PLoS ONE: MUC4 ja MUC1 ilmentäminen Adenokarsinooma Vatsa korreloi Aluksen Invasion ja imusolmukemääritysmenetelmä Metastasis: immunohistokemiallisessa tutkimus Early Mahalaukun Cancer

tiivistelmä

Olemme aiemmin raportoitu, että MUC4 ilme on huono ennustetekijä eri karsinoomat. Aikaisemmat tutkimus osoitti myös, että MUC1 ilmentymistä syöpien, mukaan lukien varhainen ja myöhemmissä vaiheissa on huono ennustetekijä. Esillä olevassa tutkimuksessa, ilmaus profiilit MUC4 ja MUC1 tutkittiin immunohistokemiallisesti (IHC) käyttäen kahta anti-MUC4 monoklonaalisia vasta-aineita (MAb: t), 8G7 ja 1G8 ja anti-MUC1 MAb DF3 104 maha on poistettu yksilöiden aikaisin mahalaukun adenokarsinoomaa kanssa limakalvon alaista invaasio (pT1b2), mukaan lukien 197 histologisia alatyypin vaurioita. Ennen IHC tutkimus ihmisen yksilöitä, arvioimme spesifisyys kaksi MAb: Western-blottauksella ja IHC kahden MUC4 mRNA ilmentävien mahasyövässä solulinjoissa. MAb 8G7 reagoinut selvästi, kun taas MAb 1G8 ei ilmennyt reaktiivisuus, joko Western blottauksella tai IHC. Vuonna IHC mahan syövistä, ilmaus hinnat MUC4 /8G7 havaita MAb 8G7, MUC4 /1G8 havaita MAb 1G8 ja MUC1 /DF3 havaita MAb DF3 hyvin eriytetty tyypit (70%, 38/54, 67%, 36/54, 52%, 28/54) olivat merkittävästi korkeammat kuin huonosti eriytetty tyypit (18%, 10/55, 36%, 20/55, 13%, 7/55) ( P
< 0,0001; P
= 0,0021; P
< 0,0001), tässä järjestyksessä. MUC4 /8G7 ilmentyminen liittyvät imusuonten invaasiota (r = 0,304, P
= 0,033). Sitä vastoin MUC4 /1G8 ilmentyminen liittyvät imusuonten invaasiota (r = 0,395, P
= 0,001) ja imusolmuke etäpesäke (r = 0,296, P
= 0,045). MUC1 /DF3 ilmentyminen liittyvät imusuonten invaasiota (r = 0,357, P
= 0,032) ja laskimoiden invaasio (r = 0,377, P
= 0,024). Lopuksi ilmaus MUC4 sekä MUC1 alussa mahasyövistä on käyttökelpoinen markkeri ennustamaan huono ennustetekijöiden liittyvät aluksen hyökkäystä.

Citation: Tamura Y, Higashi M, Kitamoto S, Yokoyama S, Osako M, Horinouchi M, et al. (2012) MUC4 ja MUC1 ilmentäminen Adenokarsinooma Vatsa korreloi Aluksen Invasion ja imusolmukemääritysmenetelmä Metastasis: immunohistokemiallisessa tutkimus Early syöpään. PLoS ONE 7 (11): e49251. doi: 10,1371 /journal.pone.0049251

Editor: Fazlul H. Sarkar, Wayne State University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 17 elokuu 2012; Hyväksytty: 05 lokakuu 2012; Julkaistu 13 marraskuuta 2012

Copyright: © 2012 Tamura et ai. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain Princes Takamatsu Cancer Research Fund S. Yonezawa; Apurahat-in-tuki tieteellisen tutkimuksen tieteellisen tutkimuksen (B) 23390085 S. Yonezawa; Tieteellinen tutkimus (C) 21590399 M. Higashi; Nuorten tutkijoiden (B) 24701008 S. Yokoyama; Tieteellinen tutkimus prioriteettialuetta 239349 S. Kitamoto (JSPS Fellowship) alkaen opetus-, tiede-, urheilu, kulttuuri ja tekniikka, Japani; haima Research Foundation Japanin S. Yokoyama; ja Kodama Memorial Foundation, Japani M. Higashi. S. Batra tukee osittain National Institutes of Health avustusten (CA78590, CA163120, CA133944 ja CA111294). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Ei ylimääräistä ulkoista rahoitusta saaneet tähän tutkimukseen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole eturistiriitoja koskevat työtä tutkimuksessa.

