom želodca, MUC4 /8G7 je izrazil včasih v citoplazmi površine sluznice epitela, in pogosto ampak šibko v citoplazmi fundic in pilorično žlez (A in D). MUC4 /1G8 smo pogosto izražene v temenu celic in citoplazme sluznice epitela površine, in pogosto toda šibko v citoplazmi fundic in pilorusa žlez (B in E) in je bil ves čas videti na vaskularni endotelij. MUC1 /DF3 bila včasih izražen v sluznice epitela površine, in vedno v fundic žleze (zlasti intenzivno na vrhovih celic), vendar ne v pilorusa žleze (C in F). Original povečava × 100 (A, B, C) × 400 (D, E, F)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s001
(IOD)
Tabela S1.
Podroben število in odstotek pozitivno obarvanih neoplastične celice, ki uporabljajo sistem točkovanja
doi:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s002
(DOC)

Priznanja

zahvaljujemo se g Y. Atsuchi, gospod K. Matsuo, gospa C. Baba, gospa Y. Nishimura, gospa S. Yoshimura in gospa I. Houjou za njihovo tehnično pomoč.

• Plos ONE: Visoke vrednosti aromatskih aminokislin v želodčnega soka v zgodnjih fazah želodčnega raka napredovanje
• Plos ONE: CYP2E1 RSAI /PstI polimorfizem in želodca Rak dovzetnosti: Meta-analize je na podlagi 24. Case-Control študije