Johdanto

Mahasyöpää on neljänneksi yleisin syöpä maailmassa ja yli 90% mahasyövistä ovat adenokarsinooman [1]. Äskettäin Japanissa, varhainen havaitseminen rutiini tähystystutki- on gastroenterologian klinikoilla on johtanut tarkkoja diagnooseja ja tehokas kirurgiseen tai endoskooppinen hoitoja, tuloksena on suhteellisesti parempi ennuste. Analyysissä 11261 potilaiden mahalaukun syövän hoitaa mahalaukun resektio, TNM 5 vuoden pysyvyys vaiheessa IA oli 91,8% ja vaiheen IB eloonjäämisaste oli 84,6% [2]. Varhaiseksi syöpien, tähystyksen submukoosinen leikkely (ESD) on ensimmäinen valinta hoitoon Japanissa, mutta kriteerit ylimääräisiä kirurgian kuten imusolmukedissektiossa jälkeen ESD ovat edelleen kiistanalaisia ​​[3].

sarja immunohistokemian (IHC) tutkimukset musiiniekspressiota erilaisissa ihmisen kasvaimet ovat osoittaneet, että ilmaus MUC1 musiini (pan-epiteelikalvo-musiini) liittyy invasiivisia leviämisen kasvainten ja huono tulos potilaista, kun taas ilmaus MUC2 musiinin (suoliston tyyppi eritys- mukiinia) liittyy ei-invasiivisia leviämisen kasvainten ja tulos on myönteinen potilaille [4], [5]. Aikaisemmat tutkimus osoitti, että MUC1 ilmentymistä mahasyövistä on huono ennustetekijä [6].

MUC4 oli ensimmäinen raportoitu tracheobronchial mukiinia [7] ja on kalvoon liittyvä mukiinia [8]. Tutkimuksessamme sarjan, ekspressiota MUC4 in maksansisäisten kolangiokarsinooma, haiman adenokarsinooma, ekstrahepaattisen sappitiehyen karsinooma, keuhkon adenokarsinooma, ja suun okasolusyöpä oli itsenäinen tekijä huonoon ennusteeseen, ja on käyttökelpoinen markkeri ennustaa potilaiden [ ,,,0],5], [9], [10], [11], [12], [13]. Unfortunatly, on olemassa muutamia tutkimuksia MUC4 ilmaisun profiilin ihmisen mahasyövän. Esillä olevassa tutkimuksessa tutkimme ilmaus profiilit MUC4 sekä MUC1 varhaisessa mahasyövässä kudoksiin, ja totesi, että MUC4 ja MUC1 ilmaisun alussa mahasyövistä tulisi huono ennustetekijöiden by lymph aluksen invaasio, verisuonten invaasio ja imusolmuke etäpesäkkeitä.

anti-MUC4 monoklonaalisia vasta-aineita (MAb: t), 8G7 ja 1G8, tiedetään havaita eri paikkoihin MUC4 molekyylin. MAb 8G7 tunnistaa tandem-toisto-sekvenssin (STGDTTPLPVTDTSSV) ihmisen MUC4α alayksikön [14]. MAb 1G8 on nostatettu rotan sekvenssin (rotan ASGP-2), ja tunnistaa epitoopin rotan ASGP-2-alayksikön, joka vastaa ihmisen MUC4β alayksikön, ja esittää ristireaktiivisuutta ihmisen näytteitä [15]. Täten erityistä huomiota kiinnitettiin vertailua kahden anti-MUC4 MAb: Western-blottauksella ja IHC kahden mahasyövän solulinjoissa, ennen IHC tutkia ihmisten mahasyövän kudoksiin. Lisäksi koska on olemassa kiistaa koskien ennustetekijöiden merkityksestä nämä anti-MUC4 MAb:, kirjallisuuskatsaus MUC4 ilmaisun erilaisissa syövissä suoritettiin myös.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaille ja Tissue Näytteet

gastrectomy yksilöitä 104 varhaisen syöpien, jotka osoittavat submukoosinen invaasio, pT1b2, tai ilman imusolmuke etäpesäke, haettiin tiedoston vuodesta 1994 2008 Kagoshima-shi Medical Association Hospital. Keski-ikä potilailla oli 65,7 (S.D., 9,8; alue, 39-92 vuotta; mediaani-ikä 66 vuotta); 64 tapausta oli miehiä, ja 40 tapausta oli naisia. Tutkimus tehtiin noudattaen pääperiaatteisiin Helsingin julistuksen, ja hyväksynyt eettinen komitea Kagoshima-shi Medical Association Hospital (KMAH 2011-02-02). Tietoinen, kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta. Niissä tapauksissa, joissa on enemmän kuin kaksi histologista tyyppiä sekoittaa yhteen vaurio, kukin histologisen kuvio arvioitiin riippumattomasti, mukaan Japani luokittelu mahakarsinooman (JCGC) [16].

arviointi monoklonaalisia vasta-aineita MUC4

Solut ja viljelyolosuhteet.

Ihmisen mahalaukun syövän solulinjat (SNU-16 ja NCI-N87) ja haimasyövän solulinjoissa (PANC1 ja CAPAN1) hankittiin American Type Culture Collection (Manassas, VA). Sekä mahasyöpä soluja pidettiin RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO); PANC1 soluja ylläpidettiin DMEM (Sigma-Aldrich); Capan1-soluja ylläpidettiin DMEM /F-12 (Sigma-Aldrich). Kaikki alustat täydennettiin 10% naudan sikiön seerumia (GIBCO, Breda, Alankomaat) ja 100 U /ml penisilliiniä /100 ug /ml streptomysiiniä (Sigma-Aldrich). Kaikki soluja inkuboitiin 5% CO 2 37 ° C: seen ja pidettiin sub-konfluentteja tasolla.

RNA ja RT-PCR: llä.

Kokonais-RNA uutettiin soluista käyttämällä RNeasy mini (Qiagen, Hilden, Saksa) ja kvantifioidaan NanoDrop ND-1000 spektrofotometrillä. Saatu mRNA (2 ug) oli käänteistranskriptio cDNA: ksi kanssa High Capacity RNA cDNA Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA). Seuraavia alukkeita suunniteltu myöhemmin PCR: MUC4, 5'TGGGACGATGCTGACTTCTC-3 ', 5'-CCCCGTTGTTTGTCATCTTTC-3'; ACTB, 5'-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCTG-3 ', 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'. PCR suoritettiin AmpliTaq Gold Fast PCR Master Mix (Applied Biosystems) seuraten valmistajan protokollaa.

Proteiinin uutto ja western-blottauksella.

Yhteensä solulysaatteja valmistettiin käyttäen RIPA-puskuria, joka sisälsi proteaasi-inhibiittoriseoksen (Nacalai Tesque, Kioto, Japani). Proteiinipitoisuus mitattiin BCA-määrityksellä (Thermo Scientific, Rockford, IL). Yhtä suuri määrä proteiinia lysaatti erotettiin 2% agaroosigeelissä, joka sisälsi SDS: ää ja passiivisesti siirrettiin PVDF-kalvolle yön yli huoneen lämpötilassa. Membraanit blokattiin 1% kuorittua maitoa /PBST: ssä 2 tunnin ajan ja saatettiin standardi immunologinen menettelyä käyttäen spesifisiä ensisijainen vasta-aineita. Ensisijainen vasta-aineet ovat seuraavat: anti-ihmisen MUC4 MAb 8G7 (1:1000, syntyy Dr. Surinder K. Batra, University of Nebraska Medical Center, Omaha, NE), ja 1G8 (1:1000, Invitrogen, Camarillo, CA), ja anti-ihmis-a-tubuliinin MAb DM1A (1:2,000, Sigma-Aldrich).

Immunosytokemia viljeltyjä soluja.

MUC4 värjäytymistä viljellyissä soluissa, soluja siirrostettiin 8-kammio dioja (Becton Dickinson and Company, Franklin lakes, NJ) ja inkuboitiin yön yli. Solut kiinnitettiin 3,7% formaldehydillä 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ja värjättiin MAb 8G7 (1:24,000) ja MAb 1G8 (1:4,000) yön yli 4 ° C: ssa, vastaavasti. Signaalin tunnistus suoritettiin immu- menetelmällä käyttäen Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

immunohistokemiaallisesti Ihmiskudokset

IHC ihmisille mahakarsinoomat tehtiin käyttäen seuraavia vasta-aineita mahdollisimman leikkauksesta kussakin kasvain. MUC4 havaittiin kaksi MAb: t, 8G7 ja 1G8. Sillä vertaileva tutkimus, MUC1 ilmentyminen tutkittiin myös MAb DF3 (hiiren IgG, TFB, Tokio, Japani). IHC suoritti immunoperoksidaasimenetelmällä seuraavasti. Antigeeni haku suoritettiin käyttäen CC1 antigeeni hakuun (pH 8,5 EDTA, 10037 ° C, 30 min., Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) ja kaikki osastot. Inkuboinnin jälkeen primaaristen vasta-aineiden (MAb MUC4 /8G7 laimennettiin 1:3000, 37 ° C, 32 min .; MAb MUC4 /1G8 laimennettiin 1:500, 37 ° C, 24 min .; MAb MUC1 /DF3 laimennettu 1:50, 37 ° C, 32 min.) fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa pH 7,4 (PBS), jossa 1% naudan seerumialbumiinia, leikkeet värjättiin on Benchmark XT automatisoitu dia värjäyslaitteella käyttäen diaminobentsidiiniä havaitseminen pakki (Ultraview DAB, Ventana Medical Systems). Yksinkertaisuuden vuoksi MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ja MUC1 /DF3 käytetään osoittamaan musiiniantigeeneille havaitaan jokaisen vasta-aineella.

Pisteytys tulosten ja tilastollinen analyysi.

neljä sokaissut tutkijat ( YT, MH, MG ja SY) arvioinut IHC värjäyksen tiedot itsenäisesti. Kun arviointi erosivat joukossa neljä, lopullinen päätös tehtiin yksimielisesti. Tulokset arvioitiin perustuvat prosenttiosuus positiivisesti värjättyä masoluja, ja prosenttiosuus tiedot luokiteltiin kuuteen laadut käyttäen seuraavaa pisteytystä: negatiivinen, yksikään karsinoomasoluja värjätään; heikko, alle 5% on syöpäsolua värjätään; 1+, ≥5% < 25%; 2+, ≥25% < 50%; 3+, ≥50% < 75%; ja 4+: ≥75% värjättyä. Tapaukset, joissa ≥5% karsinoomasolujen värjättyjen solujen pidettiin positiivisina. Tilastollinen analyysi suoritettiin nonparametric menetelmillä käyttäen Excel-tilastot Ver.3 ohjelmisto syntyy Hisae Yanai, Faculty of Science, Saitama University (OMS Publishing, Japani).

Survival potilaista verrattiin välinen ryhmä positiivisia MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 tai MUC1 /DF3 ilmaisun ja ryhmässä negatiivinen ilmaus mukaan Kaplan-Meier menetelmällä, ja erot eloonjäämiskäyrien testattiin käyttäen log-rank-testi. Todennäköisyyttä P < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Evaluation of Two monoklonaalisia vasta-aineita MUC4

Tutkiakseen ero vasta-spesifisyyden välillä 8G7 ja 1G8, me suorittaa RT-PCR, Western blotting ja IHC-analyysi käyttämällä kahta mahasyövän solulinjoissa, SNU-16 ja NCI-N87-soluissa. MUC4 mRNA havaittiin kaksi mahasyövän solulinjoissa (Fig. 1A). Yhdenmukainen aiempien raportin [14], meidän tiedot osoittivat, että 8G7 tunnustettu erittäin suuri moolimassa proteiinia (yli 500 kD, joka on odotettu koko natiivi MUC4). Päinvastoin, 1G8 ei ole mitään immunoreaktiivisia bändejä (Fig. 1 B). Sama tulos havaittiin IHC-analyysi (Fig. 1 C).

immunohistokemiallinen värjäys gastrectomy näytteet

immunohistokemiallinen värjäys ei-neoplastisten mahan limakalvon.

ei -neoplastic limakalvon tapauksista mahalaukun syöpä, MUC4 /8G7 ilmaistiin joskus sytoplasmassa pinnan limakalvojen epiteelin, ja usein, mutta heikosti sytoplasmassa fundic ja mahaportin rauhaset (kuvio S1 A ja D). MUC4 /1G8 ilmaistaan ​​usein solun huipun ja sytoplasmassa pinnan limakalvojen epiteelin, ja usein, mutta heikosti sytoplasmassa fundic ja mahaportin rauhaset (kuvio S1 B ja E), ja nähtiin jatkuvasti on verisuonten endoteelin. MUC1 /DF3 toisinaan ilmaistu pinnan limakalvojen epiteelin, ja aina fundic rauhaset (erityisesti voimakkaasti solun kärkeä), mutta ei mahanportin rauhaset (kuvio S1 C ja F).

immunohistokemiallinen värjäys mahalaukun adenokarsinooman.

Tutkimme gastrectomy yksilöitä 104 varhaisen syöpien (pT1b2), koska halusimme välttää suuria rappeuttavia muutoksia, joita usein havaitaan pitkälle kehittyneessä syövän kudoksissa, ja säätää vaiheessa tarkkaa vertailua IHC havainnot ja ennusteeseen viittaavia tekijöitä.

Kun yli kaksi histologista tyyppiä sekoitettiin yksi vaurio maha on poistettu yksilöiden 104 varhaisen syöpien, kukin histologisen kuvio arvioitiin riippumattomasti mukaan JCGC [16]. Siksi 104 gastrectomy yksilöitä, voisimme arvioida 197 karsinooma pesäkkeitä eri histologisia tyyppejä yhteensä.

Niistä 197 vauriot oli 15 vaurioita papillaarisen adenokarsinooma (PAP) (kuviot. 2A-D), 39 hyvin eriytetyn putkimaisen adenokarsinooma (tub1) (kuviot. 2E-H), 52 kohtuullisesti erilaistunut putkimaisen adenokarsinooma (tub2) (kuviot. 2I-L), 6 mucinous karsinoomien (mUC) (kuviot. 2M-P), 8 kiinteän tyyppinen huonosti eriytetty adenokarsinooma (por1) (kuviot. 2Q-T), 47 ei-kiinteiden tyyppi huonosti eriytetty adenokarsinooma (por2) (kuviot. 2U-X) ja 30 signet-rengas cell carcinoma (sig) (kuviot. 2Y-b), joka perustuu yhteydessä yleisten histologisten luokittelu mahasyövän JCGC [16]. Mukaan yhteydessä WHO luokittelu kasvaimia mahassa [17] sekä että JCGC [16], pap ja tub1 luokiteltiin "hyvin erilaistunut adenokarsinooma", ja por1 ja por2 luokiteltiin "huonosti erilaistunut adenokarsinooma ". Tiedot ilmentymisen määrä MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ja MUC1 /DF3 oli yhteenvetona kuviossa 3. Yksityiskohtaisten määrä ja prosenttiosuus positiivisesti värjättyä neoplastiset solut käyttämällä pisteytysjärjestelmää tiivistetysti taulukossa S1.

Expression profile of MUC4 /8G7.

Niistä 197 adenokarsinooma vaurioita, MUC4 /8G7 on ilmaistu 83 leesioita (42%). MUC4 /8G7 oli merkitsevästi korkeampi positiivisen ilmaisun (≥5% of karsinoomasoluja värjätty) hyvin eriytetty tyypit (papa + tub1: 70%, 38/54) kuin huonosti eriytetty tyypit (por1 + por2: 18% , 10/55) ( P
< 0,0001) (Fig. 3A, nuolet). MUC4 /8G7 olivat lähinnä sytoplasmassa neoplastisten solujen pap (Fig. 2B), tub1 (Fig. 2F) ja tub2 (Fig. 2J), tapauksissa, joissa positiivisen ilmaisun.

Expression profile ja MUC4 /1G8.

Niistä 197 adenokarsinooma vaurioita, MUC4 /1G8 ilmoitettuna 95 leesioita (48%). MUC4 /1G8 osoitti huomattavasti suurempia positiivisen ilmaisun hyvin eriytetty tyypit (papa + tub1: 67%, 36/54) kuin huonosti eriytetty tyypit (por1 + por2: 36%, 20/55) ( P
= 0,0021) (Fig. 3B, nuolet). MUC4 /1G8 olivat lähinnä solun kärkien pap (Fig. 2C), tub1 (kuviot. 2G) ja tub2 (Fig. 2K), tai intrasytoplasmista musiinin sisältö sig (Fig. 2a), tapauksissa, joissa positiivinen ilme.

Expression profiilia MUC1 /DF3.

Niistä 197 adenokarsinooma vauriot, MUC1 /DF3 ilmentyi 62 leesioita (31%). MUC1 /DF3 osoitti huomattavasti suurempia positiivisen ilmaisun hyvin eriytetty tyypit (papa + tub1: 52%, 28/54) kuin huonosti eriytetty tyypit (por1 + por2: 13%, 7/55) ( P
< 0,0001) (Fig. 3C, nuolet). MUC1 /DF3 olivat lähinnä solun kärkien pap, tub1 ja tub2 (Fig. 2 I), tapauksissa, joissa positiivisen ilme.

vertailu musiiniekspressiota kussakin histologisen tyypin.

vuonna tub1, ekspressionopeuksia on MUC4 /8G7 ja MUC4 /1G8 olivat huomattavasti korkeammat kuin MUC1 /DF3 ( P
= 0,0106 ja P
= 0,039, tässä järjestyksessä) (Fig. 3, * 1). Vuonna por2, ilmaisu määrä MUC4 /1G8 oli merkittävästi korkeampi kuin MUC4 /8G7 ( P
= 0,0286), tai että MUC1 /DF3 ( P
= 0,0005) (Fig. 3, * 2). Vuonna sig, ilmaus nopeudella MUC4 /1G8 oli merkittävästi suurempi kuin MUC4 /8G7 ( P
= 0,0158), tai että MUC1 /DF3 (sig, P
= 0,0019) (kuvio . 3, * 3). Muissa histolgical tyypit (pap, tub2, muc ja por1), ei ollut merkittävää eroa ilmaisun keskuudessa MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ja MUC1 /DF3 (Fig. 3).

väliset MUC4 tai MUC1 ilmaisun ja imusolmukkeiden alus invaasio, verisuonten invaasio ja imusolmuke etäpesäke.

puolikvantitatiivinen arviointi imusuonten invaasion (ly), laskimoiden invaasio (v) ja imusolmuke etäpesäke tila (N) on määritelty JCGC [16]. Lymphatic invaasio (ly) arvioitiin seuraavasti; ly0, ei imusuonten invaasio; ly1, minimaalinen imusuonten invaasio; LY2, kohtalainen imusuonten invaasio; ja ly3, merkitty imusuonten hyökkäystä. Sillä laskimoiden invaasion (v), joka on samanlainen arviointi (v0 ja v3) tehtiin käyttäen elastisen värjäytymistä (Victoria-Blue), joka lisättiin värjäys hematoksyliini-eosiinilla. Kokonaismäärä imusolmukkeiden ja määrä mukana imusolmukkeiden jokaisen solmukohdan asema (N) rekisteröitiin seuraavasti; N0, ei alueellisella imusolmuke etäpesäke; N1, etäpesäkkeitä 1-2 imusolmukkeisiin; ja N2, etäpesäkkeitä 3-6 alueellisiin imusolmukkeisiin. Alueellinen imusolmuke etäpesäke havaittiin 55 potilaalla (N1, 41 tapausta, N2, 14 tapausta). Ei ollut mitään merkittävää korrelaatiota histologisia tyyppejä ja imusuonten invaasio, laskimoiden invaasio tai imusolmuke etäpesäke tila.

Jokaisessa tapauksessa korkeimmat pisteet kuudesta IHC laadut (negatiivinen, heikko, 1+, 2+, 3+ tai 4+) eri histologisia tyyppejä laskettiin koska IHC pisteet kussakin, esim "IHC pisteet 4+" varten tapauksessa [tub1 pisteet, 3+; tub2 pisteet, 4+]. Olemme arvioineet korrelaatio IHC pisteet ja ti, v ja N tekijöitä kullekin potilaalle. Kuten on esitetty taulukossa 1 MUC4 /8G7-ilmentyminen liittyvät lymfaattinen invaasiota (r = 0,304, P
= 0,033). MUC4 /1G8 ilmentyminen liittyvät imusuonten invaasiota (r = 0,395, P
= 0,001) ja imusolmuke etäpesäke (r = 0,296, P
= 0,045). MUC1 /DF3 ilmentyminen liittyvät imusuonten invaasiota (r = 0,357, P
= 0,032) ja laskimoiden invaasio (r = 0,377, P
= 0,024).

Lisäksi selvitimme korrelaatio IHC tulokset MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ja MUC1 /DF3. Kuten taulukosta 2, oli korrelaatio MUC4 /8G7 pisteet ja MUC4 /1G8 pisteet (r = 0,486, P
< 0,0001). Sen sijaan ei ollut korrelaatiota MUC4 /8G7 pisteet ja MUC1 /DF3 pisteet (r = 0,267, P
= 0,202), eikä ollut mitään korrelaatiota MUC4 /1G8 pisteet ja MUC1 /DF3 pisteet (r = 0,245, P
= 0,269).

väliset MUC4 tai MUC1 ilmaisun ja selviytymistä.

joukossa 104 potilasta, seurata tiedot saatiin 87 potilasta. Mediaani seuranta-aika oli 47,5 kuukautta (vaihteluväli 0-193 kuukautta). Vuonna 87 potilaalla, yksi potilas kuoli mahalaukun karsinooma 39 kuukautta leikkauksen jälkeen yksi potilas osoitti maksan etäpesäke mutta selvisi 78 kuukautta, ja kaksi potilasta kuoli muita sairauksia. 85 potilasta ilman kaksi potilasta kuoli muiden sairauksien, Kaplan-Meier arvio testattiin käyttäen log-rank-testi. Positiivisen ryhmän ja negatiivinen ryhmä (MUC4 /8G7 + vs -, MUC4 /1G8 + vs - tai MUC1 /DF3 + vs -), log-rank-testi kokonaiselinaika (MUC4 /8G7, P = 0,27; MUC4 /1G8, P = 0,37; MUC1 /DF3, P = 0,22) ja ilman taudin etenemistä (MUC4 /8G7, P = 0,85; MUC4 /1G8, P = 0,23; MUC1 /DF3, P = 0,83) ei esiintynyt merkittäviä eroja. Tarkempi analyysi 42 potilaasta elossa yli 5 vuotta osoitti myös merkittäviä eroja.

Keskustelu

Viime aikoina olemme raportoineet, että ilmaus MUC4 on itsenäinen huono ennustetekijä of pancreatobiliary adenokarsinoomat [ ,,,0],10], [11], [12] sekä keuhkoadenokarsinooma [13] ja suun okasolusyöpä [9]. MUC1 on myös raportoitu olevan huono ennustetekijä erilaisissa ihmisen kasvainten [4], [5]. Aikaisemmat tutkimus syöpien, mukaan lukien sekä varhainen syöpiä ja kehittyneitä syöpiä osoittivat, että MUC1 on hyödyllinen ennustetekijä köyhien tulos potilaista [6]. Esillä olevassa tutkimuksessa, suhde musiiniekspressiota ja potilaan lopputulosta ei voida arvioida, koska mahalaukun syövistä ovat varhaisessa vaiheessa pT1b2 ja suurin osa potilaista on ollut myönteisen tuloksen. Kuitenkin saatiin seuraavat tulokset: (1) MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ja MUC1 /DF3 ilmaisuja liittyivät kanssa imusuonten hyökkäystä. (2) MUC4 /1G8 ilmentyminen liittyy imusolmuke etäpesäke. (3) MU1 /DF3 ilmentyminen liittyvät laskimoiden hyökkäystä. Japanissa, ESD on ensimmäinen valinta hoito varhaisessa mahasyövistä [3]. Tutkiminen MUC4 sekä MUC1 että ESD yksilöitä voidaan selventää, onko muita leikkaus, kuten imusolmukedissektiossa tai usein seurantaa varten etäpesäkkeitä ovat tarpeen.

Aiemmat tutkimukset osoittivat, ettei siginificant korrelaatiota MUC4 ilmaisun ja MUC1 ilmaisun [10], [11], [12], [13]. Myös tässä tutkimuksessa on mahasyövistä alkuvaiheessa ei ollut siginificant korrelaatiota ilmentymisen MUC4 ja MUC1. Sekä MUC4 ja MUC1 ilmaisun mahasyövistä voi liittyä kanssa huono ennustetekijät, kuten imusuonten invaasio, laskimoiden invaasio ja imusolmuke etäpesäke, jonka avulla eri mekanismilla.

Aiemmassa tutkimuksessa mahasyövistä käyttäen MAb 8G7, Senapati et ai. osoittivat, että MUC4 /8G7 ilmaisua ei liittynyt kasvaimen tyyppi, vaihe tai erottelun taso on sama [18]. Mielenkiintoista, niiden tulokset osoittivat 42% ilmentymisnopeudessa siinä vaiheessa I syöpiä (n = 19), joka on sopusoinnussa meidän data (MUC4 /8G7: 42% ja MUC4 /1G8: 48%) esillä olevassa tutkimuksessa tarkastellaan vaihe I syövät (n = 104). Kuitenkin meidän tutkimus paljasti, että molemmat MUC4 /8G7 ja MUC4 /1G8 ilmaisut olivat erilaisia ​​joukossa histologisia tyyppejä, ja olivat merkittävästi korkeammat hyvin eriytetty tyyppejä kuin huonosti eriytetty tyyppi. MUC1 /DF3 ilme oli myös merkitsevästi suurempi hyvin eriytetty tyyppejä kuin huonosti eriytetty tyyppi. Me kertoi, että MUC1 ilmentyminen oli korkea hyvin eriytetty adenokarsinooma syöpien kuten kehittyneiden syöpiä, ja korkea MUC1 ilmentyminen voi vaikuttaa potilaiden selviytymiseen hyvin eriytetty adenokarsinooma mahan [6]. Korkea ilmentyminen MUC4 kaivossa eriytetty adenokarsinooma voivat myös vaikuttaa selviytymisen potilaiden mahalaukun syöpä. Edellisessä tutkimuksessa [6], määrä korkea ilmentymisen MUC1 /DF3 oli merkitsevästi suurempi kehittynyt mahasyöpä kuin alussa syöpien. Suhdetta MUC4 ilmaisun kanssa hyökkäys mahasyövistä olisi mielenkiintoinen tutkimuskohde.

On kiistaa koskien ennustetekijöiden merkityksestä MUC4 /8G7 ja MUC4 /1G8 ilme. Niinpä olemme käyneet läpi 19 esineet MUC4 IHC tutkimuksen haettu eri ihmisen syövän kudoksissa (taulukko 3). Merkitys MUC4 /8G7 ja MUC4 /1G8 ei voitu arvioida 8 19 tutkimuksissa. Eräässä tutkimuksessa käytetään polyklonaalista MIUC4-vasta kertoi, että MUC4 ilmentyminen liittyy fovorabel lopputulokseen [19], kolme tutkimukset osoittavat mitään korrelaatiota MUC4 ilmaisun ja ennusteen [20], [21], [22], muut kolme tutkimusta eivät ole huomauttamista korrelaatio MUC4 ilmaisun ja ennusteen [18], [23], [24], ja loput yhdessä tutkimuksessa kilpirauhassyövän ei ilmoittanut MUC4 ilmentymistä syöpä [25]. Toisaalta, toisessa 11 artikkeleita, oli ilmeinen ero ennustetekijöiden merkityksestä välillä MUC4 /8G7 ilmaisun ja MUC4 /1G8 ilme. Useimmat tutkimukset käyttäen 8G7, joka oli tuotettu ihmisen MUC4, MUC4 /8G7 ilmentyminen liittyy aggressiiviseen kasvaimen käyttäytymisen tai huonon tuloksen ihmisen karsinoomia [9], [10], [11], [12], [13], [ ,,,0],26]. Sitä vastoin useimmat tutkimukset käyttäen 1G8, joka nostettiin vastaan ​​rotan ASGP-2, kuvattu, että MUC4 /1G8 ilmentyminen liittyy suotuisaan lopputulokseen [27], [28], [29], [30], vaikka yksi tutkimus haiman adenokarsinooma kuvattu, että MUC4 /1G8 ilmentyminen liittyy huonoon säilymiseen [31]. Tämä selvä ero herättää kysymyksen siitä, 8G7 ja 1G8 ovat olennaisesti erilaisia ​​merkkejä. MAb 1G8 nostettiin käyttämällä rotan Muc4 epitooppi [15]. Ihmisen MUC4 ja rotan Muc4 osoittaa yli 60% peptidin sekvenssin samankaltaisuus [32], mutta ne eivät ole identtisiä. On huomionarvoista, että IHC käyttäen MAb 1G8 aina positiivista värjäytymistä verisuoniendoteelissä, joka on hieman epätavallinen, sillä se osoittaa MUC4 joka on yksi jäsenistä musiinien.

Näin arvioimme spesifisyys MAb 8G7 ja MAb 1G8 Western-blottauksella ja IHC kahden mahasyövän solulinjoissa. Meidän Western blotting -analyysi osoitti, että MAb 8G7 tunnustettu erittäin korkean molekyylipainon proteiinien (yli 500 kD: n, joka on odotettu koko natiivi MUC4), kun taas MAb 1G8 ei osoita immunoreaktiivisia bändejä. IHC-analyysi osoitti myös MAb 8G7 positiivista värjäytymistä mutta MAb 1G8 negatiivisesti värjätty kahdessa mahasyövän solulinjoissa. MUC4 mRNA ekspressoitui myös kaksi mahasyövän solulinjoja esillä olevassa tutkimuksessa, kuten on esitetty aikaisemmassa tutkimuksessa analysoidaan haimasyövän solulinjoissa RT-PCR: llä ja pohjois blot analyysit [33], [34]. Sekä MAb 8G7 ja MAb 1G8 reagoivat ihmisen mahasyöpä kudoksissa, vaikka sijainnit MUC4 /8G7 ja MUC4 /1G8 ilme osoitti merkittävä ero. Mahasyövän kudoksissa, MUC4 /8G7 olivat lähinnä sytoplasmassa neoplastisten solujen pap ja amme, kun taas MUC4 /1G8 olivat lähinnä solun kärkien pap ja amme tai intrasytoplasmista mukiinia aine sig. Koska sytoplasmisen ekspressiokuviota MUC4 /8G7 nähdään myös haiman adenokarsinooma, maksansisäinen kolangiokarsinooma, extra maksan sappitiehyen syöpä, keuhkojen adenokarsinooma ja suun okasolusyöpä [9], [10], [11], [12], [13 ] mukaan intracytoplasmic MUC4 /8G7 ilmentämiskuviota mahasyövässä kudoksissa voi olla järkevää. Sen sijaan, lineaarinen ekspressiokuviota MUC4 /1G8 yhdessä solun kärkeä mahasyövän kudosten voi heijastaa tuntematon toimintoja tai ominaisuuksia MUC4β alayksikön havaita MAb 1G8 nostatettu rotan epitooppi [15], kuten esillä oleva tutkimus osoitti, että MUC4 /1G8 ilmaus liittyivät imusuonten invaasion ja imusolmuke etäpesäke, jotka ovat köyhiä ennustetekijöiden jopa alussa mahasyövän. Erityisesti por2 ja sig, ilmaisu määrä MUC4 /1G8 oli merkittävästi korkeampi kuin MUC4 /8G7 tai MUC1 /DF3. Lisäksi oli siginificant korrelaatio MUC4 /8G7 ilmentyminen ja MUC4 /1G8 ilmentymisen Tutkituista potilaista. Siten IHC signaali MUC4 /1G8 havaittu maha on poistettu yksilöitä voidaan osoittaa huomattavan merkityksen epitoopin havaita MAb 1G8, vaikka ei ollut reaktiivisuus MUC4 /1G8 ilmentymistä ihmisen mahasyövän solulinjoissa (SNU-16 ja NCI- N87). Epitooppi havaitsema MAb 1G8 on kiinnostava alue tulevaisuuden tutkimus.

Johtopäätöksenä tässä tutkimuksessa varhaisen syöpien, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ja MUC1 /DF3 ilmaisuja havaittiin pääosin hyvin eriytetty adenokarsinoomat. MUC4 /8G7 ilmentyminen liittyvät imusuonten hyökkäystä. MUC4 /1G8 ilmentyminen liittyvät imusuonten invaasion ja imusolmuke etäpesäke. MUC1 /DF3 ilmentyminen liittyvät imusuonten hyökkäyksen ja laskimoiden hyökkäystä. Tarkastelu MUC4 ja MUC1 ilmaisun mahasyövistä tulisi käyttökelpoinen markkeri ennustamaan huono ennustetekijöiden liittyvät aluksen hyökkäyksen, vaikka alkuvaiheessa.

tukeminen Information
Kuva S1.
ei-neoplastisia limakalvon tapauksissa mahalaukun syöpä, MUC4 /8G7 ilmaistiin joskus sytoplasmassa pinnan limakalvojen epiteelin, ja usein, mutta heikosti sytoplasmassa fundic ja mahaportin rauhaset (A ja D). MUC4 /1G8 ilmaistaan ​​usein solun huipun ja sytoplasmassa pinnan limakalvojen epiteelin, ja usein, mutta heikosti sytoplasmassa fundic ja mahaportin rauhaset (B ja E), ja nähtiin jatkuvasti on verisuonten endoteelin. MUC1 /DF3 toisinaan ilmaistu pinnan limakalvojen epiteelin, ja aina fundic rauhaset (erityisesti voimakkaasti solun kärkeä), mutta ei mahanportin rauhaset (C ja F). Alkuperäinen suurennos x 100 (A, B, C), x 400 (D, E, F).
Doi: 10,1371 /journal.pone.0049251.s001
(TIF)
Taulukko S1.
Yksityiskohtainen määrä ja prosenttiosuus positiivisesti värjättyä neoplastiset solut käyttämällä pisteytysjärjestelmää.
doi: 10,1371 /journal.pone.0049251.s002
(DOC) B

Kiitokset

Kiitämme herra Y. Atsuchi, herra K. Matsuo, Ms. C. Baba, Ms Y. Nishimura, Ms S. Yoshimura ja Ms. I. Houjou niiden teknistä apua.

• PLoS ONE: korkea aromaattisten aminohappojen mahanesteessä alkuvaiheissa mahasyövän Progression
• PLoS ONE: CYP2E1 RsaUlä /PstI polymorfismi ja mahasyövän Herkkyys: Meta-analyysit Perustuen 24 tapausverrokkitutkimukset